Desinfectantes

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
EVALUACIN DE LA EFICACIA DE UN DESINFECTANTE DE

ALTO NIVEL, A BASE DE PEROXIDO DE HIDROGENO,
EMPLEADO EN LA ESTERILIZACIN DE DISPOSITIVOS E
INSTRUMENTOS HOSPITALARIOS
MEDINA CRDOBA LUZ KARIME

VALENCIA MOSQUERA LIGIA LUCIA
TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial
Para optar al ttulo de
MICROBILOGA INDUSTRIAL
Bogot D.C.
21 de Julio de 2008
NOTA DE ADVERTENCIA
Artculo 23 de la Resolucin N 13 de Julio de 1946 La Universidad no se

hace responsable por los conceptos emitidos por sus alumnos en sus
trabajos de tesis. Solo velar por que no se publique nada contrario al
dogma y a la moral catlica y por que las tesis no contengan ataques
personales contra persona alguna, antes bien se vea en ellas el anhelo de
buscar la verdad y la justicia.
EVALUACIN DE LA EFICACIA DE UN DESINFECTANTE DE ALTO NIVEL,

A BASE DE PEROXIDO DE HIDROGENO, EMPLEADO EN LA
ESTERILIZACIN DE DISPOSITIVOS E INSTRUMENTOS HOSPITALARIOS
MEDINA CORDOBA LUZ KARIME

APROBADO
_____________________
Gretty Paola Tarazona
Bacteriloga
Directora
____________________
Janeth Arias Palcios
Bacteriloga M.C
Codirectora
__________________
Zulma Valbuena
Bacteriloga
Jurado
____________________
Miguel Pinzon Bello
Asesor Estadstico
__________________
Cindy Fernndez
Microbiologa Industrial
Jurado
EVALUACIN DE LA EFICACIA DE UN DESINFECTANTE DE ALTO NIVEL, A BASE DE

PEROXIDO DE HIDROGENO, EMPLEADO EN LA ESTERILIZACIN DE DISPOSITIVOS E
INSTRUMENTOS HOSPITALARIO
MEDINA CORDOBA LUZ KARIME

APROBADO
_________________________
Dra. INGRID SCHULER P.h D.
Decana Acadmica
____________________________
JANETH ARIAS PALACIOS MSc.
Directora de Carrera
AGRADECIMIENTOS
A Dios gracias por darnos la vida y otorgarnos el conocimiento, la fortaleza, y salud

e iluminarnos en el camino para alcanzar nuestras metas.
Dedicamos este proyecto a nuestros padres y familiares los cuales nos ayudaron con
su apoyo y amor
incondicional,
por que gracias a ustedes logramos alcanzar
nuestros conocimientos y estar mas cerca las metas profesionales.

A la Dra.
Janeth Arias Palacios nuestras codirectora del proyecto
por su
conocimiento, apoyo y confianza que siempre nos brindo.

A la Dra. Gretty Paola Tarazona nuestras directora por su colaboracin durante el
transcurso de toda la investigacin.
A la Dra. Alba Alicia Trespalacios por felicitarnos el espacio para llevar a cabo nuestra
investigacin.
A la Pontificia Universidad Javeriana nuestra institucin por facilitarnos los materiales
y medios necesarios para alcanzar nuestra metas.
A todas las personas que siempre estuvieron apoyndonos

A todos ellos muchas gracias
TABLA DE CONTENIDO
Paginas
1. INTRODUCCIN
2. MARCO TERORICO
11
2.1. DESINFECCIN
11
2.2. DEFINICIONES
13
2.3. DESINFECTANTES
15
2.3.1.Generalidades
15
2.3.2. Caractersticas de un buen desinfectantes
16
2.3.3. Factores que influyen en la eficacia de los desinfectantes
16
2.3.4. Mecanismos de accin de los desinfectantes
18
2.3.5. Resistencia de los microorganismos a los desinfectantes
21
2.3.6. Clasificacin de los desinfectantes segn su mecanismo de accin
23
2.3.6.1. Agentes que daan la membrana clula
23
2.3.6.2. Agentes que desnaturalizan protenas
23
2.3.6.3. Agentes que modifican grupos funcionales
23
2.3.7. Clasificacin de los desinfectantes segn su actividad
24
2.3.8. Clasificacin de los desinfectantes segn el mtodo de desinfeccin
25
2.3.8.1. AGENTES FSICOS DESINFECTANTES
25
2.3.9. AGENTES QUMICOS DESINFECTANTES
27
2.3.9.1. Productos reductores: Aldehidos
27
2.3.9.1.1. Formaldehdo
27
2.3.9.1.2. Glutaraldehido
28
2.3.9.2. Agentes oxidantes
29
2.3.9.2.1. cido peractico
29
2.3.9.2.2. Ozono
30
2.3.9.2.3. Perxido de Hidrogeno
30
2.3.9.2.3.1. Mecanismo de accin
31
2.3.9.2.3.2. Espectro de actividad
33
2.3.9.2.3.3. Aplicaciones
33
2.3.9.3. Fenoles y derivados
34
2.3.9.4. Alcoholes
35
2.3.9.5. Halgenos
36
2.3.9.6. Compuestos Yodados
36
2.3.9.7. Compuestos que liberan cloro
37
2.3.9.8. Biguanidas
39
2.3.9.9. Agentes cidos desinfectantes
39
2.3.9.10. cidos orgnicos
40
2.3.9.11. Compuestos de amonio cuaternario
40
2.3.9.12. Agentes desinfectantes tensioactivos anfotericos
41
2.3.9.13. Detergentes desinfectantes
41
2.4. Desinfectante de alto nivel de STERIS
42
3. TIPOS DE MICROORGANISMOS
43
3.1. Factores que influyen en el crecimiento de los microorganismos
45
3.3. Microorganismos Evaludos
46
3.3.1. Staphylococcus aureus
46
3.3.2. Pseudomonas aeruginosa
46
3.3.3. Salmonella choleraesuis
47
3.3.4. Bacillus subtilis
47
4. LIMPIEZA Y DESINFECCIN DEL MATERIAL HOSPITALARIO
48
4.1. Normas generales
48
4.2. Clasificacin de los materiales segn el riesgo de infeccin
49
4.2.1. Material crtico o de alto riesgo
49
4.2.2. Material semicrtico o de riesgo intermedio
49
4.2.3. Material no crtico o de bajo riesgo
50
5. METODOS DE EVALUACIN DE LOS DESINFECTANTES
51
5.1. Mtodo del coeficiente fenolico
51
5.2. Tcnica de dilucin en tubo
52
5.3. Tcnica de la placa de agar

6. JUSTIFICACIN
53
7. OBJETIVOS
54
7.1 General
54
7.2. Especficos
54
8. HIPOTESIS DE ESTUDIO
55
9. MATERIALES Y METODOS
56
9.1. Materiales
56
9.2. Diseo de la Investigacin
58
9.2.1. Variables del estudio
58
9.2. Anlisis de la Informacin
59
9.3. Mtodos y Procedimientos
60
9.3.1. Preparacin del Inoculo
60
9.3.2. Preparacin de las concentraciones del desinfectante
61
9.4. Evaluacin del desinfectante
61
9.4.1.
62
Lectura e interpretacin
10.
Resultados
63
11. Anlisis de la Informacin
71
11.1. Anlisis estadstico de los resultados
72
12. Discusin de resultados
73
13. Conclusiones
79
14. Recomendaciones
80
15. Cronograma de trabajo
81
16. Presupuesto
81
17. Bibliografa
82
18. ANEXOS
INDICE DE TABLAS
Paginas
Tabla N 1. Definicin de trminos
12
Tabla N 2. Agentes qumicos desinfectantes y Antispticos
15
Tabla N 3. Mecanismos de Accin de Antispticos y Desinfectantes
19
Tabla N 4. Efectividad de Desinfectantes Qumicos
42
Tabla N 5. Niveles de desinfeccin o esterilizacin
50
Tabla N 6. Materiales de laboratorio
56
Tabla N 7. Equipos de Laboratorio
56
Tabla N 8. Reactivos y medios de cultivos
57
Tabla N 9. Patrn de Mc Farland
60
Tabla N 10. Preparacin de las concentraciones del desinfectante
61
Tabla N 11. Porcentaje de Inhibicin para Staphylococcus aureus
63
Tabla N 12. Porcentaje de Inhibicin para Pseudomonas aeruginosa
65
Tabla N 13. Porcentaje de Inhibicin para Salmonella choleraesuis
66
Tabla N 14. Porcentaje de Inhibicin para Bacillus subtillis
67
Tabla N 15. Comportamiento de las cepas con la concentracin de 0.02%
68
68
69
Tabla N 18. Comportamiento de las cepas con la concentracin de 1%
69
Tabla N 19. Comportamiento de las cepas con la concentracin de 2%
INDICE DE FIGURAS
Figura 1. Comportamiento del desinfectante ante Staphylococcus aureus
64
Figura 2. Comportamiento del desinfectante ante Pseudomonas aeruginosa
65
Figura 3. Comportamiento del desinfectante ante Salmonella choleraesuis
66
Figura 4. Comportamiento del desinfectante ante Bacillus subtillis
67
RESUMEN
En el presente estudio se evalu el desinfectante de alto nivel de STERIS a base de perxido

de hidrogeno, empleado en la desinfeccin de equipos e instrumentos hospitalarios. El mtodo
utilizado para evaluar la eficacia del desinfectante, fue la tcnica de placa en agar mediante la
siembra en estra, por medio de este procedimiento se logr determinar el porcentaje de
inhibicin del desinfectante de alto nivel de STERIS a base de perxido de hidrogeno, frente 4
microorganismos con propiedades y caractersticas diferentes: Pseudomonas aeruginosa
(ATCC 9027), Staphylococcus aureus (Beta-Hemolitico CMDM 227), Salmonella choleraesuis
(Kuznedorf CMDM 074) y Bacillus subtilis (ATCC 6633). Se determino la eficacia de cinco
concentraciones del desinfectante (0.02%, 0.04%, 0.08%, 1% y 2%) y se valoraron en tres
tiempos diferentes 5, 10 y 15 minutos, para cepas vegetativas y 3, 6 y 9 horas para la cepa
esporulada. Segn el ensayo
experimental,
la reduccin de la poblacin microbiana en
promedio fue del 100% para las concentraciones de 0.08%, 1% y 2%. De acuerdo a los
resultados obtenidos en este estudio se demostr que el desinfectante de alto nivel de STERIS
a base de perxido de hidrogeno es efectivo en un 100% cuando se emplea la concentracin
recomendada por la casa comercial (2%) en el menor tiempo de exposicin al desinfectante.
La
mnima concentracin de efectividad del desinfectante ensayado fue de 0.08%, sin
embargo, si emplean concentraciones menores no se garantiza la destruccin total de los

microorganismos.
10
1. INTRODUCIN
La limpieza y desinfeccin son las herramientas para controlar los factores relacionados con el
medio ambiente hospitalario.
Los objetos, equipos, instrumentos mdicos y quirrgicos
utilizados para el cuidado del paciente pueden comportarse como vehculos de transmisin de
agentes infecciosos a huspedes susceptibles. Estos objetos primero deben limpiarse
cuidadosamente y posteriormente desinfectarse o esterilizarse para prevenir la contaminacin
cruzada y una posible transmisin de microorganismos. Una adecuada poltica de desinfeccin
y esterilizacin, junto con el lavado de manos y las precauciones de barrera, son las medidas
ms eficaces para prevenir la infeccin hospitalaria.
Un aspecto importante del control de las infecciones son los principios que rigen la limpieza,
desinfeccin y esterilizacin. Evitar la transmisin de microorganismos potencialmente
patgenos, ya sea entre enfermos, del personal sanitario a aqullos o a la inversa, debe
considerarse como una prioridad en todos los centros sanitarios. Es necesario diferenciar
claramente, segn el uso a que est destinado el mismo, el material que necesita una
esterilizacin del que necesita una desinfeccin o simplemente una limpieza adecuada. La
limpieza es obligada en cualquier caso, pudiendo despus optar por una esterilizacin o por
una desinfeccin de mayor o menor nivel.
Es cierto que en el hospital la creacin de fuentes nuevas de infeccin es permanente y que la
propagacin de la contaminacin es igualmente continua, en consecuencia, la aplicacin de las
medidas higinicas debe ser tambin metdica, programada y continua (diaria); por tal motivo
la limpieza y la desinfeccin, constituyen, junto con la esterilizacin, los elementos primarios y
ms eficaces para romper la cadena epidemiolgica de la infeccin. Teniendo en cuenta que
La infeccin hospitalaria constituye un tema de extraordinaria actualidad por su frecuencia,
gravedad y repercusin econmica.
El objetivo de este estudio es evaluar la eficacia del desinfectante de alto nivel de STERIS a
base de perxido de hidrogeno. El cual es empleado en la desinfeccin de equipos,
dispositivos e instrumentos crticos y semicrticos hospitalarios, teniendo como referencia 6
microorganismos contaminantes.
En el presente trabajo se evalu el desinfectante de alto nivel de STERIS a base de perxido
de hidrogeno, empleado en la desinfeccin de equipos e instrumentos hospitalarios.
El mtodo de evolucin de la eficacia del desinfectante fue la tcnica de placa en agar
mediante la siembra en estra, en el cual se logr, el porcentaje de inhibicin del desinfectante
de alto nivel de STERIS a base de perxido de hidrogeno, frente 4 microorganismos con
propiedades
caractersticas
diferentes:
Pseudomonas
aeruginosa
(ATCC
9027),
Staphylococcus aureus (Beta-Hemolitico CMDM 227), Salmonella choleraesuis (Kuznedorf
11
CMDM
074) y
Bacillus subtilis (ATCC 6633). Se determino la eficacia de cinco
concentraciones del desinfectante (0.02%, 0.04%, 0.08%, 1% y 2%) y se valoraron en tres

tiempos diferentes 5, 10 y 15 minutos. Segn el ensayo experimental
el desinfectante, es
efectivo contra los microorganismos estudiados a la concentracin recomendada por la casa

comercial y a un menor tiempo.
12
2. MARCO TEORICO
2.1. DESINFECCION
La desinfeccin se puede definir como el acto de eliminar todos los microorganismos sobre
objetos inanimados, pero no necesariamente toda forma de vida microbiana, por ejemplo, las
esporas bacterianas y los hongos. La desinfeccin no tiene el margen de seguridad que
proporciona la esterilizacin, adems de que la desinfeccin es afectada por muchos factores,
cada uno de los cuales tiene un efecto importante en el resultado final. (Navarrete et al, 1998).
La razn principal
de la aplicacin de una efectiva etapa de desinfeccin es reducir los
contaminantes microbianos a un nivel aceptable en el equipo, utensilios y del ambiente de

produccin del alimento. Esta debe realizarse sobre superficies limpias. (GTC 85, 2003).
La desinfeccin puede ser considerada como el complemento y perfeccionamiento de las
operaciones de limpieza a las que vuelve incluso ms eficaces, ya que reduce los
inconvenientes debidos a la presencia de microorganismos. (Vlez y Cuadrado, 2005).
Otro aspecto importante es la eleccin del desinfectante, el cual debe ser eficaz en ese caso
determinado, en aquel lugar, en aquellos materiales, tener un buen espectro de accin y
carecer de toxicidad. Entre los factores que condicionan la eficacia de un desinfectante esta:
Propios del desinfectante: la concentracin a la que se utiliza, la estabilidad de las soluciones
desinfectantes y el pH de actividad optimas del mismo.
Propias de la resistencia microbiana: el tipo y ciclo vital de los microorganismos, la densidad de
la poblacin y el tiempo de contacto.
Propios del material a tratar: la naturaleza del material en especial el contenido de materia
orgnica, la constitucin del material, la compatibilidad con el desinfectante, el tipo de
tratamiento al cual est sometido al mismo tiempo que se usa el desinfectante, la cantidad de
suciedad adherida a la superficie a tratar y la calidad del agua empleada. (Vlez y Cuadrado,
2005).
13
2.2. DEFINICIONES
En la esfera de la desinfeccin y la esterilizacin se utilizan muchos trminos diferentes. En la

tabla N se encuentran los trminos ms comunes:
Tabla 1. Definicin de trminos relacionados con los procedimientos de limpieza, desinfeccin
y esterilizacin.
TERMINO
DEFINICION
Agente que mata los microorganismos o suprime su crecimiento

Antimicrobiano
y proliferacin. (OMS, 2005)
Sustancia que inhibe el crecimiento y el desarrollo de microorganismos

Antisptico
pero no necesariamente los mata. Los antispticos suelen aplicarse a

las superficies corporales. (OMS, 2005)
Antibitico
Sustancia qumica natural procedente del metabolismo de los

microorganismos y sus derivados sintticos que destruyen (bicida) o
inhiben el crecimiento de bacterias u otros microorganismos
Bactericida
Sustancia qumica que, bajo condiciones definidas, destruye formas

vegetativas bacterianas, pero no necesariamente las esporuladas.
(Forsythe y Hayes, 2002).
Bacteriosttico
Sustancia qumica que previene el crecimiento de bacterias, pero no

necesariamente las destruye. (Forsythe y Hayes, 2002).
Biocida
Sustancia qumica que posee actividad desinfectante o antisptica,

destruye los microorganismos patgenos y no patgenos. (GTC 85,
2003).
14
Desinfeccin
Tratamiento fsico-qumico o biolgico aplicado a las superficies

limpias, que tiene como propsito destruir las clulas vegetativas de
los microorganismos que pueden ocasionar un riesgo de salud publica
y reducir sustancialmente el nmero de otros microorganismos
indeseables. (GTC 85, 2003).
Desinfectante
Definido originalmente en trminos mdicos, como toda sustancia

qumica
que
destruye
los
microorganismos
causantes
de
enfermedades, ahora se define como las sustancias que destruyen

una gran variedad de microorganismos, pero no necesariamente las
esporas bacterianas. (Forsythe y Hayes, 2002).
Cualquier proceso utilizado para eliminar o matar microorganismos.

