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Objetivo
Uma boa coleta de sangue permite segurana no resultado do exame, todos os
procedimentos devem ser realizados de forma a garantir a segurana do profissional, do paciente
e da amostra.
Desenvolvimento
O paciente deve ser orientado a manter um jejum de 10 a 14 horas, antes da coleta. Ele
fica livre somente para beber gua, a coleta deve ser preferencialmente realizada na parte da
manha e antes da pratica de exerccios fsicos.
A obteno do sangue pode ser por puno venosa, arterial, ou puno de pele (capilar), a
amostra tambm podem ser coletadas no dorso da mo, na veia femoral, veias jugulares, cordo
umbilical e seio sagital superior.
Normalmente usa-se a dobra do cotovelo ou a mo para a coleta.
Procedimento
Verificar quais exames ser realizado.
Identificar os tubos com o nome do paciente.
Retirar a agulha da embalagem estril e acoplar a seringa estril.
Colocar o garrote ao redor do brao acima do cotovelo.
Paciente abrir e fechar a mo vrias vezes.
Determinar a veia a ser puncionada.
Desinfetar a pele com lcool 70%.
Introduzir a agulha na pele e penetrar no interior da veia.
Aps a coleta, pedir para o paciente abrir a mo.
Soltar o garrote.
Retirar a agulha voltada para cima.
Distribuir nos tubos Inverter os que tiverem anticoagulantes.
OBS: quando se quer obter o soro do paciente, usa-se tubo sem anticoagulante, e se
deseja obter plasma, usa-se tubo com anticoagulante.
Concluso
Com os dias de estgio na rea de coleta, foi possvel obter prtica, aumentar confiana alm de
aprender as tcnicas utilizadas, para que na hora da coleta eu possa transmitir ao paciente
segurana e confiabilidade.
HEMATOLOGIA
coagulao, dever ser coletado primeiro um tubo de descarte. Isso devido ao fato de o primeiro
fluxo de sangue coletado conter os fatores de coagulao, principalmente a protrombina, o que altera
os
resultados.
Anlises de Coagulao
Quando se pretende fazer anlise de coagulao, dever ser colhida uma amostra de plasma
(CITRATO DE SDIO). Esta ser obtida atravs da coleta em tubo de citrato de tampa azul. Este tubo
contm Citrato de Sdio, o sangue colhido com anticoagulante deve ser cuidadosamente
homogeneizado por inverso de 5 a 8 vezes para evitar hemlise e a coagulao do sangue.
Quando se pretende fazer anlise bioqumica ou sorolgica, dever ser colhida uma amostra
de soro. Esta ser obtida atravs da coleta em tubo sem anticoagulante para que ocorra o processo de
coagulao. Portanto, a coleta deve ser feita no tubo de tampa vermelha sem gel ou no tubo de tampa
amarela com gel. Estes tubos contm ativador de cogulo e deve-se, imediatamente aps a coleta,
homogeneiz-los por inverso de 5 a 8 vezes para evitar hemlise, manter em repouso na posio
vertical por 30 minutos para retrair o cogulo e seguir a centrifugao a 3.000 rpm durante 10 minutos.
Anlises Bioqumicas
Quando se pretende fazer anlise bioqumica, gasometria ou outros exames, dever ser
colhida uma amostra de plasma (HEPARINA). Est ser obtida atravs da coleta em tubo de heparina
de tampa verde. Este tubo contm Heparina, o sangue colhido com anticoagulante deve ser
cuidadosamente homogeneizado por inverso de 8 a 10 vezes para evitar hemlise e a coagulao do
sangue.
Anlises Hematolgicas
Quando se pretende fazer anlise hematolgica, dever ser colhida uma amostra de sangue
total (EDTA). Esta ser obtida atravs da coleta em tubo de EDTA de tampa roxa. Este tubo contm
anticoagulante especfico para evitar a coagulao. O sangue colhido com anticoagulante deve ser
Anlises Glicmicas
Quando se pretende fazer anlise de glicemia, dever ser colhida uma amostra de plasma
(FLUORETO DE SDIO). Esta ser obtida atravs da coleta em tubo de tampa cinza. Este tubo
contm fluoreto de sdio com EDTA, o sangue colhido com anticoagulante deve ser cuidadosamente
homogeneizado por inverso de 5 a 8 vezes para evitar hemlise e a coagulao do sangue.
nas
hemcias,
e aglutinina,
no
plasma
sanguneo.
Tipo Sanguneo
Aglutinognio (hemcias)
Aglutinina (plasma)
Anti-B
Anti-A
AB
AB
-----
-----
Anti-A e Anti-B
aglutinao quando em contato com anticorpos anti-Rh. Quando um indivduo Rh- recebe
sangue Rh+, ele passa a produzir anticorpos anti-Rh.
A eritroblastose fetal uma doena que pode ocorrer quando mes Rh- geram filhos Rh+.
Nestes casos, pequenos vasos da placenta se rompem e h passagem de sangue do filho para a
me. Em resposta, o sangue da me passa a produzir anticorpos anti-Rh. Numa prxima
gravidez, se o filho for Rh+, os anticorpos maternos iro atacar as hemcias do feto, provocando a
doena.
O cromossomo D o responsvel pela produo da maior parte do aglutinognio
conhecido como Rh, por isso o termo Rh pode ser substitudo pelo fator D
Materiais
Laminas
Reagentes (anti-A, anti-B, anti-AB e anti-D)
sangue
Mtodo
1. Pegar quatro lminas e marca-las de acordo com o reagente a ser colocado. Colocar uma
gota de sangue em cada lmina e uma gota de cada soro de acordo com a marcao
realizada. Exemplo: uma gota do reagente anti-A na lmina marcada como anti-A.
Homogeneizar. Observar a presena de aglutinao macroscpica se houver aglutinao
significa que a hemcia possui antgeno correspondente. Exemplo: Houve aglutinao com
o reagente anti-A, significa que o sangue pode ser A. Se no houver aglutinao com
nenhum dos reagentes, o tipo sanguneo o O. Se houver aglutinao com o reagente
anti-D significa que o sangue Rh positivo.
Determinao grupo ABO em tubo
Materiais
Tubos
Pipetas
Reagentes (anti-a, anti-b, anti-ab e anti-d)
Sangue
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Centrfuga
Mtodos
1. Marcar trs tubos como anti-A, anti-B e anti-AB. Colocar duas gotas de sangue nos trs
tubos e duas gotas do reagente correspondente.
2. Centrifugar por 15 segundos em 3500 rpm. Ressuspender delicadamente o boto de
hemcias e examinar a presena ou no, de aglutinao.
Coombs Direto
Materiais
Tubos
Soro de coombs
Sangue
Soluo fisiolgica
Pipetas
Centrfuga
Mtodo
Materiais
Tubos
Centrfuga
Banho-maria
Soro de coombs
Hemcias com tipagem conhecida
Soluo fisiolgica
Mtodo
Materiais
Sangue
Lminas
Lpis
Mtodo
1. Preparar duas lminas novas e desengorduradas. Colocar uma gota de sangue pequena
em uma das extremidades da lmina. Tomar a outra lmina e coloca-la frente da gota
num ngulo de 45, fazer um ligeiro movimento para trs at o sangue se espalhar
totalmente na borda da lmina. Com um movimento uniforme, para frente, fazer esta
lmina deslizar sobre a outra, ela arrastar atrs de si o sangue que se espalhar em fina
camada. Imediatamente aps, agita a lmina ao ar at o esfregao secar-se
completamente e identificar com lpis.
Colorao de Lmina
Materiais
Mtodos
Materiais
Lmina corada
Microscpio
Mtodo
Materiais
Cmara de Neubauer
Pipetas
Tubos
Lquido de Gower
Sangue
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Lamnula
Microscpio
Mtodo
Clculo
n de eritrcitos/mm3 = n de eritrcitos contados 10.000
Materiais
Cmara de Neubauer
Pipetas
Tubos
Lquido de Turk
Sangue
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Lamnula
Microscpio
Mtodo
Clculo
Hematcrito
O hematcrito um exame de diagnstico que serve para avaliar a percentagem dos glbulos
vermelhos ou hemcias no volume total de sangue, ajudando a identificar a anemia.
Materiais
Capilar
Sangue
Papel ou gaze
Bico de bunsen
Centrfuga
Mtodo
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1. Encher dois teros de um capilar com sangue com anticoagulante, limpar a extremidade
com papel ou gaze.
2. Fechar a extremidade do tubo na chama, protegendo o sangue com o dedo e rotacionando
lentamente o capilar para que ele feche por igual, sem formar deformaes na ponta.
3. Centrifugar por 5 minutos a 11.500 rpm.
4. Fazer a leitura no carto especial alinhando o incio da coluna de hemcias em zero e o
final do plasma em 100% e obtenha o resultado em porcentagem.
Hemoglobina
hemoglobina
uma
protena
presente
nos
eritrcitos
(hemcias),
constituindo
Materiais
Regente de cor
Padro
gua destilada
Sangue
Tubos
Pipetas
Espectrofotmetro
Mtodo
1. Identificar 3 tubos como branco, teste e padro. Adicionar no tubo padro 5ml do reagente
de cor e 20l do padro. No tubo teste colocar 5ml do reagente de cor e 20l do sangue
total.
2. Misturar e esperar 5 minutos.
3. Determinar as absorbncias em 540nm, acertando o zero com gua destilada. A cor
estvel por vrias horas.
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Clculos
Hemoglobina (g/dl) =
absorbncia do teste
10
absorbncia do padro
Fator de calibrao =
10
absorbncia do padro
VCM
O volume globular mdio (VGM) ou volume corpuscular mdio (VCM) mede o tamanho das
hemcias. Um VCM elevado indica hemcias macrocticas, ou seja, hemcias grandes. VCM
reduzidos indicam hemcias microcticas, isto , de tamanho diminudo.
VCM =
Clculo
hematcrito
10
eritrcitos
Valores de referncia: Macrocitose = 98fl
Normocitose = 80 98fl
Microcitose = 80fl
HCM
Clculo
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HCM =
hemoglobina
10
eritrcito
Clculo
CHCM =
hemoglobina
100
hematcrito
Contagem de reticulcitos
O reticulcito uma clula jovem que representa uma fase intermediria entre os eritroblastos
da medula ssea e os eritrcitos maduros, anucleados e j totalmente hemoglobinizados.
Materiais
Sangue
Corante azul cresil brilhante
Lminas
Mtodos
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Fazer um esfregao com uma gota de azul cresil brilhante e uma gota de sangue total. Incubar por
15 minutos a 37C.
Clculo
Reticulcitos =
n de hemcias contadas
Podemos concluir que alm da importncia da coleta do material biolgico a ser analisado,
de suma importncia observar bem o exame a qual o paciente foi solicitado, para que este seja
armazenado e analisado de forma correta. Devemos sempre colocar a identificao nos tubos em
primeiro lugar, alm de conferir o laudo do exame com o cadastro do paciente, pra assegurar que
no haja erros na emisso de resultados.
Uroanlise
A urina composta por 96% de gua e 4% por substncias provenientes da dieta e do
metabolismo. Constituda por uria e outras substncias qumicas orgnicas e inorgnicas
dissolvidas em gua que podem sofrer alterao devido a alimentao, atividade fsica,
metabolismo orgnico e funo endcrina.
Para a realizao do exame, a urina considerada padro ou mais adequada para anlise
a primeira amostra da manh. Esta amostra deve ser colhida imediatamente aps acordar, pela
manh, em jejum e antes de realizar qualquer atividade. recomendado, ainda que esta amostra
seja colhida aps oito horas de repouso e, pelo menos quatro horas aps a ltima mico. A
primeira amostra da manh considerada como amostra padro para a realizao do exame de
urina porque ela mais concentrada que as outras amostras e porque nesta amostra se verifica
maior crescimento das bactrias eventualmente presentes na bexiga, assim o resultado da analise
realizada reflete melhor as condies do paciente.
Uma outra amostra a segunda amostra da manh, sendo obtida com mais facilidade no
laboratrio que a primeira amostra da manh. Deve ser colhida de duas a quatro horas aps a
primeira mico do dia, podendo sofrer alteraes devido a ingesto de alimentos e lquidos no
desjejum. Com o objetivo de aumentar a concentrao de eventuais bactrias presentes na bexiga
pode-se recomendar a restrio de ingesto de lquido aps as 2 horas.
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Objetivo
Material
Amostra biolgica
Fita reagente
Estante
Centrfuga
Lminas
Lamnulas
Refratmetro
Tubos
Microscpio
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Mtodo
1. - Exame Fsico
Aspecto
A urina pode ser considerada lmpida, ligeiramente turva e turva. A urina pode apresentar
turvao quando h presena de grandes quantidades de hemcias, clulas epiteliais,
cristais e bactrias, alm da presena de matria gordurosa.
Odor
Em situaes normais, a urina apresenta odor caracterstico, ligeiramente aromtico,
alterando aps algum tempo de repouso. Quanto a urina entra em estado de
decomposio, seu odor ptrido ou amoniacal, devido fermentao bacteriana.
Cor
A urina, em situaes normais, apresenta cor amarela, variando do tom claro e escuro. A
urina pode apresentar colorao vermelha ou castanha em casos de hematria, alm de
apresentar variaes de colorao devido a certos alimentos ingeridos, como por exemplo
a beterraba. Em casos de ingesto de medicamentos, a urina pode apresentar colorao
bastante variada como vermelha, verde, laranja, etc.
