UNIVERSIDAD PRIVADA NORBERT WIENER

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

E.A.P TECNOLOGA MDICA EN ANATOMA PATOLGICA Y

LABORATORIO CLNICO
CITOLOGA II

SECCIN: LC8M1

PRODUCTO N 1

USO CITOLOGA CONVENCIONAL CITOLOGA CON CITOCENTRFUGA

EN EL HOSPITAL NACIONAL SERGIO E. BERNALES.

Docente: M.C. VEGAS NAVARRO, GABRIELA.

Alumno (s):
DAMIAN SALAZAR, JUAN JOS.
DOMINGUEZ TRUJILLO, RUTH.

LIMA-PER
2015

USO CITOLOGA CONVENCIONAL CITOLOGA CON CITOCENTRFUGA

EN EL HOSPITAL NACIONAL SERGIO E. BERNALES.
HOSPITAL NACIONAL SERGIO E. BERNALES

REA DE LABORATORIO DE ANATOMA PATOLGICA

DRA. GIULIANA M. URQUIZO SALAS.
TECNICAS EN EL LABORATORIO DE CITOLOGIA
INTRODUCCIN
La citologa, permite examinar grupos celulares de diferentes partes del
organismo, convirtindola en una herramienta diagnstica muy importante para
el clnico. La coleccin de muestras citolgicas es muy sencilla, econmica y
segura para el paciente.
En general existen 2 grandes mtodos de preparacin de muestras
dependiendo de la cantidad de lquido que presenten, de esta manera
tenemos:

 Mtodo directo: se emplea cuando la muestra es rica en clulas, es

decir, presenta muy poca cantidad de lquido por lo que el material
colectado se coloca directamente sobre un portaobjetos para realizar el
frotis, como ejemplos tenemos la puncin aspiracin con aguja fina, los
raspados e improntas.
Mtodo indirecto: en caso de que las muestras obtenidas sean lquidas
y para realizar el frotis habr que concentrar la poblacin celular
mediante centrifugacin, ejemplos son la orina y lquidos procedentes de
lavado.
Los estudios citolgicos pueden agruparse en 4 grandes categoras:
1. Investigacin de las clulas atpicas en las secreciones lquidas o
derrames.
2. Investigacin de clulas atpicas despus de un escobillado o raspado
con instrumentos diversos de una mucosa o una lesin de piel.
3. Citodiagnstico despus de una citopuncin, es decir, despus de una
puncin hecha con aguja fina para recoger lquido tisular recogiendo
clulas en suspensin y no un fragmento del tejido.
4. Citodiagnstico de pieza operatoria no fijada por la tcnica de los frotis o
de las impresiones.
Los 2 primeros grupos forman parte de la citologa de deteccin precoz o
exfoliativa basada en la investigacin de clulas anormales, a veces poco
numerosas y muy alteradas que requieren del patlogo para que las revise
con paciencia, atencin y gran experiencia.
Los grupos 3 y 4 permiten en cambio el estudio de verdaderas poblaciones de
clulas, con frecuencia numerosas y no alteradas, en las que se pueden
observar las modificaciones morfolgicas ms o menos marcadas, al densidad,
la cohesin, la diferenciacin y la reaccin celular del estroma avocando en
numerosos casos a un verdadero citodiagnstico inmediato y al establecimiento
de un ndice citolgico de malignidad que puede intervenir en el pronstico y
las indicaciones teraputicas de los tumores.
PREPARACION DE LA MUESTRA PARA EL ESTUDIO CITOLOGICO
Tipos de muestras segn su procedencia

Muestras procedentes de lquidos fisiolgicos como por ejemplo sangre,

orina lquido cefalorraqudeo, liquido pleural, liquido prosttico, contenido
gstrico.
Muestras procedentes de lquidos y fluidos patolgicos, liquido de
derrames, pleural, peritoneal, contenido de un quiste, expectoracin
bronquial, liquido procedente del lavado de esfago, estmago, colon y
las procedentes de citopunciones como por ejemplo la puncin de
mdula sea, la puncin heptica.
Muestra procedentes de frotis legrados como por ejemplo el frotis
vaginal y el cepillado bronquial.
Piezas operatorias.

Preparacin general de la muestra

La totalidad de las muestras que recibe el laboratorio de citologa se puede
separar en 3 grandes grupos:
Frotis fijados: lo constituyen aquellos frotis que han sido extendidos y fijados
por el clnico inmediatamente despus de la obtencin de la muestra. Deben
llegar al laboratorio adecuadamente identificadas con el nombre del paciente y
uniformemente extendidos, normalmente se fijan con cito spray, estos portas
que ya llegan al laboratorio fijados estn listos para proceder a la tincin
rutinaria que se suele realizar al de papanicolau, ejemplos son las secreciones
de mama, las muestras procedentes de cepillados y otros tipos de muestras
citolgicas.
Frotis secados al aire: son frotis extendidos por el clnico inmediatamente
despus de la obtencin de la muestra y secados al aire, estos frotis no fijados
van destinados a ser teidos con la tincin de Romanowsky.
Muestras no fijadas ni secadas al aire: este tercer grupo incluye las muestras
frescas que llegan a laboratorio generalmente en forma de fluido lquido o
semislido, requiere mayor dedicacin y habilidad. El procesamiento de estas
muestras puede ser por:
Extensin directa: es la tcnica ms rudimentaria especialmente
til para muestras mucosas (esputo, lquido de aspecto mucoso,
aspirado bronquial). Los pasos a seguir son:
Identificar dos o ms portas con el nombre o nmero de orden del
enfermo.
Observar la muestra y anotar su aspecto microscpico.
Se seleccionan aquellas partes de la muestra que son
representativas de la misma y las de apariencia patolgica.
Se deben colocar las partes seleccionadas sobre un porta y
extenderlas con otro hasta conseguir frotis uniformes, tambin se
pude hacer con el asa de platino previamente esterilizada.
Las portas preparadas pueden introducirse en la solucin fijadora
(caso de la tensin de Papanicolau) o se deja secar al aire (si se van
a teir con Romanowsky).
Centrifugacin: es una tcnica til para muestras seromucosas y
grandes volmenes de lquidos serosos (liquido qustico y procedentes
de lavados).El mtodo consiste en:
Anotar el aspecto mucoso de la muestra.
Agitar la muestra para despus resuspender las clulas que contiene
y verter igual cantidad en dos tubos de centrifuga.
Se centrifuga a una velocidad aproximada de 2000rpm, durante 5
minutos, una vez centrifugado se decanta el sobrenadante, mezclar
el sedimento con unas gotas de sobrenadante para resuspender las