Descontaminacin
Tambin se utiliza para referirse a la eliminacin o neutralizacin de

sustancias qumicas peligrosas y materiales radioactivos. (OMS,
2005).
Detergentes
Sustancias capaces de ayudar a la limpieza, cuando se agregan al

agua. Incluyen jabones, agentes tensioacivos orgnicos. (GTC 85,
2003).
Sustancia o mezcla de sustancias qumicas utilizadas para matar

Esporicida
microorganismos y esporas. (OMS, 2005).
Proceso que mata o elimina todas las clases de microorganismos y

Esterilizacin
esporas. (OMS, 2005).
Fungicida
Agente qumico que, bajo condiciones definidas, destruye los mohos y

sus esporas. (Forsythe y Hayes, 2002).
Es un producto de accin letal sobre los microorganismos,

Germicida
especialmente los patgenos (grmenes). (Res.GMC N26/96).
15
Eliminacin de la actividad biolgica de los microorganismos por
Inactivacin
destruccin, inhibicin de la reproduccin o inhibicin de la actividad

enzimtica. (GTC 85, 2003).
Cubre todos los procesos implicados en la eliminacin de todo tipo de
Limpieza
suciedad de las superficies, pero no los que corresponden a la

esterilizacin. (Forsythe y Hayes, 2002).
Aplicacin de cualquier mtodo o sustancia qumica sobre una
Sanitizacion
superficie limpia, para la destruccin de microorganismos patgenos u

otros organismos. Tal tratamiento no afectara el equipo, ni el producto
ni la salud de las personas. (GTC 85, 2003).
Componente que, en la formulacin, es responsable de por lo menos

Sustancia
principio
una determinada accin del producto. (Res.GMC N26/96).
activo
Virucida
Sustancia qumica que destruye o inactiva partculas vricas. (GTC 85,

2003).
16
2.3. DESINFECTANTES
2.3.1.
Generalidades
Los desinfectantes y antispticos son sustancias qumicas que matan o inhiben el crecimiento
microbiano. Entre los desinfectantes esta el cloro, hipoclorito, clormidas, fenol, agentes
alquilantes, detergentes, etc.
Se aplican sobre material inerte como pisos, mesas y equipos,
mientras que los antispticos como el alcohol yodado, methiolate se emplean sobre tejidos
vivos. (Escobar, 2002). El objetivo de los agentes es disminuir el nmero de microorganismos,
de forma que los que sobrevivan (algunas esporas y posiblemente unas pocas formas
vegetativas muy resistentes) no influyan en la calidad microbiolgica de las muestras y
productos que contactan con las superficies desinfectantes (Arias, 2006).
Pueden utilizarse como desinfectantes o antispticos muchos tipos de sustancias qumicas.
Dado que el nmero y la variedad de productos comerciales es cada vez mayor, deben elegirse
cuidadosamente las formulaciones que sean ms indicadas para las necesidades concretas. La
actividad germicida de muchas sustancias qumicas es ms rpida y eficaz a temperaturas ms
altas, pero las temperaturas elevadas tambin pueden acelerar su evaporacin y degradarlas.
Es preciso tener particular cuidado en el uso y el almacenamiento de esas sustancias en las
regiones tropicales, donde su tiempo de conservacin puede verse reducido a causa de las
altas temperaturas del ambiente. Muchos germicidas pueden ser perjudiciales para el ser
humano o el medio ambiente. Se deben seleccionar, almacenar, manipular, utilizar y eliminar
con precaucin, siguiendo las instrucciones del fabricante. En relacin con la seguridad
personal, se recomienda utilizar guantes, delantales y proteccin ocular cuando se preparen
diluciones de germicidas qumicos. (OMS, 2005).
En la tabla N2. Se observan la clasificacin de lo diferentes agentes esterilizantes, segn al
grupo al que pertenecen, desinfectantes y antispticos:
Tabla N 2. Agentes qumicos desinfectantes y Antispticos
Antispticos
Alcoholes
Iodo
Agentes catinicos, aninicos y anfteros
Colorantes
Desinfectantes y/o Esterilizantes
Cloro y Compuestos clorados

Aldehdos
Compuestos Fenlicos
Acidos y Alcalis
Fuente: (http://www.microbiologia.com.ar).
17
2.3.2.
Caractersticas o Propiedades de un buen desinfectante
Los desinfectantes que se deben utilizar en las superficies, deben cumplir, en condiciones
ideales lo siguiente:
Su eficacia: destruir rpidamente los microorganismos, siendo igual de eficaces con las
bacterias Gram positivas que con las Gram negativas; deben destruir la mayora de las
esporas fngicas, siendo tambin conveniente la destruccin de las esporas bacterianas.
Se suficientemente estable a los factores ambientales (materia orgnica, jabones y

detergentes, pH, temperatura, aguas duras y humedad relativa).
Tiempo de contacto. Todos los desinfectantes requieren un tiempo mnimo de contacto

para mostrar su eficacia. Ninguno acta inmediatamente.
Propiedades no toxicas y no irritantes.
No debe ser corrosivo.
Tener capacidad de penetracin.
Tener accin detergente adems de desinfectar.
Debe ser soluble en agua y no afectarle la dureza del agua.
Debe ser incoloro o no teido.
Debe ser inodoro o no desprender olores desagradables.
Debe ser fcilmente disponible, econmico y fcil de usar.
Estables durante mucho tiempo en forma concentrada y durante u tiempo mas breve en
forma diluida. (Quiles y Hevia, 2007); (Marriot, 2003).
2.3.3. Factores que influye la eficacia de los agentes qumicos desinfectantes.

La eficacia de todos los agentes de desinfeccin est influenciada por la concentracin, el
tiempo de contacto, la temperatura, la materia orgnica, pH, la dureza del agua, combinacin
con detergentes y tipos de microorganismos (GTC 58, 2003).
Concentracin: La concentracin para obtener un determinado efecto, si como el

rango de concentraciones en que se puede obtener un resultado esperado, depende
de la naturaleza qumica del desinfectante, de los tipos de microorganismos que se van
a eliminar y de las condiciones de aplicacin.
pH: Todos los desinfectantes se ven afectados por el pH de las soluciones de uso.
(GTC 85, 2003). El pH afecta tanto a los microorganismos como a los agentes
qumicos. El aumento de pH por encima de 7 incrementa la carga negativa de los
microorganismos afectando la concentracin del agente sobre la clula. El pH
determina el grado de disociacin y la efectividad del agente qumico, pues a menor
18
disociacin
mayor
permeabilidad
mayor
efectividad.
(http://www.microbiologia.com.ar/).
Temperatura: Por lo general
las temperaturas mas elevadas mejoran el poder
desinfectante, por ejemplo del oxido de etileno. (Jimnez, 2000).
Algunos
desinfectantes son afectados a bajas temperaturas. El cloro y los desinfectantes a base

de cido peractico o perxido de hidrogeno, mantiene eficacia en temperaturas muy
bajas. Las temperaturas demasiado altas debe ser evitadas, debido a las
caractersticas corrosivas ya la prdida posible de actividad de algunos desinfectantes.
(GTC 85, 2003)
Tiempo de contacto: El efecto de los agentes qumicos no es inmediato, los

microorganismos no son susceptibles a un agente en la misma forma, por lo que no
todos los microorganismos mueren al mismo tiempo. (Jimenez, 2000). El tiempo de
contacto esta directamente relacionado con la concentracin para obtener un efecto
microbiano dado. Existe un tiempo de contacto mnimo para cada desinfectante y para
cada concentracin. Tiempos prolongados de contacto tiene efectos adversos en los
equipos de proceso. (GTC 85, 2003).
Dureza del Agua: La mayora de los desinfectantes son eficaces en una amplia gama
de la dureza del agua. (GTC 85, 2003). Las aguas duras (Calcio y magnesio), afectan
negativamente al desinfectante. (Arias, 2006).
Condiciones de Crecimiento y Tipo de Microorganismos: los desinfectantes deben

tener el ms amplio espectro de actividad en contra de los virus, bacterias, hongos y
esporas. Y debern tener accin bicida en contra de los microorganismos en una
variedad de condiciones y estadios de crecimientos. La cantidad de microorganismos,
influye en la accin del desinfectante, por lo que es importante recudir esta carga con el
lavado y con el uso de detergentes, antes de la desinfeccin. (Galn, 2003).
Sustancias interferentes: la eficacia de los desinfectantes se reduce con la presencia

de sustancias interferentes, especialmente materia orgnica, por dos principales
causas:
a. La presencia de materia orgnica reduce y en algunos casos inactiva la accin de ciertos

agentes desinfectantes. Los ms afectados son los clorados y los yodforos.
b. Algunos desinfectantes pueden ser tambin afectados por las materias orgnicas, como
sales presentes en agua dura.
19
Adems, de una forma no reactiva, la metera orgnica e inorgnica forma una barrera
protectora, de tal manera, que los microorganismos son protegidos de sus efectos. (Galn,
2003).
2.3.4. Mecanismos de accin de los desinfectantes sobre los microorganismos.

La accin de los desinfectantes se caracteriza por su intensidad y ausencia de especificidad.
En su actuacin se distinguen varias etapas:
a) Fijacin: Ocurre en la pared bacteriana y vara en funcin de la concentracin y movimiento.
Es un fenmeno de naturaleza qumica elctrica.
b) Penetracin: Los desinfectantes atraviesan la pared bacteriana y la membrana celular.
c) Accin: se realiza a dos niveles: uno sobre la membrana citoplasmtica, cuya alteracin
provoca una desorganizacin del metabolismo, la fuga de sustancias, la degradacin celular y,
finalmente, la muerte celular. A otro nivel oxidan sustancias y desnaturalizacin los protenas
con dao en el metabolismo celular (GTC 58, 2003).
La accin que ejercen los agentes desinfectantes para destruir los microorganismos, tales
como la oxidacin, la coagulacin de protenas y el rompimiento de la pared y membrana
celular, permiten que se lleven a cabo los mecanismos por los cuales se logra eliminar las
bacterias. Estos mecanismos son:
Desintegracin de organizacin de la clula.
Interferencia con la energa (ncleo).
Sntesis de protenas (interferencia con el crecimiento).
La accin oxidante del cloro al combinarse con el agua, se lleva a cabo directamente sobre el
protoplasma de la bacteria, causando desintegracin de su estructura.
As mismo, se conoce que la mayora de desinfectantes qumicos coagulan las protenas, como
otro mecanismo de accin en la destruccin de las bacterias. El rompimiento de la pared
celular se explica por el descenso de la tensin superficial causando en algunos casos que la
bacteria se disuelva. (Soto, 1995). En la Tabla N 3, se resumen los mecanismos de accin y
los blancos de los principales agentes qumicos utilizados en desinfeccin.
20
Tabla N3
Mecanismos de Accin Antibacteriana de Antispticos y Desinfectantes mas
Comunes.
Sitio Blanco
Envoltura
Antisptico o Desinfectante
Mecanismo de Accin
Glutaraldehdo
Unin cruzada protenas
celular
(pared
celular,
Bacterias Gram negativas: remocin de

Mg++,
membrana
externa)
liberacin
de
algunos
EDTA, otros permeabilizantes
lipopolisacaridos
CAC (compuestos de amonio
Dao generalizado de la membrana que
cuaternario)
comprometen fosfolpidos de las dos

membranas.
Las bajas concentraciones afectan la
Clorhexidina
integridad de la membrana, las altas

concentraciones causan coagulacin del
citoplasma.
Membrana interna
Diaminas
citoplasmtica
Induccin a la prdida de aminocidos.

PHMB (mezcla heterodispersa
de
bioguanidas
polihexametileno), alexidina.
de
Fase de separacin y formacin de
dominios de lpidos de membrana.
Fenoles
Prdida, desacople.
Desnaturalizacin
de
protenas
por
coagulacin
Unin cruzada a
Formaldehdo
Unin cruzada de protenas, ARN y
Glutaraldehdo
ADN.
macromolculas
Unin cruzada de protenas de la

envoltura celular y en otros sitios
celulares.
Acridinas
Intercalacin
de
una
molcula
21
de
Intercalacin con el
acridina entre dos capas de pares de
ADN
bases en el ADN.
Interaccin
con
Compuestos con plata
grupos tiol
Enzimas que se unen a membrana

interaccin con grupos tiol.
Efectos en el ADN
Halgenos
Inhibicin de la sntesis del ADN
Perxido de hidrgeno, iones
Ruptura de la hebra de ADN
de plata
Halgenos
Oxidacin
de
los
grupos
tioles
disulfitos, sulfxidos o disulfxidos.
Perxido de hidrgeno: Actividad debida

a la formacin de radicales libres OH-,
Agentes oxidantes
Peroxgenos
que oxida a los grupos tioles en enzimas

y protenas; cido paractico: Inhibicin
de los grupos tioles en protenas y
enzimas.
Membrana
Alcoholes
citoplasmtica
Desagregacin
de
la
membrana
de
enzimas
citoplasmtica.
Desnaturalizacin
intracelulares por coagulacin.

Fefectos
proteinas
en
y
las
Cloro y derivados
acidos
nucleicos
Inhibe
las
reacciones
enzimticas,
desnaturaliza protenas e inactiva cidos

nuclicos.
Fuente: (Cabrera et al, 2002). (Laveau y Buix, 2002).
22
2.3.5. RESISTENCIA DE LOS MICROORGANISMOS A LOS DESINFECTANTES.