Densidade
medida a densidade da urina com a finalidade de verificar a capacidade de concentrao
e diluio do rim, bem como o estado de hidratao do paciente, diabetes inspido e
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2. - Exame Qumico
pH
Embora um individuo sadio produza a primeira urina da manh com pH ligeiramente cido,
entre 5,0 e 6,0, o pH normal das outras amostras do dia pode varias de 4,5 a 8,0. A urina
noturna tem pH mais baixo por causa da acidose respiratria fisiolgica do sono.
O pH urinrio importante na determinao de acidose respiratria ou metablica;
alcalose respiratria ou metablica, anormalidades na secreo e reabsoro de cidos e
bases pelos tbulos renais; precipitao de cristais e formao de clculos;
acompanhamento de tratamento das infeces do trato urinrio e determinao de
amostras insatisfatrias.
Protenas
A determinao de protenas a mais indicativa de doena renal, pois a presena de
proteinria pode ser indicativo de doenas renais incipientes. A urina em estado normal
possui pequenas quantidades de protena, em mdia menos de 10 mg/dL ou 150 mg por
24 horas, e a principal protena encontrada a albumina, sendo observada atravs de fitas
reativas. O resultado qualitativo normalmente representado por negativo, trao e positivo.
O resultado positivo acompanhado pelo nmero de cruzes, dado pelo grau de
intensidade da reao.
Glicose
Anlise bioqumica mais utilizada na deteco e controle da diabetes mellitus Alm disso, a
anlise utilizada para determinar deficincia da reabsoro tubular, leses no sistema
nervoso central, distrbios da tireide, latncia de diabetes durante a gravidez. Em adultos,
a excreo de glicose na urina de em mdia 130 mg durante 24 horas, sendo observada
atravs de tira reativa contendo glicose oxidase.
Bilirrubina
A bilirrubina um composto amarelo muito pigmentado, sendo produto da degradao da
hemoglobina. Sua presena na urina pode ser a primeira indicao de hepatopatias,
sendo, muitas vezes,detectada bem antes do desenvolvimento da ictercia porque o limiar
renal de eliminao de bilirrubina menor que 2 mg/dL, enquanto que os indivduos com
ictercia apresentam concentrao de bilirrubina direta no sangue maior que 2,5 mg/dL.
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Urobilinognio
Tal como a bilirrubina, o urobilinognio um pigmento biliar resultante da degradao da
hemoglobina e derivado da bilirrubina pela ao da flora bacteriana intestina.
Normalmente, o adulto excreta menos de 4 mg por dia, visto que uma parte do
urobilinognio reabsorvido, retornando ao fgado. Valores aumentados podem indicar
cirrose heptica, ictercias parenquimatosas e constipao crnica.
Sangue
O sangue pode ser encontrado na urina em forma de hemcias ntegras (hematria), ou
presente como hemoglobina. Em condies normais, a hemoglobina destruda e
metabolizada no retculo endotelial e quando no ocorre uma metabolizao normal ocorre
a ultrapassagem do limiar renal para hemoglobina (100 a 300 mg/dL), no sendo
reabsorvida e sofrendo eliminao renal.
A hematria pode ocorrer em casos de clculos renais, glomerulonefrite, pielonefrite,
tumores, trauma e exposio a produtos ou drogas txicas.
Cetonas
Geralmente, quantidades mensurveis de cetonas no so vistas na urina, pois toda a
gordura metabolizada completamente degradada em dixido de carbono e gua. Quando
o uso de carboidratos fica comprometido e o estoque de gordura precisa ser metabolizado
para o suprimento de energia, pode-se detectar cetonas na urina.
Nitrito
A determinao de nitrito na urina til para diagnostico das infeces da bexiga, pois
muitas vezes os casos so assintomticos ou os sintomas so inespecficos. Quando h
presena de nitritos, ocasionalmente constatado a presena de bactrias, pois essas so
responsveis pela transformao do nitrato em nitrito.
3. - Exame Microscpico
Leuccitos
Os leuccitos so os glbulos brancos que permanecem com suas caractersticas
morfolgicas intactas. Quando h presena de leuccitos na urina isso pode ser o principal
indicativo de inflamao nas vias urinrias.
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Hemcias
A presena de hemcias na urina pode ser um indicador de infeces e traumas.
Clulas epiteliais
So encontradas em urinas normais, em nmero varivel, principalmente em urina de
mulher e mais intensamente durante a gestao.
Cilindros
Os cilindros so clulas agrupadas e possuem suas caractersticas especificas
dependendo da sua formao. Os tipos de cilindros so:
- Cilindros hialinos no indicam doena, mas pode ser um sinal de desidratao.
- Cilindros bacterianos
- Cilindros hemticos sangue.
- Cilindros leucocitrios indicam inflamao dos rins.
- Cilindros de clulas epiteliais indicam leso dos tbulos.
- Cilindros granulares
- Cilindros creos inflamao sria dos rins
- Cilindros adiposos indicam proteinria.
- Cilindros largos
Cristais
A presena de cristais na urina pode depender do pH, e em urinas cisas, so encontrados
os uratos amorfos, oxalatos de clcio e cido rico. Em urinas alcalinas, encontramos
fosfatos amorfos, fosfato triplo ou amonaco-magnesiano, carbonato de clcio e fosfato de
clcio. Os cristais de maior importncia so:
- Cristais epiteliais so as prprias clulas do trato urinrio que descamam.
- Cristais de cido rico
- Cristais de cestinha
- Cristais de bilirrubina
- Cristais de colesterol
- Cristais de magnsio amnio-fosfato.
Resultado
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Os resultados esperados sero avaliados de acordo com o valor de referncia, bem como
a anlise da urina por meio fsico, qumico e microscpico para que seja estipulado o estado em
relao aos componentes da urina, levando em considerao as substncias consideradas
normais, e com alterao.
Concluso
O exame de urina , sem duvida, um meio preciso para avaliao da funo renal,
disfunes metablicas, bioqumicas e microbiologias, alm de possibilitar a avaliao de outras
patologias. Para isso, de extrema importncia o uso de tcnicas sensveis e especificas para o
bom desenvolvimento da anlise. Com este estgio aprendemos a importncia de orientar o
paciente a realizar a coleta de forma correta, alm de tomar as medidas preventivas para
assegurar a integridade da amostra, fornecendo segurana e confiabilidade de resultados.
Parasitologia
O exame parasitolgico das fezes utilizado para diagnosticar os parasitos intestinais, por
meio da pesquisa das diferentes formas parasitrias que so eliminadas nas excrees fecais,
alm do estudo das funes digestivas, dosagem da gordura fecal, pesquisa de sangue oculto,
entre outras. A coleta deve ser realizada em quantidade aproximada de 30g em recipiente limpo e
seco, de preferncia de boca larga, ou ainda, na proporo de uma parte de fezes para trs do
conservador, quando este j est acondicionado no recipiente para a conservao do material,
evitando a contaminao por urina. Em crianas, no utilizar as fezes da fralda quando estiverem
diarricas ou lquidas, solicitar coletores infantis disponveis. No caso de fezes consistentes,
encaminhar condicionalmente para o responsvel do setor verificar se para a analise, a
quantidade suficiente. Encaminhar ao laboratrio em at 3 horas se em temperatura ambiente
ou em at 6 horas se refrigerada.
O exame coproparasitolgico consiste na anlise das fezes para que seja observada a
presena de protozorios ou helmintos. Os protozorios so os cistos unicelulares, enquanto os
helmintos so os ovos e as larvas. Os mais importantes no mbito laboratorial so:
- Protozorios
Giardia lamblia
A Giardia lamblia um parasita monoxnico, de ciclo biolgico direto. A facilidade de
manter esse ciclo in vitrocontribui para o desenvolvimento de vrias pesquisas. As formas
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Moscas, baratas e outros artrpodes atuam como vetores mecnicos e contribuem para a
distribuio dos cistos de E. histolytica, principalmente em reas onde predominam
populaes de nvel scio-econmico mais baixo, bem como precrias condies de
saneamento bsico.
A amebase intestinal apresenta duas formas clnicas principais: colite no-disentrica e
colite disentrica (disenteria amebiana). A colite no-disentrica a forma clnica mais
comum entre os indivduos sintomticos infectados por Entamoeba histolytica. Essa forma
clnica caracterizada por evacuaes diarricas ou no, com duas a quatro dejees
dirias. O indivduo pode eliminar fezes pastosas ou moles e, eventualmente, com sangue
ou muco. Ao longo da infeco pode ocorrer alternao entre funcionamento intestinal
normal e quadros de diarria. Esto presentes na maioria dos casos, ainda, sintomas
intestinais como flatulncia, desconforto abdominal e clicas. Pode ocorrer, mais
raramente, febre. A colite disentrica uma forma clnica menos comum, tendo sido
observada em cerca de 10% dos indivduos com amebase intestinal. Essa forma clnica
apresenta evoluo aguda e caracterizada pela presena de dores abdominais, clicas
intestinais intensas, diarria lquida com evacuaes mucossanguinolentas e febre
moderada.
Cryptosporidium sp
O protozorio do gnero Cryptosporidium apresenta alta capacidade de veiculao hdrica
e, por isso, causa grande preocupao s empresas de saneamento e indstria da gua.
Apesar de tambm ocorrer em pacientes imunocompetentes, a criptosporidiose humana
considerada uma infeco oportunista devido sua alta prevalncia em indivduos
imunodeprimidos, como os portadores de HIV/AIDS. Nesses pacientes, a diarreia
provocada pela doena grave e recorrente.
Os esporozotos e merozotos pertencentes ao gnero Cryptosporidium possuem um
complexo apical (visvel apenas em microscpio eletrnico) constitudo por estruturas
como roptrias, micronemas, grnulos eltron-densos, microtbulos sub-peculiarese anis
apicais. Por isso, so classificados no filo Apicomplexa. Os oocistos possuem um formato
que varia de esfrico a ovoide, medindo de 3 a 8,5 m de dimetro de acordo com a
espcie. Em sua maioria, apresentam uma parede cstica dupla e espessa, mas 20% deles
tm parede fina que se rompe ainda dentro do hospedeiro. Internamente a eles, h quatro
esporozotos que so libertados ou nas fezes, ou no tubo digestivo do hospedeiro aps
a dissoluo da sutura presente em sua parede. O esquizonte aparece no intestino j sem
complexo apical. esfrico, apresenta ncleo volumoso, nuclolo evidente e mede de 4 a
6 m de dimetro.
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desenvolvimento
socioeconmico,
tendo
alta
prevalncia
em
pases
em
70%, em duas a oito semanas os ovos frteis originam larvas que sofrem mudas dentro da
casca. Esse perodo de embrionamento dos ovos ocorre no meio exterior e requer a
presena de oxignio. Forma-se inicialmente uma primeira larva, L1, dentro do ovo. Essa
apresenta um esfago com duas dilataes, sendo do tipo rabditide. Uma semana aps,
a larva L1 sofre muda, transformando-se em L2 e em seguida outra muda, transformandose em L3, a qual apresenta um esfago retilneo ou filariide. Essa larva L3, ou de terceiro
estgio, a forma infectante e pode permanecer vivel por vrios meses. Os ovos
contendo a forma infectante, ao serem ingeridos, tm sua casca amolecida no estmago e
sofrem ao dos sulcos digestivos no duodeno, onde liberam suas larvas. Essa ecloso
deve-se a fatores como temperatura, pH, presena de agentes redutores e concentrao
de CO2 no intestino do prprio hospedeiro. Ao serem liberadas, as larvas atravessam a
parede intestina, ao nvel do ceco, e por meio dos vasos linfticos ou veias do sistema
porta, alcanam o fgado em cerca de quatro a cinco dias. A partir da, atingem o corao
direito e os pulmes, nos quais realizam o ciclo pulmonar, cerca de quatro a cinco dias
aps a ingesto dos ovos. Nos pulmes, aps cerca de oito ou nove dias, as larvas L3
continuam sua evoluo e sofrem uma terceira muda, originando larvas L4, as quais
atravessam as paredes dos capilares alveolares e atingem os alvolos. J nos alvolos,
ocorre uma quarta muda, originado L5. Aps duas semanas, as larvas sobem pelos
bronquolos, brnquios, traquia e laringe, quando so expelidas ou deglutidas com as
secrees brnquicas at atingir o estmago e o intestino. A ltima muda ocorre no
intestino, jejuno geralmente, e origina larvas nas formas juvenis, as quais crescem e se
desenvolvem sexualmente em aproximadamente dois meses.
O Ascaris lumbricoides, na sua forma adulta, alimenta-se de produtos semi-digeridos no
intestino do hospedeiro, j que apresentam as enzimas necessrias para digesto de
protenas, carboidratos e lipdeos. Os scaris adultos so aerbios facultativos, porm,
normalmente no meio em que se encontram, seu metabolismo quase inteiramente
anaerbio. Eles realizam movimentos constantes para se manterem aderidos luz do
intestino, e tm uma longevidade mdia de dois anos. O ciclo biolgico do Ascaris
lumbricoides do tipo monoxnico, ou seja, possui um nico hospedeiro. A nica forma
infectante desse parasita o ovo embrionado contendo larvas de terceiro estgio, e a via
de penetrao no ciclo a oral.
