Cartul

a1

MANEJO DEL MICROSCOPIO PTICO,

COLORACIONES, TCNICAS DE COLORACIN
DE MICROBIOS, TINCIONES SIMPLES Y
DIFERENCIALES

I. INTRODUCCIN:
Te has imaginado alguna vez poder ver lo ms pequeo que nos rodea, lo que esta tan cerca a
nosotros y a la vez tan lejos; es lo que el hombre ha buscado desde siglos atrs, Un Holands
llamado Leewenhoeck, hombre sencillo labrador de lentes, cre el primer microscopio;
convirtindose en el primer cazador de microbios iniciando una caza que se lleva incluso en
nuestros das.
El microscopio es uno de los instrumentos ms usados ya que nos permite observar el objeto de
un tamao mayor y percibir de talles imposibles de observar a simple vista. El microscopio
comnmente usado en nuestros laboratorios es el microscopio ptico compuesto, cuyo poder
resolutivo puede alcanzar hasta 0.0002 mm (0.2 um, donde 1 um=0.001mm), suficiente como
para poder distinguir las estructuras ms grandes de las clulas eucariotas y tambin clulas
procariotas enteras, sin embargo no se pueden observar las estructuras internas de las clulas
procariotas ni se discierne la ultraestructura de las clulas eucariotas, Existen diferentes
tcnicas para poder visualizar stos microorganismo, como las coloraciones simple y diferencial
que a travs de los aos muchos cientficos las fueron mejorando.

II. OBJETIVOS
-

Identificar, cada una de las partes y sistemas que conforman el microscopio ptico
compuesto para poder familiarizarnos con su funcionamiento.

Aprender a utilizar las diferentes tcnicas de tincin y reconocer la clasificacin de las

bacterias Gram positivas y Gram negativas.

Observar y realizar el proceso de preparacin en fresco para el reconocimiento de

protozoarios y microalgas.

III. FUNDAMENTOS
MICROSCOPIO
En general podemos distinguir dos partes esenciales de finalidad distinta: la parte ptica cuyo
papel es formar la imagen aumentada, y la parte mecnica, cuya funcin es la de sostener los
elementos pticos y el preparado a examinar.

1. Parte ptica:
La parte ptica est formada por dos
sistemas centrados de lentes de
aumento o convergentes: el objetivo y el
ocular, y por el aparato de iluminacin
que facilita y mejora la observacin
microscpica.

1.1.

Objetivo
Los objetivos van cerca del objeto a observar. Est compuesto por un sistema
concentrado de lentes convergentes. Cada objetivo tiene una inscripcin, por
ejemplo: Plan 40/0.65 160/0.17. Plan significa que es el plano acromtico, es
decir un objetivo acromtico corregido para evitar dispersin de los colores con
imagen plana, 40 indica el aumento y se representa como 40 X. el valor 0.65 hace
referencia a la apertura numrica, que es un valor caracterstico del objetivo; 160
es la longitud del tubo (distancia objetivo-ocular) y 0.17 es el espesor mximo del
cubreobjetos que se puede interponer entre objeto y objetivo.
Existen distintos tipos de objetivos que se diferencian por la manera de utilizarse:
a) Objetivos a seco: son aquellos objetivos que no requieren la interposicin de
ninguna sustancia a adems del aire entre la lente y del preparado. Los ms
utilizados son:

Pequeo aumento: Mayor de 0 y menor de 10X

Mediano aumento: Mayor de 10X y 30X
Gran aumento: Mayor de 30X y menor de 90X
b) Objetivos de inmersin: son aquellos que entre la lente y el preparado se debe
interponer un medio transparente con un ndice de refraccin (n) superior al del
aire (n=1), y semejante al de vidrio (n=1.5), evitando la refraccin y por tanto,
permite aprovechar un mayor nmero de rayos refractados para la formacin de
la imagen. El medio utilizado es un aceite de inmersin, por ejemplo el aceite
de cedro, el cual evita la refraccin de la luz ya que tiene el mismo ndice de
refraccin que el vidrio portaobjetos.
Los objetivos deben poseer tres cualidades, a saber: poder definidor, poder
penetrante y poder resolvente. El poder definitivo consiste en la propiedad de
presentar con limpieza y correccin los contornos de la imagen. El poder
penetrante es la propiedad de presentar, sin variar el enfoque, perfectamente
detallados varios planos del espesor de una preparacin. El poder resolvente
permite apreciar delicados detalles de estructura.