La resistencia que ejercen las bacterias a los antibiticos, antispticos y desinfectantes es un
problema de salud pblica, que se crea superado.
La resistencia bacteriana a los biocdas fue descrita en las dcadas de 1950 y 1960 y ha ido en
aumento. Ciertos biocda como alcoholes, formaldehdos, biguanidas, yodoforos, aldehdos y
agentes catinicos como los compuestos de amonio cuaternario (CUAs), la clorhexidina y el
triclosn se han comprometido como posibles causantes de la seleccin y persistencia de
cepas bacterianas con bajo nivel de resistencia a los antibiticos (Cabrera et,al, 2007).
Mecanismos de resistencia a los antispticos y desinfectantes
En la actualidad se ha obtenido un avance considerable en la comprensin de la respuesta de

las bacterias a los bactericidas. La resistencia puede ser una propiedad natural de un
organismo (intrnseca) o conseguida por mutacin o adquisicin de plsmidos (autorreplicacin,
ADN extracromosmico) o transposones (cromosomal o integrado en plsmidos, cassettes de
ADN transmisibles). Los genes de resistencia naturales en plsmidos, se originan como
mutaciones puntuales en los genes blanco (sitios de insercin de los genes de resistencia) de
bacterias susceptibles y tambin de genes que les proveen proteccin contra otras bacterias.
La resistencia intrnseca se ha demostrado para bacterias Gram negativas, esporas
bacterianas, micobacterias y bajo ciertas condiciones en especies del gnero Staphylococcus.
(Cabrera et,al, 2007; Cash, 2002).
Resistencia intrnseca de las bacterias Gram negativas.
Las bacterias Gram negativas por lo general son ms resistentes a los antispticos y
desinfectantes que las Gram positivas. La membrana externa de las bacterias Gram negativas
acta como una barrera que limita la entrada de varios tipos de agentes antibacterianos sin
relacin qumica. Las molculas hidroflicas de bajo peso molecular pasan fcilmente a travs
de las porinas, en cambio las molculas hidrofbicas se difunden a travs de la bicapa de la
membrana. Adems de las vas antes descritas se ha propuesto una tercera va para agentes
catinicos como los Compuestos de amonio cuaternario, biguanidas y diamidinas, los cuales
daan la membrana y facilitan su autocaptacin. Un ejemplo claro de resistencia mediada por
la membrana externa es el de P. aeruginosa que presenta diferencias en la composicin del
lipopolisacrido (LPS) y el contenido de cationes como el magnesio, que produce enlaces
estables entre molculas de LPS y como complemento a este mecanismo, esta bacteria
presenta porinas pequeas que impiden el paso por difusin de ciertas sustancias. Algunas
cepas que son muy resistentes a clorhexidina, CAC, EDTA y diamidinas se han aislado de
23
muestras clnicas. La presencia de un LPS menos cido en la membrana externa puede ser un
factor que contribuye a la resistencia intrnseca. (Cabrera et,al, 2007).
La presencia de lpidos en la membrana externa de los bacilos Gram negativos se relaciona
con el hecho de que estas bacterias son mucho ms resistentes que los Gram positivos a los
agentes antibacterianos, incluyendo los desinfectantes. En los estafilococos, por ejemplo, los
lpidos estn presentes en pequeas cantidades; si se incrementa (por ejemplo hacindoles
crecer en presencia de glicerol), los microorganismos se vuelven ms resistentes a ciertos
fenoles y penicilinas. En las micobacterias, el contenido en lpidos se asocia con su gran
resistencia a los desinfectantes. Se han
llevado a cabo estudios con mutantes rugosos,
defectivos en la regin interna del ncleo, que resulta sensibles a una amplia variedad de
desinfectantes y detergentes, relacionndose lo uno con lo otro. Se ha visto tambin, que la
reorganizacin de los fosfolpidos de la membrana externa puede permitir la penetracin de
molculas hidrofbicas por disolucin y difusin en los lpidos. (Camargo, Torres, 2003).
La superficie de los Gram negativos lisos es hidroflica; en el caso de los mutantes rugosos, sin
embargo, tienden a ser mucho ms hidrofbica En las cepas salvajes, las molculas del LPS
intactos se oponen al acceso rpido de los biocidas hidrofbicos o de los antibiticos, al interior
de la clula probablemente mediante un sistema de blindaje protector conferido por los
fosfolpidos, mucho de los cuales no estn presentes en la estructura de la membrana clsica.
En el caso de los bactericidas cationicos,
como es el caso de las biguanidas y los derivados
de amonio cuaternario, ambos interactan con fosfolpidos y LPS, produciendo dao en la

membrana celular. (Camargo, Torres, 2003).
Mecanismos de Resistencia Bacteriana Adquirida
Como se ha visto en los antibiticos y en los agentes quimioteraputicos, la resistencia

adquirida a los antispticos y desinfectantes surge por mutacin o por la adquisicin de
material gentico en forma de plsmidos o transposones; estas configuraciones permiten
grandes arreglos de genes de resistencia para la mayora de los antibiticos y desinfectantes al
ser transferidos juntos en un solo evento de conjugacin (Cash, 2002); (Cabrera et,al, 2007).
24
2.3.6. CLASIFICACION DE LOS DESINFECTANTES SEGN SU MECANISMO DE ACCION.
2.3.6.1. Agentes que daan la membrana celular

Los solventes orgnicos (fenoles, alcoholes) y los desinfectantes tensioactivos (detergentes)
daan la integridad estructural de la membrana, es decir desorganizan la disposicin ordenada
de lpidos y protenas, de modo que interfieren con su funcin, ejerciendo un efecto neto de:
Interferencia con la funcin normal de permeabilidad selectiva.
Interferencia con procesos de transporte y metabolismo energtico.
Salida de pequeas molculas de la clula. (Jimnez, 2000).
2.3.6.2. Agentes que Desnaturalizan protenas

Las protenas en su estado natural poseen una forma caracterstica de la que dependen su
funcin. Los agentes cidos o bases cambian el pH del medio, modificando las cargas de los
grupos R (Restos de los aminocidos) de las protenas y las interacciones intramoleculares;
desnaturalizndolas y perdiendo su funcionalidad. (Jimnez, 2000).
2.3.6.3. Agentes que modifican los grupos funcionales cidos Nucleicos y Protenas
Se caracterizan por los siguientes efectos:
Alteran grupos funcionales que forman parte de los centros activos de enzimas y otras
protenas.
Alteran grupos funcionales de cidos nucleicos, componentes de la pared y de la

membrana.
Al modificarse los grupos funcionales, ya sea por cambio en estado de oxidacin (agentes
oxidantes), por bloqueo (metales pesados) o por incorporacin de pequeos restos carbonados
(agentes alquilantes) se afecta:
La interaccin intramolecular de las protenas alterando su forma.
La interaccin intermolecular, por ejemplo de las enzimas y proteinas con el sustrato, o de

los cidos nucleicos durante su lectura ya sea en la duplicacin, trascripcin o traduccin.
(Jimnez, 2000).
25
2.3.7. CALSIFICACION DE LOS DESINFECTANTES DEACUERDO A SU ACTIVIDAD

Los desinfectantes qumicos, de acuerdo a su actividad, se dividen en cuatro niveles:
Desinfectantes de Nivel ms Alto (IV): Proceso mediante el cual se destruyen o
eliminan todos los microorganismos, con excepcin de alto nmero de esporas
bacterianas (NTC 4850,2000). En condiciones estrictamente controladas, este
procedimiento eliminas virus, hongos, formas vegetativas bacterinas, includas
micobacterias, y solo admiten la presencia
de algunas esporas bacterias
convencionalmente consideradas no patgenas. (Navarrete, 1998). En este grupo se

puede incluir el oxido de etileno y el glutaraldehido, (Galan, 2003).
Desinfectante de Nivel Alto (III): con un amplio espectro incluso con cierta actividad
esporicida. En este grupo se podran incluir los siguientes productos:
Glutaraldehido: agente de actividad alta en contra de bacterias, hongos, virus y
esporas. Pudiendo ser fungicida tras una aplicacin de 15-30 minutos al 40%.
Hipoclorito sdico.
Perxido de Hidrogeno, es mas efectivo como esporicida que como bactericida. (Galan,
2003).
Desinfectante de nivel intermedio (II): Proceso mediante el cual se inactivan
microorganismos como Mycobacterium tuberculosis, las bacterias vegetativas, la
mayora de los virus y hongos, pero no destruyen las esporas bacterianas. (NTC 4850,
2000).
Exige adems del nivel I, la eliminacin de las micobacterias, pero no asegura la
destruccin de las esporas bacterianas. (Mignard, 2006). En este grupo habra que
incluir el etanol y el isopropanol. (Galn, 2003).
Desinfectante de nivel bajo (l): Este procedimiento puede inhibir o destruir a la mayor
parte de las bacterias en estado vegetativo, algunos hongos y virus; pero no puede
dependerse de ella para eliminar microorganismos resistentes, tales como los bacilos
de la tuberculosis o las esporas bacterianas. (NTC 4850, 2000). Este procedimiento es
poco confiable si se desconoce la biocarga o el riesgo es de consideracin. (Navarrete,
1998). Los agentes qumicos como los compuestos de amonio cuaternario (cloruro de
benzalconio) son considerados como desinfectantes de baja actividad. (Galn, 2003).
26
2.3.8.
CLASIFICACIN
DE
LOS
DESINFECTANTES
SEGN
EL
METODO
DE
DESINFECCION
2.3.8.1. AGENTES FISICOS DESINFECTANTES

Los microorganismos tienen una temperatura mnima, ptima y mxima de crecimiento. Las
temperaturas por debajo de la mnima usualmente tiene una accin de stasis o sea detienen
el crecimiento microbiano, pero no provocan la muerte celular. Las temperaturas por encima de
la mxima usualmente tienen una accin cida o sea provocan la muerte de los
microorganismos por desnaturalizacin de enzimas y otras protenas. El uso de altas y bajas
temperaturas esta muy difundida y resulta muy efectivo para controlar el crecimiento
microbiano. La sensibilidad de los microorganismos a las temperaturas varia con las especie y
con el estado en que se encuentren. Las esporas bacterianas son estructuras vivas mas
termorresistentes. Resisten tratamientos trmicos ms drsticos que las formas vegetativas.
Por ejemplo esporas de microorganismos mesfilos en suspensin son capaces de resistir 30
minutos a 80C, lo cual es letal para las formas vegetativas. Existen tambin ascosporas de
hongos filamentosos que son mas termorresistentes que la correspondientes forma micelial.
(Jimnez, 2000).
El Calor
La eficacia de los procesos de desinfeccin por calor depende de la temperatura alcanzada, del
tiempo y de la humedad. El grado de destruccin microbiana requerido se alcanza siempre y
cuando el mtodo de aplicacin y el diseo del equipo permitan la penetracin adecuada de
calor en todas partes del equipo. (GTC 85, 2003).
Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la accin del calor. El calor
provoca desnaturalizacin de protenas, fusin y desorganizacin de las membranas y/o
procesos oxidativas irreversibles en los microorganismos. La efectividad del calor como mtodo
de
esterilizacin
depende
de:
Temperatura
Tiempo
de
exposicin.
El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Estos efectos se deben
principalmente a dos razones:
El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas (DNA,
RNA, protenas, etc) son producidas por reacciones que eliminan agua. Por lo tanto,
reacciones inversas podran daar a la clula a causa de la produccin de productos
txicos. Adems, las estructuras secundarias y terciarias de las protenas se estabilizan
27
mediante uniones puente de hidrgeno intramoleculares que pueden ser reemplazadas

y rotos por el agua a altas temperaturas.
El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms elevado

que el aire. Por lo que, los materiales hmedos conducen el calor mucho ms
rpidamente que los materiales secos debido a la energa liberada durante la
condensacin. (GTC 85, 2003).
El autoclave es el aparato ms comnmente utilizado en los laboratorios para

esterilizar cultivos y soluciones que no formen emulsiones con el agua y que no se
desnaturalicen a temperaturas mayores a 100 C. Una temperatura de 121 C (una
atmsfera de sobrepresin) con un tiempo de exposicin mayor a 15 minutos sirve para
destruir organismos formadores de esporas. (http://www.microbiologia.com.ar/).
Calor seco
El calor seco produce desecacin de la clula, efectos txicos por niveles elevados de
electrolitos, procesos oxidativos y fusin de membranas. Estos efectos se deben a la
transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que estn en contacto con
stos. El aire es mal conductor del calor, y el aire caliente penetra ms lentamente que el vapor
de agua en materiales porosos. La accin destructiva del calor sobre protenas y lpidos
requiere mayor temperatura cuando el material est seco o la actividad de agua del medio es
baja. Esto se debe a que las protenas se estabilizan mediante uniones puente de hidrgeno
intramoleculares
que
son
ms
difciles
de
romper
por
el
calor
seco.
Tratamiento con aire caliente
Para este tipo de tratamientos se emplean hornos que alcancen temperaturas mayores de
150C. Estos tratamientos pueden ser esterilizantes. Las condiciones de esterilizacin de
material con baja carga puede ser: a) 180C una hora b) 160c durante dos horas . Si se
empleara calor seco al 121C se debera realizar un tratamiento de 16 horas. (Jimnez,
2000). Este tipo de tratamientos se usa para esterilizar material de vidrio, instrumentos de
metal o aceites y polvos que soporten esas altas temperaturas
Otros Agentes Fsicos desinfectantes
Desinfeccin mediante radiacin
Su accin depende de: Tipo de radiacin, tiempo de exposicin
y la dosis. Ionizantes:
Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos nuclecos, estructuras
proteicas y lipdicas, y componentes esenciales para la viabilidad de los microorganismos.
28
Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales termolbiles

(termosensibles) como jeringas descartables, sondas, etc. No se utilizan para medios de cultivo
o soluciones proteicas porque producen alteraciones de los componentes.
a) Ultravioletas: Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos debido a que forman
dmeros de pirimidinas adyacentes que inducen errores en la duplicacin y por lo tanto la
prdida de la viabilidad de las clulas.
Son escasamente penetrantes y se utilizan para
superficies. (http://www.microbiologia.com.ar/).
Filtracin
Los filtros retienen los microorganismos impidiendo el pasaje a travs de los mismos. Los filtros
de membrana retiene a los microorganismos en la superficie por poseer poros de tamao
pequeo (0.2 micras) a travs de los cuales los microorganismos no pueden pasar. Los filtros
de profundidad retienen a los microorganismos atrapndolos en su matriz. Un ejemplo de
filtracin de profundidad es el tapn de algodn que se utiliza para tapar los tubos de medio de
cultivo. (Jimnez, 2000).
2.3.9. AGENTES QUIMICOS DESINFECTANTES

Los agentes qumicos (AQ) son compuestos que matan o inhiben el crecimiento de los
microorganismos. Incluyen sustancias usadas como conservadores y antispticos as como
drogas usadas para el tratamiento de enfermedades infecciosas de plantas y animales.
(Jimnez, 2000). La eficacia de los desinfectantes qumicos se debilita por la presencia de
suciedad y cuanto mas limpia esta la superficie a desinfectar ms eficaz resultara el
desinfectante utilizado. (Forsythe y Hayes, 2002).
Tipos de Agentes Qumicos Desinfectantes
2.3.9.1 Productos reductores. Aldehdos

2.3.9.1.1. Formaldehdo
Conocidos comnmente como formol, formalina y aldehdo frmico. El formaldehido es un gas
incoloro, de olor irritante y lacrimgeno, soluble en agua y tiene un pH dbilmente cido.
Adems es un agente corrosivo y potencialmente carcingeno. (Leveau y Bouix, 2002).
Se utiliza como desinfectante de alto nivel en estado lquido y gaseoso. Principalmente se
utiliza en solucin acuosa (formaldehdo al 37%); en estas condiciones posee actividad
bactericida, fungicida, virucida, tuberculicida y esporicda. (Leveau y Bouix, 2002).
29
El formaldehdo reacciona con las protenas y los cidos nucleicos dando lugar a una
desnaturalizacin irreversible debido a la formacin de puentes intra e intermoleculares. El
formaldehdo es muy utilizado para la desinfeccin de superficies, de equipos y de los circuitos
de tuberas, en asociacin con otros aldehdos amonios cuaternarios. El uso principal es la
desinfeccin por va area. (Leveau y Bouix, 2002)
Ventajas
Bactericida-fungicida
No corrosivo
Buena enjuagabilidad
Bajo costo.
Activo en presencia de materia orgnica
Desventajas:
Olor desagradable
lacrimgeno
Posibles riesgos toxicos por inhalacin.
Irritante y cancergeno en forma de gas
(Leveau y Bouix, 2002)
2.3.9.1.2. Glutaraldehido
Conocido comnmente como aldehdo glutrico. La estabilidad del glutaraldehido depende del
pH y la temperatura. La prdida de actividad se acelera a partir de pH 8,8 y una temperatura
superior a 50C. La zona de pH compatible con una estabilidad satisfactoria va de pH 3,5 a 6,5.
El gluataraldehido no es un agente qumico agresivo frente a los materiales utilizados (acero
inoxidable, aluminio, materias plsticas, caucho). (Leveau y Bouix, 2002)
El glutaraldehido es el agente antimicrobino mas utilizado en el sector hospitalario para la
desinfeccin del materila de endoscopia. (Leveau y Bouix, 2002)
Su actividad biocida se debe a la desnaturalizacin de las protenas y aniquilacin de los
cidos nucleicos (RNA y DNA). El glutaraldehido posee un espectro muy amplio que abarca
las bacterias, levaduras, mohos, y formas esporuladas. Se distingue sobre todo por su
actividad virucda frente a los virus encapsulados y virus desnudos. Esta propiedad es
aprovechada en el sector hospitalario (activiadad anti-hepatitis B) o agroalimentario (actividad
antifungico). (Leveau y Bouix, 2002)
Ventajas
30
Bactericida-fungicida-virucida-esporicda
Accin rpida
No corrosivo
Costo moderado
Efectivo en presencia de materia orgnica
Efectivo en presencia de materia orgnica
Desventaja:
Olor caracterstico
Sensible a las variaciones de pH.
(Leveau y Bouix, 2002)
2.3.9.2. Agentes Oxidantes

2.3.9.2.1. cido peractico (cido peroxiactico).
Este cido fuertemente oxidante es activo en forma de cido peroxiactico. Las soluciones de
este cido constituyen sistemas bactericidas, fungicidas, virucicas y esporicidas eficaces. (GTC
85, 2003).
Las soluciones de cido peractico son incoloras, de olor picante y lacrimgeno; es un oxidante
potente, muy reactivo y causa quemaduras. El pH del cido peractico es generalmente
cercano a 1, por lo tanto es muy cido; la estabilidad se mantiene respetando las reglas
estrictas (temperatura de almacenamiento baja y ausencia de metales pesados en los
compuestos base durante la fabricacin). (Leveau y Bouix, 2002)
Su accin bicida se debe a la desnaturalizacin de protenas, rompe los enlaces
intramoleculares de los enzimas y
compuestos de la membrana por ruptura oxidativa y
provoca cambios de permeabilidad de la pared celular. (Leveau y Bouix, 2002).

