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PRACTICA No. 1
TEORIA DE LA GENERACION ESPONTANEA

OBJETIVO:
El alumno ser capaz de comprender la teora de la generacin espontnea, as
como el proceso por el cul los microorganismos se originan de materiales inertes.

INTRODUCCIN.
Pueden los microorganismos originarse a partir de materiales inertes o lo
hacen a partir de microorganismos preexistentes?. En esta prctica tendr usted la
oportunidad de explorar por si mismo el problema.

MARCO TEORICO.
El origen de la vida
El origen de la vida ha tenido en todas las civilizaciones una explicacin cuyo
denominador comn era la intervencin divina. La ciencia, sin embargo, ante esta
gran pregunta necesitaba buscar causas, reglas o mecanismos que dieran a ese
hecho una justificacin constatable.
La generacin espontnea de la vida fue una teora autorizada y desautorizada
consecutivamente en varias ocasiones entre 1668 y 1862, ao ste ltimo en que
se disip la incgnita. En 1668 el mdico italiano Francesco Redi demostr que las
larvas de mosca de las carnes en descomposicin se producan a causa de
puestas previas, y no espontneamente por la propia carne. La generacin

espontnea quedaba en parte desautorizada (no exenta de polmica) a pesar del

arraigo que esa teora tena en la historia de la biologa. 1
La polmica sobre la generacin espontnea se aviv an ms cuando en 1677
Antoni Van Leeuwenhoek, un fabricante de microscopios y pionero en
descubrimientos sobre los protozoos, desautoriz de nuevo la antigua teora
cuando experiment sobre microorganismos slo visibles al microscopio, ante la
aparente constatacin de que estos seres aparecan espontneamente en los
alimentos en descomposicin. Demostr que las pulgas y gorgojos no surgan
espontneamente a partir de granos de trigo y avena, sino que se desarrollaban a
partir de diminutos huevos.1,2,3
Tuvieron que transcurrir cien aos para que en 1768 el fisilogo italiano Lazzaro
Spallanzani (fundador de la biologa experimental) demostrase la inexistencia de
generacin espontnea. Hirviendo un caldo que contena microorganismos en un
recipiente de vidrio, y cerrndolo despus hermticamente para evitar la entrada
de aire, el lquido se mantuvo claro y estril. Los inmovilistas de esa poca no
dieron validez al experimento, a pesar de su rotundidad, y expusieron como
argumento que se haba alterado el aire del interior del recipiente por efecto del
calor, eliminando los principios creadores de la vida.
El problema segua sin resolverse definitivamente en la segunda mitad del siglo
XIX, hasta que el bilogo francs Louis Pasteur se propuso emprender una serie
de experimentos para solventar la cuestin de la procedencia de esos
microorganismos que, en apariencia, se generaban espontneamente. En 1862
Pasteur lleg a la conclusin de que los grmenes penetraban en las sustancias
procedentes de su entorno. Ese descubrimiento dio lugar a un debate feroz con el
bilogo francs Flix Pouchet, y ms tarde con el respetado bacterilogo ingls
Henry Bastion; ste ltimo mantena que la generacin espontnea poda darse en
condiciones apropiadas. Una comisin de la Academia de Ciencias acept
oficialmente en 1864 los resultados de Pasteur, a pesar de ello los debates
duraron hasta bien entrada la dcada de 1870.

En la actualidad, la base de referencia de la teora evolutiva del origen de la vida

se debe al bioqumico sovitico Alexandr Ivnovich Oparin, aunque el britnico
John Burdon Sanderson Haldane sostuvo una idea similar. Oparin postul en 1924
que las molculas orgnicas haban podido evolucionar reunindose para formar
sistemas que fueron hacindose cada vez ms complejos, quedando sometidos a
las leyes de la evolucin. Segn esta teora, los ocanos contenan en sus
orgenes gran cantidad de compuestos orgnicos disueltos. En un proceso que
requiri mucho tiempo, esas molculas se fueron agrupando en otras mayores y
stas a su vez en complejos temporales. 2
Alguno de esos complejos se convirti en un protobionte tras adquirir una serie de
propiedades, por las cuales poda aislarse e introducir en su interior ciertas
molculas que le rodeaban y liberar otras. Las funciones metablicas, la
reproduccin y el crecimiento habran aparecido despus de que el protobionte
adquiriera la capacidad de absorber e incorporar las molculas a su estructura,
para finalmente conseguir separar porciones de s mismo con iguales
caractersticas.

La teora de Oparin fue experimentada con validez por Stanley Miller en 1953,
como parte de su tesis doctoral dirigida por H. Urey; consiguiendo obtener
compuestos orgnicos complejos despus de reproducir las condiciones primitivas
del planeta en un aparato diseado al efecto.
Miller cre un dispositivo, en el cual la mezcla de gases que imitan la atmsfera
primitiva, es sometida a la accin de descargas elctricas, dentro de un circuito
cerrado en el que herva agua y se condensaba repetidas veces. Se producan as
molculas orgnicas sencillas, y a partir de ellas otras ms complejas, como
aminocidos, cidos orgnicos y nucletidos.
Se abri as camino a la obtencin de numerosas molculas orgnicas. En
condiciones de laboratorio se han conseguido sintetizar azcares, glicerina,

aminocidos, polipptidos, cidos grasos, o porfirinas que es la base de la clorofila

y hemoglobina, etc.
Una condicin indispensable para la evolucin de la vida a partir de materia
orgnica no viva, era la existencia de una atmsfera terrestre carente de oxgeno
libre. En opinin de Haldane, que sostena esa idea, durante el proceso
biogentico los compuestos orgnicos no podran ser estables en una atmsfera
oxidante (con O2); seran los organismos fotosintticos los que posteriormente
produciran el O2 atmosfrico actual.1,2,5,3
En resumen, la vida surgi en unas condiciones ambientales muy distintas a las
actuales, las de la Tierra primitiva, a partir de molculas orgnicas que no
competan con ningn otro organismo vivo. Mediante la intervencin de la
seleccin natural se habran ido diversificando hasta los actuales organismos.

MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO

8 matraces de 250 ml.
600 ml de caldo nutritivo
Tubo de vidrio recto de 8 a 10 cm. De largo
Tubo de vidrio en forma de S, de 18 a 20 cm de largo
Parafina o cera para sellar
Algodn
Tapn de goma para un matraz
Papel aluminio
Cuerda o hilo

METODOLOGA

Vierta 75 ml de caldo en cada uno de los matraces:

Matraz 1: Tpelo con algodn. No lo caliente.

2,5

Matraz 2: Tpelo con algodn. Calintelo suavemente en un bao de agua

hirviendo Durante 10 minutos.
Matraz 3: Calintelo suavemente en bao de agua hirviendo durante 10 minutos y
djelo Destapado.
Matraz 4: calintelo suavemente en bao de agua hirviendo durante 10 minutos.
Despus de Calentado tpelo con un tapn. Selle el tapn al vidrio con cera o
parafina.
Matraz 5: Colquelo en la olla de presin o en el autoclave durante 15 minutos a
una Presin de 15 libras. Deje el matraz destapado.
Matraz 6: Tpelo con algodn. Cubra el tapn de algodn y el cuello del matraz
con una o Dos capas de papel aluminio. Amrrelo fuertemente. Colquelo en la
olla de Presin o en el autoclave como hizo con el matraz 5.
Matraz 7: Tpelo con algodn a travs del cual se ha insertado un tubo de vidrio
recto. Colquelo en la olla de presin o en el autoclave como hizo con el anterior.
Matraz 8: Tpelo con algodn a travs del cual se ha insertado el tubo de vidrio en
forma de

S . Colquelo en la olla de presin o en el autoclave igual que los

anteriores.

Coloque los matraces en una mesa de trabajo (evite la luz directa del sol).
Observe los cambios en los matraces, al principio diariamente y despus cada
semana. Anote sus observaciones. Cuando aparezcan cambios en los matraces,
haga una preparacin hmeda de una gota de caldo y obsrvela al microscopio
con el objetivo de mayor aumento. Si tiene dificultades para observar prepare un
frotis coloreado con azul

de metileno y use el objetivo de inmersin. Pida

instrucciones a su profesor.
Prepare un cuadro que muestre los datos de observacin y lo que ha sucedido en
cada matraz.