1.2.

Ocular
El ocular denominado as porque se ubica cerca del ojo del observador, tiene como
funcin principal llevar la imagen del objeto hasta el ojo humano amplindola an
ms. Est compuesto por dos lentes convexas: el inferior o lente de campo y el
superior o lente ocular, dispuestos en un tubo cilndrico de metal. La capacidad de
aumento del ocular puede variar entre 5X y 15X.. El microscopio puede presentar
un solo ocular (monocular) o dos oculares (binoculares). En nuestro laboratorio
contamos con microscopios binoculares y con capacidad de aumento 10X.

1.3.

Sistema de iluminacin
a) Fuente de iluminacin: proporciona la iluminacin requerida para realizar
cualquier observacin microscpica.
Lmpara. Los microscopios como fuente luminosa artificial (luz incorporada),
presenta una lmpara (de tungsteno o halgeno) en el pie del microscopio.
b) Filtros de luz: son placas de vidrio coloreadas que dejan pasar las radiaciones
de longitud de onda ms convenientes para la ms adecuada observacin,
absorbiendo las restantes. Se ubican en el portafiltro.
c) Diafragma: es un dispositivo que consta de un conjunto de pequeas lminas
que pueden acercarse o alejarse entre ellas, limitando un orificio de dimetro
variable, que sirve para graduar la cantidad de rayos luminosos que llegan al
objeto.

d) Condensador: es un dispositivo constituido por un sistema de lentes

convergentes que proyectan sobre el preparado en forma de un amplio cono, el
haz de luz que lo atraviesa

2. Parte Mecnica:
Sirve para sostener a la parte ptica y permite los desplazamientos necesarios para el
enfoque e iluminacin del objeto por observar.
Est constituido por:

2.1.

Pie o Estativo
Es una parte maciza y pesada, para asegurar una perfecta estabilidad del aparato y
servir de soporte a sus dems partes.

2.2.

Columna o Brazo
Es la parte articulada al pie por medio de una bisagra llamada Charnella que
sostiene a la platina, a la sub-platina, al tubo ptico y lleva los tornillos
macromtrico y micromtrico. Adems lleva adherida un par de pinzas que sirve
para sujetar la lmina portaobjetos y un carro mvil (Charriot), que accionado por
dos tornillos, permite el desplazamiento del preparado en dos sentidos
perpendiculares entre s.

2.3.

Tubo ptico
Es metlico y de forma cilndrica, ennegrecido interiormente para evitar la refraccin
de la luz. En el extremos superior del tubo va el ocular y en el extremo inferior los
objetivos, los que pueden estar fijados por medio de un dispositivo llamado
revlver.

2.4.

Revolver
Es un dispositivo metlico de forma circular y entornillado en la parte inferior del
tubo ptico, que presenta varios orificios a los que van enroscados los objetivos, al
girar el revolver permite utilizar los diferentes aumentos.

2.5.

Tornillo macromtrico y micromtrico

Permite enfocar con precisin moviendo muy lentamente la platina hacia arriba y
hacia abajo. En algunos modelos tanto el macro y micromtrico son asociados por
un solo tornillo. El tornillo macromtrico permite acercar rpidamente el objetivo al
preparado.

2.6.

Platina

Es una pieza metlica cuadrada, donde se colocan los preparados y tiene en la

parte central un orificio, que permite el paso de la luz proveniente del sistema de
iluminacin. En los modelos perfeccionados sta platina puede desplazarse por los
tornillos macro y micromtrico, hacia arriba y hacia abajo.

TECNICAS DE COLORACIN
Como casi todos los microorganismos son casi incoloros, cuando se los observa a travs de
un microscopio ptico estndar, a menudo es preciso prepararlos para la observacin y una
de las maneras de hacerlo consiste en someterlos a tincin (coloracin). En las tcnicas de
coloracin se utiliza colorantes de tipo cido, bsico y mordientes como el lugol. El trmino
tincin significa simplemente colorear los microorganismos con un colorante que destaque
ciertas estructuras.