Ventajas
Bactericida-fungicida-virucida-esporicida
Activo a bajas temperaturas
Accin rpida
Buena enjuagabilidad
Poco costoso.
Desventajas
Riesgos de corrosin
Inestabilidad debido a la temperatura
Vapores irritantes.
31
2.3.9.2.2. Ozono
El
ozono es una molcula compuesta por tres tomos de oxigeno que se presenta
naturalmente en la parte superior de la atmosfera que envuelve la tierra. Acta como oxidante y
desinfectante y puede utilizarse como medio de control de amenazas qumicas y microbianas.
El ozono esta siendo considerado como sustituto del cloro. Como el dixido de cloro, el ozono
es inestable, debiendo generase a medida que se va consumiendo en el punto de aplicacin.
Como oxida rpidamente, ejerce menos impacto ambiental. (Marriot, 2003)
2.3.9.2.3 Perxido de hidrgeno.

El perxido de hidrgeno pertenece al grupo de los desinfectantes oxidantes, conocido
comnmente como agua oxigenada, dixido de hidrgeno o hidroperxido, su frmula qumica
es (H2O2). Este producto se puede considerar como el desinfectante ms natural. Se le
encuentra espontneamente en productos como la leche y la miel e igualmente en los tejidos
vivos donde es el resultado del metabolismo celular. (Leveau y Bouix, 2002).
El perxido de hidrogeno es un biocida ampliamente empleado para de desinfeccin,
esterilizacin y antisepsia. Comercialmente se encuentra en concentraciones comprendidas
entre el 3% y 90%. Considerado biodegradable, ya que se degrada rpidamente en dos
productos inocuos agua y oxigeno. Posee un amplio rango de actividad y eficacia. (Galn,
2003).
Esta eficacia disminuye cuando lo que se necesita es una eliminacin de esporas. En estos
casos, la actividad esporicida se verifica cuando la concentracin mnima de uso se encuentra
comprendida entre el 10% y 30%, siendo generalmente necesario un incremento en el tiempo
de contacto, superior siempre a 5 minutos. (Galn, 2003).
En cuanto a la toxicidad del oxigeno para los microorganismos, es sabido que durante la
respiracin se forman cantidades pequeas de radicales libres superxido (O2).
Estos
radicales libres son txicos para los componentes celulares, de tal suerte que los
microorganismos que crecen en presencia de oxigeno, como aceptor final de electrones, deben
sintetizar un enzima la superxido dimutasa, para neutralizarlos. Gracias a esta enzima, los
radicales superxido se transforman en oxigeno molecular (O-2) y perxido de hidrogeno
(H2O2). (Cuesta y Castillo, 2004).
El perxido de hidrogeno es tambin toxico, pero se convierte inmediatamente en oxigeno
molecular y aguas mediante la enzimas catalasa. Tambin la peroxidasa destruye el peroxido
de hidrogeno. El in perxido (O-2) es otra forma txica del oxigeno, que se genera en
pequeas cantidades en la respiracin normal. El ultimo producto de la respiracin normal es
32
el radical hidroxilo libre (OH-) es muy reactivo. Se produce principalmente por las radiaciones
ionizantes, tambin en la
reaccin entre radicales libres superxido y perxido. (Cuesta y
Castillo, 2004).
Mecanismos de accin
El mecanismo de accin del perxido de hidrogeno todava no est definitivamente establecido.
Se han presentado no obstante varias hiptesis.
Una primera hiptesis, la formacin del hipoclorito
seria el factor clave: en presencia del
enzima mieloperoxidasa, el cloruro contenido en las bacterias puede ser oxidado por el
perxido de hidrogeno en hipoclorito:
H2O2 + Cl- OCl- + H2O

Segn una segunda hiptesis el perxido de hidrogeno acta mediante la produccin del
radical hidroxilo OH.
O2 + e- O2 - ion speroxido
O2 + H2O2 OH- + O2 + OH radical hidroxilo
Este radical puede atacar a los lpidos de las membranas, al ADN, protenas, y otros
compuestos vitales de la clula. (Leveau y Bouix, 2002).
Se considera que la inhibicin de crecimiento microbiano por el perxido de hidrogeno no es
resultado directo
de sus propiedades oxidativas en su estado molecular, si no por
consecuencia de la actividad de otras especies qumicas oxidantes derivadas del mismo. De

hecho el perxido es una excelente fuente de oxigeno singlete, los radicales superxido (O2 -)
y los radicales hidroxilo
( OH) que son altamente reactivos y muy txicos para los
microorganismo. Aunque el mecanismo exacto por el cual el H2O2 produce productos letales
para muchos microorganismos no ha sido
debido a su capacidad
completamente explicado, es bien sabido que,
para producir los derivados mencionados con fuerte propiedades
oxidativas, puede producir daos a los cidos nuclecos, enzimas y componentes de

membrana. (Labas et al, 2007).
33
Posibles mecanismos de desinfeccin H2O2

El perxido de hidrogeno funciona como un agente oxidante, produciendo radicales hidroxilos
libres que atacan los componentes esenciales de las clulas, incluyendo lpidos, protenas y
ADN, adems se degrada rpidamente produciendo agua y oxigeno. (Jang et al, 2007)
Los efectos dainos producidos a los componentes celulares de las bacterias parecen ser
producida por un fenmeno oxidativo. El estrs, derivado de las especies reactivas de oxigeno
(ROS), especialmente de los radicales OH, tienen alta capacidad para producir dao celular.
De hecho, el estrs oxidativo puede ser una consecuencia propia del metabolismo aerbico o
de la accin interna del sistema inmunolgico que acta sobre los posibles reacciones de
respuesta al ataque de agentes patgenos indeseados o del resultado de una agresin externa
por sustancias qumicas, tales como el perxido de hidrogeno. (Labas et al, 2007).
Existen varias maneras por las cuales el peroxido de hidrogeno puede ser transformado en
radicales hidroxilos (OH), entre ellas se incluyen:
La interaccin con iones metlicos de transicin que existente en el medio, por

ejemplo, cobre, hierro, etc.
Cuando actan en combinacin con radiacin UV
Descomposicin por una reaccin de dismutacin con un mximo ritmo de pH. (Labas
et al, 2007).
Los radicales hidroxilos constituyen una de las especies qumicas con el mayor potencial para
producir dao celular. El perxido de hidrgeno no es una molcula grande y es capaz de
difundir a travs de la membrana celular y, una vez dentro, para producir los radicales hidroxilo
(OH ) por medio de algunos de los mecanismos mencionados anteriormente. Los radicales
hidroxilos pueden repercutir en los diferentes componentes de la
las clulas que producen el
estrs oxidativo y conducir a irremediable consecuencias:
Oxidacin de los diferentes aminocidos como

histidina, metionina y
cistena dando
tirosina, fenilalanina, triptfano,
lugar a una prdida de la capacidad de la
protena correspondiente y las molcula adecuadas para cumplir su funcin especfica.
Tambin pueden actuar sobre los lpidos para producir una reaccin de peroxidacin
que afecta gravemente a la integridad de la membrana celular. Una de las
consecuencias de esta reaccin es el aumento de la rigidez de la membrana celular,
se produce la prdida de su permeabilidad y
otro tipo cambios que producen un
deterioro en la organizacin la membrana interna.
Acta sobre la clula, el DNA, especficamente el (OH), puede producir una ruptura en
la cadena o modificaciones qumicas en las bases nitrogenadas.
34
El dao mortal producido por el perxido de hidrogeno existe en el medio (efecto

exgeno) o producido por la clula (efecto endgeno). Sin embargo las bacterias tienen
sus propias mecanismos enzimticos como las catalasas, que dentro de ciertos lmites
ejercen un a proteccin. (Labas et al, 2007).
Espectro de actividad
El efecto bactericida del perxido de hidrogeno en los sistema biolgico ha sido reportado y
muestra una inhibicin del crecimiento e inactivacin de los microorganismos patgenos;
bacterias, hongos, virus, micobacterias y esporas bacterianas, cuando se utiliza el
desinfectante a la concentracin y bajo condiciones adecuadas. (Labas et al, 2007).
El perxido de hidrogeno tiene actividad, particularmente frene a las esporas, fuertemente
aumentada por una elevacin de la temperatura. Al pasar de 20 a 45 C, por 10 al menos el
tiempo necesario para matar las esporas. (Leveau y Bouix, 2002).
El perxido de hidrogeno es ms activo sobre la bacterias Gram negativas que sobre las Gram
positivas, lo que es normal, sobre las bacterias anaerobias, que estn provistas de catalasa,
que sobre las bacterias aerobias. Algunos mohos, como por ejemplo los Trichophyton, pobres
en catalasa, son ms sensibles. Otros como Candida albicans, que posee una actividad
catalasa ms elevada, son ms resistentes. pH optimo: ligeramente acido; incompatibilidades:
alcalinos, metales, catalasa. (Leveau y Bouix, 2002).
Cuando se utiliza el perxido de hidrogeno en medio alcalino libera de una forma violenta todo
su oxigeno. Por el contrario en medio cido, las soluciones de perxido de hidrogeno son ms
estables cuanto ms bajo es el pH. Esta molcula es utilizada a veces en los detergentesdesinfectantes para la industria Lctea o fabricas de queso, en presencia a de cido fosfrico.
(Leveau y Bouix, 2002).
Aplicaciones como antisptico
Antisptico en el lavado de lceras y heridas: ayuda a la eliminacin de detritus titulares en
regiones inaccesibles. Se utiliza H2O2 de 10 volmenes (3%) y cremas del 1%-1.5%.
Enjuagues bucales en amigdalitis, estomatitis aguda, halitosis, extracciones dentales e
infecciones de la boca. Diluir 1 parte del perxido de hidrogeno comercial de 10 V con una
parte
de
agua
para
obtener
una
concentracin
del
1.5%.(www.scielo.cl/pdf/infotec/v18n2/art10.pdf).
35
Aplicaciones como desinfectantes
Desinfeccin de lentes de contacto blandas, aparatos de ventilacin asistida y

tonmetros oculares a concentraciones del 3% al 6%. Antes de colocar la lente de
contacto en el ojo es necesario neutralizar el perxido de hidrgeno, ya que es irrita la
crnea.
Desinfeccin de aparatos para endoscopia como alternativa a glutaraldehdo. A

concentraciones del 6% ha mostrado incluso ser ms efectiva que el glutaraldehdo,
Pero no se utiliza porque su poder oxidante podra daar los aparatos (deteriora gomas
y plsticos de tubos de insercin). A concentraciones del 3% es eficaz frente a quistes.
(www.scielo.cl/pdf/infotec/v18n2/art10.pdf).
El H2O2 ha sido utilizado como agente antimicrobiano desde principio del ao 1800 y
es bien conocido por su uso en aplicacin tpica de la piel en concentraciones del
3%.(Labas et al, 2007).
Estabilidad y condiciones de uso

Se degrada espontneamente en reposo y por eso necesita incorporar agentes estabilizantes.
La descomposicin gradual aumenta por accin de la luz, de la agitacin y del calor. Debe
conservarse en envases aislados de la luz y del aire entre 15-30C. Si no contiene agentes
estabilizantes debe guardarse a temperatura inferior a 15C. Las soluciones ms concentradas
son ms estables que las diluidas. Las incompatibilidades tambin pueden provocar la
descomposicin. Se degrada rpidamente por la accin de lcalis y de metales finamente
divididos. (www.scielo.cl/pdf/infotec/v18n2/art10.pdf)
Efectos adversos
Irritacin de piel y mucosas con soluciones concentradas y dermatitis de contacto. Hipertrofia
de las papilas gustativas (desaparece al dejar los lavados bucales); irritacin de la mucosa
bucal por el uso repetido en enjuagues bucales. (www.scielo.cl/pdf/infotec/v18n2/art10.pdf)
2.3.9.3. Fenoles y derivados

El ortofenilfenol y el ortobenzilparaclorofenol son los derivados fenlicos utilizados comnmente
en los hospitales. El poder bactericida de los compuestos fenolicos resulta de la lisis celular
por desnaturalizacin de la membrana citoplasmtica y de los enzimas o de una combinacin in
situ con los constituyentes citoplasmticos pero sin fuga celular. La actividad bactericida se
extiende generalmente a las Gram negativas y Gram positivas sin gran diferenciacin. La
actividad fungicida es pequea. Los fenoles no son considerados como virucas y esporicdas.
(Leveau y Bouix, 2002).
36
El fenol y los derivados fenlicos, en la actualidad, se reservan para la desinfeccin de

superficies (suelos, paredes) y material no poroso. Entre las desventajas de su utilizacin
destaca la irritacin de la piel y de las mucosas y el descenso de la eficacia en presencia de
materia orgnica. No se aconseja su utilizacin para la desinfeccin de superficies en las
habitaciones de pediatra, ni tampoco en la desinfeccin de cunas e incubadoras. (Quiles y
Hevia, 2007).
Los compuestos fenlicos, un grupo amplio de productos, figuran entre los germicidas ms
antiguos. Sin embargo, los resultados de estudios de inocuidad ms recientes recomiendan
restringir su uso. Tienen actividad contra las formas vegetativas de las bacterias y contra los
virus con envoltura lipdica y, cuando estn debidamente formulados, tambin son activos
contra las micobacterias. No tienen actividad contra las esporas y su actividad contra los virus
sin envoltura lipdica es variable. Muchos productos fenlicos se utilizan para descontaminar
superficies ambientales, y algunos (por ejemplo, el triclosn y el cloroxilenol) se encuentran
entre los antispticos ms usados. (OMS, 2005)
El triclosn es comn en los productos para el lavado de manos. Tiene actividad principalmente
contra las formas vegetativas de las bacterias y es inocuo para la piel y las mucosas. Sin
embargo, en estudios de laboratorio se ha observado que las bacterias con resistencia inducida
a bajas concentraciones de triclosn tambin muestran resistencia a ciertos tipos de
antibiticos. Se desconoce el alcance de esta observacin sobre el terreno. Algunos
compuestos fenlicos son sensibles a la dureza del agua y pueden quedar inactivados con
aguas duras; por esa razn, deben diluirse con agua destilada o desionizada. (OMS, 2005)
2.3.9.4. Alcoholes
Dos alcoholes se utilizan principalmente: el etanol y el isopropanol. Estos dos compuestos son
elegidos por su poder disolvente y carcter voltil ms que por actividad antimicrobiana. Los
alcoholes poseen una rpida accin bactericida, actuando sobre bacterias Gram negativas y
Gram positivas, y virus con envuelta, siendo por tanto considerados como desinfectantes de
bajo nivel. La concentracin bactericida ptima se sita en el 70%. Ello se debe a que estos
compuestos acuosos penetran mejor en las clulas y bacterias, permitiendo as la
desnaturalizacin de las protenas. (Leveau y Bouix, 2002).
Los alcoholes se inactivan en presencia de materia orgnica. Se utilizan muy frecuentemente
para la desinfeccin de la piel, y resultan muy eficaces para este fin cuando a continuacin se
aplica un yodforo. Su aplicacin est tambin indicada en la desinfeccin de material no
crtico como termmetros y fonendoscopios. La toxicidad del alcohol isoproplico es dos veces
37
superior a la del etanol. Su utilizacin puede provocar irritacin y sequedad de la piel; al

volatilizarse puede producir irritacin de la mucosa nasal y lagrimal). (Leveau y Bouix, 2002).
Ventajas
Poco toxico
Accin rpida
Secado rpido
No corrosivo.
Desventajas
Eficacia antimicrobiana pequea
costo elevado. (Leveau y Bouix, 2002).
2.3.9.5. Halgenos
Todos los halgenos (F, Cl, I, y Br) son desinfectantes: sus propiedades germicidas y de
penetracin en general aumentan con su peso molecular. El yodo es el halgeno de mayor
peso atmico y que por su bajo poder de oxidacin resulta ms estable.
Los productos oxidantes halogenados, bien sean el cloro y derivados, o el yodo y derivados
(yodoformos), son uno de los grupos de desinfectantes ms utilizados en la actualidad,
generalmente como desinfectantes de superficies los primeros y como antispticos de piel y
mucosas los segundos, aunque tanto unos como los otros pueden tener efectos txicos.
(Galn, 2003).
Por su capacidad como fuertes oxidantes, todos los halgenos tienen accin desinfectante,
aunque en su forma elemental solo tiene importancia el cloro y el yodo. (Galn, 2003).
2.3.9.6. Compuestos Yodados (Yodforos)

