QACIF et al.

Aspects qualitatif et quantitatif des peroxydases du palmier dattier (Phoenix dactylifera

L.) tudis chez des pieds mles et femelles
N. QACIF1, K. BENDIAB2 & M. BAAZIZ1

Lien: http://www.biotech-ecolo.net

. Equipe de Biochimie et Biotechnologies des Plantes, Universit Cadi Ayyad, Facult des Sciences-Semlalia,
B.P : 2390, 40000 Marrakech, Maroc. E-mail : baaziz@ucam.ac.ma
2
. Dpartement de Biologie, Facult des Sciences et Techniques de Guliz, Marrakech

Rsum
Dans le but de dfinir une stratgie damlioration et de gestion des ressources gntiques des
palmeraies marginales, la distinction prcoce des pieds mles et femelles savre fortement
recommande. Lutilisation des marqueurs biochimiques et molculaires devient un pralable
indispensable pour atteindre ce but.
Les peroxydases (EC.1.11.1.7) sont des oxydo-rductases impliques dans plusieurs processus
dont la croissance des plantes et leur rsistance aux contraintes. Afin dtudier les proprits
physico-chimiques et catalytiques des peroxydases des folioles et des inflorescences du palmier
dattier provenant de pieds mles et femelles, une purification partielle de ces enzymes a t
ralise par prcipitation au sulfate dammonium suivie dune chromatographie sur Sephadex
G25 et dune lectrophorse prparative sur des gels de polyacrylamide 11%.
Llectrophorse dextraits enzymatiques prpars partir des folioles et des inflorescences
mles et femelles, a permis lobtention de zymogrammes montrant deux zones dactivit (E1 et
E2). Lextrait correspondant aux inflorescences femelles reprsente deux bandes
supplmentaires au niveau de la deuxime zone E2.
Le taux de purification atteint pour les fractions des folioles femelles est de lordre de 46 fois et
de 117 fois pour celles des mles, alors quil est de lordre de 9.59 et 89.14 fois pour les fractions
des inflorescences femelles et mles, respectivement.
Les peroxydases du palmier dattier sont caractrises par une grande thermostabilit avec un
pH optimum de 5,8.
Mots cls : Palmier dattier, Phoenix dactylifera L., peroxydases, pieds mles, inflorescences,
purification

Introduction
La palmeraie de Marrakech est constitue essentiellement de sujets issus de semis et dont les touffes
mles reprsentent actuellement plus de 54% de lensemble des touffes existantes [1]. Elle reprsente
un rservoir dhybrides, de qualit gnralement moyenne et de maturit tardive. Or, lamlioration
gntique de telles palmeraies marginales est lie lidentification des cultivars du palmier dattier
(Phnix dactylifera L.) et la distinction prcoce des pieds mles et des pieds femelles. En considrant
la prennit de cette espce, lutilisation des marqueurs biochimiques et molculaires devient
ncessaire.
Les peroxydases (EC.1.11.1.7) sont des enzymes hmoprotiques trs rpandues chez les tres vivants.
Chez les plantes, elles catalysent l'oxydation de diffrents substrats (des amines aromatiques, des
phnols,), elles interviennent ainsi dans diffrents phnomnes physiologiques tels que
l'enracinement, la lignification, et la rsistance aux stress biotiques et abiotiques [2, 3, 4, 5, 6].
L'activit des peroxydases est module par plusieurs facteurs physico-chimiques telle que la
temprature, le pH et la force ionique.
L'objectif de ce travail est l'tude des aspects qualitatif et quantitatif des peroxydases en vue de leur
valuation comme marqueurs dans la dtermination prcoce du sexe chez le palmier dattier (Phnix
dactylifera L.).

