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Principios de la tcnica
En cromatografa de gases la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna
cromatogrfica. La elucin se produce por el flujo de una fase mvil que es un gas inerte, y
a diferencia de la mayora de los tipos de cromatografa, la fase mvil no interacciona con
las molculas del analito; su nica funcin es la de transportar el analito a travs de la
columna.
Respecto a la cromatografa lquida, la cromatografa de gases tiene la ventaja de disponer
de detectores mucho ms universales (por ejemplo, el de ionizacin de llama). Adems,
para numerosas aplicaciones, los mtodos son ms simples, ms rpidos y ms sensibles que
los correspondientes a la cromatografa lquida de alta resolucin. La instrumentacin
requerida para cromatografa de gases tambin es mucho ms sencilla y econmica que la
empleada en HPLC. Sin embargo, en cromatografa de gases, la influencia de la
temperatura sobre la distribucin del equilibrio es considerable, a diferencia de la
cromatografa lquida. Por ello, la cromatografa de gases presenta limitaciones en tres
casos:
compuestos poco voltiles, generalmente los de peso molecular superior a 300 u.m.a.
compuestos sensibles a una elevacin de la temperatura incluso moderada
(determinados compuestos de inters biolgico)
compuestos que se encuentran en forma inica (puesto que son e n general poco
voltiles)
Por esta razn, la cromatografa de gases se emplea cuando los componentes de la mezcla
problema son voltiles o semivoltiles y trmicamente estables a temperaturas de hasta
350-400C. En cambio, cuando los compuestos a analizar son poco voltiles y/o
termolbiles, la tcnica separativa adecuada suele ser la cromatografa lquida de alta
resolucin (HPLC).
A menudo la cromatografa de gases se emplea para confirmar de la presencia o ausencia de
un compuesto en una muestra determinada.
Aplicaciones
Medioambientales: Anlisis de pesticidas y herbicidas, anlisis de hidrocarburos,
semivoltiles y voltiles, anlisis del aire...
Alimentos y aromas: fragancias y aromas, aceites, bebidas, cidos orgnicos, azcares,
FAMES, steres metlicos, triglicridos, alcoholes...
Qumica Industrial: alcoholes, cidos orgnicos, aminas,aldehdos y cetonas, steres y
glicoles, hidrocarburos, disolventes, anilinas, gases inorgnicos...
Biociencia: drogas, frmacos, alcoholes y contaminantes en sangre, disolventes
residuales...
Derivadas del petrleo: gas natural, gases permanentes, gas derefinera, gasolinas,
gasleos, parafinas...
Equipos
Cromatografa
Keulemans ha definido la cromatografa como un mtodo fsico de separacin en el cual los
componentes a separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales constituye la fase
estacionaria, de gran rea superficial, y la otra es un fluido (fase mvil) que pasa a travs o
a lo largo de la fase estacionaria.
La fase estacionaria puede ser un slido o un lquido dispuesto sobre un slido que acta
como soporte, de gran rea superficial. La fase mvil es un fluido (puede ser gas, lquido o
fluido supercrtico) que se usa como portador de la mezcla.
En la cromatografa ocurren dos fenmenos muy importantes y que son prcticamente los
rectores del proceso de separacin: la adsorcin y la absorcin.
La adsorcin es la retencin de una especie qumica en los sitios activos de la superficie de
un slido, quedando delimitado el fenmeno a la superficie que separa las fases o superficie
interfacial.
Esta retencin superficial puede ser fsica o qumica. La adsorcin depende de la naturaleza
de la substancia adsorbida, de la temperatura, de la naturaleza y estado de subdivisin del
adsorbente, y de la concentracin.
La absorcin es la retencin de una especie qumica por parte de una masa y depende de la
tendencia que tiene sta a formar mezcla o reaccionar qumicamente con la misma.
Existen muchas maneras de clasificar los mtodos cromatogrficos.
Segn, Giddings, se puede clasificar la Cromatografa por sus variantes:
Fase Mvil (puede ser gaseosa, lquida fluido supercrtico)
Fase Estacionaria
Mecanismo de Retencin (tipos de equilibrios implicados en la transferencia de los solutos
entre las fases).
Forma de Contacto entre las fases (columna superficie plana)
Dimensionalidad
Escala Fsica
Gradientes
Segn la Teora de los Platos, una columna cromatogrfica est constituda por
una serie de platos que contiene una fase estacionaria. Supone que el volmen
de fase estacionaria en cada plato es constante; que el volmen de fase mvil
es constante de plato a plato; que en cada plato las dos fases estn en
equilibrio, y que el valor del Coeficiente de Distribucin es constante e
independiente de la concentracin del soluto.
N = 16(tr/w)2
HETP H = A + B/u + Cu
Columna
Es el lugar donde ocurre la separacin. Se dice que es el corazn de un
cromatgrafo.
Los materiales con los cuales generalmente se pueden elaborar las columnas
son: cobre, aluminio, acero inoxidable, vidrio tefln.