A fase de invaso larvria geralmente assintomtica, mas quando h elevadas cargas
larvrias pode causar hepatomegalia e mais raramente ictercia. Durante a passagem das
larvas pelos pulmes ocorre a eosinofilia pulmonar aguda (Sndrome de Loeffler),
caracterizada por um quadro respiratrio de intensidade varivel no qual h presena de
tosse, dispnia, sibilos e dor retroesternal. Vermes adultos de Ascaris lumbricoides em
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duodenal, atinge a circulao passa a localizar-se em rgos como crebro, olhos e tecido
celular subcutneo.
A tenase geralmente assintomtica. Como no h invaso das mucosas, a maioria das
manifestaes clnicas ocorrem devido a presena do verme no intestino associada
competio por nutrientes entre o parasito e o hospedeiro. Alm disso, a absoro dos
excretos do verme podem causar alguns sintomas como cefalia e irritabilidade. Sendo
assim, o sintoma mais comum a dor abdominal inespecfica, mas pode ocorrer tambm
nuseas, adinamia, perda de peso, alteraes no apetite, obstipao intestinal ou diarria
e prurido anal. Na tenase por T. saginata pode ocorrer sintomas abdominais agudos
devido a migrao das proglotes seguida por obstruo do apndice ou vias biliares e
pancreticas.
Schistosoma mansoni
O S. mansoni apresenta vrias fases no seu ciclo evolutivo, alm de dimorfismo sexual, e
cada uma possui suas prprias caractersticas:
Macho mede aproximadamente 1cm de comprimento; tem cor esbranquiada, com
tegumento recoberto de minsculas projees, as tubrculos; em sua poro anterior
apresenta as ventosas oral e ventral (acetbulo); na poro posterior encontrado o canal
ginecforo; apresenta ainda: esfago bifurcado ao nvel do acetbulo, ceco terminando na
extremidade posterior e sete a nove massas testiculares que se abrem no canal
ginecforo.
Fmea mede cerca de 1,5 cm de comprimento; apresenta cor mais escura, devido ao
ceco com sangue semidigerido, e tegumento liso; a poro anterior semelhante do
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adultos e migrar lentamente para o intestino grosso. No ceco os vermes reiniciam seu ciclo
biolgico.
O sintoma mais frequentemente encontrado o prurido anal intenso, predominantemente
durante a noite, quando h uma reduo da temperatura corporal (nus e regio perianal).
O prurido causado pela presena do ovo do verme na pele da regio perianal. A coceira
constante acaba por lesionar as estruturas perianais, podendo ser encontrado um nus
avermelhado, congesto e at mesmo recoberto por muco, que chega a ser sanguinolento.
Alguns pontos hemorrgicos podem ser encontrados na regio que sofreu o trauma. As
escoriaes produzidas na pele podem servir como porta de entrada para novas infeces.
Objetivo
O exame parasitolgico das fezes tem como objetivo a anlise das fezes para que seja analisado
parasitos intestinais, por meio da pesquisa das diferentes formas parasitrias.
Mtodos
Mtodo de Sheater ou Faust
Tem como finalidade exame coproparasitolgico qualitativo com princpio centrfugo-flutuao
para pesquisa de cistos e oocistos de protozorios intestinais.
Materiais
- Soluo B de acar
- Copos descartveis ou Becker
- Coador (tamis)
- Palitos de madeira
- Tubo de centrfugae centrfuga
- Lmina e lamnula
- Ala bacteriolgica
- Fezes
- Sulfato de zinco a 33%
- Lugol
Mtodo
Sheater
1. Utilizar 11 ml da soluo B com 1 g de fezes. Homogeneizar aos poucos a soluo
juntamente com as fezes em um copo plstico.
31
2. Coar com tamis para outro copo. Preencher o tubo de centrfuga, e levar para a centrfuga
por 10 minutos a 1600 rpm.
3. Flambar a ala bacteriolgica, esfriando em recipiente com gua.
4. Pegar uma gota da flutuao e pingar em uma lmina, cobrindo com a lamnula.
5. Observar no microscpio em objetiva de 100x.
Faust
1. Pegar 1 g de fezes e homogeneizar em 10 ml de gua em um copo plstico.
2. Coar com tamis para outro copo.
3. Colocar a suspenso no tubo de centrfuga e levar para a centrfuga 3x a 2500 rpm
durante 1 minuto, descartando o sobrenadante entre uma centrifugao e outra.
4. Homogeneizar tudo com 10 ml de sulfato de zinco e centrifugar novamente por 1 minuto a
2500 rpm.
5. Coletar 1 gota do sobrenadante com ala bacteriolgica e colocar na lmina, colocando
uma gota de lugol.
6. Observar no microscpio em objetiva de 100x.
Mtodo de Willis
Tem por finalidade o exame coproparasitolgico qualitativo com princpio de flutuao para
pesquisa de ovos de helmintos.
Materiais
- Soluo hipersaturada de cloreto de sdio
- Copos descartveis
- Coador (tamis)
- Gaze
- Palitos de madeira
- Borel
- Placa de Petri
- Lminas e lamnulas
- Fezes
Mtodo
1. Pegar 3,0 gramas de fezes e homogeneizar em 40 ml de soluo de NaCl em um
copo plstico.
2. Coar com tamis e gaze para outro copo.
32
3. Sobre uma placa de Petri, preencher um borel com a suspenso de fezes coadaat
formar um menisco convexo na borda do borel.
4. Colocar a lmina sobre o menisco, com cuidado para no formar bolhas, deixando
a lmina em repouso de 10 a 15 minutos.
5. Cobrir com lamnula e observar no microscpio em objetiva de 100x.
Mtodo de Hoffman
Tem por finalidade exame coproparasitolgico qualitativo com princpio de sedimentao para
pesquisa de ovos de helmintos.
Materiais
- gua
- Copos descartveis
- Coador (tamis)
- Gaze
- Palitos de madeira
- Clice de sedimentao
- Pipeta Pasteur
- Lminas e lamnulas
- Fezes
Mtodo
1. Pegar de 5 a 10g de fezes e homogeneizar em 250 a 300 ml de gua.
2. Filtrar a suspenso de fezes para um clice de sedimentao e aguardar cerca de
25 minutos.
3. Desprezar 2/3 do sobrenadante.
4. Acrescentar gua at a borda do clice e aguardar cerda de 25 minutos. Repetir o
procedimento at a soluo ficar limpa.
5. Pipetar o sedimento para a lmina, cobrindo com a lamnula.
6. Observar no microscpio em objetiva de 40x.
Concluso
33
parasitolgicos disponveis para o diagnstico dos parasitos intestinais. Tambm devemos estar
atentos quanto ao perodo de exposio e de analise a ser realizado com a amostra.
Imunologia
Beta-HCG Ltex
Finalidade do teste
Sistema para deteco qualitativa da gonadotrofina corinica humana (hCG) por
aglutinao direta do ltex em amostras de urina, usando partculas de ltex revestidas com
anticorpo monoclonal. Somente para diagnostico in vitro.
Significado clnico
A gonadotrofina corinica humana um hormnio glicoproteico produzido pela placenta
durante a gravidez. Homens sadios e mulheres sadias no-gravidas no possuem nveis de HCG
detectveis.
Normalmente, encontra-se presente no soro e urina de mulheres gravidas aps o stimo
dia da concepo. O HCG secretado 6 a 8 dias aps a concepo, aumentado rapidamente ate
um pico de 50.000 a 200.000 um/mL na 6 a 8 semana. A partir de ento, sua concentrao
comea a cair, atingindo aps a 20 semana, um plateau de 5.000 a 20.000 um/mL para o
restante da gravidez.
Alm da gravidez, valores altos de HCG podem ser encontrados em enfermidades
trofoblsticas de origem gestacional e no gestacional. Essas situaes devem ser identificadas
antes de se fazer o diagnostico de uma gravidez.
Procedimento
1. Pipetar 25 L da urina do paciente em umas das reas da placa de reao.
Emoutras duas reas da placa de reao, colocar uma gota do Controle Positivo e
uma gota do Controle Negativo.
2. Adicionar 25 L do Ltex HCG (bem homogeneizado) as reas de reao,
contendo a urina Teste, o Controle Positivo e o Controle Negativo. Usando palitos
distintos, misturar bem a urina com o ltex. Inclinar a placa de reao, lenta e
cuidadosamente, para frente e para tras, com movimentos oscilatrios em planos
34
diferentes, por 2 minutos. Pode-se utilizar um mixer com uma rotao de 100 rpm
por 2 minutos. Aps os 2 minutos realizar a leitura dos resultados sobre uma luz
artificial para verificar presena ou no de aglutinao macroscpica.
Resultados
Positivo
Aglutinao visvel (ntida), indicando presena de hCG na amostra analisada em
concentraes superiores a 200 mUl/mL.
Negativo
Ausncia de aglutinao, indicando presena de hCG na amostra analisada em
concentraes inferiores a 200 mUl/mL (200UI/L).
Chagas - HAI
Finalidade
Eritrcitos de aves estabilizados, sensibilizados com componentes antignicos do
Trypanossoma cruzi altamente purificados, mostram aglutinao quando reagem com anticorpos
contra esses antgenos presentes no soro do paciente.
Importncia clnica
A doena de Chagas ou Tripanossomase Americana uma infeco endmica, de
evoluo essencialmente crnica, causada por um protozorio, o Trypanossoma cruzi, e
transmitida ao homem por um inseto, o triatomneo.
Imunologicamente, 3 estgios podem ser considerados: agudo, latente ou indeterminado e
crnico. Na fase aguda, verificam-se febre, miocardiopatia, linfoadenopatia, hepatoesplenomegalia
e parasitemia. A multiplicao intracelular dos parasitas nos msculos lisos e estriados e clulas
do sistema retculo endotelial acarreta a formao de pseudocistos. Na fase intermediria ou
latente no h sintomas. A doena pode evoluir para a fase crnica com sinais de miocardiopatia,
degenerao das clulas ganglionares do sistema nervoso central e perifrico, hipertrofia e
dilatao de certos rgos, tais como esfago e clon.
Pelos altos ndices de prevalncia e morbidade, ela se tornou um dos maiores problemas
de sade pblica em toda a Amrica Latina.
Como a minoria dos indivduos com sorologia positiva para T. cruzi desenvolve evidncias
clnicas da doena crnica, as informaes prestadas pelo laboratrio clnico tornam-se decisivas
no diagnstico etiolgico.
35
Materiais
suspenso de hemcias sensibilizadas
soluo diluente
2-mercaptoetanol
soro controle positivo
soro controle negativo
amostra/soro
tubos
pipetas
placa de microtitulao
Mtodo
1. Colocar a placa de microtitulao sobre um pano mido para neutralizar as foras
eletrostticas.
2. Pegar 10ml da soluo diluente e acrescentar 70l de 2-mercaptoetanol.
3. Diluir em um tubo de ensaio 10l da amostra com 0,31ml da soluo diluente com
2-mercaptoetanol preparada anteriormente.
4. Pipetar 50l do soro controle positivo, negativo e da diluio da amostra nas
respectivas cavidades da placa, sugere-se A1 controle positivo, A2 controle
negativo e A3 amostra testada.
5. Adicionar 25l da suspenso de hemcias sensibilizadas em cada cavidade.
6. Agitar a placa por vibrao mecnica ou batendo, com os dedos nas bordas da
placa por 3 a 4 minutos. Deixar em repouso por 1 a 2 horas em temperatura
ambiente, em local livre de vibraes. Fazer a leitura
Resultado
Reao negativa: quando as hemcias depositam no fundo da cavidade formando um
boto.
36
Finalidade
Sistema para determinao qualitativa e semiquantitativa, em lminas, dos fatores
reumatoides em soro. Somente para uso diagnstico in vitro.
Significado clnico
Soro com teores de fatores reumatoides superior a 8 U.I/mL levam a aglutinao do ltex,
o que evidenciado pela formao de grumos finos ou grosseiros.
A positividade de fator reumatoide em pacientes portadores de artrite reumatoide oscila
entre 70% e 85 %.
Fator reumatoide est presente em numerosas patologias onde o sistema imunolgico
altamente estimulado. Citam-se endocardite bacteriana subaguda, malria, sfilis, tuberculose,
hepatite crnica, hansenase (lepra), leishmaniose, sarcoidose, mononucleose infecciosa, calazar,
linfomas, macroglobulinemia, poliarterite nodosa, lpus eritematosos sistmico, leucemia mieloide
crnica, infeco viral crnica e doenas autoimunes.
A presena de fator reumatoide no estabelece o diagnostico de artrite reumatoide, bem
como a sua ausncia no o afasta.
Materiais
kit reagentes ( FR -Ltex, controle positivo, controle negativo, lmina e hastes para
homogeneizao);
tubos de ensaios
pipetas semiautomticas de 25 uL e 200 uL;
ponteiras descartveis;
cronometro
amostra (soro)
Procedimento
Teste Qualitativo
1) utilizar soro no diludo;
37
Resultados
Teste positivo: ntida aglutinao.
Teste negativo: suspenso homognea.
1) Rotular 6 tubos de 1 a 6;
2) Colocar, a partir do tubo 1, 200 uL de soluo fisiolgica (salina);
3) Transferir 200 uL de soro para o tubo 1, homogeneizar, transferir para o tubo 2, e assim
sucessivamente, at o tubo 6.
4) Teremos ento as diluies que se seguem, com as respectivas equivalncias.