Deuxime Congrs International de Biochimie. Agadir (Maroc), 9, 10, 11, et 12 Mai 2006

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Matriel & mthodes
Le matriel vgtal utilis dans ce travail est constitu de folioles et dinflorescences chantillonnes
de palmiers adultes mles et femelles appartenant la palmeraie de Marrakech. Les chantillons
prlevs sont identifis suivant le sexe du pied dont ils sont issus, et ils sont spars en 2 lots selon le
sexe mle ou femelle.
- Purification partielle des peroxydases
La purification partielle des peroxydases des folioles et des inflorescences du palmier dattier (Phnix
dactylifera L.) est ralise par broyage de 30 g du matriel vgtal frais. Il en rsulte un extrait brut
dont les protines sont fractionnes par prcipitation au sulfate d'ammonium (0 80 %). Les extraits
sont ensuite dessals par chromatographie d'exclusion sur colonne de Sephadex G25. l'lution est faite
par le Tris-HCl 50 mM (pH 7,2). Les fractions actives sont rassembles pour constituer un seul extrait
qui est soumis llectrophorse prparative sur gel de polyacrylamide 11%
- Dosage de l'activit peroxydasique
L'activit peroxydasique a t dose par spectrophotomtrie 470 nm en prsence de H2O2 et de
gaiacol.
- Sparation des peroxydases par lectrophorse
la sparation des peroxydases a t faite sur un gel de polyacrylamide concentration uniforme 11%.
Une partie du gel a servi pour la rvlation in situ de lactivit enzymatique en utilisant comme
substrat donneur de protons la benzidine 0,05 % (P/V) prpare dans le tampon actate 0,1 M (pH
5,0). La raction est dclenche par une solution de peroxyde d'hydrogne H2O2 1%. Lautre partie du
gel a servi pour llution des formes majeures des peroxydases pralablement spares sur gel.
Rsultats & Discussion
Llectrophorse prparative a permis dobtenir deux fractions majeures lues partir des zones E1 et
E2. Lextrait correspondant aux inflorescences femelles reprsente deux bandes supplmentaires au
niveau de la deuxime zone E2 ayant des Rf de 0,4 et 0,47, ces deux bandes sont moins intenses dans
l'extrait correspondant aux folioles femelles (Fig. 1, 2). La purification partielle des peroxydases de
Phoenix dactylifera L. par lution des formes enzymatiques pralablement spares par lectrophorse
a permis dobtenir des taux de purification variable selon la nature du matriel vgtal utilis. Ainsi,
les taux de purification des peroxydases de la zone 1 calculs pour les folioles femelles et mles sont
de lordre de 46 fois et 117 fois respectivement. Ils sont de lordre de 9.59 et 89.14 fois pour le cas des
inflorescences femelles et mles, respectivement.
La purification partielle des peroxydases par lectrophorse prparative a permis de dterminer
quelques caractristiques physico-chimiques et catalytiques. Ces enzymes prsentent une grande
thermostabilit (Fig. 3) avec un pH optimum de 5,8 (Fig. 4).
IF

IM

Zone E 1

FF

FM
0,01
0.20
0.25
0,3
0,35
0,4
0,47

Zone E 2

+
Fig. 1. Exemple de zymogramme obtenu par
lectrophorse sur gel de polyacrylamide continu
11% des peroxydases des inflorescences femelles
(IM) du palmier dattier (Phoenix dactylifera L.)

Fig. 2. phnotypes lectrophortiques

des peroxydases extrapurifies partir
des inflorescences (I) et des folioles (F)
mles (M) et femelles (F) du palmier
dattier (Phoenix dactylifera L.)

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180

120

0,3

100

0,25

DO/min 470 nm

80
60
40

0,2
0,15
0,1
0,05

20
0

Fig. 3. Effet de le temprature (50 C,

60 C, 70C, et 80 C) sur l'activit
des
peroxydases
partiellement
purifies partir des folioles du
palmier dattier

6,
2

30
Temps (min)

5,
4

20

4,
6

10

4,
2

3,
4

Activit relative (%)

QACIF et al.

pH

Fig.4. Effet du pH sur l'activit des

peroxydases partiellement purifies
partir des folioles du palmier
dattier

En conclusion, et considrant les donnes bibliographiques rapportant le rle des oxydorductases

dans la rgulation des phytohormones impliques dans la dtermination sexuelle des plantes [7, 8], les
peroxydases pourraient constituer aprs dautres investigations complmentaires, des marqueurs
potentiels pour l'identification prcoce des pieds mles et femelles chez le palmier dattier. Les tudes
ralises dans ce but sont en cours.
Rfrences bibliographiques
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femelles de la rgion de Marrakech ralise sur la base des phnotypes isoenzymatiques des estrases,
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