El relleno puede ser un slido, un lquido recubriendo un slido.
Podemos clasificar las columnas segn el propsito del proceso cromtografico:
Empacadas
Analtica
Preparativas
Capilares
W.C.O.T. (Wall Coated Open Tubular)
S.C.O.T. (Support Coated Open Tubular)
Factores que Afectan la Eficiencia de una Columna
Longitud de la Columna
Dimetro de la Columna (1/4", 1/8", 1/16" de dimetro externo)
Tamao de las partculas del relleno
Naturaleza de las fases
Cantidad de fase estacionaria
Temperatura de la columna
Velocidad del gas portador
Cantidad de muestra inyectada
Material del cual est elaborada la columna
Enrollado de la columna
Soporte
La funcin bsica del soporte es la de "mantener" (sostener, retener) la fase
estacionaria. Idealmente debera ser un material inerte que "mantiene" la fase
estacionaria sobre su superficie como una pelcula delgada.
La mayora de los soportes cromatogrficos est hecha de diatomita.
Qumicamente es casi todo slice, con algunas impurezas. Tambin se conoce
como Tierras Diatomceas Kiselguhr (palabra alemana). Domina el campo de
los soportes debido a su estructura, superficie y disponibilidad.
la naturaleza de la muestra
la naturaleza de la Fase Lquida
el uso que se le va a dar a la columna:
General
Especfico
Precio
Podemos resumir que un buen soporte debe reunir las siguientes
caractersticas:
Constante de Rohrchneider
Constante de McReynolds
Existen muchas discusiones sobre este tema para poder definir y describir el
parmetro polaridad en cromatografa, podemos decir que la polaridad de una
fase estacionaria lquida se refiere a las interacciones intermoleculares que
involucra dipolos permanentes.
Selectividad es definida como las diferentes atracciones intermoleculares
Varias cualidades ha de reunir un lquido para servir como fase estacionaria:
Viscosidad
Tensin Superficial
Tensin de Vapor
Selectividad respecto a los componentes de la fase mvil
Reversibilidad del Reparto
Estabilidad Trmica
Gas Portador
El gas portador cumple bsicamente dos propsitos: Transportar los
componentes de la muestra, y crear una matriz adecuada para el detector.
Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la muestra como con la
fase estacionaria)
Debe ser capaz de minimizar la difusin gaseosa
Fcilmente disponible y puro
Econmico
Adecuado al detector a utilizar
Detectores
Un detector es un dispositivo para revelar la presencia de las sustancias
eludas a la salida de la columna cromatogrfica. Podemos expresar que el
detector son los "ojos" de un cromatgrafo.
El Detector es un dispositivo capaz de convertir una propiedad fsica, no
medible directamente, en una seal elaborable y ofrecernos informacin sobre
la naturaleza y magnitud de la propiedad fsica.
En cromatografa un detector funciona comparando una propiedad fsica entre
el gas portador puro y el mismo gas portador llevando cada uno de los
componentes que previamente se han separado en la columna, esta accin se
traduce en una seal tipo elctrica, que posteriormente se amplificar
mediante un registrador grfico integrador permitiendo indicar el momento
que salen de la columna los componentes.
Clasificacin de los detectores
Cromatograma y su Interpretacin
Los siguientes trminos son los utilizados en un cromatograma tpico y
recomendados por la IUPAC:
Line Base
Pico Cromatogrfico
Base del Pico
rea del Pico
Altura del Pico
Ancho del Pico
Ancho del Pico a la mitad de la Altura
Insuficiente Resolucin
Variaciones en la lnea base
Picos extremadamente pequeos
Las desviaciones en la lnea base se pueden compensar por interpolacin de
sta entre el prinpio y el final del pico.
Integracin Automtica
Electromecnica
Electrnica
Anlisis Cualitativo
Los procedimientos para identificacin de los picos cromatogrficos podemos
dividirlos en dos categoras:
Identificacin Cromatogrfica
Por Datos de Retencin
Por Serie Homlogas (Indices de Retencin de Kovacs)
Identificacin No Cromatogrfica
Anlisis Clsicos
Identificacin por:
Adicin de Estndar
Formacin de Derivados
Sustraccin de un Componente
Identificacin con Tcnicas Auxiliares: UV, IR, MS, RMN
Anlisis Cuantitativo
Existen varios mtodos para cuantificar un pico cromatogrfico:
Normalizacin de rea
Normalizacin de rea con Factores de Respuesta
Estandarizacin Externa
Estandarizacin Interna
ISTOCKPHOTO/THINKSTOCK
El mtodo cientfico se utiliza en casi cualquier rea, desde la fsica a la qumica y biologa,
pasando por las matemticas, filosofa, antropologa y sociologa, entre otras ms.
Gracias al mtodo cientfico y su rigurosidad, los resultados de estudios ganan credibilidad,
construyendo conocimiento y haciendo posible nuevos descubrimientos cientficos para el
beneficio de toda la humanidad.