clulas y depositar con una pipeta Pasteur una gota de este

sedimento sobre un porta previamente identificado.
Realizar una extensin directa con esta parte de la muestra o
citocentrifugarla.
Fijar rpidamente con la solucin fijadora.
Citocentrifugacin: esta tcnica se hace con una centrifuga llamada
citospyn. Pequeas alcuotas (cantidades iguales) de muestra lquida se
hacen girar lateralmente sobre un porta para formar una monocapa de
clulas. Es una tcnica de gran utilidad y rapidez para la preparacin de
muestras lquidas.
Filtros de membrana: constituyen una tcnica de concentracin de
clulas en muestras lquidas de baja densidad celular (orina) ya que
rescatan mayor nmero de clulas que la citocentrifugacin. Estos filtros
son membranas porosas de plstico cuyos poros van de 10 - 8 micras.
Los ms utilizados son:
o Tipo millipore (de acetato de celulosa).
o Filtros nucleopore (de policarbonato).
Se realiza una filtracin con la muestra y posteriormente se examina el filtro.
En citologa se usan sobre todo los filtros SM, cuyos poros van de 1 - 2 a 5
micras, cada cm2 de superficie contiene millones de poros capilares que
ocupan ms del 80 % del volumen total. Este filtrado no necesita ningn
fraccionamiento del lquido y no hay que extraer el sedimento y colocarlo sobre
el portaobjetos; ello permite una estimacin cuantitativa de las clulas
cancerosas en un volumen de lquido dado pero en cambio pueden haber
superposiciones celulares molestas y la membrana filtrante experimentar una
desecacin rpida.
El lquido se filtra a la presin atmosfrica o a una presin negativa de 25 mm
de mercurio, una presin negativa ms fuerte no es aconsejable ya que podra
deformar las clulas.
La fijacin debe hacerse nicamente con alcohol etlico de 95 pues el alcohol
absoluto, el ter o la acetona provocaran la disolucin del filtro.
El filtro con la muestra sujeto con una pinza se coloca sobre un portaobjetos y
se tie.
Ejemplos de preparacin de algunas muestras.
ORINA
Recoger aproximadamente 100 ml de orina en un recipiente estril. Algunos
prefieren la 1 orina de la maana pero otros aconsejan hacer practicar
ejercicios al enfermo especialmente en caso de tumor vesical ya que la
agitacin de la orina contra la pared provoca una descamacin importante.

Si se sospecha de un tumor de urter, pelvis renal o rin es preferible recoger

la orina por cateterismo uretral.
Centrifugar unos 10 ml a 1500 rpm durante 5 minutos, seguidamente se realiza
un primer examen del sedimento con el fin de apreciar la cantidad de cristales,
si hay muchos se eliminar ajustando el pH; si hay muchos hemates hay que
hemolizarlos con actico al 5%.
Rechazar el lquido sobrante y se aspira el sedimento con una pipeta Pasteur,
si el sedimento es escaso hay que usar una tcnica de concentracin como la
citocentrifugacin.
Extender el sedimento sobre un porta preferiblemente albuminado. Fijar
inmediatamente durante 15 segundos. Proceder a la tcnica de tincin.
SANGRE
Todos los mtodos se basan en la eliminacin de los hemates por hemlisis,
por sedimentacin acelerada o por centrifugacin fraccionada.Se prctica
mucho al tcnica de Seal, que se basa en la diferente densidad de las clulas
cancergenas y los linfocitos por una parte y los eritrocitos y PMN por otra.
Se usa como medio de separacin una mezcla de diferentes siliconas de
densidad 1, 075 las clulas cancerosas y linfocitos se acumulan en la superficie
de la silicona y los PMN y eritrocitos se acumulan por debajo de la silicona.
SECRECIONES PROSTTICAS
Se obtienen por masaje de la prstata en el polo inferior ya que esta regin es
frecuentemente el lugar de predileccin del desarrollo del cncer. Hay que
hacer ligera presin con el dedo en el polo inferior y abstenerse de apretar las
vesculas seminales a fin de evitar la descamacin de clulas de este origen.
Terminado el masaje se har presin sobre la uretra hasta el orificio del meato
uretral para conducir las secreciones.
Una vez recogidas se depositan sobre las portas previamente impregnadas de
albmina de Mayer para asegurar la adhesin de las clulas. Cada gota es
comprimida entre 2 portas que son separados por deslizamiento y fijados
inmediatamente.
DERRAMES PLEURALES ASCTICOS O PERICRDICOS
Deben recogerse en frascos que contengan anticoagulante, se centrifuga la
muestra a 2000 rpm durante 10 minutos y se extiende el sedimento sobre dos
portas, los cuales sern teidos uno con la tcnica de Papanicolau y otro con la
tcnica de May Crundwald Giemnsa.
LIQUIDO CEFALORRAQUDEO
Es centrifugado y el sedimento es extendido y teido.