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INSTITUTO TECNOLGICO DE
ACAPULCO
MICROBIOLOGA GENERAL
MIGUEL NGEL DAZ ALDAY
AISLAMIENTO DE
BACTERIOFAGOS
RIVERA RAMOS PATRICIA
GABRIELA
10320453
19 NOVIEMBRE 2014

NDICE
Objetivo.3
Introduccin..3
Materiales.5
Mtodo..5
Prueba cualitativa5
Prueba cuantitativa por dilucin en placa..5
Bibliografa6

NDICE DE IMGENES
Imagen 14
Imagen 24
Imagen 36

AISLAMIENTOS DE BACTERIFAGOS

OBJETIVO: Aislar virus bacterianos utilizando tcnicas adecuadas

INTRODUCCIN:
Bacterifago, tambin llamado virus bacteriano, virus capaz de infectar las
bacterias. Los bacterifagos estn presentes en los desechos humanos, en el
suelo y en las aguas residuales. Fueron descubiertos en 1 9 1 5 p o r e l i n v e s t i g a d o r
i n g l s F r e d e r i c k W . T w o r t , y t a m b i n d e f o r m a independiente, por el
cientfico franco-canadiense Flix H. D'Hrelle en 1917. La mayor parte de los virus
bacterianos que se han estudiado infectan principalmente bacterias como
Escherichia coli o Salmonella typhimurium, aunque se conocen virus que infectan
tanto eubacterias como arqueobacterias. El material gentico de este tipo de virus
puede ser tanto ARN como ADN. Unos cuantos poseen una en vo ltura de
lpido s, pe ro la ma yo ra ca re cen de ella . Mucho s ba cterifag os
pre sen ta n estructu ra s comple jas con cabe za y cola . En este ltimo
ca so la infeccin de la bacteria se produce por la penetracin del cido nucleico, ya que la
cabeza y la cola se quedan en la superficie de la bacteria, y las partculas vricas
se forman en el interior de sta hasta producir el estallido o lisis de la misma. Al infectar un
virus o una bacteria ocurre lo siguiente: adsorcin del virus y penetracin en las
clulas, dilucin o lisis de la bacteria con liberacin del virus. Esta fa se de lisi s
se po ne de mani fi esto po r el acla ramien to de los cul ti vos bacterianos
en medios lquidos o por la formacin de calvas o placas en cultivos en m e d i o s
slidos. Esta lisis se puede inhibir por medio de
s u e r o s anti bacterifago. Los bacterifagos han servido para estudiar muchos
conceptos bsicos en virologa que luego se aplicaron a virus de organismos
superiores. En la dcada de 1960, las investigaciones pioneras de los
sistemas husped-parsito en los fagos fueron dirigidas por los fisilogos
estadounidenses Max Delbrck, AlfredHershey y Salvador Luria, gracias a las
cuales compartieron el Premio Nobel de Fisiologa y Medicina en 1969. En 1980, estas
investigaciones permitieron conocer el modo de penetracin de los fagos en el
interior de las bacterias, as como la existencia de recombinacin gentica
entre virus o el fenmeno de restriccin- modifica cin de la s clula s
bacte ria nas para hace r fre nte a la in fe ccin . En general, supusieron un
apoyo importante a la hiptesis de que el ADN constitua el material gentico de los seres
vivos. Al estudiar las propiedades fsicas y qumicas as es necesario preparar un
gra n lote del mismo puri fi cad o, libre de materi al cel ula r (hu sp ed) y
esto se considera como el medio del aislamiento de fagos. Los bacterifagos se emplean
actualmente como vectores de clonacin en el campo de la ingeniera gentica y su estudio
tiene implicaciones importantes en la medicina y la gentica, en concreto en la
comprensin de las infecciones virales, defectos genticos, problemas de desarrollo,
causas del cncer y la resistencia de las bacterias a los antibiticos