RESULTADOS
Realizar un cuadro que muestre los datos de observacin y lo que ha sucedido en
cada matraz.

CUESTIONARIO
1.- Con base en las observaciones realizadas en los matraces Cules son sus
conclusiones sobre el origen y fuente de los microorganismos.
2.- Que aplicaciones prcticas sugiere este experimento?

REFERENCIAS

1.- Carlos M. Barzizza 1949.Microbiologa.

2.- Bowen W. S. 1963. Microbiologa General y aplicada.. Editorial salvat.
3.- Burdon K.L. 1971. Microbiologa editorial Impresora Publi-mex.
4.- Seeley H.W. 1973. Microbios en accin. Manual de laboratorio para
microbiologa. Edit. Blume S.A.
5.- Palieroni N.J. 1970. Principios generales de microbiologa. Edit. Sec. Gral. De
los estado Americanos.

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PRCTICA No. 2

DIFERENCIACION DE CLULAS PROCARIOTES Y EUCARIOTES

OBJETIVO
Observar e identificar microscpicamente las diferencias que existen dentro de los
cuerpos celulares procariote y eucariote.

INTRODUCCIN
En la naturaleza existen dos tipos de clulas, una de ellas ha recibido el nombre de
procaritica (del griego antes del ncleo), la otra evolucion de la clula procaritica y en
la actualidad, se encuentra en protistas, vegetales, hongos y animales, esta recibe el
nombre de eucaritica (ncleo verdadero)

La diferencia marcada entre estas dos clulas consiste en que la clula eucaritica posee
material gentico dentro de una estructura limitada por una membrana nuclear y
normalmente otros organelos, mientras que el material gentico de las procaritas no est
dentro de una membrana.
MARCO TEORICO
La mayora de los sistemas biolgicos estn formados por unidades llamadas clulas.
Cada clula es una entidad viva completa; la biounidad ms pequea capaz de
mantener una existencia independiente. Este concepto (una de las doctrinas bsicas
unificadoras de la biologa) fue elaborado por Schleiden y Schwan en 1839, ms de 150
aos despus del primer reconocimiento evidente de la naturaleza celular de las plantas
superiores por Robert Hooke. La nica excepcin a este conceptos son los virus, que no
tienen capacidad de vida independiente, debido en gran parte a su lapso de vida, pues

deben asociarse y vivir dentro de las clulas a fin de reproducirse, as que no son, en el
sentido ms amplio, verdaderos organismos vivos.1

Las clulas de los organismos ms simples son capaces de realizar todas las actividades
especficas. Necesitan, por lo tanto, de la capacidad para comunicarse unas con otras, de
manera que las actividades de grupos de clulas especializadas puedan coordinarse y los
productos de un proceso metablico de un grupo de ellas puedan transferirse a otro grupo
para promover el metabolismo. Cada una de las clulas de un organismo multicelular
porta inicialmente, y quiz por toda su vida, la totalidad de la informacin inmediatamente,
por lo tanto, la clula debe tener algn sistema de seleccin y ciertas instrucciones
externas que la habiliten para seleccionar la informacin apropiada.2

Es evidente que el organismo influye sobre el patrn de desarrollo de las clulas

individuales o, en otras palabras, el comportamiento de una de ellas es influenciado por
las otras. Para comprender el comportamiento de un organismo, deben conocerse
ntimamente los detalles del comportamiento y capacidades de las clulas que no
constituyen. Inversamente, el estudio de las actividades y reacciones de una sola clula o
de sus partes es una pretensin estril, a menos que se la estudie en la perspectiva de
todo el organismo del que es una parte y el cual controla y dirige su comportamiento y
desarrollo.3

Las clulas y los organismos formados por ellas, pueden dividirse en dos tipos; las
procariticas (pro, antes y karyotic, que posee ncleo; por lo tanto, clulas que carecen de
ncleo organizado o membrana nuclear) y las eucariticas (eu, bueno; por lo tanto,
clulas que poseen un ncleo bien definido separado del citoplasma por una membrana).
Las bacterias y las algas verde azules son procariticas, son pequeas, cercanas a 1
micra de dimetro y muestran comparativamente escasa organizacin estructural. Las
clulas eucarticas son por lo regular mucho ms grandes (10-100 micras o mayores) y
poseen una compleja estructura interna, inclusive numerosos organelos de funcin
especfica. Aunque las clulas pueden llegar a ser ms y ms complejas con el transcurso
del tiempo, es probable que sean tan simples y sencillas como la complejidad de su
comportamiento lo requiera. Los sistemas biolgicos tienden a menudo a seguir el
principio de la navaja de Occam: la manera ms simple y directa de hacer algo es la
ms idnea. Las formas costosas (en trminos de energa y materia) y complicadas de

hacer las cosas, no tienen la probabilidad de sobrevivir a la evolucin como las ms

simples, para el mismo fin. Este razonamiento (realmente no merece ser calificado de
principio) ha sido til en el estudio y compensin de los complejos sistemas de control
intracelular e intercelular de organismos pluricelulares.1,3

La clula es la unidad morfolgica ms pequea todava capaz de vida independiente,

que aparece como organismo autnomo en los seres monocelulares. En los metazoos
forma grandes agregados y es un organismo elemental o un componente en el marco de
la estructura superior.2

La expresin La expresin clula se encuentra por primera en Robert Hooke quien en

1667 describi cells, little boxes en tapones de botellas. Originariamente, pues, el trmino
significa estructuras que encierran un hueco. Con el transcurso del tiempo el concepto
cambia hasta adquirir importancia el contenido.3

La doctrina celular surgida en la segunda mitad del siglo pasado fue extraordinariamente
fructfera. Virchow formul en 1855 el axioma ovnis cellula e cellula; el concepto de
generacin primaria hubo, pues, de ser definitivamente abandonado. Alrededor de 1875,
Strasburger, Btschli y Flemming descubrieron la divisin nuclear: se haba dado el primer
paso hacia la comprensin de la divisin celular hereditariamente idntica.1

La morfologa, la fisiologa y la patologa dirigieron su atencin hacia la clula.

Adems del ncleo, la clula contiene otras varias formaciones ms pequeas: los
organelos celulares. Estas partculas slo ayuden participar

en la formacin de

estructuras biolgicas mayores dentro de una clula o por mediacin de una clula, en la
que son englobada en un organismo dotado de las propiedades de la vida. La clula es
capaz de multiplicacin ( capaz, pues, de desarrollo a travs de mutaciones), es irritable (
muestra recepcin de estmulos y respuesta a los mismos), tiene que mantener su
estructura de acuerdo con el segundo principio de la termodinmica (entropa) con el
auxilio de un metabolismo. En la clula y en la totalidad del organismo, los procesos
fisicoqumicos estn ordenados de tal manera que sirven para la conservacin de estas
propiedades. A travs del metabolismo la clula se halla en relacin con un intercambio

mayor de materiales. Representa un sistema abierto un equilibrio fluido. La clula

contiene el principio del acoplamiento de reaccin que se autorregula.2,3

La clula a secas no existe. Aparece siempre en una determinada figura, diferenciacin,

determinacin. Ninguna clula muestra simultneamente todas las diferenciaciones
posibles. No obstante, casi todas las clulas tienen en comn algunas formaciones: los
organelos celulares. 1
MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPO
Microscopio de contraste de fase o campo claro.
Puente de tincin.
Pipeta Pasteur.
Asa bacteriolgica.
Mechero Bunsen.
Porta objetos.
Cubreobjetos.
Cristal violeta.
Lugol.
Alcohol-acetona.
Safranina.
Muestra de cebolla blanca, morada y Cambray
Cepa bacteriana pura.
Agua corriente y destilada
Lanceta estril
Agua encharcada
Torundas con alcohol
Azul de metileno
Bistur con navaja
Pinza de diseccin sin dientes
Aguja de diseccin
Orina
Aceite de inmersin

METODOLOGA
1. Colocar en el porta objetos una capa delgada de los diferentes tipos de cebolla
2. Encima de ellas ponerles cubre objetos.
3. Observar al microscopio con los objetivos 10, 40x y 100x, describir lo observado y
dibujar. Posteriormente, agregar una gota de azul de metileno a las muestras y
observar a 100x.
4. En otro porta objetos, realizar un frotis con una gota de sangre obtenida de la puncin
del dedo pulgar (de la mano contraria a la que utiliza para escribir), con la lanceta
estril. Observar a 10x, 40x y 100x. Y luego agregar azul de metileno a la muestra y
nuevamente observar a 100x.
5. En otro porta objetos realizar un frotis con el inculo bacteriano puro y una gota de
agua estril.
6. Fijar la muestra con la flama del mechero, evitando quemar la misma
7. Enseguida se procede a realizar la tincin de Gram, la cual nos servir para la
diferenciacin celular microscpica de la cepa pura:
Tcnica de tincin de Gram (modificada por Hucker)