Un yodforo es una combinacin de yodo y una sustancia solubilizante, formando as un
complejo que libera lentamente yodo orgnico. El yodo se puede hacer soluble en agua
mediante formacin de complejos con agentes tensioactivos no inicos adecuados, como por
ejemplo, xidos condensados de nonifenol etileno. Estos complejos se conocen como
yodforos. Las condiciones cidas aumentan su actividad bactericida. La materia orgnica
inactiva el yodo de las soluciones yodoforas y el color mbar se desvanece (GTC 85, 2003).
El yodo liberado progresivamente, va actuar por oxidacin sobre las protenas enzimticas y
estructurales. Los yodforos son considerados como los agentes antimicrobinos eficaces. El
efecto bactericida se obtiene por una concentracin media de 30mg/l de yodo. Los mohos y
38
levaduras son bastantes sensibles a los derivados yodados. La actividad esporicda solo se
obtiene con concentraciones muy elevadas. (Leveau y Bouix, 2002).
Ventajas
Bactericida-fungicida-virucida
activos a bajas temperaturas.
Poco influenciado por el pH
Desventajas
riesgo de corrosin
sensible a los materiales orgnicos
corrosivo de metales.
2.3.9.7. Compuestos que liberan cloro

Los compuestos liberadores de cloro son desinfectantes potente espectro de actividad amplia.
Son sensibles tanto las bacterias Gram negativas como las Gram positiva, adems presentan
cierta actividad frente a esporas bacterianas. (Arias, 2006).
Los agentes qumicos orgnicos que liberan cloro, por ejemplo el diclorodimetil hidantoina y el
dicloroisocianurato de sodio, son ms comnmente formulados con detergentes y se
comercializan en polvo. (GTC 85, 2003).
El cloro disponible del hipoclorito de sodio y otros agentes qumicos que liberan cloro
reaccionan rpidamente con la materia orgnica y se inactivan por esta, pero en condiciones
de uso normal, el volumen de solucin y la concentracin son tales que la cantidad de suciedad
presente en el equipo no afectan considerablemente la eficacia de la solucin desinfectante.
Los agentes qumicos que liberan cloro son corrosivos para la mayora de los metales, incluido
el acero inoxidable. A una baja concentracin en condiciones alcalinas, a baja temperatura y
poco tiempo de contacto los peligros de corrosin se minimizan y la accin desinfectante
permanece eficaz. (GTC 85, 2003).
Los hipocloritos son los desinfectantes ms utilizados de este grupo y estn disponibles
comercialmente
en
forma
lquida
(hipoclorito
sdico)
slida
(hipoclorito
clcico,
dicloroisocianurato sdico).
El hipoclorito de sodio es relativamente inestable a la temperatura y a luz. Los derivados
clorados, en forma de polvo, son ms estables pero sensibles a la humedad. El cloro gaseoso,
39
el hipoclorito de sodio y los derivados clorados dan cido hipocloroso (HCLO) en presencia de
agua. (Leveau y Bouix, 2002).
El mecanismo de accin sobre los microorganismos, se basa en el poder oxidante del cido
hipocloroso (forma Activa) que entraa una destruccin de las protenas estructurales y un
bloqueo de la actividad enzimtico.
Los generadores de cido hipocloroso son muy buenos bactericidas y virucidas. La actividad
fungicida es poco marcada. El potencial de actividad es muy dependiente de la proporcin de
materia orgnica. Los derivados clorados son principalmente utilizados en tratamiento de
superficies y circuitos de tuberas, despus de la limpieza. (Leveau y Bouix, 2002).
Ventajas
Son eficaces contra una amplia variedad de bacterias, hongos y virus
Poco costoso
Se presentan en forma liquida o granulada
Se puede aadir a agua de bebida.
Buena enjuagabilidad.
Poco corrosivo
No son afectados por las sales de las guas duras (salvo si se registran ligeras
variaciones debidas al pH)
Acta rpidamente
No se origina subproductos txicos
Desventajas
Son inestables frente al calor
Son muy corrosivos para el acero inoxidable y otros metales
Riesgos de corrosin
Sensibles a la materia orgnica
Inactivado por la luz solar
Inactivo en agua dura
Se volatiliza rpidamente
Ineficaz frente a esporas
Inestabilidad ligada a la temperatura. (Leveau y Bouix, 2002).
2.3.9.8. Biguanidas
Son derivados de la guanidina, una sustancia que se encuentra en forma natural en vegetales y
cereales. El grupo incluye un pequeo nmero de materiales que han sido identificados como
poseedores de propiedades bactericidas. Estos son bis-biguanidas o biguanidas polimricas.
40
Solamente las biguanidas polimricas tienen uso significativo en la desinfeccin en plantas de

alimentos. (GTC 85, 2003)
Estos materiales no son tensioactivos y son esencialmente no espumantes, no corrosivos y no
irritantes. Las biguanidas se desactivan en contacto con materiales aninicas y con el cloro.
Tienen una excelente estabilidad cuando se almacenan en sus recipientes originales. Son
efectivos a un rango amplio de pH, pero se pueden precipitar sobre pH de 10 y se puede
desactivar de modo reversible por debajo de un pH 3. (GTC 85, 2003).
Las biguanidas son absorbidas por la pared microbiana provocando lesiones irreversibles por
fenmenos de coagulacin con inhibicin enzimtico y destruccin membranar (Leveau y
Bouix, 2002).
Ventajas
Bactericida
poco txicos
no espumantes
no corrosivos
buena tolerancia cutnea.
Desventajas:
no virucda
2.3.9.9. Agentes cidos Desinfectantes

Los agentes cidos de desinfeccin son formulaciones que contiene agentes tensioactivos
aninicos y catinicos o anfteros y cidos orgnicos, usualmente cido fosfrico. Se pueden
usar como desinfectantes en presencia de un bajo nivel de suciedad. En concentraciones de
uso normal dan valores de pH aproximadamente de 2. Por ser de alta acidez, eliminaran y
evitaran la formacin de incrustaciones, pero son corrosivos para los metales diferentes a
lacero inoxidable. Forman espuma cuando se recirculan en los sistemas de tuberas. (GTC 85,
2003).
Estos desinfectantes matan los microorganismos penetrando en su interior y rompiendo la
membrana celular; disocian luego la molcula acida y, como consecuencia, acidifican el
interior. Los desinfectantes cidos son de accin rpida y eficaz contra levaduras y virus.
41
2.3.9.10. cidos Orgnicos

Una serie de cidos orgnicos cuentan con propiedades antimicrobianas, preferiblemente
microbiostaticas, por ejemplo cido frmico, cido benzoico, etc. Mediante halogenizacin
pueden aumentarse los efectos hasta alcanzar un nivel microbicida adecuado para la
desinfeccin, las propiedades desarrolladas en su empleo obedecen mayormente a su
contenido cido, aunque se ha descrito una considerable resistencia de mohos y levaduras a
los mismos. (Galn, 2003).
2.3.9.11. Compuestos de Amonio Cuaternario (QACS)

Los compuestos de amonio cuaternario, conocidos como cuaternarios, QAC son
esencialmente sales de amonio con algunos o todos los tomos del non (NH4) sustituidos por
grupos alquilo o arilo (Arias, 2006).
El anin generalmente es un cloruro o un bromuro. El catin es parte activa de la molcula,
mientras que el anin es solo importante en lo que concierne a la solubilidad de QAC. Las
sustituciones
posiblemente son tericamente muchas, pero para conseguir la mxima
actividad de la cadena alquilita (catin) debe contener entre 8 y 18 tomos de carbono

mximos. (Arias, 2006).
Los QAC son generalmente inodoros, incoloros, no irritantes y desodorizantes. Son
desinfectantes de amplio espectro y tiene accin detergente. Los QAC se inactivan en
presencia de jabones, en forma concentrada son muy estables y tiene una vida til larga, su
manipulacin es segura pero pueden llegar a causar irritacin en pieles sensibles en
concentraciones de uso. (GTC 85, 2003).
Los compuestos de amonio cuaternario
se adsorben a nivel de los grupos cargados
negativamente de las estructuras de la superficie celular. La desorganizacin de la membrana

da lugar a una modificacin de la permeabilidad y una desnaturalizacin de las protenas de
estructura y enzimas. El espectro de actividad de estos productos es bastante elevado, son en
general buenos bactericidas, fungicidas y algicidas, pero actividad escasa frente a virus y
esporas. (Leveau y Bouix, 2002).
Ventajas
Bactericida-fungicida
Poco toxico
Estables (pH-temperatura)
No corrosivo
Costo moderado
42
Desventajas
Espumante
No virucidas
No activo frente a esporas
Inactivo en presencia de matara orgnica.
Inactivo frente a aguas duras. (Leveau y Bouix, 2002).
2.3.9.12. Agentes Desinfectantes Tensioactivos Anfotricos

Los agentes tensioactivos anfteros tiene propiedades detergentes y algunos tienen
propiedades bactericidas. (GTC 85, 2003). Estos compuestos se presentan como cationes o
aniones, dependiendo del pH de la solucin y en forma catinica como son bactericidas
activos. (Arias, 2006).
El mecanismo de accin de los compuestos anfteros, se basa en la alteracin rpida de la
estructura con perforaciones membrana res y fuga celular. Las actividades bactericidas y
fungicidas se obtienen con concentraciones de principios activos dbiles, la actividad virucida
es poco conocida. Los anfteros son considerados como poco txicos, son poco afectados por
la materia orgnica y no son corrosivos. (Leveau y Bouix, 2002).
2.3.9.13. Detergentes-Desinfectantes
Los detergentes-desinfectantes, conocidos popularmente como detergentes antimicrobianos
son esencialmente combinaciones de ingredientes compatibles y complementarios; contiene
adems de un detergente, un desinfectantes de forma que la limpieza y desinfeccin se lleva a
cabo en una sola operacin. En la prctica, las formulaciones de detergentes/desinfectantes
suelen contener otros componentes, como agentes secuestrantes y tampones, siendo
frecuentes el incluir dos surfactantes en una sola formulacin, siempre que sean compatibles.
Cualquiera que sea su frmula, idealmente un buen detergente-desinfectante debe ser eficaz
frente a una gran variedad de suciedades y amplio espectro de microorganismos. (Forsythe y
Hayes, 2002).
En la tabla N4, se puede observar la actividad de los desinfectantes ms comunes.
4 - Excelente
3 Alta
43
2 Media
1 Baja
0 Ninguna
Tabla N4. Efectividad de Desinfectantes Qumicos
Bacteria
Hongos
Desinfectantes
Gram (+)
Gram (-)
Levadura
Moho
Cloro Liquido
Hipoclorito Orgnico
Yodforos
Amonio Cuaternario
Desinfectantes cidos
cido Percetico
Biguanidas
Fuente: GTC 85, 2003
2.4. DESINFECTANTE DE ALTO NIVEL DE STERIS A BASDE DE PEROXIDO DE

HIDROGENO
El Esterilizante qumico desinfectante de alto nivel de STERIS, produce una reaccin qumica
oxidativa, que ofrece una alternativa segura a los riesgos asociados a los aldehdos. Este
desinfectante es
un microbicida de amplio espectro fabricado con Perxido de hidrgeno
acelerado (AHP, Accelerated Hydrogen Peroxide), una frmula patentada, que combina una
baja concentracin de perxido de hidrgeno y otros ingredientes inertes, lo que acelera su
eficacia; est diseado para la desinfeccin de alto nivel de dispositivos mdicos de riesgo
medio sensibles al calor, incluido el procedimiento manual o automtico de los endoscopios
flexibles. (www.steris.com)
Caractersticas del desinfectante
Accin rpida desinfeccin de alto nivel
Cinco minutos de tiempo de contacto a 20C (68F) para alto nivel de desinfeccin
Desinfectante qumico oxidativo
La concentracin de perxido de hidrogeno al 2% es reducida en comparacin con

otros qumico basados en perxido de hidrogeno al 7.5%
No requiere activacin
44
Fcil enjuague de los instrumentos, no deja residuos txicos
No genera carbono orgnicos voltiles (COV) (aerosoles)
Es inodoro
Tiene baja formacin de espuma, es tensioactivo y biodegradable
No es costoso
Beneficios
Amplio espectro de actividad: capacidad tuberculicida, fungicida, bactericida y virusida
Actividad microbiana ms rpida que el glutaraldehido y ortoparaldehido (OPA)
Seguro para los instrumentos, mejoramiento de la compatibilidad con endoscopios

sensibles.
Seguridad para el usuario, reduce el tiempo y las posibilidades de errores en la mezcla

o dilucin.
Seguro para los pacientes y el personal
Seguro para el medio ambiente y para los equipos
Estable en presencia de fluidos corporales del paciente
3. TIPOS DE MICROORGANISMOS
Los microorganismos son la forma de vida ms difundida en la naturaleza. Su presencia tiene
efectos positivos y negativos para la vida del hombre, consecuentemente su control es
fundamental para evitar que estos efectos produzcan consecuencias indeseables, para la
salud, el medio ambiente y los bienes que hacen a la calidad de vida del ser humano. El
mencionado control se puede realizar por medios fsicos o qumicos, los cuales deben ser
especficos para la accin deseada y no deben producir efectos colaterales indeseados.
Los microorganismos se clasifican en: bacterias, mohos (hongos), levaduras, parsitos y virus.
Bacterias
Las
bacterias
son
microorganismos
unicelulares
(clulas
procariticas)
que
tienen
aproximadamente 1 m de dimetro, con variacin morfolgica desde formas de vara cortas y

estiradas (bacilos) a formas esfricas u ovoides. Algunas especies de bacterias tambin
producen esporas, algunas de las cuales son resistentes al calor, productos qumicos y otras
condiciones medioambientales. Las bacterias son clulas envueltas por una membrana
citoplasmtica y una pared externa de estructura caracterstica; poseen el citoplasma repleto
45
de ribosomas y el material gentico est libre sin membrana nuclear. Algunas son mviles por
poseer flagelos. (Marriot, 2003)
Mohos
Los mohos son microorganismos pluricelulares (clulas eucariotas) con morfologa de micelio
filamentosa. Consisten en una serie de clulas tubulares que oscilan entre 30 a 100 micras de
dimetro, llamadas hifas, que forman una masa microscpica llamada micelio. Los mohos se
caracterizan por la variedad de colores en que se manifiestan y son generalmente reconocidos
por su apariencia suave o rizada, como algodn. Pueden desarrollarse numerosas y diminutas
esporas que se encuentran el aire y que pueden esparcirse con las corrientes de aire. Las
esporas producen el crecimiento de un nuevo hongo si son trasladadas a un lugar que reuna
las condiciones adecuadas para su germinacin. Los mohos generalmente resisten mayores
variaciones en el pH que las bacterias y las levaduras y pueden tolerar con frecuencia mayores
variaciones de temperatura. (Marriot, 2003).
Los mohos se reproducen sexual y asexualmente (esporas), la cual determina sus variadas
especies, obtienen su alimento de materia orgnica que proviene, en su gran mayora de los
alimentos. (GTC 85, 2003).
Virus
Los virus son microorganismos infecciosos con dimensiones que oscilan de 20 300 nm, o sea
que son alrededor de 1/100 a 1/10 menores que una bacteria. La mayora de los virus pueden
verse solo a travs del microscopio electrnico. Una partcula de virus consiste en una
molcula simple de DNA o RNA, rodeada por una capa de protena. Los virus nos se pueden
reproducir fuera de otro organismo y son parsitos obligados de todos los organismos vivos,
como bacterias, hongos, algas, protozoos, plantas superiores y animales vertebrados e
invertebrados. (Marriot, 2003).
Levaduras
Las levaduras son generalmente unicelulares. Difieren de las bacterias por el gran tamao de
sus clulas y su morfologa, y porque producen brotes durante el proceso de reproduccin por
gemacin. Las levaduras pueden diseminarse a travs del aire u otros medios y pueden
ponerse en las superficies de los alimentos. Las colonias de levaduras son generalmente de
apariencia hmeda o viscosa y de una blancura cremosa. Estos microorganismos se
desarrollan mejor en una zona de acidez media, con un pH entre 4.0 y 4.5. (Marriot, 2003).
46
3.1. FACTORES QUE INFLUYEN EN EL CRECIMIENTO DE LOS MICROORGANISMOS.