Por otro lado, tambin son muy tiles en la tipificacin de cepas bacterianas.
1. Fagos lisognicos: tambin denominados moderados o temperados: aqu el
genoma del fago se replica sincrnicamente con el cromosoma bacteriano,
pasando a la progenie. En este estado lisgeno, los fagos integrados al
cromosoma bacteriano adquieren genes de la bacteria durante su separacin.
Estos genes permiten a la bacteria lisgena expresar nuevas actividades y
producir nuevas protenas.
El genoma del fago lisgeno puede modificar la estructura del polisacrido
bacteriano y su antigenicidad, o puede codificar la produccin de toxinas
bacterianas que causan enfermedades como la difteria, la escarlatina, el
botulismo.

2. Fagos lticos: se replican dentro de la bacteria husped y la lisan, liberando

nuevos fagos. Los fagos ms estudiados hasta ahora son los de
Escherichia coli, mismos que se han designado con la letra T y diferentes
nmeros. Los fagos virulentos al destruir a las bacterias producen placas de lisis
que se tornan evidentes en cultivos de placas de agar.

Imagen 1

Imagen
2

Colonias de S. aureus creciendo en una placa de

medio de cultivo

MATERIALES Y MTODOS
Material Biolgico:
Cepa bacteriana (Escherichia coli o Pseudomonas sp.)
Agua residual o servida (en nuestro caso se uso aguas residuales del
Drende Pimentel).
Material de Laboratorio:

Medio de cultivo: Caldo Doble Concentrado

Caldo triptosa
Caldo Triptosa o Caldo Nutritivo.
Agar triptosa
Filtro de porcelana.
Frascos y botellas estriles.
Viales, placas, pipetas, papel filtro, tubo para centrifugar, anzas
bacteriolgicas (en anillo y en punta).
Centrfuga refrigerada.
Estufa
Bomba de vaco
Matraz

MTODOS
Prueba cualitativa.
1. Siembre una placa de agar-cerebro-corazn, depositando en la superficie 0.2
ml de una suspensin de Escherichia coli, que ser el husped especfico del
fago.
2. Enseguida distribuya el inculo homogneamente con un asa bacteriolgica.
3. A continuacin, marque 4 puntos separados en el reverso de la misma caja y en
cada uno deje caer una gotita de suspensin del fago T7, usando una pipeta
Pasteur.
4. Incube a 37 C por 24 hs.
5. Observe las reas circulares sin crecimiento de la bacteria, equivalentes a
zonas de bacterias lisadas por replicacin del fago.
Prueba cuantitativa por dilucin en placa.
1. Haga diluciones de una suspensin del fago en la forma siguiente: En un tubo
estril coloque 0.5 ml del fago, ms 4.5 ml de caldo cerebro corazn (c.c.c.).
2. De ah transfiera 0.5 ml a otro tubo conteniendo 4.

5 ml de solucin salina fisiolgica y contine haciendo diluciones con s.s.f. hasta

obtener una dilucin de 1:1000 000.
3. De cada dilucin del fago, transfiera 0.1
ml a tubos conteniendo 0.l ml de la bacteria. Mezcle e incube a 37 C por 20 min.
4. Al cabo de este tiempo adicione a cada tubo 4 ml de a.c.c. blando (0.5%),
mezcle y vace en cajas de Petri estriles con a.c.c
5. Deje solidificar e incube a 37 C durante 24 hs. Determine las calvas y cuntelas.
6. Para calcular el nmero de partculas virales /ml, cuente el nmero de placas
lticas en las cajas de cultivo que presenten pocas placas y aplique la siguiente
frmula:
UFP / ml = PV x FD
PV = nmero de placas virales
FD = Factor de dilucin de la caja de Petri
UFP / ml = unidades formadoras de placas, por ml de suspensin original del fago.

Imagen 3

BIBLIOGRAFA
http://www2.uacj.mx/icb/manuales/microII/P2-fagos.pdf
http://es.scribd.com/doc/6850630/Virologia-Practica-02-Aislamiento-debacteriofagos
http://www.serida.org/publicacionesdetalle.php?id=2211