1. Coloque el frotis en el puente de coloracin.

2. Cubra el frotis con cristal violeta y djelo actuar durante 1 min. Escurra el colorante y
lave con un chorro suave de agua corriente.
3. Cubra el frotis con lugol y deje actuar durante 1 min. Escurra y lave con agua.
4. Decolore con alcohol-acetona de 5 a 30 seg. Y lave con agua corriente.
5. Cubra el frotis con safranina y deje actuar durante 1 min. Escurra y lave con agua
corriente.
6. Deje secar al aire.
7. Repita el proceso anterior con cada uno de los frotis.
8. Observe las preparaciones en el microscopio con el objetivo de inmersin.
9. Realice esquemas a colores de cada una de las preparaciones observadas al
microscopio.
8. En otro porta objetos realizar un frotis sanguneo y observar al microscopio
9. En otro porta objetos colocar una gota de orina y observar al microscopio
10. En otro porta objetos colocar una gota de agua encharcada y observar al microscopio.

RESULTADOS Y CONCLUSIONES
Se observarn diferencias considerables con respecto a las clulas trabajadas.
CUESTIONARIO:
1. Esquematice la estructura de la clula procariote y mencione las funciones de la
misma.
2. Esquematice la estructura de la clula eucariote y mencione las funciones de la
misma.
3. Mencione las diferencias entre ambas clulas.

REFERENCIAS
1. AUDESIRK, T. Y GERALD, A. Biologa, la vida en la tierra.4 ed. Mxico. Prentice
Hall. 1996
2. VILLE, C.A. et al., Biologa. 2 ed. Mxico. Interamericana McGraw-Hill. 1992
3. BROCK, T. D. y SMITH, O. W. Microbiologa. Mxico. Prentice-Hall
Hispanoamericana.1987

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PRCTICA No. 3
FISOLOGA DE PROTOZOARIOS DE VIDA LIBRE
OBJETIVO:
El alumno ser capaz de conocer la fisiologa que llevan a cabo las distintas
formas de protozoarios.

INTRODUCCIN

La mayora de los protozoarios, tanto de vida libre como parsita, se parecen

claramente a los animales en sus hbitos alimenticios, ingieren partculas slidas,
las ingieren y luego las expulsan al exterior. Cuando las amibas o los Paramecium
se desarrollan junto con bacterias en el cultivo de laboratorio, estos se alimentan
de las mismas bacterias. Sin embargo, los organismos parsitos de la clase
Sporozoa se nutren por adsorcin directa de materiales alimenticios solubles a
travs de sus paredes celulares.
A pesar de sus necesidades fisiolgicas especializadas, muchos protozoarios
incluyendo variedades patgenas, pueden crecer en tubos de ensayo en el
laboratorio, en medios enriquecidos con sangre y otras sustancias proticas
complejas, semejantes a las mezclas utilizadas para el cultivo de bacterias
patgenas.
MARCO TERICO
El reino protoctista abarca una gran cantidad de organismos eucariticos, cuya
diversidad los hace difciles de caracterizar. Los protistlogos calculan que hay
cerca de 200 000 especies de protistas entre extintas y existentes. Estos

organismos comparten su principal caracterstica con los animales, plantas y

hongos: la estructura celular eucaritica.las clulas eucariticas poseen ncleos
verdaderos y otros organelos delimitados por membrana, como mitocondrias y
plstidos. Su ncleo se divide por meiosis y mitosis, aunque estos procesos
presentan variaciones. Sin embargo, dicha caracterstica hace que la separacin
entre los protistas y el reino monera sea bastante clara. Dentro de este reino, el
tamao de los organismos vara de protozoarios unicelulares a quelpos, algas
cafs gigantes, que pueden alcanzar una longitud hasta de 60 m. Casi todos los
protistas son organismos unicelulares microscpicos. Sin embargo, algunos
poseen una organizacin colonial; otros son cenocticos (multinuclaeados, pero no
multicelulares). Y otros multicelulares. Casi todos los protistas multicelulares
poseen una forma corporal simple, sin tejidos especializados.
La palabra protista se deriva del griego que significa el primero. Los protistas
unicelulares realizan todas las funciones en una clula. Por ej. La regulacin de
agua con frecuencia es controlada por organelos especficos, llamados vacuolas
contrctiles.
Muchos protistas son de vida libre, en tanto que otros forman sociedades
simbiticas con otros organismos. Tales asociaciones van desde el mutualismo,
donde ambos miembros se benefician, hasta el parasitismo, siendo algunos
protistas importantes patgenos de plantas y animales.

MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO

Microscopio
Portaobjetos y cubreobjetos
Goteros
Tubo capilar pipeta Pasteur
Tubo de ensayo
Balanza granataria
Agua destilada
Parrilla

Cultivo de Paramecium
Levadura de pan
cido actico
Lugol
Rojo congo
Solucin de metilcelulosa o gelatina
Probeta de 50 ml

METODOLOGA

1. En un tubo de ensayo colocar un gramo de levadura de pan y disolverla en

50 ml de agua destilada.
2. Hervir durante 5 min. esta mezcla.
3. Aadir 0.1 gr de rojo congo, seguir calentando a fuego lento sin hervir
durante 8 min. (no quemar la levadura). Por ltimo deje enfriar la mezcla.
4. En un portaobjetos, adicionar una gota de gelatina o metilcelulosa y una
gota de cultivo que contenga gran cantidad de Paramecium.
5. Adicionar en uno de los extremos de la gota de cultivo, otra de la
suspensin de levadura.
6. Coloque con cuidado un cubreobjetos, observe al microscopio reduciendo y
abriendo el diafragma hasta observar las vacuolas contrctiles.
7. En un portaobjetos, adicionar una gota del cultivo de Paramecium y con
ayuda de un capilar o pipeta Pasteur, colocar cido actico diluido.
8. Observar inmediatamente al microscopio a seco fuerte y anote lo que
sucedi.
9. Repetir el paso anterior, sustituyendo el cido actico por lugol.

RESULTADOS

Se esperan diferentes reacciones al colocarle al cultivo de Paramecium tanto el

lugol como el cido actico.

CUESTIONARIO
1. Qu color tienen las clulas de levadura?
2. mencione, por cul organelo entran las clulas de levadura al
Paramecium? (ingestin)
3. realice un esquema en el que indiquela posicin de las vacuolas contrtiles
en el Paramecium.
4. Explique la funcin de las vacuolas contrctiles.

REFERENCIAS

1. BROCK, T. D. y SMITH, O. W. Microbiologa. Mxico. Prentice may.

Hispanoamericana. 1997
2. CARPENTER, P. L. Microbiologa. Mxico. Interamericana. 1985.
3. VILLE, C. A. ET AL., Biologa 2. Mxico Interamericana. Mc GrAW-Hill.
1992

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PRCTICA No. 4

EFECTO DE LA PRESIN OSMTICA EN LA GERMINACIN

OBJETIVO
El alumno ser capaz de observar el efecto que tienen diferentes presiones osmticas
sobre la germinacin de la semilla, en diversas soluciones.
INTRODUCCIN
El paso de las molculas al interior de las clulas est regida por la permeabilidad de las
membranas, siguiendo las leyes de difusin en algunos compuestos, cuando las
molculas no penetran por difusin lo hacen por smosis.

La presin osmtica es la fuerza que se requiere para equilibrar la tendencia del agua a
moverse desde una solucin con una concentracin ms alta de molculas libres de agua;
hacia una ms baja.
MARCO TEORICO
La presin osmtica es la propiedad coligativa ms importante por sus aplicaciones
biolgicas, como son medios lquidos del organismo (sangre, lquidos intersticiales e
intracelulares) que en conjunto constituyen lo que se ha llamado medio interno. El medio
interno se considera dividido en compartimentos que contienen disoluciones diferentes,
separadas por membranas de propiedades caractersticas, cuyo estudio fisiolgico
requiere un conocimientos fisicoqumico preciso de la presin osmtica as como de
difusin y smosis.