PREPARACIN DE EXTENDIDOS PARA LA TINCIN

Antes de teir los microorganismos se los debe fijar (adherir) al portaobjetos, el proceso
de fijacin produce la muerte simultnea de los microorganismos y su adherencia al
portaobjetos. Tambin preserva diversas partes de los microorganismos en su estado natural
con una distorsin mnima.
Cuando se fija una muestra se extiende una pelcula delgada del material que contiene los
microorganismos, sobre la superficie de la lmina portaobjeto. Esta pelcula denominada
extendido. Seguidamente el portaobjetos se fija pasndola varias veces a travs de la llama
de un mechero Bunsen, luego se le aplica el colorante correspondiente, se lo lava y se seca
con
papel absorbente. Si no se fija la muestra, el colorante podra arrastrar los
microorganismos del portaobjetos.

1. COLORACIN SIMPLE
Este tipo de coloracin es una solucin acuosa o alcohlica de un colorante bsico
nico. Aunque los colorantes se unen de forma especfica a las distintas partes de la
clula, el propsito principal de la tuicin simple es destacar el microorganismo completo
para que se vean las formas y estructuras celulares bsicas. Algunas de las tinciones
simples utilizadas con frecuencia en el laboratorio son el azul de metileno, la
carbolfucsina, el violeta de genciana (cristal violeta) y la safranina.

2. COLORACION DIFERENCIAL
A diferencia de las tinciones simples, las tinciones diferenciales reaccionan de modo
diferente con las distintas clases de bacterias y por lo tanto pueden ser empleadas para
establecer una distincin entre ellas. Las tinciones diferenciales utilizadas con mayor
frecuencia para las bacterias son la tincin de Gram y la tincin de cido-alcohol
resistencia. En sta prctica de laboratorio solo desarrollamos la tcnica Gram.

Tincin Gram
La tincin de Gram fue desarrollada por el bacterilogo y mdico Dans Hans Christian
Joachim Gram en 1884 y es uno de los procedimientos de tincin ms tiles porque
permite clasificar las bacterias en dos grandes grupos: Gram positivas y Gram negativas.
Con sta tcnica las bacterias Gram positivas se tien de azul y las Gram negativas al
quedar decoloradas se tien de rosa.
La tcnica de Gram se basa en la constitucin qumica de la pared celular de las
bacterias y se utilizan dos colorantes principales que son el cristal violeta o violeta de
genciana, denominado colorante primario por impartir su color a todas las clulas y la
safranina, denominado colorante de contraste.
Permite la observacin de Streptococcus, Staphylococcus, Bacillus, Salmonella,
Shigella, Escherichia coli, la ms representativa de las Gram negativas.

Tincin cido-Resistente (Ziehl Neelsen)

Este tipo de tincin diferencial, se fija de modo firme solo a las bacterias que poseen
ceras en las paredes de sus clulas, como las bacterias del gnero Mycobacterium, que
comprende dos patgenos importantes Mycobacterium tuberculosis y Mycobacterium
leprae as como del gnero Nocardia.

3. COLORACIN ESPECIAL
Las tinciones especiales se utilizan para colorear y aislar partes especficas de
microorganismos, como endosporas y flagelos e incluso para detectar la presencia de
cpsulas.

Tincin de Wirtz-Conklin (Prueba de los Tres Humos) (Tincin de Esporas)

Algunos gneros bacterianos como Clostridium y Bacillus, producen en su interior
formas de resistencia denominada endosporas, que se producen en condiciones
ambientales adversas. stas estructuras (endosporas) no se tien con los mtodos
comunes, como la tincin Simple y Gram, porque stos colorantes no atraviesan sus
paredes.
La tincin especfica de esporas requiere dos colorantes:

Verde de Malaquita: capaz de teir las esporas en caliente.

Safranina: colorante de contraste que tie las formas vegetativas.

Las endosporas, tras la primera tincin, no perdern el colorante en el lavado con el

agua, pero si lo harn las formas vegetativas, que quedarn teidas con el segundo
colorante.
Se emplean cultivos en fase estacionaria para dar lugar a que las bacterias produzcan
esporas.

