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UNIVERSIDADE DE SO PAULO

FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS


DE RIBEIRO PRETO

PREPARO DE AMOSTRAS

Prof Dr Cristiane Masetto de Gaitani


crisgai@fcfrp.usp.br

Ribeiro Preto - 2012

 soro

 plasma
 urina
 lquor
 tecidos
 meio de dissoluo
 gis
cremes
 comprimidos

Ribeiro Preto - 2012

OBJETIVOS
- Livre interferentes
- Concentrao da
amostra

IMPORTNCIA
- Erros na quantificao
- Deteriorao das colunas e outras
partes (compatvel com o sistema de
anlise)
- Perda de tempo com manuteno
preventiva (limpeza de detector, da
coluna, limpeza da fonte de ons)
- Necessidade de atingir limites cada
vez menores

Ribeiro Preto - 2012

PROCEDIMENTO DE EXTRAO IDEAL

 Mxima recuperao do analito de interesse


 Menor nmero de passos
 Rpido
 Alta preciso
 Fcil automao

Ribeiro Preto - 2012

ESCOLHA DA TCNICA DE EXTRAO

Caractersticas da matriz
Caractersticas do analito
Tcnica de anlise empregada

Ribeiro Preto - 2012

PRECIPITAO DE PROTENAS

- DESPROTEINIZAO
- solventes orgnicos (solubilidade das protenas)
- cidos (formao de sais insolveis)
- DESVANTAGENS
Baixa recuperao
No seletivo
Baixa exatido
Em alguns casos: diluio da amostra

Ribeiro Preto - 2012

EXTRAO LQUIDO-LQUIDO
LIQUID LIQUID EXTRACTION (LLE)
partio da amostra entre dois lquidos imiscveis: fase aquosa e fase
orgnica
analito: coeficiente de partio entre as duas fases

A eficincia da LLE depende:


 solvente extrator
 pH da fase aquosa
 volume do solvente extrator

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DESVANTAGENS

VANTAGENS

amostras com alta afinidade pela


gua so parcialmente extradas pelo
solvente orgnico
impurezas
do
solvente
so
concentradas (solvente ultrapuro)
formao de emulses

simples
grande nmero de solventes
(solubilidade e seletividade)
protenas
presentes
amostra so desnaturadas

volumes relativamente grandes de


amostra e solvente so requeridos
toxicidade dos solventes orgnicos
difcil automao

Ribeiro Preto - 2012

na

EXTRAO EM FASE SLIDA


SOLID PHASE EXTRACTION (SPE)

Ribeiro Preto - 2012

SISTEMA DE EXTRAO EM FASE SLIDA

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Condicionamento expor os stios para interao


Aplicao da amostra - lenta
Lavagem eliminar interferentes
Secagem do cartucho
Eluio eluir composto de interesse

Condicionamento

Adio amostra

Contaminante
Amostra de interesse

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Lavagem

Eluio

MECANISMO EM SPE
Modo reverso
Modo normal
Troca inica
RETENO: analito e grupos funcionais da slica
C-8, C-18 e CN: interaes de Van der Waals
Modo normal: ligaes de hidrognio, interaes - e
dipolo-dipolo
Troca inica: interaes eletrostticas

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Vantagens da SPE em relao


LLE
Maior eficincia
Elimina maior nmero de interferentes
Reduzido consumo de solvente orgnico
Fcil coleta do analito
Fcil automao

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MICRO EXTRAO LQUIDO-LQUIDO DISPERSIVA


DISPERSIVE LIQUID LIQUID MICROEXTRACTION
(DLLME)

Sistema ternrio de solventes


- Solvente dispersor
- Solvente extrator
- Fase aquosa (analito)

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FUNDAMENTOS TERICOS

Zang et al., Chin. J. Anal. Chem. 37(2), 2009


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FUNDAMENTOS TERICOS

Caldas et al., Qum. Nova, 34 (9), 2011


Ribeiro Preto - 2012

Rezaee et al., J. Chromatogr. A, 1116, 2010


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SOLVENTE EXTRATOR
- Alta densidade
- Baixa solubilidade
-Capacidade de extrao composto de interesse
-Bom comportamento cromatogrfico
dissulfeto de carbono
tetracloreto de carbono
clorofrmio
diclorometano
tetracloroetileno
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SOLVENTE DISPERSOR

-Miscvel no solvente extrator e na fase aquosa


Acetona
Metanol
Acetonitrila

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Fatores que afetam a eficincia da extrao

- Tipo solvente extrator


- Tipo solvente dispersor
- Volume solvente extrator (fator de pr-concentrao)
- Volume solvente dispersor

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Volume da fase sedimentada


-Solubilidade do solvente extrator na fase aquosa
-Volume da amostra
-Volume do solvente dispersor
- Volume do solvente extrator

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Fator de pr-concentrao (PF)

Csed: concentrao do analito na fase sedimentada


C0: concentrao inicial do analito na amostra

Recuperao da extrao (ER)

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Outros fatores que influenciam a eficincia da extrao


-Tempo de extrao

-Fora inica - adio de sal


(0,5 a 10 %)

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-Rapidez

Vantagens

-Baixo custo
-Prtica e fcil
-Altos valores de recuperao
-Alto fator de enriquecimento

-Baixo consumo de solventes orgnicos

Desvantagens

-Clculo do volume da fase sedimentada


-Consumo de solventes clorados

-Solvente extrator deve ter densidade maior do que a gua

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Publications of DLLME procedures

Ojeda et al. Chromatographia , 2011 (Published online)

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DESAFIOS
Matrizes biolgicas
Robustez
Densidade dos solventes
Automao
Incompatibilidade com algumas tcnicas analticas

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