Las bacterias, los hongos, las levaduras, parsitos y virus, requieren de ciertos factores para su
crecimiento como son:
a. Nutrientes: todos los microorganismos requieren de nutrientes como fuentes de energa para
sobrevivir y reproducirse. La mayora de los alimentos proveen nutrientes suficientes, como
carbohidratos, lpidos, protenas, ppticos y vitaminas.
b. humedad (Aw): el agua disponible en un alimento es parte vital, influyendo selectivamente en
el crecimiento de los microorganismos. Cada microorganismo tiene su propio rango de
crecimiento respecto al AW, bajo unas condiciones ambientales dadas. Un Aw desfavorable se
traduce en una reduccin del ritmo de crecimiento y disminucin en el nmero de clulas.
c. Aire: la mayora de los microorganismos requieren oxigeno (aerobios) para su crecimiento y
supervivencia. Otros, por el contrario, no requieren de la presencia de oxigeno para sobrevivir.
En la primera clase se encuentran las bacterias del genero Bacillus;
a la ultima clases
pertenecen bacterias anaerobias como las del genero Clostridium.

d. Temperatura: Todos los microorganismos tiene temperaturas ideales para su crecimiento y
reproduccin. En presencia de bajas temperaturas o temperaturas de refrigeracin pueden
sobrevivir pero, limitan su crecimiento. En algunos casos las temperaturas altas eliminaran la
mayora de los microorganismos. Se ha sealado que la temperatura mas baja a la cual crecen
los microorganismo es la de -34 C ; las mas elevada se encuentra mas o menos, por encima
de los 90C.
e. pH: como la temperatura, la mayora de los microorganismos tiene un rango ideal de pH
para su proliferacin. Algunos pueden sobrevivir en los extremos, mientras que otros no. La
resistencia de las clulas vegetativas al calor disminuye bajo condiciones cidas o alcalinas.
f. Tiempo: el propsito de la vida para todos los microorganismos es reproducirse. La tasa de
reproduccin de los microorganismos esta en funcin del tiempo, y variara segn el
microorganismo y las condiciones ambientales. (GTC 85, 2003)
3.2. Factores que limitan el crecimiento de los microorganismos.

Los factores anteriormente mencionados como la temperatura, el pH, el Aw y el aire, son
factores que a su vez limitan el crecimiento de los microorganismos. (GTC 85, 2003).
47
3.3. Microorganismos Evaluados
3.3.1. Staphylococcus aureus

Es sin duda el patgeno humano ms importante entre los estafilococos. Se le encuentran en
ambientes extremos y en las narinas anteriores del 20 al 40 % de los adultos. Otros sitios de
colonizacin son los pliegues cutneos, el perin, las axilas y la vagina. Aunque este
microorganismo suele formar parte de la microflora humana normal, puede producir infecciones
oportunistas importantes en las condiciones apropiadas. (Koneman, 1992)
Los Staphylococcus
se caracterizan por ser morfolgicamente
Cocos Gram positivos,
anaerobios facultativos no esporulados coagulasa y desoxiribonuclesa (DNAsa) positivos.

La pared de las Gram positivas esta formada fundamentalmente por un solo tipo de molculas
y es ms ancha comparndolas con las Gram negativas.
El peptidoglicano representa hasta el 90% de la pared, aunque los cidos teicoicos tambin
estn presentes en grandes cantidades que son polmeros de la pared, de la membrana o de
la capsula que contiene unidades de glicerol o ribitolfosfato. Debido a su carga negativa neta
de la superficie de las clulas y puede intervenir en el paso de iones a travs de la pared
celular. Algunos
de estos cidos contienen glicerol que estn unidos a los lpidos de la
membrana debido a esta asociacin se denominan cidos lipoteioicos. (Morales, 2007)
3.3.2. Pseudomonas aeruginosa

Son bacilos Gram negativos, mviles con flagelos polares, aerobios estrictos, metabolismo
oxidativo no fermentativo. La especie medicamente mas importantes de este genero es
Pseudomona aeruginosa, crecen entre 10 y 42. La P. aeruginosa, elabora un gran numero de
molculas celulares que secreta, las cuales participan en su patogenia produciendo
enfermedades como fibrosis qustica. Estos microorganismos de creciemineto rapido pueden
sobrevivir en ambientes marginales; por consiguiente son difciles de radicar de reas
contaminadas. Por ejemplo; salas de los hospitales, quirfanos, dispositivos para el sostn
respiratorio, incluso pueden sobrevivir en soluciones antispticas para desinfectar los
instrumentos utilizados en cirugas odontolgicas. (Cuesta y Castillo, 2004).
Las Pseudomonas,
se puede encuentran
suelo, agua y de aqu pasan a las plantas o
animales. En el hombre son oportunistas. Los alimentos implicados: vegetales crudos, agua,
leche no pasteurizada. Estos microorganismos no realizan fermentaciones y obtiene su energa
de la fermentacin de azucares; aun as muchas cepas pueden crecer en forma anaerbica
utilizando nitrato como aceptor terminal de electrones. (Cuesta y Castillo 2004).
48
Pseudomonas aeruginosa es el seudomonal que con mayor frecuencia se recupera de las

muestras clnicas. La infeccin es especialmente prevalente entre pacientes con quemaduras,
fibrosis qusticas, leucemia aguda, trasplantes de rganos y adiccin a drogas intravenosas.
Las infecciones se observan habitualmente en los sitios en los que tienden a acumularse
humedad: traqueostomas, catteres permanentes, quemaduras, odo externo y heridas
cutneas exudativas. (Koneman, 1992)
3.3.3. Salmonella choleraesuis

Las salmonellas son el grupo ms complejo
de Enterobacteriaceae, con mas de 2200
serotipos descritos las cuales poseen antgenos somticos (O, que son lipolisacridos, y
flagelares (H) que son protenas. Desde el punto de vista bioqumico, en general son lactosa y
sacarosa negativas. Samonella choleraesuis se caracteriza por presentar el siguiente cuadro
clnico de infeccin: bacteremia y septicemia sin sntomas gastrointestinales siendo
particularmente invasiva caracterizada por picos de fiebre alta y cultivos de sangre positivos.
(Koneman, 1992)
3.3.4. Bacillus subtilis

Bacteria Gram positiva, catalasa positiva encontrada comnmente en el suelo. Constituye al
grupo de patgenos oportunistas potenciales. Sus esporas pueden sobrevivir al tratamiento
con desinfectantes comunes
y muchas resisten al calor. Estos microorganismos suelen
desarrollarse bien en agar sangre, donde producen colonias grandes, extendidas
blanco,
grisasaceas, con bordes irregulares. Muchos aislamientos clnicos son betahemoliticos,

caracterstica til para diferenciar las diferentes especies de Bacillus.
Bacillus subtilis se caracteriza por ser un contaminante saprofito o integrante de la flora normal
y por que sus esporas residen en equipos e instrumentos de pacientes enfermos.
Las esporas son estructuras complejas formadas por diversas capas, algunas de las cuales le
confieren gran resistencia. En el protocolo esta DNA, RNA, acido murmico. La membrana
interna llega a ser la membrana citoplasmtica en la germinacin. (Morales, 2007), (Koneman,
1992).
49
4. Limpieza y desinfeccin del material hospitalario

4.1. Normas generales
Limpiar el material con detergente tan pronto se haya utilizado para evitar que los
restos de materia orgnica se sequen y adhieran al instrumental. Es preferible emplear
agua caliente. Utilizar detergente enzimtico en los materiales difciles de acceder para
su limpieza.
La desinfeccin previa a la limpieza es innecesaria e incrementa los costos.
Deber disponerse de cepillos adecuados para cada tipo de material a efectos de

asegurar una buena limpieza, incluso a los lugares menos accesibles. Estos cepillos
tambin deben limpiarse y desinfectarse tras utilizarlos. Es necesario controlar que
estn en buen estado.
Es importante controlar que el material se encuentre en buenas condiciones. En los

aparatos de fibra ptica, debe comprobarse que no existan fugas.
El material ha de manipularse con guantes no estriles.
Preparar la solucin desinfectante a la concentracin indicada por el fabricante.
Una vez lavado, sumergir el material en la solucin desinfectante, procurando que sta
llegue a todas las superficies, tanto internas como externas.
En una desinfeccin de alto nivel para material de riesgo (semicrtico), el tiempo de

actuacin del desinfectante ser de 20-30 minutos. Para la desinfeccin de bajo nivel,
es suficiente con 10 minutos.
El instrumental no debe almacenarse en las soluciones desinfectantes. Es muy

importante guardarlo bien seco y protegido del polvo.
No mezclar desinfectantes, excepto si se potencia la actividad.
Es preciso que los recipientes de las soluciones desinfectantes puedan taparse.

Protegerlos de la luz y de las fuentes de calor.
En las diluciones de los desinfectantes debe figurar la fecha de preparacin y la de

caducidad.
Como norma general, las soluciones desinfectantes no deben volver a utilizarse de un

da para otro, aunque pueden existir excepciones a esta norma (ej. glutaraldehdo).
Es preciso que los recipientes estn limpios para evitar que la solucin se contamine.
El personal que tiene a su cargo la desinfeccin del material ha de estar debidamente

formado y motivado, y debe conocer los distintos productos y procedimientos.
50
4.2. Clasificacin de los materiales segn el riesgo de infeccin

Los instrumentos mdicos son cada vez ms complejos. La necesidad de desinfeccin
depende del riesgo de infeccin involucrado con el uso de los diversos instrumentos en las
distintas maniobras semicrticas que involucran contacto directo con membranas mucosas y
cavidades internas del organismo. Para evitar el riesgo de infeccin nosocomial por mal uso de
equipos, este instrumental requiere de una previa desinfeccin clasificada como desinfeccin
de alto nivel y teniendo en cuenta la termo sensibilidad de este material, es que se recomienda
para estos procederes acudir al empleo de productos qumicos con actividad biocida, los cuales
han sido desarrollados con el objetivo de garantizar una rpida desinfeccin del material no
autoclavable. (Rodrguez et al, 2000).
Los productos sanitarios se dividen en diferentes categoras basado en el riesgo de infeccin
que intervienen en su utilizacin.
Spaulding1 en 1968 propuso una clasificacin como tal de los objetos para el cuidado del
paciente en tres categoras segn el riesgo de infeccin que podan comportar Crtica,
semicritica, y no critica. Esta terminologa es la utilizada por los CDC (Centers for Disease
Control and Prevention). (Omidbakhsh, 2006). Spaulding considera que los instrumentos y el
equipo debe ser limpiado y reprocesado de acuerdo a la nivel de riesgo asociado a su uso. En
esta clasificacin, los instrumentos fueron:
4.2.1. Material crtico o de alto riesgo

Son aquellos materiales que entran en contacto con la circulacin sangunea o reas del
cuerpo, como por ejemplo, los catteres cardiacos, implantes o instrumentos quirrgicos Estos
elementos son necesarios para ser reprocesado por la esterilizacin. Tambin puede definirse
de forma general como todo instrumento mdico que rompe la barrera mucosa: instrumentos
quirrgicos, agujas, catteres cardacos y urinarios, implantes, prtesis, etc. (Omidbakhsh,
2006).
4.2.2. Material semicrtico o de riesgo intermedio

Son aquellas que slo entran en contacto con mucosas membranas del cuerpo y no tienen
contacte con las partes
estriles
del cuerpo. Algunos ejemplos
son los
endoscopios
flexibles, tubos de aspiracin, broncoscopios, laringoscopios y aparatos de terapia respiratoria.

Estos instrumentos deben desinfectarse con productos de en un alto nivel. Glutaraldehdo,
orto-ftalaldehdo, cido peractico asociado a perxido de hidrgeno e hipoclorito sdico son
desinfectantes de alto nivel si se utilizan correctamente. Los dispositivos mdicos semicrtios,
51
tales como endoscopios sensibles al calor necesitan ser qumicamente desinfectados

manualmente con productos de alto nivel. (Omidbakhsh, 2006).
4.2.3. Material no crtico o de bajo riesgo

Material que entra en contacto con la piel intacta. sta acta como barrera efectiva para la
mayora de microorganismos. Se incluyen en este grupo, termmetros, aparatos de presin,
fonendoscopios, muletas, estetoscopio etc. Estos instrumentos tienen que ser
de bajo nivel desinfectados o simplemente lavarse y desinfectarse en la mayora de los casos.
(Omidbakhsh, 2006).
Tabla N 5. Niveles de desinfeccin o esterilizacin para materiales y objetos de uso

hospitalario.
Tipo
Instrumentos o equipos
Procedimiento
Desinfectantes
- Catteres endovenosos y
- Algunos de estos
cardacos
objetos se adquieren
- Instrumental quirrgico y
estriles y son de un
dental
solo uso. Si esto no es
- Implantes
posible
- Sondas urinarias
esterilizar
Material Critico
- Endoscopios rgidos que
hmedo o bien con
(Sistema
entran en tejidos
xido de etileno.
vascular
estriles
tejidos
estriles)
(artroscopio,
se
por
deben
calor
Esterilizacin
laparoscopios)
-
Accesorios
de
endoscopios rgidos y de
fibra
(pinzas de biopsia, cepillos,
cnulas)
- Agujas
- Endoscopios rgidos que
penetran en
0,2%
cido
Material
cavidades
semicrtico
(broncoscopios,
(Toca
laringoscopios)
Desinfeccin de
fenolato 1:8
membranas
- Endoscopios flexibles de
alto nivel
mucosas)
fibra ptica
no
estriles
peractico
- Glutaraldehdo al 2%
-
Glutaraldehdo
Perxido
de
hidrgeno al 6%
52
Mquinas
de
dilisis
(circuito interno)
- Otoscopios, sinuscopios,
tonmetros,
espculos
vaginales,
termmetros rectales
-
Equipos
de
terapia
respiratoria
- Termmetros
- Alcohol de 70%
Material
- Orinales
Desinfeccin de
no crtico
- Fonendoscopios
nivel intermedio o
aldehdos al 1%
- Desfibriladores
de bajo nivel
- Hipoclorito sdico al
Toca
intacta)
la
piel
Asociacin
- Esfigmomanmetros
0,1%
- Superficies
de
Amonios
cuaternarios
- Iodforos
Fuente: (www. Academia.cat/societats/formcl/libre/hygiene/3pdf.
5. METODOS DE EVALUACION DE LOS DESINFECTANTES
5.1 Mtodo del coeficiente fenlico

Este mtodo es adecuado para probar desinfectantes que se mezclan con agua y ejercen
accin antimicrobiana en forma similar a l fenol. El microorganismo de prueba que se emplea
en este procedimiento es una cepa especifica de Salmonella typhi o Staphylococcus aureus.
A una serie de de diluciones del desinfectante (5ml por tubo) se agregan 0.5 ml de un cultivo
de caldo de microorganismo de prueba cultivado en 24 h. Al mismo tiempo se hacen diluciones
similares en las mismas cantidades
a una serie de diluciones de fenol. Todos los tubos
(desinfectante mas microorganismo mas fenol mas microorganismo 9 se ponen en bao

termostatado a 20 a intervalos de 5, 10 Y 15 minutos, se hacen subcultivos por medio de un
asa de siembra en medio de cultivo estril. Los tubos as sembrados se incuban y examinan
para determinar el desarrollo.
La mayor dilucin del desinfectante que mate a los microorganismos en 10 minutos pero no en
5 se divide por la dilucin mayor del fenol que de los mismos resultados. El nmero que se
obtiene de esta divisin es el coeficiente fenolito de la sustancia probada. (Morales, 2007)
53
5.2 Tcnica de dilucin en tubo