Tincin negativa para cpsulas (Tincin de Maneval)

La tincin de cpsulas es ms difcil que otros procesos de tincin porque los
materiales capsulares son hidrosolubles y pueden desprenderse o eliminarse durante los
lavados rigurosos. Debido a la composicin qumica de las cpsulas, stas no aceptan la
mayora de los colorantes biolgicos, como la safranina, y as aparecen como los halos
que rodean cada clula bacteriana teida.
Se utiliza dos reactivos: reactivo Maneval A (Rojo de Congo) y reactivo Maneval B
(Fucsina cida)
Entre las bacterias poseedoras de cpsulas tenemos: Klebsiella, Escherichia, Bacillus,
Pasteurella, Haemophilus.

PREPARADOS EN FRESCO
La preparacin en fresco se utiliza para observar microorganismos vivos. Los microorganismos
en general tienen poco contraste con respecto al medio que les rodea, sin embargo, es posible
observarlos sin la necesidad de teirlos y fijarlos gracias a la refringencia que despiden y sobre
todo a su capacidad de movimiento en medios lquidos.

IV. PROCEDIMIENTO
A. MANEJO DEL MICROSCOPIO
1. Colocar el preparado en la platina, asegurndose que el objeto quede hacia arriba y se
halle en el centro de la perforacin que tiene la platina.
2. Seleccionar el objetivo de menor aumento (4X), ya que con un objetivo de poco
aumento se domina un campo visual mayor y por lo tanto, es ms adecuado como
objetivo buscador.

3. Bajar el tubo del microscopio mediante el tornillo macromtrico acercando

cuidadosamente el lente frontal del objetivo a la preparacin. Mirar lateralmente, con
la vista a la altura de la platina, para evitar la rotura del preparado o ms grave an la
rotura o deterioro del lente del objetivo.
4. Mirando a travs del ocular, levantar el tubo mediante el tornillo macromtrico de
enfoque aproximado hasta encontrar la imagen del objeto.
5. Se enfoca la imagen, moviendo suavemente el tornillo micromtrico de enfoque fino.
6. Modificar la altura del condensador y la abertura del diafragma hasta lograr obtener el
mejor contraste.
7. Si se desea mayor aumento se gira el revlver y se intercala otro objetivo, teniendo en
cuenta que al utilizar aumentos mayores el campo visual se reduce, ser necesario
regular nuevamente la iluminacin. Para usar el objetivo de inmersin se coloca una
gota de aceite de cedro sobre el cubreobjetos del preparado.
8. Terminada la operacin se debe apagar la lmpara, retirar el preparado y coloque el
objetivo de menor aumento en la posicin de enfoque, con la platina en su posicin
ms baja.

B. METODOLOGA GRAM
Observacin de bacterias: Gram positives (Bacillus), Gram negativos (Escherichia coli)

1. En un portaobjetos limpio se coloca una gota de agua y una asada del cultivo
(Bacillus o Escherichia coli).
2. Se seca a la llama del mechero marcando un crculo alrededor de donde se deposita
la muestra.
3. Se agrega el cristal violeta dejndolo actuar durante 1 minuto.
4. Luego se lava con agua corriente procurando no pegar de lleno el agua sobre la
muestra.
5. Aadir yodo de Gram (lugol), el cual acta como un mordiente aumentando la
capacidad del colorante para entrar en las clulas a travs de los poros en la
membrana celular. Dejndolo actuar por 2 minutos.
6. Nuevamente se lava con agua corriente.
7. Colocar el portaobjetos en ngulo y decolorar agregando alcohol-acetona, hasta que
no escurra lquido azul, durante 30 segundos. Este el paso ms importante de la

Tincin de Gram ya que una sobre decoloracin cambiara clulas Gram positivas a
Gram negativas.
8. Luego se coloca el colorante safranina y se deja actuar por 1 minuto.
9. Se lava el exceso de colorante.
10. Se deja secar al aire o bien cerca del mechero.
11. Por ltimo observamos en el microscopio con el objetivo de inmersin 100X.

C. METODOLOGA WIRTZ-CONKLIN
Observacin de esporas de Bacillus
1. Se prepara el frotis bacteriano de Bacillus.
2. Luego teir con verde malaquita. Con la ayuda de unas pinzas de madera se coloca la
muestra sobre la llama del mechero de forma que el colorante humee durante 5
minutos. Es necesario evitar que la muestra hierva. Se aade ms colorante si ste
se evapora, es importante que la muestra no se seque.
3. Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
4. Teir con safranina durante 1 minuto
5. Volver a lavar con abundante agua el exceso de colorante.
6. Secar la preparacin
7. Por ltimo observar la preparacin al microscopio con el objetivo de inmersin.