TUBO
Diluio
Soro
1:2
1:4
1:8
1:16
1:32
1:64
16
32
64
128
256
512
no
diludo
FR.
U.I/mL
Resultado
38
Proceder ao teste como descrito para teste qualitativo. Ser considerada positiva a maior
diluio da amostra que apresentar aglutinao. Expressar o resultado em U.I /mL
HIV
Fundamentos do mtodo
Os poos da policubeta esto recobertas com antgenos recombinantes dos vrus HIV-1 e
HIV-2. A amostra incubada nos poos, se ela contm anticorpos contra HIV-1 ou HIV-2 ocorrer
a unio com os antgenos sensibilizados na policubeta. O material no unido deve ser removido
por lavagem. No passo seguinte adicionado o conjugado, que contm os mesmos antgenos do
que a policubeta, conjugados com peroxidase. Se a amostra contm os anticorpos, ser unido o
conjugado. O conjugado no unido removido por lavagem. A seguir adicionada uma soluo
contendo tetrametilbenzidina e perxido de hidrognio. As amostras reativas desenvolvero cor
azul claro que se torna amarela quando a reao parada com cido sulfrico.
Significado clnico
Os vrus da imunodeficincia humana (HIV-1 e HIV-2) so os agentes causadores da
Sndrome da Imunodeficincia Adquirida (SIDA). Estes retrovrus so transmitidos pela exposio
a certos fludos corporais infectados, principalmente secrees genitais e sangue ou produtos
contaminadosderivados do sangue e por passagem atravs da placenta A evidncia sorolgica da
infeco por HIV-1 e HIV-2 pode ser obtida determinando a presena de antgenos e anticorpos
no soro de indivduos nos quais suspeita infeco. Os antgenos podem, geralmente, ser
detectados na fase agudae durante a fase sintomtica da enfermidade. Os anticorpos podem ser
detectados ao longo de toda a infeco, comeando na fase aguda ou imediatamente depois dela.
O ensaio de HIV 1+2 ELISA 3 Generacin foi desenvolvidopara detectar anticorpos contra HIV-1,
HIV-1 grupo O e HIV-2.
Procedimento
Amostra (Soro ou plasma).
39
CP
CN
Controle Positivo
---
50L
---
Controle Negativo
---
---
50L
Amostra
50L
---
---
Conjugado
100L
100L
100L
Revelador
100L
100L
100L
Stopper
100L
100L
100L
5- Para evitar a evaporao, cobrir a policubeta com fita adesiva fornecida e incubar
durante 30 2 minutos a 37C 1oC.
6- Depois da incubao, eliminar o lquido de cada poo por completo, lavar 5 vezes
segundo as instrues de lavagem (VIDE PROCEDIMENTO DE LAVAGEM)
7- Acrescentar o Conjugado;
8- Para evitar a evaporao, cobrir a policubeta com fita adesiva. Incubar durante 30 2
minutos a 37oC 1oC.
9- Lavar 5 vezes segundo as instrues de lavagem.
10- Colocar o Revelador transvasando a um recipiente limpo somente o volume
necessrio. No voltar o Revelador remanescente ao frasco original. Evitar o contato do reagente
com agentes oxidantes.
11- Incubar durante 30 2 minutos a temperatura ambiente (18-25oC), protegido da luz.
12- Acrescentar o Stopper;
13- Ler a absorbncia em espectrofotmetro em forma bicromtica a 450/600-650 nm ou a
450 nm.
Nota: recomenda-se realizar sempre a leitura em forma bicromtica. Caso a leitura for
monocromtica, realizar um branco de reagentes que dever ser subtrado das leituras das
amostras
Interpretaes dos resultados
b) Interpretao visual
Se escolhido este tipo de interpretao, deve ser considerada No Reativa toda amostra
que no apresente uma cor maior do que aquela dos Controles Negativos. Pelo contrrio, uma
amostra nitidamente amarela considerada
Reativa. Toda amostra inicialmente reativa, deve ser repetida por duplicado. Se uma ou
ambas repeties fossem positivas, a amostra deve ser considerada reativa. Uma amostra
inicialmente reativa pode ser no reativa nas duas repeties. Isto pode ser devido :
- Contaminao cruzada de um poo no reativo por uma amostra reativa.
- Contaminao da amostra durante a dispensao, impreciso no dispensado da amostra,
Conjugado e/ou Revelador no poo.
- Reutilizao de ponteiras.
- Contaminao do poo com hipoclorito ou outros agentes oxidantes.
Em certos casos, uma amostra no reativa pode apresentar uma reao falsamente
reativa, tanto na anlise inicial como em suas repeties. Algumas causas destes fenmenos
podem ser:
- Contaminao de uma amostra durante sua extrao, processamento ou conservao.
- Presena de substncias interferentes, tais como autoanticorpos, frmacos, etc.
- Dispensao e / ou aspirao ineficiente da soluo de lavagem (sistema obstruido).
Teste VDRL
Introduo
41
A sfilis uma doena infecciosa humana produzida por uma espiroqueta, o Treponema
pallidum. Ela primeiramente uma doena transmitida sexualmente. Outras possveis viam de
transmisso a transfuso de sangue infectado, hoje praticamente eliminada atravs de triagem
sorolgica de rotina, e a perinatal (sfilis congnita) transmitida in tero, pelos treponemas
procedentes da me infectada para o feto em desenvolvimento.
Clinicamente, aps um perodo de incubao que varia de 10 a 90 dias, pois
inversamente relacionado com a quantidade do inoculado, ocorre, em 85% dos pacientes, o
surgimento de um cancro, que uma leso solitria e indolor, caracterizando a sfilis primaria.
Aproximadamente 4 a 10 semanas aps o aparecimento do cancro, surgem
frequentemente sintomas como perda de peso, cefalia, anorexia, mialgia, artralgia, mal-estar,
febre baixa, linfodenopatia generalizada e exantema (presente Treponema pallidum in tero em 75
a 100% dos casos), o que caracteriza a sfilis secundria. Podem ocorrer tambm neste estgio
manifestaes de comprometimento do sistema nervoso central. Aps as manifestaes primrias
ou secundrias, ocorre o perodo conhecido como sfilis latente, caracterizado por testes
sorolgicos positivos e ausncia de achados clnicos. Pode ter durao de 1 a 2 anos. Sem
tratamento, cerca de um tero dos pacientes apresenta sfilis terciria, que pode manifestar-se
como goma (15%), sfilis cardiovascular (10%) ou neurossfilis (8 a 10%).
Os testes sorolgicos para sfilis so classificados como no-treponmicos, usados mais
comumente para a triagem, como o VDRL e o, e treponmicos, usados como testes confirmatrios
para os soros reativos nos testes de triagem, como o, (Veneral Disease Research Laboratory) e
o RPR (Rapid Plasma Reagin) e treponmicos, usados como testes confirmatrios para os soros
reativos nos testes de triagem, como o TPHA (Treponema pallidum Hemagglutination) o FTAAbs (FluorescentTreponemalAntibodyAbsorption) e ELISA (Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay).
Objetivo
O VDRL um teste de floculao, no-treponmico, para diagnstico da sfilis, atravs da
pesquisa de anticorpos no soro, plasma ou lquido cefalorraquidiano (LCR), com a grande
vantagem sobre o VDRL clssico por consistir em uma suspenso estabilizada e pronta para uso.
Princpio do Mtodo
Quando a suspenso antignica do VDRL misturada com o soro, plasma ou lquido
cefalorraquidiano (LCR) que contenham anticorpos (reaginas), as partculas de antgeno floculam
e o resultado da reao observado ao microscpio. A ausncia de floculao indica resultado
negativo.
Materiais necessrios
42
Teste qualitativo
OBS: Para evitar o efeito de pr-zona sugerimos que o teste qualitativo seja realizado com
soro, plasma ou lquido cfalo- raquidiano (LCR) puro e diludo.
Resultados das leituras
Reao Negativa: AUSNCIA de agregados. Aspecto homogneo.
Reao Fracamente Positiva: PRESENA de pequenos agregados dispersos.
Reao Positiva: PRESENA de mdios e grandes agregados.
Teste semiquantitativo
1. Fazer diluio da amostra em soluo salina a 1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32 e mais se
necessrio.
43
Introduo
Objetivo
Pesquisar PCR, em amostras de soro, usando-se partculas de ltex revestidas com
anticorpo monoclonal anti-PCR por aglutinao indireta.
Procedimento
44
a) Teste qualitativo
1. Diluir o soro do paciente em salina (NaCl a 0,9%) 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 e mais, se
necessrio.
2.Pipetar 25l de cada diluio em cada rea do carto-teste.
3.Homogeneizar a suspenso de ltex (1) e pipetar 25l em cada rea onde se encontra a
diluio daamostra.
4. Misturar muito bem o soro com o ltex, espalhando-se cuidadosamente com uma vareta
plstica (uma para cada diluio).
5.Atravs de movimentos suaves de rotao, sob uma boa fonte de luz, observar durante 2
minutos a formao de aglutinao. O ttulo da amostra corresponder a maior diluio em que
ocorrer aglutinao. A concentrao de PCR ser dada pelo seguinte clculo:
Concentrao (mg/litro)=6 x D,onde6asensibilidade do teste e D, a maior diluio que
apresenta aglutinao.
Exemplo: Se o ttulo obtido for 1:8, a concentrao aproximada de PCR existente na
amostra ser: 6x8= 48 mg/litro.
45
Toxoplasmose
Objetivo
O exame laboratorial baseado na pesquisa da presena do parasito ou presena de
anticorpos especficos. Na toxoplasmose podem ser identificadas duas formas distintas: a
congnita e a adquirida.
Procedimentos
Teste qualitativo:
46
47
Concluso
Com o tempo dedicado a imunologia pudemos observar da importncia clinica e do
diagnostico de doenas que acometem o sistema imunolgico, cada vez maior o numero de
casos de pacientes acometidos as doenas citadas neste relatrio. necessrio que se tenha
muita ateno para o diagnostico das mesmas, visto que qualquer erro nas diluies pode
acarretar resultados falsos positivos ou falsos negativos.
BIOQUMICA
Provas Bioqumicas
Glicose
Materiais
- Tubos de ensaio
- Padro n 2 glicose papliquiform
- Soro
- Glicose papliquiform n 1
- Banho maria
- Espectrofotmetro
- Cubeta
- Pipeta
- Ponteira
48
Mtodo
Clculos
Glicose (mg/dL) = Absorbncia do teste x 100
Absorbncia do padro
Colesterol
Materiais
- Tubos de ensaio
- Reagente colesterol liquiform n 1
- Padro colesterol liquiform n 2
- Soro
- Banho maria
- Espectrofotmetro
- Cubeta
- Pipeta
- Ponteira
Mtodo
1. Marcar 3 tubos com teste, padro e branco.
2. Colocar nos 3 tubos 2 ml do reagente colesterol liquiform n 1.
3. Colocar 20uL do padro colesterol liquiform n 2 no tubo marcado como padro.
4. Acrescentar no tubo teste 20uL do soro a ser testado.
5. Levar os tubos ao banho maria a 37C por 10 minutos.
49
x 200
Absorbncia do padro
Fator de calibrao
FC =
200
Abs. Do padro
Valor de referncia
Adultos Colesterol Total
Limtrofe 170-199
Elevado - 240
Elevado - 200
Triglicrides
Materiais
- Tubos de ensaio
- Reagente de cor triglicrides PP
- Padro
- Soro
- Banho Maria
- Espectrofotmetro
- Cubeta
- Pipeta
- Ponteira
Mtodo
Marcar 3 tubos com branco, teste e padro, colocando 2ml do reagente de cor triglicrides
PP nos respectivos tubos.
1. Colocar 20ul do padro no tubo padro.
2. Colocar 20ul do soro a ser testado no tubo teste.
3. Homogeneizar e incubar em banho maria a 37C por 10 minutos.
4. Levar ao espectrofotmetro para ler a absorbncia do padro e do teste, zerando
com o branco em 505nm.
50
Clculos
FC =
Valor de referncia
Adultos
Menores de 10 anos
De 10 a 19 anos
Desejvel - 100
Desejvel - 130
Elevado 200-499
Muito elevado - > 500
Colesterol HDL
Material
- Tubos de ensaio
- Pipeta
- Ponteira
- Precipitante
- Colesterol liquiform1
- Padro colesterol HDL-2
- Soro
- Banho Maria
- Espectrofotmetro
- Cubeta
Mtodo
1. Colocar em 1 tubo 0,25ml do precipitante e 0,25ml do soro a ser testado, agitando
vigorosamente por 30 segundos.
2. Centrifugar a 3500rpm por pelo menos 15 minutos , pipetando o sobrenadante
lmpido imediatamente aps a centrifugao.
3. Nomear 3 tubos com branco, teste e padro, colocando 2ml de colesterol liquiform
1 nos respectivos tubos.
4. Colocar 20ul do sobrenadante no tubo teste, e 20ul do padro colesterol HDL-2 no
tubo padro. Misturar e incubar em banho maria a 37C durante 10 minutos.