Primero se realizan diferentes diluciones del agente qumico. El mismo volumen de cada
dilucin se dispensa en tubos estriles (5ml). A cada tubo se le aade la misma cantidad de
una suspensin de microorganismos utilizado como prueba (0.5ml).
A determinados intervalos de tiempo se transfiere una alcuota de cada tubo a otra que
contenga medio de cultivo. Estos tubos son inoculados se incuban a temperatura optima del
microorganismo utilizado.
Luego se examina el crecimiento mediante la aparicin de turbidez el tubo de (crecimiento+) o
ausencia de turbidez en el tubo de (crecimiento -).
Aquellos que no presentan crecimientos indican la dilucin ala cual este agente qumico mata
al microorganismo utilizado como prueba cuando este microorganismos es expuesto al agente
qumico durante este periodo de tiempo (Morales, 2007).
5.3. Tcnica de la placa de agar

Se inocula una placa que contenga medio de cultivo slido con el microorganismo utilizado
como prueba. El agente qumico se coloca en el centro de la placa, bien dentro de un cilindro o
impregnado en un disco de papel. Al cabo de 24 a 48 horas se observan zonas de inhibicin
(crecimiento negativo) alrededor del agente qumico. Una modificacin de esta tcnica es la
incorporacin del agente qumico en el medio de cultivo antes de verterlo sobre la placa. Una
vez solidificado se inocula con el microorganismo utilizado como prueba, se incuba y se
examina el crecimiento microbiano. (Arias, 2006).
54
6. JUSTIFICACION
En todos los campos de la investigacin, en los que ha de trabajarse con productos qumicos,
se necesitan un desinfectante que impida de forma fiable la contaminacin microbiana y
mantenga limpias al mismo tiempo las superficies y los equipos de trabajo.
La limpieza y la desinfeccin, constituyen, junto con la esterilizacin, los elementos primarios y
ms eficaces para romper la cadena epidemiolgica de la infeccin. La infeccin hospitalaria
constituye un tema de extraordinaria actualidad por su frecuencia, gravedad y repercusin
econmica.
La desinfeccin de instrumentos y superficies de los puestos de trabajo, bsicamente en el
laboratorio donde se manipulan muestras biolgicas, constituye la forma ms adecuada de
evitar el posible contagio. Esto se consigue con una correcta utilizacin de desinfectantes.
La atencin hospitalaria plantea las mximas exigencias de higiene ya que los dispositivos
mdicos e instrumentos de ciruga como es el caso de los implantes, tienen contacto directos
con fluidos corporales. La mala higiene de estos instrumentos pueden ocasionar infecciones
irreversibles en pacientes inmunosuprimidos o en el peor de los casos la muerte; Justamente
por tal motivo se necesita utilizar un desinfectante que tenga una eficacia no solo eliminando de
forma rpida y fiable los microorganismos, evitando de tal forma el deterioro de la salud de los
pacientes sino eliminando tambin los olores desagradables. Permitiendo de esta manera
que no se generen enfermedades.
Para el desarrollo de esta investigacin se empleara el desinfectante de alto nivel de STERIS,
a base de perxido de hidrogeno, mediante ensayos in Vitro que garanticen su utilizacin en
instrumentos y dispositivos mdicos en el sector hospitalario.
55
7. OBJETIVOS
7.1. Objetivo General
Evaluar la eficacia del desinfectante de alto nivel de STERIS a base de perxido de hidrogeno
frente a los microorganismos descritos en la ficha tcnica con la finalidad
de verificar su
actividad en el en el sector Hospitalario.
7.1.
Objetivos Especficos
Determinar si los lineamientos establecidos por fabricante permiten prever la limpieza

y desinfeccin
segura de los dispositivos utilizados en los diferentes procesos
mdicos.
Proporcionar evidencia documentada y con un alto grado de confiabilidad que permita

establecer la accin antimicrobina del desinfectante de alto nivel de STERIS a base
de perxido de hidrogeno.
Evaluar in Vitro la actividad del desinfectante de alto nivel de STERIS a base de

perxido de hidrogeno, mediante la tcnica de la placa en agar.
56
8.
HIPOTESIS DEL ESTUDIO
H0: El porcentaje de inhibicin de las concentraciones evaluadas (0.02%, 0.04%, 0.08%, 1% y

2%) del desinfectante es mayor o igual al 75%.
Ho: 75%
Hi: El porcentaje de inhibicin de las concentraciones evaluadas (0.02%, 0.04%, 0.08%, 1% y

2%) del desinfectante es menor al 75%.
Hi: < 75%
57
9.
9.1.
MATERIALES Y METODOS
MATERIALES
Para la realizacin de este estudio se empleo el siguiente material, los cuales fueron
proporcionados por la Pontificia Universidad Javeriana.
Tabla N 6. Total de materiales empleados para los cuatro microorganismos en estudio.
MATERIALES
TOTAL
CAJAS DE PETRI GRANDES
126
TUBOS 16mm x 150 mm
46
TUBOS PARA PATRON MC FARLAND
PIPETAS 2ml
36
PROBETA GRADUADAS 100ml
FRASCOS AMBAR DE 100 ml
FIOLA DE 1000 ml
Tabla N7. Equipos de Laboratorio
EQUIPOS
CANTIDAD
Incubadora 25C+/-2C
Incubadora 35C+/- 2C
Autoclave
Balanza
Mechero
Microscopio
58
Tabla N 8. Reactivos y medios de cultivos.
REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO
CANTIDAD
Agar BHI
500 g
Caldo BHI
500 g
Yoduro de potasio
1 unidad
Cristales de fenol
1 unidad
Alcohol acetona
1 unidad
Fucsina
1 unidad
Cloruro de bario
1 ml
Acido sulfrico
10 ml
59
9.2. DISEO DE LA INVESTIGACION
Poblacin
de estudio: Desinfectante de alto nivel de STERIS, a base de perxido de
hidrogeno, empleado en la desinfeccin de equipos y dispositivos de uso hospitalario.

Muestreo: El estudio se llevo a cabo enfrentando
cepas de los siguientes microorganismos
(Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Salmonella choleraesuis, Bacillus subtilis)

a diferentes
concentraciones del desinfectante. Las cepas fueron proporcionadas por la
Pontificia universidad Javeriana.

Para realizar el
ensayo experimental, se evaluaron las diferentes concentraciones
del
desinfectante frente a las diferentes cepas microbianas. Se realizaran dos repeticiones para
cada microorganismo con las tres concentraciones del desinfectante. Las muestras se
analizaron en los laboratorios de la Pontificia universidad Javeriana. El tiempo de contacto del
desinfectante vs microorganismo, fue de 5, 10 y 15 minutos, para bacterias vegetativas y un
tiempo de 3,6 y 9 horas para la cepa esporulada, todo esto con el fin de
determinar si el
tiempo establecido por la casa productora es el adecuado o aumentar el mismo en el momento

de emplear el desinfectante sobre los equipos recomendados.
9.2.1. VARIABLES DEL ESTUDIO
Variables dependientes
Porcentaje de inhibicin microbiana de cada concentracin del desinfectante evaluada,
se calcular mediante el promedio de inhibicin de las replicas de cada
microorganismo evaluado.
Variables independientes
Las diferentes concentraciones a las cual se evaluara el agente desinfectante
(Concentracin recomendada, ala mitad y al doble).
Los diferentes tiempos de exposicin para las 3 cepas bacterianas 5,10 y 15; 3,6 y 9
horas para la cepa esporulada.
60
9.2.2. Anlisis de la Informacin

Modelo estadstico
Los resultados obtenidos a travs de este ensayo experimental se examinaron por medio de un
anlisis
descriptivo a travs de graficas, donde se observo el comportamiento de cada
microorganismo despus de ser expuesto a cada una de las concentraciones y tiempo

evaluado
del desinfectante, de esta forma se estableci la mejor concentracin de
desinfectante que actu frente a cada microorganismo.

Estandarizacin del Mtodo
Los datos obtenidos durante la investigacin, se analizaron estadsticamente mediante la
prueba de Mann-Whitney y Kruskal- Wallys, con un nivel de confianza del 75%, de esta forma
se determino la eficacia de las diferentes concentraciones del desinfectante,
frente a los
microorganismos mencionados en la ficha tcnica.
61
9.3. METODOS Y PROCEDIMIENTOS
Microorganismos: los microorganismos que se utilizaron fueron Bacillus subtilis ATCC 6633,
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Staphylococcus aureus beta-hemolitico CMDM 227 y
Salmonella choleraesuis- Kuznedorf CMDM 074, los cuales se preservaron en cajas petri a 5C
y les realizo una identificacin microscpica por medio de la coloracin de Gram.
Desinfectante: Fue suministrado por la casa comercial STERIS y preparado de acuerdo a las
recomendaciones de la misma.
Medios de cultivo. Caldo BHI para inocular los microorganismo y reproducirlo; agar agar BHI
utilizado como medio de cultivo para siembra y recuperacin de Salmonella choleraesuis,
Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa.
9.3.1. Preparacin del Tubo # 2 Patron de Mac Farland

Tabla N 9. Patrn de McFarlan.
Tubo N
BaCl2 1%
H2SO4 1%
Concentracin
ml x 108
0.2
9.8
Fuente (Escobar, 2002).

Se tomaron 0.2 ml de BaCl2 al 1% y 9.8 ml de al H2SO4 1% lo que corresponde a una
concentracin de 6x108, se agita el tubo y de esta manera se obtiene la muestra patrn de
turbidez. (Morales, 2007)
9.3.2. Preparacin del inoculo (Preparacin de los microorganismos para prueba).

Se prepararon las suspensiones de los microorganismos en solucin salina a 0.85% (p/v) en
un tubo de 13x100 mm, cuya concentracin final debe ser de 6x108 clulas / ml, la cual se
comparo con el tubo N 2 del patrn de Mac Farland. En un tubo de 16x150 mm con caldo BHI
se inoculo la suspensin de los microorganismos preparados en solucin salina El inoculo se
llevo a incubacin a una temperatura de 37C por 24 horas. Terminado el tiempo de incubacin
se verifico la pureza de las cepas mediante coloracin de Gram. En el caso de Bacillus subtilis
se incubo a una temperatura de 37C por 72 horas. A partir de este inoculo se realizaron las
pruebas para la evaluacin del desinfectante.
62
9.3.3. Preparacin de las concentraciones del desinfectante

Para realizar el ensayo in vitro de la eficacia del desinfectante de alto nivel de STERIS a base
de perxido de hidrogeno frentes las cepas bacterianas mencionadas en la ficha tcnica, se
prepararon las siguientes concentraciones:
El siguiente cuadro muestra la relacin entre las concentraciones ensayadas del desinfectante
de alto nivel de Steris a base de perxido de hidrogeno y el factor de dilucin para la
preparacin y aplicacin de cada una de ellos.
Tabla N 10. Preparacin de las concentraciones del desinfectante de alto nivel de ATERIS a
base de perxido de hidrogeno.
CONCENTRACIONES DEL
DESINFECTANTE
0.02%
0.04%
0.08%
1%
2%
FACTOR DE DILUCIN
1/100: Se prepara 1 ml de la solucin desinfectante en 100 ml
de agua.
de agua
de agua
50/100: Se prepara 50 ml de la solucin desinfectante en 100
ml de agua
Se debe usar el desinfectante puro.
9.4. EVALUACIN DEL DESINFECTANTE DE ALTO NIVEL DE STERIS
A BASE DE
PEROXIDO DE HIDROGENO.
Se sometieron los microorganismos prueba frente al desinfectante que se quiere evaluar a

diferentes concentraciones y diferentes tiempos, segn (Carrascal, 2003).
Se preparararon previamente una serie de 5 concentraciones del desinfectante de la siguiente
manera:
a. La dosis recomendada por la casa comercial
b. A la mitad de la dosis recomendada
c. tres concentraciones adicionales de prueba.
63
Se tomaron 2 ml de cada concentracin del desinfectante y se llevaron a tubos de

ensayo.
Se inocularon 0.2 ml de las suspensiones de los microorganismos preparadas segn

escala 2 de Mac Farland) a cada uno de los tubos con las
concentraciones del
desinfectante.
Se agitaron los tubos y a partir de este momento se empezara a contabilizar 5, 10 y 15

minutos.
Posteriormente segn se fue cumpliendo el tiempo se sembraron en cajas con medio

de cultivo BHI.
Las cajas fueron divididas en cuatro segmentos, donde por medio de estras se sembr
cada una de las concentraciones del desinfectante con el microorganismo. Se repiti el
mismo procedimiento con cada cepa.
Se incubaron a 35C las cajas de agar BHI por 48 horas. (Carrascal et al, 2003),
(Morales, 2007).
9.4.1. Lectura e Interpretacin

Terminado
el tiempo de incubacin se realizo la lectura de las muestras
observando el
nmero de estras que presentaron crecimiento del microorganismo, se tuvieron en cuenta los
siguientes criterios:
Cada estra tiene un valor de 25% para un total de 100% (4 estras) se
lee por
inhibicin del crecimiento del microorganismo, para considerar valida una estra esta
debe tener mas de 50% de su longitud.
Se escoge aquella dilucin
que en menor tiempo sea capaz de inhibir al
microorganismo de estudio en un 100%.
Control: todas las estras deben mostrar crecimiento (si este control no presenta
crecimiento en todas las estras se debe repetir todo el procedimiento). (Carrascal et al,
2003)
64
10.
RESULTADOS
A continuacin por medio de tablas y graficas se presentan los resultados correspondientes al

porcentaje de inhibicin de cada uno de los microorganismos evaluados en este estudio.
Sthaphylococcus aureus
Tabla N11. Porcentaje de inhibicin de Sthaphylococcus aureus, segn la concentracin y el

tiempo de contacto.
Sthaphylococcus aureus
IN VITRO
CONCENTRACION DEL
DESINFECTANTE
% INHIBICION
TIEMPO DE CONTACTO EN MINUTOS
5 MINUTOS
10 MINUTOS
15 MINUTOS
0.02%
25
0.04%
43.75
100
0.08%
100
100
100
1%
100
100
100
2%
100
100
100
NOTA: Los resultados corresponden al promedio de las replicas y estn expresados en

porcentaje.
65
PORCENTAJE DE INHIBICION DEL DESINFECTANTE DE ALTO NIVEL DE STERIS A

BASE DE PEROXIDO DE HIDROGENO ANTE Sthaphylococcus aureus .
100%
90%
80%
%DEINHIBICION
70%
0.02%
60%
0.04%
50%
0.08%
40%
1%
30%
2%
20%
10%
0%
5min
10min
15min
TIEMPOENMINUTOS
Figura N 1. Comportamiento del desinfectante de alto nivel de STERIS a base de perxido de

hidrogeno ante Sthaphylococcus aureus.
66
Pseudomonas aeruginosa
Tabla N12. Porcentaje de inhibicin de Pseudomonas aeruginosa segn la concentracin y

el tiempo de contacto.
IN VITRO
CONCENTRACION DEL
DESINFECTANTE
Pseudomonasa aeruginosa
% INHIBICION
5 MINUTOS
10 MINUTOS
15 MINUTOS
0.02%
28.12
0.04%
87.5
100
100
0.08%
100
100
100
1%
100
100
100
2%
100
100
100
porcentaje.