D. METODOLOGA DE MANEVAL
Observacin de cpsulas de la bacteria Klebsiella pneumoniae.
1. Se agrega una gota pendiente de Reactivo Maneval A (Rojo de Congo).
2. Luego con un asa bacteriolgica se tomar una muestra del cultivo, se coloca sobre la
gota y se mezcla con sta haciendo movimientos giratorios con el asa.
3. Extender la muestra hasta que quede una pelcula delgada.
4. Se ayuda a secar un poco en la flama del mechero para sellar los bordes y luego se
deja secar a temperatura ambiente.
5. Despus se agrega el Reactivo Maneval B (Fucsina cida) y se deja actuar durante 1
minuto.

6. Luego se lava el frotis suavemente y se seca con la ayuda de una toalla de papel
absorbente.
7. ltimamente se observa al microscopio.

V. RESULTADOS
A. Tincin de Gram
1. Observacin: Gram positivos (Bacilos)
2. Muestra: Cultivo en Agar nutritivo.
3. Color: Violeta oscuro
4. Aumento empleado:
10 X
100 X
1000X
-----------------(Ocular) X (objetivo) = Total

1. Observacin: Gram negativos

(Escherichia coli)
2. Muestra: Cultivo en Agar nutritivo.
3. Color: Rosado
4. Aumento empleado:
10 X
100 X
1000X
-----------------(Ocular) X (objetivo) = Total

Anlisis:
-

En ambas bacterias se ha aplicado la misma tcnica por consiguiente los mismos

pasos del mtodo. Este mecanismo se basa en las diferencias de estructura de la

pared celular de las bacterias grampositivas y gramnegativas y en la forma en que

reaccionan frente a diversos reactivos.
-

El colorante violeta de genciana y el yodo del lugol se combinan en el citoplasma de

cada bacteria y lo colorean de violeta oscuro o prpura.

Las bacterias que mantienen este color despus de haberles agregado el alcohol para
decolorarlas y agregado luego safranina, se clasifican como grampositivas; las
bacterias que no conservan el color violeta oscuro despus de la decoloracin se
clasifican como gramnegativas.

Gram positivas
En la mayora de las bacterias Gram positivas la pared celular est compuesta por
varias capas de pptidoglucano que conforman una estructura gruesa y rgida, Adems
de la presencia de cidos teicoicos (cido Lipoteicoico y cido teicoico mural) y
fosfato.
Estas bacterias retienen el color violeta, debido a que cuando el colorante principal
violeta de genciana o cloruro de metilrosanilina se combina con el Iodo del lugol, el
mordiente determina la formacin de cristales con el colorante que no pueden
atravesar la pared por su gran tamao. La aplicacin de alcohol deshidrata el
pptidoglicano de las grampositivas y las torna an ms impermeables a los cristales
de violeta de genciana-yodo, no permitiendo su salida al exterior. Al agregar la
safranina crea un contraste con el colorante principal, ste es absorbido por las
grampositivas pero es enmascarado por el cristal violeta el cul es ms intenso y
adems ha sido absorbido primero por las clulas no dando cabida a la safranina.

Gram negativas
La pared celular de las gramnegativas es ms delgada pero a la vez ms compleja que
las grampositivas. Est compuesta por una o muy pocas capas de pptidoglucano y
una membrana externa asimtrica, si bien tiene una monocapa interna formada por
fosfolpidos la monocapa exterior esta formada por un tipo especial de lpido,
denominado lipopolisacrido (LPS).
Estas bacterias no retienen el color violeta pero si el rosado, debido a que cuando se
forma el complejo cristal violeta en la clula y se decolora al aplicar alcohol, porque el
alcohol disuelve la membrana externa de la clula
e incluso crea
en ladedelgada
1. Observacin:
Esporas
Baciloscapa
de pptidoglucano pequeos orificios a travs de los cuales se difunden los cristales
2. Muestra:
Cultivo
en Agar nutritivo.
de colorante-yodo volvindose incolora, entonces
al agregar
el colorante
safranina,
ste determina que las clulas se tornen de color rosado.
3. Color:

B. Tincin Wirtz-Conklin

Endosporas -> verdes

Clulas -> rosadas

4. Aumento empleado:
10 X
100 X
1000X
-----------------(Ocular) X (objetivo) = Total

 Anlisis:
-

Las endosporas no se tien con mtodos comunes, como la tincin simple y la tincin de
Gram, porque estos colorantes no atraviesan sus paredes, por ello se ha utilizado el
colorante verde de malaquita el cual si puede atravesar la pared de la endospora
tindola de verde con la ayuda del calor al momento de fijar el extendido. En el caso
de las clulas estn han sido teidaas de color rosado debido a que al momento de
lavar el exceso de verde de malaquita ha sido aplicado el colorante safranina, el cual
tie de rosado las partes de la clula que no ha coloreado el verde de malaquita y que
por lo tanto no es endospora.

C. Tincin Maneval
1. Observacin: Cpsulas de Klebsiella
pneumoniae.
2. Color:
-

Cpsulas -> halos incoloros

Espacio intercelular (fondo) -> azul
oscuro
Bacteria -> rojo

3. Aumento empleado:
10 X
100 X
1000X
-----------------(Ocular) X (objetivo) = Total

 Anlisis:
-

Varios microorganismos contienen una cubierta gelatinosa denominada cpsula. La

presencia de sta estructura en un microorganismo indica patogenicidad o virulencia,
es decir que puede causar enfermedad. Es decir sta les confiere propiedades
antifagocticas e interfieren con los mecanismos de defensa del organismo que se
apoderan.

La tincin de Maneval permite la observacin de tales estructuras, donde las cpsulas

aparecen como halos incoloros en un fondo azul oscuro y una bacteria roja.

Adems las cpsulas son incapaces de asimilar o retener las tinciones comunes
asimismo el calor y el lavado las disuelven, por lo cual el mejor mtodo son las
tinciones negativas, en este caso la de Maneval.

D. Protozoarios y Microalgas

1. Observacin: Protozoarios
2. Tcnica: Preparacin en fresco
3. Aumento empleado:
10 X
X
X
-----------------(Ocular) X (objetivo) = Total

1. Observacin: Microalgas
2. Tcnica: Preparacin en fresco
3. Aumento empleado:
10 X
X
X
-----------------(Ocular) X (objetivo) = Total

 Anlisis:
-

VI. CONCLUSIONES

La tcnica de coloracin diferencial de Gram, permite observar la variabilidad entre las

muestras biolgicas de bacterias grampositivas y gramnegativas por medio de la tincin
violeta oscuro para las Gram positivas y rosado para las Gram negativas.

La coloracin Gram no es eficiente para todas las bacterias; por lo que los cientficos se
ayudan de otros mtodos como lo es Tincin Wirtz-Conklin y la Tincin Maneval; estas
tinciones son especiales para bacterias que en su estructura llevan capsula o si estas
estn en su etapa de esporas,

VII. REFERENCIAS

http://www.geocities.ws/vidianne_mx/bactincionesbactyhon.pdf
http://es.scribd.com/doc/95313060/Examenes-en-fresco

Cartul
a2

AISLAMIENTO DE HONGOS AMBIENTALES,

OBSERVACIN DE HONGOS A PARTIR DE
MUESTRAS BIOLGICAS

I.

INTRODUCCIN
Te has puesto a pensar cmo los cadveres y frutas se descomponen. La naturaleza busc su
propia manera de poder deshacerse de la basura.

Los hongos tienen el poder de ayudar al medio donde viven descomponiendo la materia
orgnica. Te imaginas un mundo donde no se descomponga nada, que los cadveres de
animales y restos vegetales que estn amontonados mal oliente, produciendo enfermedades y
muchas cosas ms; los hongos cumplen ciertas funciones esenciales, no solo la de
descomponer y devolver elementos a nuestro medio ambiente: gracias a ellos tenemos la cura
de muchas enfermedades que ocasion la muerte de grandes masas de seres vivos, la
penicilina es un claro ejemplo de la utilidad de los hongos en el campo de la medicina. Tambin
los podemos encontrar como plaguicidas y en la industria alimentaria.
Los hongos en su mayora se encuentran en el medio ambiente, lo cual hace ms factible su
aislamiento; facilitando su estudio a los cientficos, tales como: caractersticas, estructuras,
produccin de toxinas o antibiticos.