La difusin es un proceso por el cual las molculas de un gas, un lquido o un slido,

tienden a alcanzar una distribucin homognea a todo el espacio que les es accesible.
Por difusin, las molculas del soluto tienden a esta homogeneidad en el seno del

disolvente, lo que se alcanza al cago de un cierto tiempo. Al poner en contacto dos

disoluciones acuosas por ejemplo de NaCl y KNO3, los solutos difunden en toda su masa,
esencialmente de la misma manera que difunden dos gases encerrados en recipientes
que comunican libremente.

La difusin a travs de la membrana es el tipo de difusin de mayor importancia biolgica,

porque la presencia de membranas de las ms variadas caractersticas condiciona el
paso de disolvente y disoluciones en todas las estructuras celulares. Por eso se estudian
los fenmenos de difusin y permeabilidad en la fisiologa, desde la gnesis de
potenciales elctricos en la clula nerviosa hasta los ms elementales mecanismos de
secrecin glandular2.

Las membranas biolgicas o artificiales, se han definido aproximadamente como

estructuras laminares caracterizadas por poros de determinadas dimensiones. El
comportamiento de la membrana frente a determinadas circunstancias depende
fundamentalmente de la relacin entre el dimetro de los poros y el dimetro de las
partculas. La presencia de una membrana separando dos medios diferentes, determina
ciertas restricciones en el proceso de difusin de las sustancias3.

Las membranas se clasifican esquemticamente en cuatro grupos fundamentalesimpermeables, dialticas y permeables- segn sus propiedades referentes a la filtracin y
smosis. En Fisiologa, al hablar de disolvente, prcticamente en todos los casos, se
refiere al agua, pero los solutos pueden ser muy variables: coloidales, como protenas y
polisacridos; verdaderos, de tipo salino o molecular como NaCl, KHCO3, glucosa, urea,
etc.3

Membranas impermeables. Son aquellas que no las pueden atravesar ni el disolvente, ni

los solutos; por ejemplo, aunque no en un sentido muy riguroso, los tegumentos.
Membranas semipermeables. Las pueden atravesar libremente el agua, pero no permiten
el paso de solutos verdaderos o cristaloides de ninguna clase. Son ejemplos conocidos
las membranas de pergamino o de ferrocianuro cprico.
Membranas dialticas. Son permeables al agua y a solutos verdaderos pero no las
atraviesan los solutos coloidales por ejemplo las membranas de colodin, celofn o el
endotelio capilar.1

Membranas permeables. Permiten el paso de agua y disoluciones verdaderas y coloidales

y slo son impermeables a las dispersiones groseras. Son ejemplos tpicos los filtros de
arcilla y el papel de filtro hmedo.1

Las membranas biolgicas en general, aunque pueden incluirse en algunos de estos

grupos para sistematizar conceptos, en realidad no encajan estrictamente en ninguno de
ellos porque son de propiedades intermedias. Adems, las membranas celulares junto a
sus propiedades de permeabilidad comparables a las de membranas artificiales,
presentan otro fenmeno que es la variabilidad selectiva. Es decir, el paso de sustancias
est condicionado en parte, por los fenmenos metablicos de la membrana o el
protoplasma que modifican el tipo de difusin que sera previsible atendiendo slo a sus
propiedades fisicoqumicas.1,2

Osmosis. Es la difusin de lquidos a travs de membranas. Supongamos dos

disoluciones de concentracin desigual, por ejemplo NaCl 1M y 2M respectivamente,
separadas por una membrana semipermeable que como se ha dicho, permite el paso de
agua pero no de sal. El agua tiende a atravesar la membrana, pasando de la disolucin
ms diluda a la ms concentrada, es de decir, en el sentido de igualar las
concentraciones. Y si los volmenes de las dos disoluciones indicadas fueran iguales, el
equilibrio se alcanzara cuando a los lados de la membrana se llegase a la misma
concentracin (1.5 M ) de sal.1,3

La tendencia a igualarse las concentraciones que est en correspondencia con la presin

osmtica, se explica segn el segundo principio de la Termodinmica, por la existencia de
una diferencia en la presin de vapor. Esto es lo que en rigor podemos considerar como
esencial para el concepto de presin osmtica que no es en s misma una presin
mecnica ejercida por las partculas del soluto sobre las paredes de la vasija, como
supona la teora del bombardeo y no est de ms puntualizarlo as, desde el principio
para precisar conceptos pues que vara valorar la presin osmtica se hace referencia con
frecuencia a sus efectos mecnicos.1
MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPO

Soluciones de sacarosa (no electrolito) 0.0 M; 0.1 M; 0.2M; 0.3M; 0.4M; 0.5M;
0.6M.

Cloruro de sodio (electrolito) 0.0 M; 0.1 M; 0.2M; 0.3M; 0.4M; 0.5M; 0.6M.

Agua destilada

Algodn

Cajas de Petri

Semillas de trigo, frijol o acelga

Caja de cartn

METODOLOGA
Colocar en las cajas de Petri una capa delga de algodn y humedecer con agua y
las soluciones abundantemente (0.0 M; 0.1 M; 0.2M; 0.3M; 0.4M; 0.5M; 0.6M.)

Poner dos repeticiones para cada concentracin (0.0 M; 0.1 M; 0.2M; 0.3M; 0.4M;
0.5M; 0.6M.)

Colocar enseguida de 5 a 10 semillas por caja.

Las semillas debern estar dentro de un ambiente tibio y obscuro

Observar cada 24 horas y anotar el nmero de semillas germinadas

Observar por 5 das

Graficar los datos de concentracin contra el porcentaje de geminacin.

RESULTADOS
Las reacciones de las semillas ante las diversas concentraciones de sacarosa o cloruro
de sodio se reflejarn en la morfofisiologa de la semilla-pltula.
REFERENCIAS
1. AUDESIRK, T. Y GERALD, A. Biologa, la vida en la tierra. 4 ed. Mxico.
Prentice-Hall. 1996
2. VILLE, C.A. et al., Biologa. 2 ed. Mxico. Interamericana McGraw-Hill. 1992

UT

PRACTICA No. 5
CUANTIFICACIN DE CROMOSOMAS EN APICES DE HABA

OBJETIVO:
El alumno ser capaz de cuantificar el nmero de cromosomas en pices de
cebolla durante el proceso de mitosis.
INTRODUCCIN.
Es la divisin celular que consiste en que a partir de una clula se obtienen 2
clulas hijas, genticamente idnticas a la madre. Se produce en cualquier clula
eucarionte, ya sea diploide o haploide y como mantiene invariable el nmero de
cromosomas, las clulas hijas resultarn diploides, si la madre era diploide o
haploide. La divisin del citoplasma se llama citocinesis, y la divisin del ncleo,
cariocinesis. Algunas clulas no realizan mitosis y permanecen en un estado
interfsico, pero otras la realizan frecuentemente (clulas embrionarias, clulas de
zonas de crecimiento, clulas de tejidos sujetos a desgaste.).

MARCO TEORICO
MITOSIS
Es la divisin celular que consiste en que a partir de una clula se obtienen 2
clulas hijas, genticamente idnticas a la madre. Se produce en cualquier clula
eucarionte, ya sea diploide o haploide y como mantiene invariable el nmero de
cromosomas, las clulas hijas resultarn diploides, si la madre era diploide o
haploide. La divisin del citoplasma se llama citocinesis, y la divisin del ncleo,
cariocinesis. Algunas clulas no realizan mitosis y permanecen en un estado

interfsico, pero otras la realizan frecuentemente (clulas embrionarias, clulas de

zonas de crecimiento, clulas de tejidos sujetos a desgaste.).
Funcin: crecimiento y desarrollo del organismo multicelular, y la regeneracin de
tejidos expuestos a destruccin de clulas. En unicelulares, cumple la funcin de
reproduccin asexual.
Cada mitosis est precedida por una interfase, donde se produce la duplicacin
del material gentico. Acta como un mecanismo que asegura que cada clula hija
reciba la misma informacin gentica.
Etapas: Profase, Prometafase, Metafase, Anafase y Telofase.
1. PROFASE: La cromatina se condensa para formar los cromosomas y los 2
centrolos migran a polos opuestos organizando un sistema de microtbulos
(aparato mittico) para permitir la migracin de los cromosomas. El aparato
mittico est constituido por:

Centrolos: Estn rodeadas por el centrosoma. A medida que cada centrolo

migra, tiene un hijo y cuando llega al polo se ven 2.

steres: Conjunto de microtbulos cortos que se extienden desde cada

centrolo.