51
x 40
Absorbncia do padro
Fator de calibrao
FC =
40
Abs. Do padro
Valores de referncia
Crianas
Colesterol LDL (2 a 9 anos)
Colesterol HDL
< 10 anos
Limtrofe - 110-129
Desejvel - 40
Elevado - 130
10 a 19 anos
Desejvel - 35
Adultos
Colesterol LDL
Colesterol HDL
Baixo - > 40
Limiartimo - 100-129
Elevado (desejvel) - 60
Limiarelevado - 130-159
Elevado - 160-189
Muitoelevado - 190
cido rico
Material
52
- Tubos de ensaio
- Soro
- Padro
- Reagente de cor
- Pipeta
- Ponteira
- Banho Maria
- Espectrofotmetro
- Cubeta
Mtodo
1. Identificar 3 tubos com branco, teste e padro.
2. Colocar 40ul do soro no tubo teste, 40ul do padro no tubo padro e 2ml do
reagente de cor nos 3 tubos.
3. Misturar e incubar os tubos no banho maria a 37C por 5 minutos.
4. Levar ao espectrofotmetro para determinar as absorbncias do teste e do padro
em 505nm, acertando o zero com o branco.
Clculo
FC = Concentrao do padro
Absorbncia do padro
Valores de referncia
Adultos
Crianas
Bilirrubina
Materiais
- Tubos de ensaio
- Acelerador
- cido sulfanlico
53
- Padro
- Diazo reagente
- gua destilada
- Soro
- Nitrito de sdio
- Pipeta
- Ponteira
- Banho Maria
- Espectrofotmetro
- Cubeta
Mtodo
1. Preparo do Diazo Reagente
a) Adicionar 0,01ml de nitrito de sdio a 0,3ml do cido sulfanlico, misturar e
usar no dia.
2. Preparo do padro
a) Marcar um tuo como branco e um como padro.
b) Colocar no tubo branco 2ml do acelerador, 0,2ml do diazo reagente e
0,10ml do padro. Misturar e esperar por 5 minutos.
c) Levar no espectrofotmetro para determinar a absorbncia do padro em
525nm, acertando o zero com o branco.
3. Procedimento
a) Identificar 3 tubos como branco, direto e total.
b) Colocar no tubo branco 2ml de gua destilada, 0,2 de cido sulfanlico e
0,1ml da amostra.
c) Colocar no tubo direto 2ml de gua destilada, 0,2ml de diazo reagente e
0,1ml da amostra.
d) Colocar no tubo total 2ml de acelerador, 0,2ml de diazo reagente e 0,1ml da
amostra, misturar e esperar por 5 minutos.
e) Levar para o espectrofotmetro para determinar as absorbncias em
525nm, acertando o zero com o branco.
54
Clculos
Bilirrubina (mg/dL) = Absorbncia do teste
x 10
Absorbncia do padro
Fator de calibrao
FC =
Valores de referncia
Bilirrubina total
Bilirrubina direta
Recm nascidos
1 dia at 5,1
1 a 2 dias at 7,2
3 a 5 dias at 10,3
Tampo - Contm tampo TRIS 500 mmol/L, pH 8,3 e fenoxietanol 7,2 mmol/L.
Nitrito de sdio
Pipeta
Ponteira
Banho Maria
Espectrofotmetro
Cubeta
Mtodos
1. Identificar 3 tubos de ensaio como: Branco, Teste e Padro e proceder:
55
2.
3. O nvel de gua do banho-maria deve ser superior ao nvel dos reagentes nos tubos.
4. Fazer a leitura fotomtrica do tubo Teste em 560 nm (540 - 580) ou filtro verde, acertando
o zero com o tubo Branco.
5. A primeira absorbncia do tubo Teste ser A1
Calculo
IST: 20 - 50%
Transferrina: 200 a 300 mg/dL
Ferro srico
Materiais
-
Soro
Nitrito de sdio
Pipeta
Ponteira
Banho Maria
Espectrofotmetro
Cubeta
Mtodo
1. Marcar 3 tubos de ensaio com as letras B (Branco), P (Padro), A (Amostra) e
proceder como a seguir:
57
Calculo
Proteinas totais
Materiais
-
Padro - 4,0 g/dL: Aps o manuseio, sugere-se armazenar bem vedado para evitar
evaporao. Contm albumina bovina 4 g/dL e azida sdica 15,4 mmol/L.
Fotmetro capaz de medir com exatido a absorbncia em 545 nm (530 a 550 nm).
Cronmetro.
Mtodo
1. Tomar 3 tubos de ensaio e proceder como a seguir:
Branco
Teste
Padro
Amostra
-----
0,02 mL
-----
Padro (n 2)
-----
-----
0,02 mL
0,02 mL
-----
-----
Biureto de Uso
1,0 mL
1,0 mL
1,0 mL
58
Clculos
Ver linearidade.
Absorbncia do teste
Protenas (g/dL) =
x4
Absorbncia do padro
Devido grande reprodutibilidade que pode ser obtida com a metodologia, o mtodo do fator pode ser
empregado.
4
Fator de calibrao =
Absorbncia do padro
Albumina
Materiais
-
Reagente de Cor: Contm tampo 60 mmol/L, pH3,8, verde de bromocresol 300 mol/L e
Brij 35 6,0 mmol/L.
Fotmetro capaz de medir com exatido a absorbncia em 630 nm ou filtro vermelho (600
a 640 nm).
Cronmetro.
59
Mtodo
1. Tomar 3 tubos de ensaio e proceder como a seguir:
Branco
Teste
Padro
1,0 mL
1,0 mL
1,0 mL
Soro
-----
0,01 mL
-----
Padro (n 2)
-----
-----
0,01 mL
Reagente de Cor (n 1)
Clculos
Absorbncia do teste
Albumina (g/dL) =
x 3,8 g/dl
Absorbncia do padro
Devido grande reprodutibilidade que pode ser obtida com a metodologia, o mtodo do fator pode ser
empregado.
3,8
Fator de calibrao =
Absorbncia do padro
Fosfatase alcalina
Materiais
-
acetato de magnsio 2,0 mmol/L p-nitrofenilfosfato 12 mmol/L, azida sdica 6,4 mmol/L.
60
Fotmetro com cubeta termostatizada capaz de medir com exatido a absorbncia em 405
nm.
Cronmetro.
Mtodo
1. Pipetar 1,0 mL do Reagente de Trabalho em um tubo 12x75 e adicionar 0,02 mL de amostra.
2. Homogeneizar.
3. Transferir imediatamente para a cubeta termostatizada a 37 C. Esperar 30 segundos.
4. Fazer a leitura da absorbncia inicial (A1), disparando simultaneamente o cronmetro.
5. Repetir a leitura aps 2 minutos (A2).
Clculo
A Teste = A2 A1
O fator 2764 foi calculado segundo as condies da reao propostas acima. Recalcular o fator quando for
efetuada qualquer modificao em um dos parmetros utilizados para calcul-lo (Ver Mtodo para clculo
do fator).
61
Valores de referncia
37 C
Adultos (U/L)
27 - 100
Crianas (U/L)
75 - 390
Hemoglobina glicada
Materiais
-
Colunas para cromatografia: resina de troca inica equilibrada com tampo fosfato pH 6,7.
Fotmetro capaz de medir com exatido a absorbncia em 415 nm ou filtro azul (405 a 430).
Termmetro.
Mtodo
Minimizao da ao de interferentes
Este procedimento deve ser aplicado somente quando a amostra estiver turva, lipmica ou ictrica.
1. Pipetar em um tubo 1,0 mL da amostra bem homogeneizada. Marcar o nvel de 1,0 mL no tubo.
2. Centrifugar a 2000 rpm por 5 minutos. Retirar o plasma sem ressuspender as hemcias.
3. Adicionar 3,0 mL de NaCl 150 mmol/L (0,85%). Centrifugar. Acertar o volume para a marca de 1,0 mL,
retirando o excesso do sobrenadante.
4. Homogeneizar bem e utilizar para preparar o hemolisado.
Preparo do hemolisado
Em um tubo 12 x 75 adicionar 0,4 mL de hemolisante (n 2) e 0,1 mL da amostra. Agitar fortemente por 20
segundos e esperar 5 minutos. Se a hemlise for incompleta (o lquido no tubo se mostra turvo), centrifugar
e usar o sobrenadante. Antes de iniciar a cromatografia, assegurar-se de que o hemolisado, o tampo e as
62
colunas tenham a mesma temperatura ambiente. Nunca realizar a cromatografia se o hemolisado, tampo e
coluna tiverem temperaturas diferentes do ambiente no qual se realizar a cromatografia.
Preparo da coluna
A presena de bolhas de ar no filtro ou na resina interfere na drenagem do tampo, aumentando o tempo de
eluio da hemoglobina glicada.
Retirar a tampa superior da coluna, introduzir o basto fazendo movimentos giratrios descendentes a
ascendentes para ressuspender a resina. Remover imediatamente a tampa inferior, colocar a coluna em um
tubo de ensaio e esperar que todo o lquido penetre na resina. A partir da, a coluna estar pronta para uso
e a cromatografia dever ser iniciada imediatamente. Jamais iniciar a cromatografia em temperatura inferior
a 16 C ou superior a 30 C.
Medir a temperatura do lquido que drenou da coluna para correo do resultado.
Cromatografia
Adicionar 0,05 mL do hemolisado sobre a resina, de modo que no haja ressuspenso da mesma, evitando
a formao de bolhas de ar. Esperar que o hemolisado penetre na resina.
Transferir a coluna para um tubo de ensaio limpo e seco, marcado com o nmero 1 e adicionar lentamente,
com a ponta da pipeta tocando a parede da coluna, 3,5 mL de Tampo Hb-Rpida (n 1). A eluio da Hb-G
se completa quando todo o tampo penetra na resina.
Desprezar a coluna.
Colorimetria
Homogeneizar o contedo do tubo nmero 1 (Hb-G) e us-lo para a colorimetria sem qualquer tratamento
adicional.
Para um tubo limpo e seco, marcado com o nmero 2 (Hb-total) pipetar 7,0 mL de gua destilada, adicionar
0,02 mL do hemolisado e misturar.
Determinar as absorbncias dos tubos nmero 1 (Hb-G) e nmero 2 (Hb.total) em 415 nm ou filtro azul (405
a 430 nm) acertando o zero com gua destilada.
A cor estvel por 4 horas.
A1
Hemoglobina Glicada (%) =
A1
x 100
ou
x 20
63
5 x A2
A2
Efeito da temperatura
A cromatografia deve ser realizada a 22 C. Se for realizada em temperatura diferente, corrigir o resultado
para a temperatura de 22 C, multiplicando-se o resultado encontrado pelo fator de correo
correspondente temperatura de trabalho.
Temperatura de
Fator de correo
trabalho (C)
16
1,16
17
1,13
18
1,10
19
1,08
20
1,05
21
1,03
22
1,00
23
0,98
24
0,95
25
0,93
26
0,90
27
0,88
28
0,86
29
0,84
64
30
0,82
Concluso
Conclui-se que o exame bioqumico fundamental para traar valores favorveis e
desfavorveis para a sade do paciente, bem como para analisar, identificar e determinar os
valores de acordo com o valor de referncia, podendo ser apresentando alteraes bioqumicas
ou no.
Microbiologia
QUANTO A FORMA
MEIOS DE CULTURA
O crescimento dos microrganismos nos diferentes meios de cultura utilizados fornece as primeiras
informaes para a sua identificao. importante conhecer o potencial de crescimento de cada
meio de cultura e adequar ao perfil bacteriano esperado para cada material.Alguns procedimentos
so essenciais na hora da preparao de cada meio de cultura para a obteno de melhores
resultados e evitar contaminaes, como nos diferentes casos: quando distribuir o meio antes de
autoclavar, os tubos no precisam estar esterilizados; quando distribuir o meio aps a
autoclavao,
os
tubos,
frascos,
placas,
pipetas
vidrarias
ou
materiais
auxiliares
obrigatoriamente devem ser estreis e os meios devem ser autoclavados com as tampas semiabertas, para que a esterilizao seja por igual em todo o contedo dos tubos - tampas fechadas
no permitem a entrada do vapor.
gar nutriente (AN)
Meio relativamente simples, de fcil preparo e barato, muito usado nos procedimentos do
laboratrio de microbiologia.
Utilidade: anlise de gua, alimentos e leite como meio para cultivo preliminar das amostras
submetidas exames bacteriolgicos e isolamento de organismos para culturas puras,
conservao e manuteno de culturas em temperatura ambiente, como mtodo opcional para os
laboratrios que no dispem do mtodo da criopreservao (congelamento das cepas em freezer
- 70C) e observao da esporulao de espcies de bacilos Gram positivos.
66
Interpretao:
Cor original do meio: branco opalescente
Positivo: Crescimento na superfcie do gar;
Negativo: Ausncia de crescimento.
gar sangue (AS)
O meio, usando uma base rica, oferece timas condies de crescimento a maioria dos
microrganismos. A conservao dos eritrcitos ntegros favorecem a formao de halos de
hemlise ntidos, teis para a diferenciao de Streptococcus spp. eStaphylococcus spp.
Utilidade: isolamento de microrganismos no fastidiosos, verificao de hemlise dos
Streptococcus spp. eStaphylococcus spp. e usado na prova de satelitismo (para identificao
presuntiva de Haemophilus spp.).
Interpretao:
Cor original do meio: vermelho.
Beta hemlise: presena de halo transparente ao redor das colnias semeadas (lise total dos
eritrcitos).
Alfa hemlise: presena de halo esverdeado ao redor das colnias semeadas (lise parcial dos
eritrcitos).
Gama hemlise (sem hemlise): ausncia de halo ao redor das colnias (eritrcitos permanecem
ntegros).