II. OBJETIVOS

III.

Aprender a diferenciar las distintas variedades de hongos y sus funciones en el medio.

Reconocer las caractersticas especficas de cada hongo.

Fundamentos
1) IMPORTANCIA

a) Contribuyen al balance ecolgico debido a su calidad de

organismos desintegradores
b) Pueden actuar como micoherbicidas contra las malas
hierbas, bien aplicado directamente o mediante
substancias fitotoxicas obtenidas a partir de ellos
c) Puede usarse en procesos industriales gracias a las
enzimas hidroliticas que poseen; como por ejemplo
producen amilasa que ayuda a la fermentacin alcohlica
o la produccin de melaza de caa de azcar
d) Se puede usar hongos en el campo de farmacologa; por
ejemplo se puede usar como purgante; el cornezuelo de
centeno, a este se le utiliza para conseguir contracciones

durante el parto; LSD, la cual provoca efectos

alucingenos.
e) La mayora de veces los hongos solo afectan a la piel,
cabello las uas u otras zonas superficiales. La micosis
son muy comunes en pacientes inmunolgicos
deprimidos.
f) Se utilizan en la elaboracin de queso roquefort, asi
como en la maduracin del queso camembert; el Agaricus
Campestris se utiliza en algunas comidas

2) CARACTERSTICAS DE LOS HONGOS

a) Nutricin por digestin extracelular y absorcin
b) Eucariotas
c) Hetertrofos para funciones de carbono
d) La mayora hetertrofos para fuente de nitrgeno
e) Aclorofilicos
f) Osmtico
g) PH: 6.5
h) La mayora inmviles
i) Reproduccin por esporas: sexuales o asexuales; o
hifas
j) unicelulares o pluricelulares

3) MORFOLOGIA
A) PUEDEN SER:

Levaduras
Caractersticas
1. Unicelulares
2. De forma casi esfrica, ovoide o alargada
3. No existe entre ellos una distincin entre cuerpo
vegetativo y reproductivo

4. Su pared celular tiene mayor proporcin de quitina

combinada con otros compuestos como glucanos
5. No contiene hifas
6. Son tpicos de lugares con azucares
Mohos
Caractersticas
1. Multicelulares
2. Filamentosos
3. Tiene dos porciones: reproductiva y otra vegetativa
4. Compuesto por filamentos llamados hifas; las que
en conjunto forman un micelo, a menudo ests
estn dividas por tabiques o septos; pero tambin
puede que no sea taquicada y sea solo continuada.
4) REPRODUCCION
Los hongos pueden llevar a
reproduccin: asexual y sexual.

mecanismos

de

Reproduccin asexual: incluye la gemacin,

fragmentacin y la formacin de esporas asexuales

la

cabo

dos

Reproduccin sexual: supone la unin de dos ncleos,

proceso por el cual se forman las esporas sexuales, de
las que existen tres tipos: zigosporas, ascosporas y
basiodiosporas

5) MEDIOS DE CULTIVOS MAS USADOS EN HONGOS

 Agar dextrozado de saboureaud con cicloheximida y

cloranfenicol: se utiliza para el aislamiento e
identificacin de dermatofitos y cndidas
Agar dextrozado con cloranfenicol sin cicloheximida; se
utiliza para el aislamiento e identificacin de
patgenos ambientales y oportunistas
Agar de harina de maz; para identificar distintas
especies de cndida y para realizar subcultivos ya que
estimula la reproduccin de hongos miceliales
Agar de urea
IV)

PROCEDINIENTO

a) aislamiento de hongos en agar saboureaud

preparacin:
agar agar 0.38 gramos

peptona 1.25 gramos

extracto de carne 0.75 gramos
cloruro de sodio 1.25 gramos
glucosa 1 gramo

b) PREPARACIN DE UN CULTIVO
Poner 25 ml agua destilada en un matraz a hervir; luego se
adicion 0.38 gramos de agar agar, 1.25 gramos de de
peptona, 0.75 gramos de extracto de carne, 1.25 gramos de
cloruro de sodio y 1 gramo de glucosa; una vez vaciado
todos los ingredientes se calienta a fuego lento moviendo
constantemente hasta que los productos queden totalmente
disueltos.