Huso acromtico: Tiene forma de ovoide y formado por muchos

microtbulos sin ramificaciones.

Cada cromosoma est constituido por 2 cromtidas unidas por el centrmero. La

envoltura nuclear se desorganiza y sus fragmentos no se distinguen del retculo
endoplasmtico. Desaparece el nucleolo.
1. PROMETAFASE: Los cromosomas condensados migran hacia la placa
ecuatorial del huso acromtico.
2. METAFASE: Los cromosomas se alinean en el plano ecuatorial, y cada uno
estn unido por su centrmero a una fibra del huso acromtico.
3. ANAFASE: Las 2 cromtides de cada cromosoma se separan por fisin del
centrmero y se dirigen hacia polos opuestos. El movimiento de los
cromosomas hijos hacia los polos se debe a un acortamiento de las fibras
cromosmicas y se alargan las fibras interzonales.

4.

TELOFASE: El huso mittico y los steres se desorganizan. Alrededor de

cada grupo cromosmico se organiza una envoltura nuclear a partir del
retculo endoplasmtico y de la envoltura original. Los cromosomas se
dispersan y retoman el aspecto de cromatina que tenan antes de iniciarse
la divisin. Los nucleolos reaparecen a partir de sus organizadores.

1,2,3

Citocinesis:
1. La divisin del citoplasma se produce junto con la telofase. Se produce un
surco en la membrana plasmtica, producidos por un anillo de
microfilamentos

unidos

ella.

Las

clulas

hijas

se

separan,

distribuyndose el hialoplasma y los organelos de un modo equitativo.

2. Cuando no ocurre citocinesis luego de la cariocinesis, los dos ncleos
quedan en el mismo citoplasma y resulta una clula binucleada.
Divisin en clulas vegetales:

No hay centrolos ni steres pero se organiza el huso acromtico.

Citocinesis: el citoplasma se divide mediante un tabique, que se forma por

la agrupacin de microtbulos y vesculas. Las vesculas crecen, se
ordenan y se funden entre s originando la placa celular. Finalmente se
arman las paredes celulares a partir de celulosa, hemicelulosa y pectina.
1,2,3

Meiosis
Es un proceso de reduccin cromtica por el que los cromosomas se reducen a la
mitad. En la meiosis I (etapa reduccionaria) se reduce el nmero diploide de
cromosomas a la mitad (haploide) pero an los cromosomas son dobles. En la
meiosis II (etapa ecuacional) se mantiene el nmero cromosmico haploide
conseguido en la etapa anterior. Los cromosomas son simples.1,2,3

Meiosis I: Est precedida por una interfase durante la cual se duplica el

material gentico.

1. PROFASE I: La envoltura nuclear y el nucleolo se desorganizan, los

centrolos migran a polos opuestos, duplicndose y se ordena el huso

acromtico. Se divide en 5 etapas: Leptonema, Cigonema, Paquinema,

Diplonema y Diacinesis.
2. PROMETAFASE I: Los cromosomas migran al plano ecuatorial de la clula.
3. METAFASE I: Los cromosomas se alinean en el plano ecuatorial. Los 2
cromosomas del bivalente se unen por medio del centrmero a la misma
fibra del uso acromtico.
4. ANAFASE I: Los 2 cromosomas homlogos unidos a la misma fibra del
huso se repelen y migran a polos opuestos. Cada cromosoma est formado
por 2 cromatides.
5. TELOFASE I: Cuando los cromosomas llegaron a los polos, se
desorganizan el huso acromtico y los steres, se reorganizan la envoltura
nuclear y los nucleolos y se constituyen los ncleos hijos.
Citocinesis: Se produce simultneamente con la telofase, y da como resultado 2
clula hijas con un nmero haploide de cromosomas.
Intercinesis: Es un perodo que tiene lugar entre la meiosis I y II y no se realiza
duplicacin del ADN.

Meiosis II: Los procesos de esta divisin son semejantes a los de una
mitosis en una clula haploide.

1. PROFASE II: Se condensan los cromosomas, se desintegran los nucleolos,

los centrolos migran a los polos y se duplican, formacin del huso
acromtico y se desorganiza la envoltura nuclear.
2. PROMETAFASE II: Los cromosomas condensados migran a la placa
ecuatorial de la clula.
3. METAFASE II: Los cromosomas se alinean en la placa ecuatorial, y cada
cromosoma se une a una fibra del huso acromtico.
4. ANAFASE II: Se fusiona el centrmero y se separan las 2 cromtidas de
cada cromosoma. Cada una migra a un polo diferente.
5. TELOFASE II: Los grupos cromosmicos llegan a los polos, el huso
acromtico se desorganiza, se reorganizan la envoltura nuclear y el
nucleolo, se dispersan los cromosomas y se transforman en cromatina.
Citocinesis: Separacin de los citoplasmas de las clulas hijas.

El proceso meitico parte de una clula diploide que da como resultado 2

haploides, y a partir de stas dos (meiosis II) se obtienen 4 haploides.
Meiosis, variabilidad gentica y evolucin
La reproduccin sexual introduce una importante proporcin de variaciones
genticas. Cuanto mayor sea la diversidad de gametas formadas en cada
progenitor, mayor ser la probabilidad de originar combinaciones diferentes por
fecundacin, y mayor ser la diversidad de los descendientes. Una clula diploide,
con 2 pares de cromosomas homlogos, originar por meiosis 4 gametas
haploides (uno de la madre y otro del padre). En la Metafase I se va a determinar
en qu sentido migrarn en la Anafase I. Hay dos opciones:
1. Puede ocurrir que los 2 cromosomas paternos migren juntos a un polo y los
dos maternos al opuesto.
2.

Puede ocurrir que migren al mismo polo el cromosoma materno del par
homlogo y el paterno del par homlogo. Los otros cromosomas, migran al
polo opuesto. 1,2,3

MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO

pices de raz
Tubos de ensaye
Gradilla
Mechero
Vaso de precipitado de 250 ml.
Bistur
Agua destilada
8- hidroxiquinolina
Cloroformo
Alcohol etlico al 95%
cido actico glacial
cido clorhdrico
Sol. Acetato-orcena

METODOLOGA
PRETRATAMIENTO
Se colocan los cortes de raz, perfectamente lavados con agua destilada en una
solucin de 8-hidrixiquinolina 0.02 M por 3 a 5 horas a 18oC.

FIJACION
Se lavan los cortes con agua destilada y se transfieren a una soluxcin modificada
de Carnoy 86 partes de cloroformo, 3 partes de alcohol etlico al 95% y 1 de cido
actico glacial) mnimo 12 horas en refrigeracin.

HIDRLISIS
Se transfieren los cortes a una solucin de cido clorhdrico 1 N a 50oC durante
15 minutos.

TINCION
En un tubo de ensaye se colocan los cortes de raz y se sumergen en solucin de
acetato-orcena. Se calientan, sin que hiervan por 3 minutos. En un portaobjetos
se colocan los cortes de raz. Con un bistur se cortan los pices (2-3 nm) que se
reconocern por ser la parte mas teida. Se les aade una gota de acetatoorcena y se aplastan con la tcnica del squash.

RESULTADOS
Realizar esquemas de lo observado.
Comparar los resultados en un cuadro con lo observado por los diferentes
equipos.

CUESTIONARIO
1.- Qu es un cromosoma?

2.- Cul es la fase dentro de la mitosis en la que se observan mejor los

cromosomas?
3.- Cual es la funcin del cido clorhdrico sobre los pices de raz?
4.- Porqu los pices de raz de cebolla se considera como un buen espcimen
para la observacin de cromosomas

REFERENCIAS
1.- GARDNER E. (1985) Principios de Gentica. Limusa. Mxico
2.- BARAHONA A. y DANIEL PIERO (1994). Gentica: Continuidad de la vida.
SEP-CONACYT-FCE. Mxico (la ciencia desde Mxico).
3.- SMITH-KEARY (1979). Gentica. Estructura y Funcin.Publicaciones
cultural.Mxico

UTs
PRCTICA No. 6
FIGURAS MEITICAS EN GNADAS DE CHAPULN
OBJETIVO:
1. Elaborar preparaciones temporales de gnadas de dos especies de
insectos:

chinche

frailecillo (Stenomacra marginella) y grillo (Achaeta domestica).