Utilidade:
crescimento de
microrganismos exigentes
Haemophilus
spp.,Neisseria
spp.,
Possui componentes (sais de bile, verde brilhante e citrato de sdio) que inibem
microrganismos Gram positivos. A incorporao de lactose ao meio permite diferenciar se o
microrganismo lactose positiva (bactrias que fermentam a lactose produzem cido que na
presena do indicador vermelho neutro resultando na formao de colnias de cor rosa), e
bactrias que no fermentam a lactose formam colnias transparentes. Tissulfato de sdio e o
citrato frrico permitem a deteco de HS evidenciado por formao de colnias de cor negra no
centro.
Interpretao:
Cor original do meio: vermelho alaranjado.
68
Interpretao:
Cor original do meio: azul claro.
Colnias lactose positiva: cor amarela.
Colnias lactose negativa: cor azul.
Interpretao:
Cor original do meio: marrom-chocolate
Colnias pequenas e opacas: suspeita de Neisseriagonorrhoeae e Neisseriameningitidis.
69
Interpretao:
Cor original do meio: amarelo claro opalescente.
Aps o crescimento, deve-se seguir a identificao do microrganismo que cresceu.
Interpretao:
Cor original do meio: castanho
Colnias brancas a vermelhas rodeadas por zonas vermelhas: suspeita de Salmonella spp.
ouProteus spp.
Colnias amarelas a esverdeadas rodeadas por zonas amarelo-esverdeadas: suspeita de
Escherichia coli, Klebsiella spp. ouEnterobacter spp.
Meio padronizado por Kirby e Bauer e pelo CLSI que oferece condies de crescimento
das principais bactrias.
70
COLORAO DE GRAM
A colorao de Gram recebeu este nome em homenagem a seu descobridor, o mdico
dinamarqus Hans Cristian Joaquim Gram. Em 1884, Gram observou que as bactrias adquiriram
cores diferentes, quando tratadas com diferentes corantes. Isso permitiu classific-las em dois
grupos distintos: as que ficavam roxas, que foram chamadas de Gram-positivas, e as que ficavam
vermelhas, chamadas de Gram-negativas.
Princpio: Nas bactrias Gram-positivas a parede celular formada principalmente por cidos
teicicos e nas bactrias Gram-negativas, formada principalmente por lipdeos. Por possurem
grande quantidade de cidos teicicos, aps a colorao, as Gram-positivas formam um complexo
corado azul intenso, que no removido facilmente com lcool-acetona. As Gram-negativas no
retm a colorao aps o tratamento com lcool-acetona e so reveladas posteriormente com
soluo de fucsina ou safranina, apresentando-se na colorao avermelhada.
Procedimento:
Staphylococcus
So geralmente encontrados na pele e mucosas do homem e de outros animais. Muitas
espcies so isoladas de partes especficas do corpo humano ou de certos animais, por
exemplo: S. auricularis encontrado como parte da microbiota humana do conduto auditivo e S.
hyicus causando dermatite infecciosa em sunos. Os estafilococos so cocos Gram-positivos,
podem se apresentar isolados ou aos pares, em cadeias curtas ou agrupados. O aspecto
macroscpico da colnia em meio slido, presena de pigmento e hemlise em gar sangue de
carneiro so caractersticas auxiliares na identificao destes microrganismos. So imveis,
anaerbios facultativos, no formadores de esporos e produtores de catalase.
Rotineiramente, o teste da catalase utilizado para diferenciar os estafilococos (catalase
positiva) dos estreptococos (catalase negativa). Entretanto, existem relatos na literatura
de Staphylococcus aureuscatalasenegativa relacionados a processos infecciosos, embora raros,
descritos em vrios pases, inclusive no Brasil. A catalase constitui um mecanismo de defesa para
a bactria contra clulas fagocitrias, porm no um fator essencial para a sobrevivncia do S.
aureus.
A identificao da espcie de estafilococos baseada em uma variedade de
caractersticas fenotpicas convencionais. As espcies mais importantes do ponto de vista clnico
podem ser identificadas com algumas provas especficas, como pigmentao da colnia, estafilocoagulase, fator clumping ou fator de agregao, prova da desoxiribonuclease, resistncia
novobiocina, fermentao do manitol, entre outras. A habilidade de coagular o plasma continua
sendo o critrio mais aceito e utilizado para identificar estafilococos patognicos associados com
72
Pneumonias;
Bacteremias;
Meningites.
Streptococcus
As bactrias do gnero Streptococcus so capazes de causar diversas doenas nos seres
humanos. Dentre as mais freqentes esto as infeces do trato respiratrio, pele e tecidos
moles, endocardites, sepse e meningites. Streptococcuspneumoniae, o pneumococo, um dos
agentes que mais freqentemente causam doenas invasivas graves, como meningite e
bacteremia.
Os estreptococos, da famlia Streptococcaceae so caracterizados como cocos Grampositivos, anaerbios facultativos, no produtores de catalase e de citocromo-oxidase. Os
estreptococos com relevncia clnica so homofermentadores, sendo o cido ltico o produto final
da fermentao da glicose. Podem produzir hemolisinas, e os tipos de reao hemoltica em meio
slido contendo 5% de sangue de carneiro, descritos a seguir, tm sido utilizados na classificao
de estreptococos.
Alfa-hemlise ( ): caracterizada por uma hemlise parcial, associada com a perda parcial de
hemoglobina pelas hemcias, ocorrendo uma zona cinza-esverdeada no meio de cultura ao redor
da colnia. Streptococcuspneumoniae caracteriza-se por produzir este tipo de hemlise.
Beta-hemlise ( ): caracterizada pela lise completa das hemcias que rodeiam a colnia,
ocorrendo uma zona transparente (zona de lise total) ao redor da colnia. Os estreptococos com
esta caracterstica so denominados beta-hemoliticos.
Gama-hemlise ( ): caracterizada pela ausncia de hemlise. Cepas desses microrganismos
no hemolticos, ou d-hemolticos, no causam modificao no meio de gar sangue de carneiro.
73
S. pyogenes
Esta espcie pertence ao grupo A de Lancefield, so colnias -hemolticas, com
vrios fatores de virulncia. Podem causar faringites, infeces respiratrias,
impetigo, erisipela, endocardites, meningites e artrites. Infeces por cepas
produtoras de toxinas podem causar a febre escarlatina e choque txico.
A faringite por S. pyogenes comum e pode evoluir com seqelas como febre
reumtica e glomerulonefrite aguda.
S. agalactiae
Esta espcie -hemoltica, pertence ao grupo B de Lancefield. Podem causar
infeces graves em neonatologia, como sepse e meningite. A deteco deste
patgeno no trato genital e/ou gastrointestinal de parturientes pode identificar um
risco para infeco dos recm-nascidos e guiar a terapia antimicrobiana intra-parto.
Algumas condies (neoplasias, imunodeficincias e diabetes mellitus) podem
predispor adultos a infeces por este patgeno como bacteremia, endocardite,
infeces de pele e tecidos moles, pneumonia e osteomielites.
BACILOS GRAM-NEGATIVOS
74
Salmonella
ao
hospedeiro.
- Possuem 2 sistemas de secreo SPI1 e SPI2. SPI1 insere nas clulas M das placas de Peyer
do intestino delgado as protenas bacterianas Sips ou Ssps, do que resulta um pregueamento da
membrana celular por rearranjo da actina. Esta membrana pregueada envolve a bactria e
captura a Salmonella, que se replica no interior do fagossoma, levando a morte da clula
hospedeira, e espalhando-se para invadir as clulas vizinhas;
colonizao assintomtica;
febre entrica (febre tifide, causada pela S. typhi; febre paratifide, causada pela S.
paratyphi, S. schottmuelleri, S. hirschfeldii; ao contrrio das outras infeces por
Salmonella, as bactrias responsveis pela febre entrica passam atravs das clulas
epiteliais do intestino e so capturadas por macrfagos, multiplicando-se aps serem
transportadas para o fgado, bao e medula ssea).
Shigella
Gnero Shigella com quatro espcies: S. dysenteria, S.flexneri, S. boydii, S. sonnei.
Quando presente sempre patognica, sua transmisso atravs de gua contaminada, comida,
mosca, pessoa a pessoa (via oral fecal). S sonney a causa mais comum de shigelose no mundo
industrial, ao passo que S. flexneri a causa mais comum de shigelosenos pases em
desenvolvimento. Geralmente limitada ao tratogasto-intestinal (raramente invade o sangue).
Inicialmente invadem clulas M das Placas de Peyer do Intestino delgado. Sistema de secreo
tipo III que introduz nas clulas epiteliais e nos macrfagos 4 tipos de protenas: IpaA, IpaB, IpaC
e IpaD. Estas protenas induzem o pregueamento da membrana clulas, capturando a bactria no
interior da clula. A shigella lisa o vacolo fagoctico e replica no interior do citoplasma da clula
hospedeira, usando os filamentos de actina para se movimentar e passar para clulas vizinhas
atravs de junes de hiato. Assim, a Shigella est protegida do sistema imunitrio. A Shigella
induz apoptose das clulas, induzindo a libertao de IL-1, atraindo polimorfonucleados,
distabilizando a integridade da parede intestinal e permitindo bactria atingir clulas epiteliais
76
localizadas
mais
profundamente.
77
originar um quadro clnico semelhante. Os organismos Yersinia podem crescer a 4C, podendo,
por isso, crescer em meios ricos em produtos de sangue armazenados no frigorfico.
Concluso
78
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
79
Disponvel em:
http://www.anvisa.gov.br/servicosaude/controle/rede_rm/cursos/boas_praticas/modulo4/intrsta.htm
Acesso em: 26/10/2014.
Disponvel em: http://www.labtest.com.br/reagentes
Acesso em: 05/11/2014.
Disponvel em: http://saudedofuturo.blogspot.com.br/2012/02/entamoeba-coli-e-entamoebahistolytica.html
Acesso em: 05/11/2014.
Disponvel em: http://repositorio.ipv.pt/handle/10400.19/1462
Acesso em: 05/11/2014.
80
Estanca Sangue ##
Fita Adesiva Hospitalar p/ Autoclave
Fita Reativa p/ Uroanalise - dosagem 10 elementos
Frasco c/ Tiras Teste Glicemia Ap GTECH Free
Fucsina p/ Gram
Garrote Tripa de Mico Latex - GROSSO
Gaze 8 Dobras (Compressa 7,5X7,5cm) 9 Fios c/500 Umed Brisa ##
Gaze 9 Fios 10 CM Larg e 50 CM Compr (Tipo Queijo)
Gorro Descartvel (Amarrar) Masc. - c/ 100 unidades ##
Heparina Sdica 5 ML - c/ 5
Hipoclorito de Sdio ( 10% - 12%) - Embalagem 1 Litro
Hipoclorito de Sdio ( 5% - 6%)
KIT Corante Hematolgico
KIT Corante p/ Gram - Cecon
KIT Corante Zihel - Neelsen
KIT p/ Det.de cido rico - Colorimtrico
KIT p/ Det.de Albumina - Colorimtrico
KIT p/ Det.de Amilase - Enzimtico
KIT p/ Det.de Bilirrubina D (Direta) - Colorimtrico
KIT p/ Det.de Bilirrubina F (Fraes) - Colorimtrico
KIT p/ Det.de Calcio - Colorimtrico
KIT p/ Det.de Capacidade de Ligao de Ferro - Colorimtrico
KIT p/ Det.de CK/ CPK (Fosforo Quinase) - Colorimtrico
KIT p/ Det.de Cloreto - Colorimtrico
KIT p/ Det.de Colesterol HDL - Labtest - Colorimtrico
KIT p/ Det.de Colesterol Total Enz-Colorim
KIT p/ Det.de Creatinina Merck - 117119910022 - Diasys Colorimtrico
KIT p/ Det.de DHL (Desidrogenase Latica) - Colorimtrico
KIT p/ Det.de Dosagem de Glicose Serica
KIT p/ Det.de Fator Reumatoide - Latex
KIT p/ Det.de Ferro Srrico - Colorimtrico
KIT p/ Det.de Fosfatase cida - Colorimtrico
KIT p/ Det.de Fosfatase Alcalina - Colorimtrico
KIT p/ Det.de Fosforo (Colorimetrico)
KIT p/ Det.de Gama GT - Enzimatico Ref.105-2/ 250 - Labtest
KIT p/ Det.de Glicose Ref. 84-2/250 - Labtest - Colorimtrico
KIT p/ Det.de Hema - Cruzi - Biolab
82
86
GUIA DE BIOSSEGURANA
LABORATRIO ESCOLA DE
ENFERMAGEM E CLNICA
GUIA DE BIOSSEGURANA
87
88
Histrico
ELABORAO
Responsabilidade
Nome
Setor
Alessandra
C.
Assinatura
Demarchi
(Enfermeira
Clnica
Enfermagem/UNIP) Campinas
de
Elaborao
I.C.S
Mrcia M. Tivelli Moraes
(Enfermeira
Clnica
Enfermagem/UNIP) Campinas
Data da Elaborao
de
02/03/2009
APROVAO
Responsabilidade
Nome
Setor Assinatura
89
Aprovao
Coordenao Laboratrios
Labs.