Una vez hecho esto el cultivo es vaciado a la caja Petri y se

deja solidificar; una vez ya solidificado la dejamos al aire libre
por unos tres minutos y dejamos al hongo desarrollarse por
el lapso de una semana.
c) ALGUNOS HONGOS IMPORTANTES
i. Penicillium chrysogenum
1)presenta conidiforos tabicados
2)crecimiento rpido, vellosas, verdosas con una
corona radial ancha y blanca
3)Es el hongo productor de penicilina ms conocido

ii. Fusarium oxysporum

1) Invade y deteriora el sistema vascular de la planta,El

primer sntoma es un amarillamiento, ms adelante se
observa la marchitez de las hojas
2) Es un hongo blanquesino, que crece filamentosamente

iii. Aspergillus spp

1)
2)
3)

hongo filamentoso
muy txicos

algunasse emplean en la fermentacin de

alimentos en ciertas regiones.

4)

Poseen distintos tonos de verde, pardo,

amarillo, blanco, gris y negro

iv. Alternaria

1)
2)
v.

sus esporas son las causantes de la alergia

Las alergias a estos hongos son comunes,

pero las infecciones graves slo son habituales en

los pacientes inmunodeprimidos

Saccharomyces cerevisiae
1) hongo unicelular
2) El ciclo de vida de las levaduras alterna dos formas,
una haploide y otra diploide.
3) Las utilidades industriales de esta levadura pueden
ser la produccin de cerveza, pan y vino
Observacin: levaduras
Tcnica: preparado en fresco
Aumento empleado:
10 x
ocular

v)

40 x
objetivo

400 x
total

CONCLUSIONES
_la tcnica de agar saboureaud permite cultivar a los hongos de
manera muy sencilla; con este mtodo se puede estudiar a un
determinado hongo con mucha facilidad.
_las utilidades de los hongos en el medio ambiente cumplen
funciones diversas y necesarias en la vida de los seres vivos.

vi)

REFERENCIAS
Manual prctico de cultivo de setas, Rigoberto GaitonHernndez
http://hongos-alergenicos.reviberoammicol.com/files/036.PDF

Cartul
a3

PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO, SIEMBRA Y

AISLAMIENTO ACCIN DE LOS MICROORGANISMOS SOBRE
LOS CARBOHIDRATOS, GRASAS, PROTENAS Y
SUSTANCIAS NITROGENADAS

I. INTRODUCCIN
Los cientficos tienen la necesidad de observar a los microorganismos, hongos y otros seres
vivos por separado y verlos desarrollarse en su medio natural, por ello inventaron un medio de
cultivo para cada uno de ellos; donde stos se pueden desarrollar y a la vez el cientfico
puedan observarlos. Cada ser vivo debe sentir que est en su medio natural para que se
desarrolle normalmente, esto incluso funciona con nosotros, los seres humanos, que al estar
en un medio distinto al que estamos acostumbrados nos comportamos de manera diferente,
similarmente sucede en los microorganismos.
Los hongos son fciles de cultivar, puesto que se encuentran distribuidos en el medio
ambiente, uno de los medios de cultivo especifico para hongos es el Agar Sabouraud.
Algunos microorganismos sintetizan almidn, descomponiendo los carbohidratos y agregando
algunos colorantes como el lugol los podemos observar de mejor manera; hay muchos
medios por los cuales podemos comprobar el metabolismo que stas bacterias y hongos
realizan; algunas de estas pruebas pueden ser las de IMVIC, la prueba de rea, gelatinasa y
como degradacin de grasas tenemos la produccin de pigmentos por las pseudomanas.
Estas son algunas de las pruebas que se pueden realizar en un laboratorio. Muchos seres
vivos se desenvuelven de manera similar a otra; pero siempre habr algo que las diferencie.

II. OBJETIVOS
Aprender la composicin y elaboracin de medios de cultivo especficos para hongos.
E. Observar los productos sintetizados por los hongos y bacterias.

III. Conclusiones
- existen diferentes mtodos para la identificacin de la hidrolisis de
almidn algunas al medio lo vuelen de color azul violceo como es
el caso del lugol y otra es la prueba de PV Y RM la cual vuelve rojo
al medio donde se hidroliza al almidn