Protena Cruda

CAPITULO X
DETERMINACION DE PROTEINA
BRUTA
A. INTRODUCCION
Las protenas son compuestos orgnicos de elevado peso molecular. Contienen al
igual que las grasas y los hidratos de carbono, oxgeno, carbono, hidrgeno, pero
todos tienen adems nitrgeno que es la fraccin que vamos a determinar en forma
de NH3 y muchas ellas azufre.
La determinacin de protena bruta consta de tres etapas: digestin, destilacin y
titulacin. Una vez obtenidas y analizadas varias protenas especficas se
descubrieron que contenan el 16% de nitrgeno aproximadamente. Esta fue la base
para la conversacin de nitrgeno en protena; de ah que la cifra de nitrgeno
obtenida se multiplique por 6.25 con lo que corresponde a las verdaderas protenas,
ya que en la determinacin se extrae amidas, aminas, vitamina B, etc. por lo que se
le denomina a l fraccin extrada protena cruda.
B. PRINCIPIO DEL METODO
Calentando el alimento con cido sulfrico concentrado, los hidratos de carbono
y las grasas se destruyen hasta formar anhdrido carbnico y agua. La protena se
descompone con la formacin de amonaco el cual interviene en la reaccin con el
cido sulfrico y forma sulfato de amonio.
NH2CH2COOH + 3H2SO4 ..... NH3 + 2CO2 + 3SO2 +4H2O
2NH3 + H2SO4 ....................... Sulfato de amonio
El sulfato de amonio en medio cido es resistente y su destruccin con
desprendimiento de amonaco sucede solamente en medio bsico. Por consiguiente,
luego de la forma de la sal de sulfato de amonio, acta en base fuerte al 50% y se
desprende todo el nitrgeno en forma de amonaco:
(NH4) 2SO4 + 2NaOH ............ Na2SO4 + 2NH4OH
2NH4OH.................................. 2NH3 + 2H2O
El amonaco que se desprende se calcula mediante la absorcin de este con 0.1N
de una solucin de cido clorhdrico por titulacin

Ing. Zoot. M.Sc. Patricio Guevara C.

35

Protena Cruda
C. EQUIPO
*Aparato de digestin y destilacin Macro Kjeldahl
-Balones Kjeldahl de 800ml.
-Buretas
-Probetas
-Frascos Erlenmeyer de 500ml.
-Soporte universal
-Agitador magntico
-Barra de agitacin
-Papel bond
D. REACTIVOS
-H2SO4 concentrado
-NaOH al 50%
-Catalizador
-H3BO3 al 4%
-Zinc en lentejas
-Indicador para Macro Kjeldahl
-HCl estandarizados 0.1N
E. PROCEDIMIENTO
(ETAPA DE DIGESTION)
1.-Pese en los papeles bond alrededor, 1gr. de muestra con aproximacin 0.1mg.
para esto pese primero el papel, luego proceda a pesar el papel ms la muestra
y registra estos pesos.
2.-Introduzca la muestra con el papel en los balones de Kjeldahl de 800ml.
3.-Aada en cada baln aproximadamente 10gr. de catalizador.
4.-Agregue 40cc. de H2SO4 concentrado de cada baln.
5.-Coloque los balones en los digestores del equipo Kjeldahl prenda el extractor
de vapores y luego los calentadores individuales del equipo.
6.-Deje que se digiera la muestra hasta que tome un color verde claro, esto
conseguimos en aproximadamente 1 1/2 horas. (Etapa de la digestin).
(ETAPA DE DESTILACION)
7.-Mientras se realiza la etapa de la digestin proceda a preparar la etapa de la
Destilacin. Coloque en los matraces Erlenmeyer de 500ml. 70ml. de H3BO3
al 4%.
8.-Una vez realizada la digestin de las muestras con el H2SO4 saque con
cuidado los balones Kjeldahl de los digestores y djelos enfriar. Mientras se
realiza el enfriamiento de las muestras digeridas procede de la siguiente
manera.
Traslade los matraces Erlenmeyer con el H3BO3 al 4% al equipo de
destilacin e introduzca los tubos de vidrio del equipo en los Erlenmeyer,
teniendo cuidado que los tubos queden en contacto con el H3BO3 al 4%.
Abra el grifo de agua que est conectado a los refrigerantes del Kjeldahl.
9.-Una vez enfriados los balones Kjeldahl con las muestras digeridas, aada a
cada baln 400ml. de agua destilada...DESPACIO, CUIDADO ES UNA
REACCION EN LA QUE HAY PRODUCCION DE CALOR Y VAPORES.
10.-Agregue a cada baln 3 pepitas de zinc granulado.
11.-Procedemos a aadir muy cerca del equipo Kjeldahl 120ml. de NaOH al 50%
en cada baln.
Ing. Zoot. M.Sc. Patricio Guevara C.

36

Protena Cruda
12.-Colocamos inmediatamente el baln de Kjeldahl a cada tapn de hule del
equipo de destilacin del aparato Kjeldahl, agitamos el baln para la
homogeneizacin de las sustancias producto de la reaccin.
13.-Prendemos los reverberos del equipo de destilacin del aparato de
determinacin de protenas y regulamos la temperatura hasta que cada matraz
Erlenmeyer con H3BO3 al 4% se hayan recolectado de 250 a 300ml. del
destilado.
14.-Una vez recolectado los 250 a 300ml. del destilado, sacamos los matraces
Erlenmeyer y ponemos de 2 a 3 gotas de indicador macro.
(ETAPA DE LA TITULACION)
15.-Armamos el equipo de titulacin que consiste en el soporte universal con los
porta-buretas, el agitador magntico y la barra de agitacin.
16.-Ponemos en la bureta el cido clorhdrico 0.1N
17.-Colocamos dentro del matraz Erlenmeyer con el destilado la barra de
agitacin y ponemos el Erlenmeyer con el destilado y la barra de agitacin
encima del agitador magntico.
18.-Realizamos la titulacin y registramos la cantidad de H2SO4 0.3N gastados
en la titulacin.
F. CALCULOS
HCl 0.1 N estandarizado x 0.014 x 6.25 x ml. HCl 0.1 Gastados.
% P.B. =---------------------------------------------------------------------------(peso papel + muestra) - (peso papel)
Donde:
14.01
-------- x 0.1 x 100 = 0.014 (constante)
1000
100
--------- = 6.25 (constante)
16
100 x % P.B.
% P.B en base seca = ---------------------% MS.

Ing. Zoot. M.Sc. Patricio Guevara C.

37