2. Identificar en dichas preparaciones las diferentes fases de la meiosis y de la

gametognesis.

INTRODUCCIN
En las clulas eucariontes somticas existen dos juegos de cromosomas 1,
heredados por cada uno de los progenitores. A esta condicin se le denomina
estado diploide o 2N. Las clulas somticas mantienen su condicin diploide
durante la replicacin celular o mitosis. Durante la formacin de gametos el
nmero de cromosomas de la especie se reduce a la mitad (N) por medio de la
meiosis. El nmero de cromosomas de la especie se reestablece cuando se
forma el cigoto durante la fertilizacin. La meiosis, por consiguiente, ocurre en el
tejido germinal de especies con reproduccin sexual.

La meiosis es un tipo de divisin celular que involucra una sola replicacin

del material gentico (Fase S del ciclo celular) y dos divisiones nucleares
sucesivas conocidas como Meiosis 1 y Meiosis 11 (Figura 1. A). La meiosis 1 o
primera divisin meitica, que es ms compleja que la segunda, es una divisin
reduccional en la que se pasa de una clula diploide (con 2N cromosomas con

dos cromtidas hermanas [4cr) a dos clulas haploides (con N cromosomas de

dos cromtidas hermanas cada uno [2c]). La segunda divisin o meiosis 11 es
similar a una divisin mittica en la que a partir de las dos clulas haploides N [2c]
generadas en la primera divisin se producen cuatro clulas haploides con N [1 c]
cromosomas de una sola cromtida. Para su mayor entendimiento, el proceso es
dividido en fases que describen los eventos ocurridos durante sta.

MEIOSIS I
PROFASEI
Durante toda esta fase la membrana nuclear permanece inalterada. Consta de
cinco etapas: leptoteno, zigoteno, paquiteno, diploteno y diacinesis.

Leptoteno 3. Los cromosomas comienzan a condensarse

manteniendo unidos los telmeros4 a la envoltura nuclear. A lo
largo

de

los

cromosomas

van

apareciendo

pequeos

engrosamientos conocidos como crommeros. En este momento slo es posible

distinguir una de
1 Dos juegos de autosomas y el par de cromosomas sexuales o slo uno de ellos.
2 4c: significa que cada cromtida (ADN) se replic en la fase S anterior a la meiosis. Cada gen est representado cuatro
veces, uno en cada cromtida y puede ser el mismo alelo o diferente.
3 Las imgenes de las fases de la meiosis presentadas son de testculo de langosta (Locusta migratoria) y fueron tomadas
de htto://www.vcbio.science.ru.nl/en de la Universidad de Radboud, Nederlands.
4 Telmeros: extremos de los cromosomas de eucariontes.

las dos cromtidas hermanas de

cada cromosoma ya que stas
estn muy unidas entre
s.
A

mayor

aumento,

en

los

cromosomas
se puede apreciar un eje proteico 5
de no histonas que posteriormente

tendr

gran

importancia

apareamiento

entre

en

el

cromosomas

homlogos.

Zigoteno. Los cromosomas homlogos (CH) se acercan hasta

quedar apareados en toda su longitud, crommero a crommero
de las cromtidas no hermanas (slo las adyacentes). La
disposicin de stos a lo largo de las cromtidas parece estar
determinado genticamente. Incluso se utiliza la disposicin de
estos engrosamientos para poder distinguir cada cromosoma
durante la profase l.

El reconocimiento de los CH se facilita gracias a que sus telmeros se encuentran

anclados en regiones muy prximas de la membrana nuclear. El eje proteico
central

juega

un

papel

importante en el apareamiento
de

los

CH

elementos

al

formar

laterales

los
del

complejo sinaptotmico 6. En
este apareamiento tambin est implicada

la secuencia de genes de cada

cromosoma, que evita el apareamiento entre cromosomas no homlogos. Durante

esta fase concluye la replicacin del ADN (2% restante) que recibe el nombre de
zig-ADN.

Paquiteno. Los CH estn perfectamente apareados formando

estructuras denominadas bivalentes, en esta fase se produce el
intercambio de material gentico entre los CH o recombinacin
gentica. sta est mediada por una estructura proteica de 90
nm de dimetro llamada ndulo de recombinacin. En l se
encuentran las enzimas que median en el proceso de

recombinacin. Durante esta fase se produce una pequea

sntesis de ADN, que probablemente est relacionada con
fenmenos de reparacin de ADN ligados al proceso de
recombinacin (HRR7).

Diploteno. Como los cromosomas estn ms condensados se pueden distinguir

las dos cromtidas de cada cromosoma, por lo que a los bivalentes descritos en
el paquiteno se
5 La imagen del eje proteico y la del complejo sinaptotmico fueron tomadas de
htto: / /users. servicios. retecal.es/touente/meiosis/imaoes/
6 estructura proteica con forma de escalera formada por dos elementos laterales y uno central que se van cerrando a modo
de cremallera y que garantiza el apareamiento entre homlogos, ver imagen
7 HRR: Homologous recombination repair

observan ahora como ttradas. Adems en este momento se pueden observar los
lugares del cromosoma donde se ha producido la recombinacin como
estructuras en forma de X denominadas quiasmas. En este punto la meiosis
puede sufrir una pausa, como ocurre en el caso de la formacin de los vulos
humanos. La lnea germinal de los vulos humanos sufre esta pausa hacia el
sptimo mes del desarrollo embrionario continuando la meiosis hasta alcanzar la
madurez sexual. A este estado de latencia se le conoce como dictiotena.

~
Diacinesis. Apenas distinguible del diploteno. En esta fase
podemos observar los cromosomas algo ms condensados y ms
claramente los quiasmas. Al final de sta y por tanto de la profase I
se presenta la fragmentacin en vesculas de la envoltura nuclear.
Durante toda la profase I continu la sntesis de ARN en el ncleo. Al final de la
diacinesis cesa la sntesis de ARN y ya no se ve el nucleolo.

METAFASEI
Comienza con la fragmentacin de la membrana nuclear. En
clulas animales se forma el huso acromtico a partir de los
centrolos ubicados en los centrosomas y que se colocan en los
polos de la clula. Los CH se unen a los microtbulos (MTs)
cinetocricos del huso por medio del centrmero movindose al centro de la
clula. En esta fase los quiasmas son todava visibles.

ANAFASEI
Los CH se separan y se mueven hacia los polos opuestos guiados
por los MTs del huso. Como consecuencia desaparecen los
quiasmas. Cabe hacer notar que los cromosomas de origen
paterno y materno tienen la misma probabilidad de migrar hacia los
polos, y que estos cromosomas han recombinado. De aqu que la meiosis
contribuye de manera importante a generar diversidad, materia prima de la
evolucin.

TELOFASEI
Esta fase de la meiosis vara segn la especie. En algunas se
forman dos nuevas membranas nucleares y se separan las dos
nuevas clulas haploides N [2c] con dos cromtidas cada una de
ellas y unidas por su centrmero. En algunas otras no se forma envoltura nuclear
y se pasa directamente a la segunda divisin meitica.

PROFASE 11
En esta fase desaparece la membrana nuclear, sr es que se
reintegr nuevamente, y comienza el ensamble del nuevo huso
acromtico. Recordar que en este momento cada clula contiene un nmero

haploide de cromosomas, cada uno de ellos con dos cromtidas.

METAFASE 11
Los cromosomas se colocan en el centro de la clula
unidos al huso por su centrmero y con cada una de sus
cromtidas de cara a los polos la clula, formando la placa ecuatorial.

ANAFASE 11
Los centrmeros se separan por despolimerizacin de las
protenas que los unen y las cromtidas hermanas son
arrastradas por los MTs hacia polos opuestos por las fibras del
huso.

TELOFASE 11
En esta fase se desensambla el huso acromtico y los
cromosomas se descondensan. Se vuelve a formar la envoltura
nuclear alrededor de los cromosomas situados en los polos. Al
final se obtienen cuatro clulas haploides N [c] con cromosomas de una sola
cromtida cada uno de ellos 8.