90
SUMRIO
1. INTRODUO ........................................................................................................................... 92
2. DEFINIES .............................................................................................................................. 92
3. PROCEDIMENTOS (ANEXO I) .................................................................................................. 93
4. ESTOCAGEM E CONSERVAO DO MATERIAL ESTERILIZADO ...................................... 94
5. PROCEDIMENTOS DE ANTISSEPSIA ..................................................................................... 94
6. EQUIPAMENTO DE PROTEO INDIVIDUAL E.P.I . (ANEXO II) ........................................ 94
7. CUIDADOS COM MATERIAL DESCARTVEL ........................................................................ 96
8 CONDUTAS APS ACIDENTE COM MATERIAL BIOLGICO (ANEXO III) ......................... 96
9 NOTIFICAO DO ACIDENTE (ANEXO IV) ........................................................................... 97
10 - ANEXO I: TIPO DE MATERIAL E MTODO PARA PROCESSAMENTO DE
ARTIGOS ..................................................................................................................................... 101
11 - ANEXO II: MATERIAL E PROCEDIMENTO INDICADO PARA USO DE
EQUIPAMENTO DE PROTEO INDIVIDUAL (EPI) ................................................................. 102
12 - ANEXO III FLUXOGRAMA DE ACIDENTE BIOLGICO .................................................. 103
13 ANEXO IV FORMULRIO P/ NOTIFICAO DE ACIDENTE BIOLGICO .................... 105
91
MANUAL DE BIOSSEGURANA
1. INTRODUO
O risco de se contrair infeces nos atendimentos em clnicas de sade est
diretamente ligado ao fato de se negligenciar as condutas de biossegurana que devem
nortear estes estabelecimentos.
A segurana da equipe de sade, bem como a do paciente, deve ser preservada
sempre e da maneira mais conveniente possvel.
No exerccio da profisso, os integrantes da equipe de sade esto sob risco
constante de contrair doenas.
2. DEFINIES
VI ARTIGOS SEMICRTICOS:
So aqueles que entram em contato com a pele no ntegra ou com mucosas
ntegras;
VII ARTIGOS NO-CRTICOS:
So aqueles que entram em contato com a pele ntegra do paciente, apenas;
3. PROCEDIMENTOS (ANEXO I)
5. PROCEDIMENTOS DE ANTISSEPSIA
94
95
Lavagem do local exposto com gua e sabo nos casos de exposio percutnea
ou cutnea.
No devem ser realizados procedimentos que aumentem a rea exposta, tais como
cortes e injees locais. A utilizao de solues irritantes (ter, glutaraldedo,
hipoclorito de sdio) tambm est contra-indicada;
Estabelecer
material
biolgico
envolvido:
sangue,
fluidos
orgnicos
pleural,
peritoneal,
pericrdico
amnitico),
fluidos
orgnicos
96
Tipo de acidente: perfurocortante, contato com mucosa, contato com pele com
soluo de continuidade.
Fonte desconhecida.
com
Chefia
de
Campus
providenciaro
*conduo
do
Ser solicitado ao aluno e paciente, uma cpia do resultado dos exames para
encerramento do caso.
98
99
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
http://bvsms.saude.gov.br/bvs/publicacoes/protocolo_expos_mat_biologicos.pdf
acessado em 25/03/2013 - 9h.
100
ARTIGO
TIPO
MATERIAL
DE
MTODO
1 OPO
2 OPO
Instrumental
Metal
Esterilizao
Autoclave
Estufa
Caixas
Metal
Esterilizao
Autoclave
Estufa
Bandejas
Metal
Esterilizao
Autoclave
Estufa
Gaze
Tecido
Esterilizao
Autoclave
Autoclave
101
EPI
MATERIAL
PROCEDIMENTO
Luva cirrgica
Ltex
Descartvel
Luva de procedimento
Ltex
Descartvel
Luva de limpeza
Borracha
Mscara
Descartvel
Descartvel
102
Colaborador/ Estagirio
Prof(a). ..................
Acidentou-se
Comunicar chefia
responsvel + SESMT
Avaliao do Acidente (item 8.2)
Fonte Ausente
Fonte Presente
Como? (Item 9)
Txi
Carro da Universidade
103
104
105
106
IDENTIFICAO:
TTULO:
DATA DA ELABORAO:
30/01/2008
01/2016
APROVAO DO DOCUMENTO
Responsabilidade
Nome
Setor
Elaborado por
I.C.S
I.C.S
Conferido por
I.C.S
Aprovado
APLICAO DO DOCUMENTO
reas
107
Assinatura
Data
108
1 Objetivo
Os procedimentos operacionais padronizados (POPs) tem como objetivo estabelecer
regras para a correta utilizao de equipamentos, materiais e reagentes dentro dos Laboratrio de
Anlises Clnica visando garantir a segurana e o bom andamento das aulas prticas.
2 reas de Aplicao
Laboratrios multidisciplinares nos cursos e disciplinas abaixo relacionadas:
109
3.5 - Professores
Comparecer no incio do semestre nos laboratrios para discutir agendas de aulas prticas e verificar a disponibilidade dos mesmos;
3.6 Alunos
Permanecer e utilizar os laboratrios somente com a presena de um professor ou tcnico;
Seguir as normas de segurana do laboratrio;
proibido trazer crianas para as aulas nos laboratrios;
Colocar os objetos no escaninho do laboratrio, levando para a bancada somente o necessrio
para as anotaes e realizao da aula;
Evitar brincadeiras, gestos bruscos, bancos no corredor e conversas desnecessrias dentro dos
laboratrios;
Buscar informaes, atravs de consulta individual, sobre os produtos qumicos que sero
utilizados durante a aula e sobre os resduos gerados, bem como os meios de primeiros socorros
em caso de acidente;
Sempre manter a bancada de trabalho limpa e organizada. Os frascos de reagentes e matriasprimas fechadas com as esptulas ou pipetas do lado de fora dos frascos;
Aps o uso das vidrarias, essas devem ser devidamente lavadas conforme procedimento adequado e dispostas em cima de um pedao
de papel toalha para secagem;
112
113
4 Consideraes gerais
Os Laboratrios Multidisciplinares dos Cursos da Sade da UNIP esto assim constitudos:
Almoxarifado;
Agitador magntico;
Auto clave;
Bancadas de granito equipadas com bico de Bunsen e tomadas 110 v e 220 v e pia
centralizada;
Banho Maria;
Centrfuga;
Estufa bacteriolgica;
Leitor de Elisa;
Pia;
Bancos;
Destilador de gua.
O Laboratrio de Anlises Clnicas tem como prioridade as atividades de ensino dos Cursos da Sade da Universidade Paulista
UNIP;
As vidrarias, equipamentos e reagentes utilizados nessas aulas sero fornecidos pela prpria
Universidade e sua reposio solicitada em poca pr-determinada pela assessoria de compras;
Os materiais solicitados para aula prtica que devero ser comprados pela prpria Unidade devem
ser solicitados pelos professores com 20 dias teis de antecedncia;
No permitida a sada de reagentes, equipamentos ou qualquer outro material utilizado durante
as aulas nas dependncias dos laboratrios;
Logo aps a utilizao dos reagentes nas aulas, os mesmos devero ser adequadamente
armazenados;
As vidrarias devero ser conferidas e lavadas conforme procedimento do laboratrio;
S permitida a entrada de alunos, que estejam matriculados naquela disciplina;
A entrada de alunos nos laboratrios para as aulas prticas s ser permitida perante a presena
do professor;
114
O tcnico deve permitir somente a entrada dos alunos e do professor que estiver usando
avental de algodo branco com manga longa, sapatos fechados, calas compridas, cabelos presos
e orientar os mesmos para que deixem sobre a bancada somente o material necessrio para a
aula;
O tcnico e auxiliar devero estar no laboratrio no decorrer da aula para orientar os alunos
em caso de dvidas sobre a utilizao dos materiais e equipamentos e somente o tcnico deve
orientar sobre a manipulao dos reagentes;
Ao trmino da aula, o tcnico dever recolher os reagentes e separar os que foram
contaminados, os que sero descartados e armazenar corretamente o restante em local adequado
(nunca deixar frascos de reagentes armazenado na capela de exausto ou nas dependncias do
laboratrio onde vai ocorrer a aula);
Desmontar a aula prtica: limpar e guardar os equipamentos, separar as vidrarias utilizadas e lavar de acordo com o
procedimento do laboratrio;
116
Solicitao de Materiais
O professor que orienta a pesquisa deve solicitar o material, justificando seu pedido com todos os
dados (descrio do material, tempo de uso, custo aproximado), ao Departamento de Pesquisa da
UNIP que encaminhar a solicitao, para Reunio Administrativa;
Somente aps a aprovao do Conselho os materiais podero ser solicitados para compra ou
disponibilizados.
Vidrarias
Separar as vidrarias por tamanho e tipo;
Enxaguar em gua corrente; colocar as vidrarias em imerso com gua e detergente especial
seguindo instrues do rtulo do detergente (10-20g/l), por aproximadamente 1h;
Colocar luvas no momento da lavagem. Para auxiliar na lavagem utilizar esponja e cepilho;
Enxaguar as vidrarias em gua corrente e depois enxaguar novamente com gua destilada;
Secar ao ar livre ou em estufa a 100C. Vidrarias com preciso volumtrica nunca devem ser secas
em estufa e nem levadas ao aquecimento;
Nas vidrarias de preciso volumtrica passar lcool 70%, caso haja necessidade de secagem
rpida, ou deixar secar ao ar livre sobre a bancada;
Antes de retirar as vidrarias da estufa, deslig-la e deix-la fechada at que as vidrarias estejam
frias; Retirar as vidrarias e guard-las adequadamente.
Bancadas
Utilizar luvas nitrlicas na limpeza;
Iniciar a limpeza das bancadas passando um pano umedecido com gua para tirar algum produto
que ali possa ter cado;
Lavar em seguida com gua e sabo utilizando uma esponja. Passar pano umedecido com gua;
Por ultimo passar uma flanela com lcool etlico a 70 %.
Obs: Caso haja necessidade passar uma soluo com hipoclorito de sdio para desinfetar a
bancada.
117
Pisos
A limpeza do piso realizada pelos auxiliares de servios gerais;
Os tcnicos devero orientar os auxiliares de servios gerais em como proceder limpeza nos
almoxarifados para evitar acidentes.
118
Primeiros Socorros
Qualquer acidente deve ser comunicado ao professor;
Qualquer produto qumico que caia sobre a pele, deve ser lavado com gua corrente em
abundncia;
Quando grandes reas do corpo forem atingidas, a utilizao do chuveiro de emergncia mais
eficiente e toda roupa da regio afetada deve ser removida.
cidos - lavar com muita gua e depois aplicar sobre a regio afetada uma soluo e bicarbonato
de sdio saturada;
Bases - lavar com gua corrente e aplicar na regio afetada uma soluo de cido brico a 2%.
Em acidentes mais graves que afete grandes regies do corpo, remover a roupa da pessoa e lavar
com bastante gua e encaminh-lo para um hospital;
Quando a regio afetada forem os olhos, utilizar o lava-olhos para remover toda e qualquer
substncia presente e depois lavar com soluo fisiolgica 0,9% de NaCl;
Em caso de inalao de substncias volteis, retirar a pessoa do laboratrio e lev-lo para um local
ventilado.
Acidentes devem ser registrados em caderno de ocorrncias.
Qualquer tipo de ocorrncia, fora da rotina normal dos laboratrios devem ser registradas em um
livro ata identificado como Registro de Ocorrncias Laboratrios Multidisciplinares. So
exemplos de ocorrncias, os acidentes decorrentes durante o expediente de trabalho dentro dos
laboratrios, como derramamento de produtos qumicos, incndios, cortes causados por vidrarias
e/ou outros materiais e queimaduras.
Devem ainda ser relatado na Ficha de Ocorrncia e encaminhado para o Encarregado a fim de
dar cincia aos superiores do ocorrido. (anexo 8).
119
Derramamento
Isolar rea e comunicar a todos que esto no laboratrio;
Proteger-se com os EPIs adequados;
Permitir ventilao e/ou exausto no ambiente;
Providenciar adequadamente a limpeza no local: no caso de cidos, lcalis e produtos orgnicos usar vermiculita, ou uma mistura de areia com areia de gato na proporo de 1:1 e colocar sobre o
produto derramado para absorv-lo. Em seguida recolh-lo com p plstica, acondicionar em saco
preto para depois efetuar o descarte;
Acidentes devem ser registrados em caderno de ocorrncias.
