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Fundamento terico
Enzimas amilasas son las ms estudiantes en este campo debido a su influencia
directa en la degradacin del almidn, uno de los productos alimentarios ms
explotados a nivel mundial.
Las amilasas son enzimas las cuales hidrolizan molculas de almidn dando como
productos dextrinas y polmeros compuestos progresivamente por unidades de
glucosa. Esta familia de enzimas hidrolticas est compuesta por a protenas
catalticas: alfa-amilasa, beta-amilasa; glucoamilasa; isoamilasa. Se encuentran
ampliamente distribuidas en tejidos vegetales, donde juegan un rol muy importante en
la degradacin del almidn en la germinacin de las semillas; en tejidos animales,
cumpliendo una misin digestiva; y en diversas especies de microorganismos como
hongos y bacterias.
Como bien es conocido las cadenas de almidn estn compuestas por dos grandes
sub-cadenas, amilosa y amilopectina. La alfa-amilasa se caracteriza por atacar los
enlaces 1,4-alfa-glicosdicos en el centro de la cadena de los polisacridos, por lo que
se la conoce como endoamilasa, produciendo glucosa, maltosa y oligosacridos.
La enzima alfa-amilasa en su accionar degrada la amilosa en maltosa y pequeos
compuestos de glucosa. Sin embargo, esta enzima solo es capaz de degradar
parcialmente la amilopectina y el glucgeno debido a que no es capaz de desdoblar
los enlaces glicosidicos1-6 encontrados en los puntos de ramificacin de la cadena del
polisacrido. Por otro lado, La beta-amilasa, presente en plantas y bacterias, tambin
cumple la funcin de degradar los enlaces 1,4-a-glucosdicos pero comienza su accin
por el extremo libre no reductor del almidn, liberando maltosa al igual que la enzima
alfa-amilasa. La hidrlisis se detiene en los puntos de ramificacin de la amilopectina y
el residuo se conoce como dextrina lmite. La pululanasa o isoamilasa, tambin
perteneciente a la esta familia, hidroliza los enlaces 1,6-alfa-glicosdicos quitando las
ramas de la amilopectina o las dextrinas. Si existe un acompaamiento general del
complejo de las amilasas se puede lograr efectiva una degradacin total del almidn.
La induccin de amilasa tipo alfa requiere un sustrato que contenga enlaces alfa-1,4
glucosdicos, adems de maltosa, dextrina y almidn. La Glucosa, as como es el
producto final de la hidrolisis, tiene la posibilidad de reprimir la sntesis de enzima
como un mecanismo conocido como represin catabolitica. Sin embargo, se ha
encontrado que algunos microorganismos en distintos sustratos que tienen como
fuente de carbono a los carbohidratos no inducen la produccin de amilasas.
Los medios de cultivo han facilitado para los microorganismos el desarrollo de enzimas
con propiedades fsico-qumicas muy deseables. La produccin de alfa-amilasa puede
darse en medio sumergido o en estado solido o por procedimientos de fermentacin.
La concentracin de metabolitos para el crecimiento de los agentes microbiales es
importante. Influye directamente la composicin del medio as como las fuentes de
carbono, de nitrgeno y el contenido de sales inorgnicas.
En cuanto a trminos de aplicabilidad industrial, es necesario estudiar la produccin de
enzimas y analizar el factor de termoestabilidad, ya que se ha demostrado que la
temperatura est ligada directamente a la velocidad de reaccin de la enzima, menor
viscosidad en el sustrato y disminucin de la contaminacin microbiana. Los
microorganismos apropiados para la produccin de enzimas deben tener ciertas
propiedades como rapidez de crecimiento, adaptacin a nutrientes relativamente
baratos y sin necesidad de inductores. Adems, se debe obtener un alto rendimiento
de enzima, de forma que sea fcil aislarlo, purificarlo y concentrarlo sin que se
produzca la formacin concomitante de metabolitos txicos o inmunognicos.
La mayora de los enzimas empleados comnmente en la industria son de origen
microbiano y se producen por fermentacin sumergida aerobia convencional, que
permite un mayor control de las condiciones de crecimiento que la fermentacin en
estado slido. Se sabe mucho acerca de la seleccin de cepas de organismos y
condiciones de cultivo, aunque menos sobre la regulacin de la sntesis, degradacin y
secrecin de la enzima por el organismo productor. Estas enzimas son con frecuencia
extracelulares, lo que facilita su aislamiento y purificacin.
PROBLEMA A RESOLVER
La bsqueda continua de microorganismos ms eficientes en la produccin de alfa
amilasa es una alternativa, para optimizar la produccin de esta enzima de importancia
comercial. Para ello, se ha aislado tres cepas de microorganismos amiloliticos, sin
embargo se desea saber cul de las tres cepas es ms eficiente en la degradacin de
ste polisacrido. Para ello se ha realizado un procedimiento de laboratorio (Remtase
al laboratorio 2, del laboratorio virtual del curso de Biotecnologa) y responda la
siguiente pregunta:
Fundamentacin:
Establezca la garanta: Respalde su hiptesis con la ley o teora cientfica que corresponda y
explique la hiptesis planteada.
A Analice la evidencia. Para ello, realice los laboratorios virtuales 2 y 3, en ese orden
y tome los resultados obtenidos, lea detenidamente los documentos, los artculos
cientficos relacionados y escoja de ellos los datos empricos (experimentales) y
tericos que le puedan servir como evidencia.
Respalde la Garanta. Una vez analizados los datos de los laboratorios y los
artculos cientficos, relacinelos con la garanta (teora cientfica) y construya la
evidencia cientfica.
C Encuentre las posibles excepciones, que se puedan presentar sobre la hiptesis
escogida, adelntese a las posibles refutaciones que pueda recibir sus argumentos.