ESPERMIOGNESIS
En los individuos del sexo masculino, los espermatocitos secundarios o gametos
N [1 c] presentan una "especializacin" que consiste en la modificacin de sus
estructuras para producir los espermatozoides. En las preparaciones de las
gnadas masculinas de los insectos que se proporcionarn en esta prctica. se
podrn observar las espermtidas (Figura 1.8) y los espermatozoides9 (Figura
1.C).

Fig. 1.A. Figuras meiticas; B, espermtidas; C,

espermatozoides

en

testculo

de

saltamontes

(Locusta migratoria).

8 Para ver una animacin de la meiosis ir a la pgina:

htto://www.iohnkvrk.com/meiosis.html

Consulta:

httg:

/users.servicios. retecal.es/touente/meiosis/
9 Imagen tomada del Dr. Wil/iam H. Heidcamp, Biology Department, Gustavus Adolphus College, Sto Peter, MN 56082 -cellab()gac.edu. en la pagina
htto: / /homeoaaes. aac. edu/~cellab/chots/chotll/fiaurell-6. html

MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO

Pinzas de relojero
Agujas de diseccin
Portaobjetos y cubreobjetos
Placa de unicel
Alfileres
Navaja de rasurar (Gillete)
Frascos goteros
Toallas de papel
Microscopio ptico
Microscopio estereoscpico
cido lacto-actico: cido lctico 85%: cido actico 60%:
agua desionizada 1:1 :1. ,( Colorante lacto-aceto-orcena:
orcena (sinttica) 1 % en volmenes iguales de
cido lctico 85%: cido actico 60%. Caliente la mezcla a
ebullicin y hierva varios minutos. Enfre y filtre. Si
posteriormente forma precipitados hay que filtrarla.
cido actico 45% recin preparado.

MA TERIAL BIOLGICO
Adultos de chinche (Stenomacra marginella) fijados en
alcohol 70%. Este hemptero habita en el follaje de
diversos rboles y arbustos. Madura sexualmente previo a
la poca de lluvias y es comn encontrarlo en las
estaciones Primavera- Verano. Lo ms adecuado es
colectarlos durante la cpula, lo que permite diferenciar a
los machos que son ms pequeos. Sus cromosomas son
grandes y fcilmente visibles. En los gametos de las
hembras se pueden observar 12 bivalentes y en los de los
machos 11, por lo que presentan un sistema de
determinacin del sexo XX/XO. (Insecta: Heteroptera:
Largidae.
Machos adultos de grillo domstico (Acheta domestica
(Linnaeus) (Insecta: Orthoptera: Gryllidae) fijados en
alcohol 70%.
METODOLOGA
1. Colectar adultos de ambas especies. Dormirlos con ter y colocarlos en
alcohol de 70 (En este caso se les proporcionarn los insectos ya fijados
en alcohol de 70).
2. Iluminar el microscopio de manera que la luz llegue en un ngulo y el fondo
se vea oscuro.
3. Colocar el insecto en un cuadrito de unicel con la regin abdominal
hacia arriba, y sujetarlo con alfileres de cabeza de la siguiente

manera: Uno en el primer artejo de cada extremidad superior y un

tercero en el lmite inferior de la cabeza. Aadir una gota de cido
actico 45% sobre el insecto.
4. Con la navaja de rasurar cortar longitudinalmente el abdomen cuidado
de cortar slo la cutcula.

5. Con pinzas de relojero eliminar o abrir ambos lados de la cutcula para

exponer el interior del insecto.
6. Con las pinzas apresar transversalmente la parte superior del tubo
digestivo y jalarlo hacia fuera, para sacar todo el sistema digestivo y
los otros rganos.
7. Al quitar los rganos mediante el paso anterior, se podrn ver a ambos
lados del insecto unas estructuras semejantes a racimos y pegadas al
dorso. stas son las gnadas.
8. Aadir gotas de cido actico 45%. Nunca dejar Que se seQuen las
anadas.
9. Colocar en un portaobjetos, una pequea parte del tejido de las
gnadas. Esto es importante porque si se coloca mucho tejido, al
hacer el "squash" ms adelante, no se podrn ver los cromosomas
Debido a que las clulas se vern en varias capas, y no se podr "
ejercer presin suficiente sobre ellas.
10. Remover con cuidado el cido actico aplicando una porcin de una
toalla de papel absorbente sobre la zona del portaobjetos en donde
se haya extendido el actico, sin tocar la muestra.
11. Aadir suavemente una gota de 1 N HCL por 30 segundos y
eliminarla absorbiendo con mucho cuidado con una pipeta Pasteur o
el extremo de una toalla de papel.
12. Rpidamente enjuagar suavemente con cido lacto-actico para
impedir que precipite el colorante.
13. Aadir una gota del colorante y esperar 15 mins.
14. Enjuagar suavemente con gotas de cido lacto-actico.
15. Colocar un cubreobjetos sobre el tejido.
16. Golpear intermitente y suavemente sobre el cubreobjetos con la punta de
un lpiz o una pluma, cuidando que ste no se deslice. Ensayar varias
veces hasta adquirir la habilidad de presionar sin deslizar el cubreobjetos
o romperlo. AL hacerlo puede observarse que el tejido se disgrega
fcilmente.

17. Observar las clulas en el microscopio ptico. Ajustar la iluminacin de

Kohler y buscar las zonas rosas (citoplasma) con regiones nucleares
(magenta).
18. Para hacer preparaciones permanentes se congelan colocndolas sobre
hielo seco. Una vez congeladas se desprende el cubreobjetos con la
ayuda de una navaja de rasurar o navaja muy delgada. Se colocan los
portaobjetos en una jarra de Coplin con etanol helado y ah se dejan
hasta que el alcohol disminuya su temperatura a la del ambiente (T A). Se
sacan del etanol y se secan al aire. Se conservan de esa manera por
periodos largos aTA.

RESULTADOS

Dibuje detalladamente las observaciones encontradas y corrobore con su profesor.

BIBLIOGRAFA

Modificacin del procedimiento elaborado por Jeanette Holden, Queen's

University, Kingston, Ontario. ~:Dr.Thomas Miller's Lab Web Page. Pag~
Designed by Harald Baella. Last updated 01-25-05 Copyright @
2003-05 Miller Web Design.

UTs
PRCTICA No. 7
IDENTIFICACIN DE CROMOSOMAS POLlTNICOS EN LAS CLULAS DE
LAS GLNDULAS SALlVALES EN LARVAS DE
Drosophila melanogaster y Drosophila pseudoobscura.
OBJETIVO:

Observar el bandeo natural e identificar las estructuras ms

relevantes de los cromosomas politnicos de las glndulas salivales
de Drosophila.

Ubicar la utilidad de los cromosomas politnicos en la localizacin de

genes y en la identificacin de cambios estructurales en los
cromosomas.

INTRODUCCIN.
Drosophila melanogaster tiene cuatro pares de cromosomas, un par sexual y tres
pares autosmicos. Los cromosomas sexuales, al igual que en otras especies
superiores son: el cromosoma X (tambin denominado cromosoma 1), que
presenta forma de barra y tiene el centrmero en un extremo y el cromosoma Y
que tiene forma de bastn. La hembra presenta dos cromosomas X y el macho un
cromosoma X y un Y (XX Y XY, respectivamente). De los cromosomas
autosmicos, los pares 2 y 3 son los ms grandes del genoma, cada uno de ellos
est dividido por el centrmero en un brazo derecho y un brazo izquierdo. Los
cromosomas del par 4 son sumamente pequeos y aparecen como puntos
diminutos en las clulas somticas en metafase (Fig. 1).

MARCO TEORICO

En 1881 E. G. Balbiani encontr estructuras peculiares en los ncleos de ciertas

clulas secretoras de los dpteros. Sin embargo stas no fueron reconocidas
como cromosomas sino hasta 1933, cuando T. Painter, E. Heitz y H. Bauer los
redescubrieron y analizaron la constancia que presentan en el arreglo y densidad
relativa las diferentes bandas o discos de que se componen; entonces
establecieron que dichas estructuras eran realmente cromosomas y los
denominaron cromosomas politnicos. Se ha descrito la presencia de este tipo
de cromosomas en tejidos secreto res como tbulos de Malpiphi, recto, intestino y
glndulas salivales de los dpteros.