120
Incndio
Pequeno incndio (em bquer, frasco etc), abafar com um vidro de relgio ou uma flanela
umedecida com gua;
Em caso de incndio com envolvimento de materiais volteis e/ou txicos, se as tentativas de
conter um pequeno incndio forem inteis, devem-se tomar as seguintes providncias:
122
123
A seguir esto relacionadas algumas regras de segurana que voc dever colocar em prtica para sua segurana e de seus colegas:
Usar sempre avental de algodo de mangas longas, na altura dos joelhos e fechados;
Usar calado fechado de couro ou similar e cala comprida;
No usar relgios, pulseiras, anis ou quaisquer ornamentos durante o trabalho no laboratrio;
No beber ou comer no laboratrio e nem utilizar material de laboratrio para colocar alimentos;
O material escolar como mochilas, bolsas, pastas e celulares devero ser deixadas na rea de
assepsia nos armrios;
proibido fumar no laboratrio ou em qualquer outro lugar que possa por em risco a segurana
ou sade das pessoas;
No permitido fotografar dentro do laboratrio em qualquer hiptese;
Caminhar com ateno e nunca correr no laboratrio;
Nunca testar amostras ou reagentes pelo sabor, os odores devem ser verificados com muito
cuidado;
No levar a mo boca ou aos olhos quando estiver manuseando produtos qumicos;
Aventais de laboratrio, luvas, culos de proteo ou outras vestimentas no devem ser usados
fora do laboratrio;
Brincadeiras so absolutamente proibidas nos laboratrios;
Usar a capela sempre que trabalhar com solventes volteis, txicos e reaes perigosas, explosivas
ou txicas;
As substncias inflamveis devem ser manipuladas em locais distantes de fontes de aquecimentos;
O uso de pipetadores requerido em qualquer circunstncia ao utilizar pipetas;
124
Lentes de contato no devem ser usadas em laboratrios, pois podem absorver produtos qumicos
e causar leses nos olhos;
Ao final de cada aula, as vidrarias utilizadas durante o trabalho de laboratrio devem ser
enxaguadas com gua antes de serem enviadas para limpeza;
125
Vidrarias trincadas, lascadas ou quebradas devem ser descartadas e o tcnico ou responsvel deve
ser avisado;
Antes de manipular qualquer reagente deve-se ter conhecimento de suas caractersticas com
relao toxicidade, inflamabilidade e explosividade;
Devem-se tomar cuidados especiais quando manipular substncias com potencial carcinognico;
Os reagentes e solues devem ser claramente identificados, com data de preparo, validade e o
nome do tcnico que a preparou;
Todo acidente com reagentes deve ser limpo imediatamente protegendo-se se necessrio;
Todas as substncias so txicas, dependendo de sua concentrao. Nunca confie no aspecto de
um produto, devem-se conhecer suas propriedades para manipul-la;
Receber visitas apenas fora do laboratrio, pois elas no conhecem as normas de segurana e no
esto adequadamente paramentadas.
No deixar caixas com materiais ou vazias em cima de armrios, no cho, nas bancadas ou nas
dependncias dos laboratrios onde ocorrem s aulas prticas;
Essas so algumas regras gerais que devemos seguir durante um trabalho no Laboratrio.
Durante o curso, em cada experimento sero relacionadas outras mais especficas, inclusive
sobre os reagentes a serem manipulados.
126
REQUISIO DE MATERIAIS
CD
DESCRIO DO ITEM
UNIDADE:
INSTITUTO: I.C.S
UN
TOTAL
DADOS DO REQUISITANTE
FUNCIONRIO:
COORDENAO:
CURSO:
DISCIPLINA:
JUSTIFICATIVA
DIRETORIA:
LABORATRIO:
127
DATA:
128
Utilizao Externa
QUANT
DESCRIO
MARCA
Solicitante (Responsvel)
Nome:
RA/Funcional:
MODELO
N DE SRIE
UNIDADE
Funo:
Assinatura:
Destino
Unidade/local:
End:
Telefone:
Sada
Data:
Retorno
Data:
Horas:
Horas:
Motivo do Emprstimo
Encarregado Responsvel
NOME:
Assinatura
OBS: O EQUIPAMENTO SOLICITADO DEVER SER DEVOLVIDO EM PERFEITO ESTADO DE FUNCIONAMENTO, SENDO DE
RESPONSABILIDADE DOS SOLICITANTES QUALQUER DANO QUE OCORRER AO EQUIPAMENTO.
129
) Funcionrio
__________________________________________________________________________
__________
__________________________________________________________________________
__________
__________________________________________________________________________
__________
Garantindo sua devoluo no prazo determinado e no estado em que acautelou o
material.
RECEBI: ____/____/____.
DEVOLVI:____/____/____.
____________________________
______________________________
Nome do responsvel pelo Material
____________________________
____________________________
Assinatura
Assinatura
130
___________________________________________
131
Curso: __________________________________________________________________________
Disciplina: __________________________________________________ Data: ____ / ____ / ____
Professor responsvel: _________________________________________ Ass.: _______________
Funcionrio responsvel: ___________________________________________________________
Ass. Coordenador do Curso: _________________________________________________________
IMPORTANTE
Pedimos a Vossa Senhoria, que esta solicitao seja enviada com ao menos 15
(quinze) dias teis de antecedncia Considerando a disponibilidade do Caixa do
Campus.
O (s) material (is) devero ser providenciados para:
Sala/Laboratrio/Clnica:
Manh
Tarde
Noite
1 horrio: _________ h
2 horrio: _________ h
Cdigo
Descrio do item
Qtde.
132
Uni. Med.
Observao:_____________________________________________________________________________
___________________________________________________________
Espao a ser preenchido pelo Encarregado
Entrada: ____ / ____ / ____
Por:__________________
Entregue em: ____ / ____ / ____
Observao:_____________________________________________________________________________
___________________________________________________________
133
SOLICITAO DE COMPRAS
PELO FUNDO DE CAIXA
Solicitante: _________________________
Curso: __________________________
Disciplina: _________________________
Ass. Resp. ____________ N/N ou n da RM: _______________ Data: ____/ ____ / ____
Aprovao da Diretoria: ____________________
SOLICITAO DE COMPRAS
PELO FUNDO DE CAIXA
134
Solicitante: _________________________
Curso: __________________________
Disciplina: _________________________
Ass. Resp. ____________ N/N ou n da RM: _______________ Data: ____/ ____ / ____
Aprovao da Diretoria: ____________________
135
Agitador Magntico
Verificar a voltagem antes de ligar o aparelho;
Colocar o bquer ou recipiente no centro da plataforma;
Colocar a barra magntica;
Acione o boto de velocidade para ligar o aparelho, observe a movimentao da barra magntica
e regule para a velocidade desejada (considere o tempo de acelerao do motor);
Observao: no recomendamos usar s aquecimento sem agitao, pois no havendo ventilao
o aquecimento poder causar danos ao motor e ao sistema eletrnico.
Limpeza
Limpeza com pano mido e lcool 70%.
Autoclave
Abrir a autoclave;
Retirar o cesto e encher o tambor interno com gua at o nvel determinado;
Recolocar o cesto com o material a ser autoclavado;
Fechar a tampa e as travas de segurana;
Ajustar o peso regulador de presso conforme a necessidade;
Ligar a chave comutadora no nvel mximo;
Abrir o registro para sada do ar interno;
Em seguida fechar o registro;
Quando atingir a temperatura definida leve a chave comutadora at o nvel mdio;
Aps ter passado o tempo determinado para a esterilizao do material, desligar a chave
comutadora e abrir o registro de vapor;
Quando a manmetro zerar, pode ser aberta a tampa.
136
Banho-Maria
Verificar se a voltagem do equipamento coincide com a da rede eltrica;
Abastecer o banho com gua destilada ou deionizada, tomando cuidado para no colocar em
excesso, ou seja, at que a gua alcance mais ou menos 3cm da borda superior. Durante o
processo de abastecimento, dever ser considerado o volume das estantes com os respectivos
tubos, para que no ocorra transbordamento de gua quando o banho for arraigado com as
provas;
Ligar o banho rede eltrica, verificando antes se o boto de ajuste de temperatura est na
posio mnima;
Para ajustar temperaturas girar o boto do termostato ligeiramente para a direita ou para a
esquerda, at o ponto de controle desejado;
A lmpada de aquecimento indica que o banho est aquecendo, aguardar que a mesma se
apague, e acompanhar a temperatura no termmetro;
Se a temperatura indicada no termmetro no for a desejada, girar o boto do termostato para a
direita, para aumentar, ou para a esquerda para diminuir;
A estabilizao da temperatura se dar quando a lmpada de aquecimento comear a oscilar no
ponto desejado.
137
Limpeza
Limpeza, manter sempre o banho com gua limpa, garantindo desta forma seu bom
funcionamento;
Para limpar o banho, tirar inicialmente toda a gua, o fundo falso, a lente e o termmetro, e
limp-lo cuidadosamente para no ofender a resistncia, o sensor, nem o protetor do
termmetro;
Manuteno, mandar o equipamento para assistncia tcnica.
Limpeza e Manuteno
A limpeza do fluxo laminar ser realizada com lcool 70%. Mensalmente colocar uma placa de
Petri com um pouco de formol a 10% para auxiliar na descontaminao.
Verificar o prazo das lmpadas e do filtro de ar.
Centrfuga
138
Deionizador de gua
Abrir a torneira de sada, localizada na clula condutimtrica;
Abrir a torneira de gua da rede;
Ajustar o seletor de voltagem tenso da rede eltrica local, e somente ento ligue o
equipamento tomada de energia eltrica;
Aguardar at que a lmpada vermelha se apague, antes de utilizar a gua deionizada;
Rejeitar toda a gua enquanto estiver acesa a lmpada vermelha de advertncia.
Aproximadamente 20 minutos costumam ser suficientes para eliminar os traos da soluo
ativadora das resinas de troca inica, que falsamente indica a saturao da coluna deionizadora;
Aps o uso, fechar a torneira de gua da rede;
Fechar a torneira de sada;
Desligar o deionizador da tomada de energia eltrica.
139
Para prolongar a vida til da clula condumtrica, sempre desligue o Deionizador da rede eltrica
aps o uso;
Nunca retirar a coluna deionizadora de dentro da carcaa, sem antes desligar o equipamento da
tomada de energia eltrica.
Estufa Bacteriolgica
Ligar a chave Liga/Desliga;
Acione a tecla Start/Off, at aparecer Off no display (indica que o termostato pode ser ajustado);
Ajustar a temperatura desejada, acionando as teclas Aumentar/Diminuir;
Algum instante voltar o display temperatura interna;
Acionar a tecla Start/Off para iniciar o ciclo.
Limpeza
Manuteno e assepsia devero ser feitas antes do aparelho ser ligado da seguinte maneira:
Usar pano levemente umedecido em gua e sabo neutro para limpeza das partes internas e
externas da estufa;
No usar produtos qumicos no visor, dever ser limpo com gua e sabo neutro utilizando pano
levemente mido;
Manuteno, assistncia tcnica.
Leitor de ELISA
O aparelho deve ser instalado em uma bancada plana, com dimenses adequadas, e longe de
equipamentos que provoquem vibraes, rudos eltricos ou calor excessivo.
Deve-se evitar exposio direta luz solar, que interfere nos resultados, e provoca alteraes na
pintura externa do aparelho, e temperatura ambiente deve ficar entre 15 e 30C.
O aparelho j fornecido com um rolo de papel instalado na impressora.
Manuteno Preventiva, o Quick Eliza, um aparelho robusto que no requer manuteno
preventiva. Alm da conservao normal do aparelho (limpeza externa, uso em condies
140
favorveis, etc) so necessrias apenas atividades de rotina, como troca de papel, ou eventual
troca de fusvel.
Limpeza e Descontaminao
As bancadas ou superfcie de trabalho dever ser limpas com papel absorvente umedecido em
hipoclorito de sdio a 1%. Desinfetar a superfcie borrifando soluo de lcool 70% e deixar na
superfcie at secar.
No descarte de material contaminado usar, sempre, luvas para o manuseio do material
contaminado. Fazer uso de recipientes prprios para descarte, como sacos de lixo branco e caixas
para perfuro-cortantes. Os materiais contaminados tipo meio de cultura e cultura de bactrias e
fungos, antes de serem descartados devem ser autoclavados para que no haja risco de
contaminao.
141
LABORATRIO/CLNICA: ________________________________________________
DISCIPLINA: ______________________________________DATA: ____ / ____ / ____
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
___________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
___________________________________________________
FUNCIONRIO: ___________ DATA: ____/____/____HORRIO:___:___
ASS. ENCARREG:__________ DATA: ____/____/____HORRIO:___:___
ASS. COORD.: _____________ DATA: ____/____/____HORRIO:___:___
SOLICITAO DE SERVIOS
DADOS DO MATERIAL
MATERIAL
MARCA
MODELO
143
N SERIE
LABORATRIO
UNIDADE
Fones :
Solicitante:
Nome da empresa
Funo:
Obs:
144
Cala comprida;
Cala comprida;
Sapato fechado;
Detector de fumaa;
Escadas;
Luz de emergncia;
Manta corta-fogo;
Ventiladores.
145
Equipamentos do Laboratrio
Relacionar o inventrio do Laboratrio Multidisciplinar.
Vidrarias do Laboratrio
Relacionar o inventrio do Laboratrio Multidisciplinar.
6 Referncias Bibliogrficas
Revista CIPA - Segurana nas universidades Cipa, 22(253): 50, 2001 (2p)
http://www.ceunes.ufes.br/downloads/2/
sandrogrecoNormas%20de%20seguran%C3%A7a
%20no%20laborat%C3%B3rio%20de
%20Qu%C3%Admica.pdf ( 10/12/07)
http://www.eb23-caxarias.rcts.pt/cfq/segurana.html (05/01/08)
http://lqes.iqm.unicamp.br/institucional/o_laboratorio/olaboratorio_normas_seguranca.html
(29/01/08)
http://portal.anhembi.br/publique/media/arquivos/labs/manual_de_bpl.doc. (30/01/08)
http://samu.saude.sc.gov.br/index.php?option=com_content&task=view&id=308&Itemid=197
(30/01/08)
http://www.fiocruz.br/biosseguranca/Bis/virtual%20tour/hipertextos/up1/armazenamento_de_p
rodutos_quimicos.html (12/02/08)
http://www.univates.br/handler.php?module=univates&action=view&article=680 (13/02/08)
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