La politenia es una forma especial de poliploida. Los cromosomas politnicos se

originan durante el ciclo celular atpico al inicio de la fase larvaria. El inicio de la
politenia queda sealado por el estrecho acercamiento de los cromosomas
homlogos en una forma que recuerda a la asociacin de los cromosomas en la
profase meitica. Una vez alcanzado este arreglo las clulas entran al proceso de

endomitosis, en el cual el ciclo celular queda constituido nicamente por una fase
G y una fase S, no ocurre mitosis, de manera que en cada ciclo, el material
gentico se replica pero no se lleva a cabo la segregacin de los cromosomas
replicados. De esta manera, cada cromosoma consta de 1024 juegos
cromosmicos que permanecen integrados en una sola estructura, lo que hace
evidente la presencia de bandas de diferente espesor y afinidad cromtica en
patrones caractersticos a cada cromosoma y, en consecuencia, propias de cada
especie de Drosophila (Fig. 2).

Durante el desarrollo de la mosca, aparecen abultamientos o "puffs" en diferentes

regiones de los cromosomas, as como zonas ampliamente distendidas
denominadas "Anillos de Balbiani" (Fig. 3). Por estudios a nivel molecular se ha
establecido que las reas abultadas de los cromosomas politnicos son reas en
las que se acumula RNA, probablemente como parte de una sntesis intensa de
protenas. La variabilidad del patrn de abultamiento refleja la actividad de genes
tejido-especfico dependientes del desarrollo del organismo.

En las clulas de las glndulas salivales de la mosca, cinco brazos largos parten
de un centro comn llamado cromocentro, el cual es una estructura radial y
representa una coalescencia de las reas heterocromticas alrededor de los
centrmeros de los cuatro pares cromosmicos. El cromosoma se forma por la
atraccin mutua y asociacin estrecha de los centrmeros.
En el caso de los cromosomas politnicos se encuentra que de cada cromosoma
en forma de V (pares 2 y 3) salen dos brazos, izquierdo y derecho (2L, 2R y 3L,
3R, respectivamente); del cromosoma X slo se extiende uno, ya que su
centrmero es terminal. El cromosoma y est formado principalmente por
heterocromatina y se queda en su mayor parte formando el cromocentro. En

ocasiones es posible ver al cromosoma 4 saliendo del cromocentro en una

extensin muy corta.
El estudio de los patrones de bandas e interbandas en los cromosomas
politnicos ha resultado en la elaboracin de mapas citolgicos los cuales
aportaron evidencias de la localizacin lineal de los genes y las relaciones de
ligamiento entre los mismos, por otro lado, el anlisis de las alteraciones en los
patrones de bandeado ha permitido la asociacin de ciertos genes con bandas e
interbandas especficas. Al compararse los mapas citolgicos obtenidos de estos
estudios con los mapas genticos, constituidos a partir del anlisis de datos de
entrecruzamiento utilizando marcadores fenotpicos en cruzas experimentales, se
ha observado que existe consistencia en la informacin aportada por ambos tipos
de mapas.
Los cromosomas politnicos tambin son importantes en el anlisis de
aberraciones cromosmicas como deficiencias, duplicaciones, inversiones y
translocaciones, y ha sido de enorme utilidad en estudios de mutagnesis
experimental.
Adems, los cromosomas politnicos son una herramienta extraordinaria en el
estudio de los polimorfismos genticos de diferentes especies del gnero
Drosophila, entre las que se puede mencionar a D. pseudoobscura, D. willistoni,
D. azteca, D. nebulosa y D. persimi/is, aportando informacin de gran importancia
para establecer relaciones filogenticas y proponer patrones evolutivos.

MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO

Larvas de Drosophila melanogaster y de D. pseudoobscura de tercer estadio
Solucin fisiolgica de NaCI al 0.7%
Acetorcena al 2%
2 agujas de diseccin o 2 pinzas de relojero
Toallas de papel
Cubreobjetos
Portaobjetos
Lpiz con goma nueva
Platina de vidrio
Barniz de uas
Etiquetas
Microscopio de diseccin
Microscopio ptico
METODOLOGA
1. Con la ayuda de una aguja de diseccin extraiga una larva de tercer estadio de
un cultivo maduro, seleccione aquellas de mayor tamao y coloque la larva
sobre una platina o portaobjetos en una gota de solucin salina.
2. Con la ayuda de dos agujas disecte la larva. Coloque una aguja en el rea de
las mandbulas y la otra en la parte central del cuerpo. Con un movimiento
rpido separe la regin ceflica del resto del cuerpo para obtener las glndulas
que quedarn adheridas a la zona de la mandbula. Las glndulas salivales
son transparentes y tienen por lo general, una franja de tejido graso adherido
lateralmente en cada una de ellas; con mucho cuidado procure retirar la grasa
tanto como le sea posible (Fig. 5 a y b).
3. Coloque una gota de acetorcena en un portaobjetos
limpio
4. y transfiera las glndulas con sumo cuidado para no perderlas, deje teir de 30
a 45 minutos sin dejar secar.

5. Coloque un cubreobjetos con una pequea gota de colorante (si es necesario),

cubra la preparacin con una toalla de papel o papel higinico y haga presin
con el dedo pulgar siguiendo un movimiento circular o golpee con la goma de
un lpiz siguiendo crculos hasta dispersar el tejido (squash), teniendo cuidado
de no romper el cubreobjetos.
6. Revise si se obtuvieron figuras (a 40 X) Y selle con barniz de uas. Esta
preparacin es semipermanente. Etiquete la preparacin.
7. Analice la laminilla a 40 o 100X para identificar con ayuda del mapa citolgico
el patrn de bandeo natural y los distintos brazos de cada cromosoma;
determine, si le es posible, la presencia de alteraciones (duplicaciones,
inversiones, deficiencias o translocaciones ).

RESULTADOS:

Dibuje las estructuras que observ en cada una de las preparaciones y coloque el
nombre de aquellas que pudo identificar.

CUESTIONARIO

1. Defina bandeo y mencione su importancia en la gentica

2. Defina cromosoma politnico y explque el por qu de su nombre.
3. Explique por qu en esta prctica se utilizaron las glndulas salivales de las
larvas de mosca y no de cualquier otro organismo.

BIBLIOGRAFA
1. De Garay, A. 1988. Gentica de poblaciones y evolucin. Textos UAP.
2. Demerec M. y S.P. Kaufmann 1975 Gua de Drosophila. Introduccin a la
gentica y citologa de Drosophila me/anogaster. Departamento de
Gentica, Institucin ICarnegie de Washington. Cold Spring Harbor, Nueva
Cork, pp 21-33.
3. Goodenough U. 1981, Gentica, Ediciones Omega, S.A. pp. 57-58
4. Guzmn J., L. Levine, O., Olvera, J. Powell, M. E. De la Rosa y V. Salceda,
1992. IPopulation Genetics of mexican Drosophila IX. East-West distribution
of inversion polymorphism in Drosophila pseudoobscura. Southwestern
Naturalist.
5. Kalthoff K (1996) Analysis of biological development. McGraw-Hill, New
York, 738 pp
6. Mertens T, Hemmersmith R (1991) Genetics. Laboratory Investigations,
McMillan Publishing Co., 9a ed., New York, 263 pp.
7. Olvera O., J. Poewll, M.E. de la Rosa, V. Salceda, M.I. Gaso, J. Guzman,
W. rAnderson, L. Levine (1979) Population Genetics of Mexican Drosophila
VI.

8. Cytogenetic

aspects

of

the

inversion

polymorphism

in

Drosophila

pseudoobscura. .
9. Evolution 33( 1), 381-395.
10. Ramos PH. Abundis, J.C. Gaytn, M.G. Ordaz, P.G. Orozco, J.
Maldonado, J.Hernndez, E. Gonzlez, P. Reyes, E. Galicia, J.A.
Muoz (1993). Manual de laboratorio de Gentica de Drosophi/a
melanogaster, McGraw-Hill, Mxico, 100- 106 p.
11. Russell P. J. (1996). Genetics. 4a. ed. Harper & Collins, New York.
196-198,220, 568-570 p.
12. Weaver R.F., Hedrick P.W. (1997) Genetics 3a. ed. WMC. Brown
Publishers, London. 638pp.

UTs
PRCTICA No. 8
MAQUETA VIVIENTE

Informacin pendiente

UT

s
PRCTICA No. 9

ESTUDIO DE CASOS BIOTICOS

Informacin pendiente