BASE DE PEROXIDO DE HIDROGENO ANTE Pseudomonas aeruginosa.
%DEINHIBICION
100%
80%
0.02%
60%
0.04%
40%
0.08%
20%
1%
0%
2%
5min
10min
15min
TIEMPOENMINUTOS

hidrogeno ante Pseudomonas aeruginosa.
67
Salmonella choleraesuis
Tabla N13. Porcentaje de inhibicin de
Salmonella choleraesuis segn la
concentracin y el tiempo de contacto.
IN VITRO
CONCENTRACION DEL
DESINFECTANTE
% INHIBICION
5 MINUTOS
10 MINUTOS
15 MINUTOS
0.02%
42.15
0.04%
62.5
100
0.08%
100
100
100
1%
100
100
100
2%
100
100
100
porcentaje.
%
%INHIBICION
BASE DE PEROXIDO DE HIDROGENO ANTE Salmonella choleraesuis
100%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
0.02%
0.04%
0.08%
1%
5min
10min
15min
2%
TIEMPOMINUTOS

hidrogeno ante Salmonella choleraesuis
68
Bacillus subtilis
Tabla N14. Porcentaje de inhibicin de
Bacillus subtilis, segn la concentracin y el
tiempo de contacto.
Bacillus subtilis
IN VITRO
CONCENTRACION DEL
DESINFECTANTE
% INHIBICION
3 HORAS
6 HORAS
9 HORAS
0.02%
50
50
87.25
0.04%
68.75
96
100
0.08%
100
100
100
1%
100
100
100
2%
100
100
100
porcentaje.
%DEINHIBICION
BASE DE PEROXIDO DE HIDROGENO ANTE Bacillus subtilis.
100,%
90,%
80,%
70,%
60,%
50,%
40,%
30,%
20,%
10,%
0,%
0.02%
0.04%
0.08%
1%
2%
3hr
6hr
9hr
TIEMPOENHORAS

hidrogeno ante Bacillus subtilis.
69
En la Tabla N 15, se puede observar la comparacin entre los resultados del porcentaje de
inhibicin del enfrentamiento de las cepas microbianas ante la concentracin de 0.02% del
desinfectante de alto nivel de STERIS, a base de perxido de hidrogeno.
Tabla N 15. COMPARACIN DEL COMPORTAMIENTO DE LAS CEPAS DE REFERENCIA

ANTE LA CONCENTRACIN DEL 0.02% DEL DESINFECTANTE.
MICROORGANISMOS
PORCENTAJE DE
INHIBICION
TIEMPO DE EXPOSICIN
5 min
10 min
15 min
Staphylococcus aureus
0%
0%
25%
0%
0%
28%
0%
0%
42%
TIEMPO DE EXPOSICIN
3 hr
6 hr
9 hr
Bacillus subtilis
50%
50%
100%
inhibicin del enfrentamiento de las cepas microbianas ante la concentracin del 0.04% del

MICROORGANISMOS
PORCENTAJE DE
INHIBICION
TIEMPO DE EXPOSICIN
5 min
10 min
15 min
0%
44%
100%
88%
100%
100%
0%
63%
100%
TIEMPO DE EXPOSICIN
3 hr
6 hr
9 hr
Bacillus subtillis
69%
96%
100%
70
inhibicin del enfrentamiento de las cepas microbianas ante la concentracin del 0.08% del

MICROORGANISMOS
PORCENTAJE DE
INHIBICION
TIEMPO DE EXPOSICIN
5 min
10 min
15 min
100%
100%
100%
100%
100%
100%
100%
100%
100%
TIEMPO DE EXPOSICIN
3 hr
6 hr
9 hr
Bacillus subtillis
100%
100%
100%
En la Tabla N18, se puede observar la comparacin entre los resultados del porcentaje de
inhibicin
del enfrentamiento de las cepas microbianas ante la concentracin del 1% del

ANTE LA CONCENTRACIN DEL 1% DEL DESINFECTANTE.
MICROORGANISMOS
PORCENTAJE DE
INHIBICION
TIEMPO DE EXPOSICIN
5 min
10 min
15 min
100%
100%
100%
100%
100%
100%
100%
100%
100%
TIEMPO DE EXPOSICIN
3 hr
6 hr
9 hr
Bacillus subtillis
100%
100%
100%
71
inhibicin
del enfrentamiento de las cepas microbianas ante la concentracin del 2% del

ANTE LA CONCENTRACIN DEL 2% DEL DESINFECTANTE.
MICROORGANISMOS
PORCENTAJE DE
INHIBICION
TIEMPO DE EXPOSICIN
5 min
10 min
15 min
100%
100%
100%
100%
100%
100%
100%
100%
100%
TIEMPO DE EXPOSICIN
3 hr
6 hr
9 hr
Bacillus subtillis
100%
100%
100%
72
11. ANLISIS DE LA INFORMACIN
Los resultados obtenidos a travs de este ensayo experimental se examinaron por medio de un
anlisis descriptivo a travs de tablas y graficas, donde se observa el comportamiento de cada
microorganismo despus de ser expuesto a cada una de las concentraciones y tiempo
evaluado del desinfectante, de esta forma se estableci la mejor concentracin de
desinfectante que actu frente a cada microorganismo. Para este fin se emplearon las
siguientes hiptesis:
Hiptesis nula (Ho): El porcentaje de inhibicin de las concentraciones evaluadas (0.02%,
0.04%, 0.08%, 1% Y 2%) del desinfectante es mayor o igual al 75%.
Hiptesis alterna (Hi): El porcentaje de inhibicin de las concentraciones evaluadas (0.02%,
0.04%, 0.08%, 1% y 2%) del desinfectante es menor al 75%.
Decisin: Para todo valor de probabilidad igual o menor a 0.05, se acepta la hiptesis
alterna y por ende se rechaza la hiptesis nula, es decir que el porcentaje de inhibicin
no es igual en las tres concentraciones evaluadas del desinfectante, por lo menos una
es diferente.
73
11.1. ANLISIS ESTADSTICO DE LOS RESULTADOS
Para el anlisis de resultados fue necesario comprender la naturaleza de los datos que forman
la base de los procedimientos de prueba, para ello se utilizo el programa estadstico
postprogram, ya que este ayuda a determinar la prueba particular que se ha de utilizar.
Los datos obtenidos durante la investigacin, se analizaron estadsticamente mediante la
prueba de MANN-WHITNEY para comparar dos tratamientos y
la prueba de KRUSKAL-
WALLIS para comparar tres o ms tratamientos.

Estas pruebas son de tipo no paramtricas y se aplicaron por que al estudiar la normalidad de
los datos mediante la prueba de SHAPIRO WILL, se encontr que los datos no provenan de
distribuciones normales.
Asumiendo que los microorganismos evaluados presentaron un comportamiento estadstico
similar, el analisis para Mann-Whitney y Kruskal-Wallys es el siguiente:
Para la concentracin de 0.02% del desinfectante, no existe evidencia estadsticamente
significativa de que el porcentaje de inhibicin del desinfectante ante los microorganismos
(Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa y Salmonella choleraesuis), para los tres
tiempos de exposicin (5 , 10 y 15 minutos) sea mayor al 75%, ya que P > 0.05, sin embargo,
para la concentracin de 0.04%, existe evidencia estadsticamente significativa que el
porcentaje de inhibicin del desinfectante ante los microorganismos es mayor al 75%, ya que P
< 0.05, para los 15 minutos de exposicin, a excepcin de Pseudomonas aeueginosa, que
presenta un porcentaje de inhibicin mayor al 75% a los 5 y 10 minutos. Para las
concentraciones de 0.08, 1% y 2%, el promedio fue de 100 por lo tanto el desinfectante es
efectivo a esa concentracin en un 100% a los 5, 10 y 15 de exposicin.
En el caso de Bacillus subtillis a una concentracin del 0.02% del desinfectante, no existe
evidencia estadsticamente significativa de que el porcentaje de inhibicin del desinfectante
para los tres tiempos de exposicin (3, 6 y p horas) sea mayor al 75%, ya que P > 0.05, sin
embargo, para la concentracin de 0.04%, existe evidencia estadsticamente significativa que
el porcentaje de inhibicin del desinfectante ante el microorganismos es mayor al 75%, ya que
P < 0.05, para las 6 y 9 horas de exposicin. Para las concentraciones de 0.08, 1% y 2%, el
promedio fue de 100 por lo tanto el desinfectante es efectivo a esa concentracin en un 100% a
las 3, 6 y 9 horas de exposicin.
74
12. DISCUSIN DE RESULTADOS
Mediante esta investigacin se evalu la eficacia del desinfectante de alto nivel de STERIS a
base de perxido de hidrogeno frente a diferentes cepas de microorganismos; con el objetivo
de verificar su actividad en el sector hospitalario, para esto se prepararon una serie de 5
concentraciones del desinfectante en estudio de la siguiente manera: concentracin de 0.02%,
0.04%, 0.08%, 1% y 2%; los tiempos de contacto probados fueron 5, 10 y 15 minutos.
Los ensayos realizados para determinar la eficacia del desinfectante de alto nivel de STERIS a
base de perxido de hidrogeno ante Staphylococcus aureus se muestran en la tabla N 11 en
los cuales se demostr que el desinfectante con un tiempo de contacto de 5, 10 y 15 minutos a
una concentracin del 0.02%, no tiene accin bactericida por encima del criterio mnimo de
aceptacin establecido 75%, para este microorganismo.
Al analizar los datos empleando la concentracin de 0.04%, se observo un aumento en el
porcentaje de inhibicin, el cual tampoco cumple con el criterio mnimo de aceptacin 75% en
un tiempo de exposicin de 5 minutos. Sin embargo, al probar la concentracin de 0.08%, se
alcanzo un porcentaje de inhibicin del 100% para los tres tiempos establecidos.
A los 10 minutos de exposicin con la concentracin del 0.02%, Staphylococcus aureus no
presento un aumento en el porcentaje de inhibicin, mientras que al probar la concentracin de
0.04% se obtuvo un porcentaje de inhibicin del 43.75% y con una concentracin de 0.08%,
se evidencio una inhibicin total del crecimiento. Mientras que a los 15 minutos de contacto
con el desinfectante se observo un aumento del 100% en el porcentaje de inhibicin con la
concentracin de 0.04%, de igual forma con una concentracin del 0.08%.
Como se muestra en la figura 1, la poblacin bacteriana se reduce en su totalidad, alcanzando
un porcentaje de inhibicin del 100%, despus de 5 minutos de tratamiento con el
desinfectante del alto nivel de STERIS a base de perxido de hidrogeno, cuando se emplearon
la mitad de la concentracin 1% y la concentracin recomendada por la casa comercial (2%).
Estos datos nos comprueban que la destruccin parcial o total de Staphylococcus aureus al
ponerlo en contacto con el desinfectante en estudio, esta determinado por la concentracin del
desinfectante y por el tiempo de exposicin.
75
El motivo por el cual Staphylococcus aureus no es inhibido totalmente a las concentraciones

de 0.02% y 0.04% con el desinfectante de alto nivel de STERIS a base de perxido de
hidrogeno se debe a que este microorganismo produce la enzima extracelular la catalasa, que
descompone el perxido de hidrogeno en agua y oxigeno molecular cuando este compuesto
se encuentra en pequeas cantidades, segn Dahiya y Speck, 1998 en cantidades mayores,
bajo condiciones experimentales Staphylococcus aureus es inhibido por la acumulacin de
perxido de hidrogeno en el medio.
En la tabla N 12, se observan los resultados correspondientes al porcentaje de inhibicin del

desinfectante evaluado ante Pseudomonas aeruginosa, estos resultados indican que a los 5
minutos con una
concentracin de 0.02%, no se presento inhibicin del microorganismo.
Cuando se someti al microorganismos a una concentracin de 0.04%, se observa una

disminucin en la viabilidad del microorganismo en funcin del tiempo de exposicin al
desinfectante, puesto que se obtuvo un valor de 88% a los 5 minutos, cumpliendo de esta
forma con el criterio mnimo de aceptacin que es del 75%. El desinfectante es eficaz en un
100% cuando se emplearon las concentraciones 0.08%, 1% y 2%.
Para un tiempo de contacto con el desinfectante de 10 minutos a una concentracin de 0.02%
tampoco se evidencio inhibicin, mientras que a con las concentraciones de 0.04%, 0.08%, 1%
y 2% el porcentaje de inhibicin fue del 100 %.
A los 15 minutos con una concentracin de 0.02% hubo una inhibicin no muy significativa ver
figura 2, mientras que con las concentraciones de 0.04%, 0.08%, 1% y 2% la inhibicin fue
total. Estos resultados
muestran claramente que para esta cepa se recomiendan las
concentraciones al 0.08%,
1% y 2% ya que presentaron un porcentaje de inhibicin
considerable a los 5, 10 y 15 minutos incluso en el menor tiempo empleado, es decir que el

desinfectante ejerce una buena accin sobre el microorganismo y por ende se puede controlar.
Mientras que una concentracin de 0.02% y 0.04% no se recomienda para su uso ya que no
se garantiza la destruccin total del microorganismo en ninguno de los tres tiempos de
exposicin.
En la figura 2, se observa la reduccin total del crecimiento microbiano, cuando se emplea una
concentracin de 1% y la concentracin recomendad 2%, para un tiempo de contacto de 5
minutos. Estos resultados indican que el desinfectante de alto nivel de STERIS, a base de
perxido de hidrogeno, tiene un efecto bactericida para este microorganismo empleando la
concentracin recomendada.
76
Los resultados obtenidos indican que Pseudomonas aeruginosa, no presenta resistencia

cuando es sometida a una concentracin del desinfectante a base de perxido de hidrogeno al
2% y esto cumple con los lineamientos establecidos por la casa comercial. Segn bibliografa
consultada este microorganismo es sensible al perxido de hidrogeno, componente activo del
desinfectante en estudio; puesto que este genera una perturbacin de los componentes de la
membrana celular. Tambin se genera una perturbacin en la quimiosmosis que es la difusin
de iones atreves de la membrana permeable, generando alteracin en la membrana de
transporte ocasionando daos a la pared celular. (Queiroz y Day, 2007).
Pseudomonas aeruginosa puede presentar resistencia en algunos casa por varios
mecanismos: presenta diferencias en la composicin del lipopolisacarido (LPS) y el contenido
de cationes como el magnesio, que produce enlaces estables entre molculas de LPS y como
complemento de este mecanismo, esta bacteria presenta prinas pequeas que impiden el
paso por difusin de ciertas sustancias antimicrobianas (Cabrera, 2007). Adems,
Pseudomonas aeruginosa tiene la capacidad de formar glycocalix que es un polisacrido o
glicoprotena que cubre la pared celular de este microorganismo, formando una barrera contra
los desinfectantes. (Queiroz y Day, 2007).
Los resultados del porcentaje de inhibicin del desinfectante de alto nivel de STERIS frente a
Salmonella choleraesuis se pueden observar en la tabla N 13 y en la figura 3, en donde se
observa que a una concentracin de 0.02%, en un tiempo de contacto entre 5 y 10 minutos, el
desinfectante no tiene ningn efecto inhibitorio frente a este microorganismo. Aunque una
concentracin del 0.04% presenta un incremento en el porcentaje de inhibicin, esta no cumple
con el criterio mnimo de aceptacin del 75% para un tiempo establecido entre los 5 y 10
minutos, puesto que se obtuvo un porcentaje de inhibicin de 0 y 63% respectivamente. Sin
embargo, se registro una reduccin total, es decir del 100% cuando se emplearon
concentraciones de 0.08 %, 1% y 2%.
A los 15 minutos de contacto del microorganismo con el desinfectante, se observo un aumento
en el porcentaje de inhibicin del 42.15% con la concentracin de 0.02%, ver figura 3. Al
emplear la concentracin 0.04% y la concentracin de 0.08%, se obtiene un porcentaje de
inhibicin del 100%.
La figura 3. muestra los valores promedios de la inhibicin del desinfectante ante Salmonella
choleraesuis, expresados en porcentaje, en los cuales se observa que la poblacin bacteriana
se reduce en su totalidad alcanzando un promedio de inhibicin del 100% cuando se emplea
77
una concentracin de 1%, la mitad de
la recomendad y una concentracin de 2% la
recomendad por la casa comercial en el mnimo tiempo de exposicin.

Los bajos porcentajes de inhibicin obtenidos cuando se ensayaron las concentraciones de
0.02% y 0.04%, pueden explicarse ya que
este microorganismo posee varios mecanismos
mediante los cuales pueden eludir la accin de los agentes antimicrobianos como por ejemplo;
pueden modificar la membrana celular, hacindola menos permeable a los antimicrobianos,
presentan enzimas especificas que modifican o inactivan los antimicrobianos; adems, la
resistencia puede deberse a la accin de una bomba de flujo o modificaciones de la pared
celular. (Martnez, 2007)
Bacillus subtilis
Tal como se puede visualizar en la tabla N 11 y en la figura 4, con estos resultados podemos
decir que cuando se emplea
una
concentracin
del desinfectante 0.02% para el
microorganismos Bacillus subtilis, se alcanza una reduccin en al poblacin del 50% para un
tiempo de contacto entre 3 y 6 horas y una reduccin del 87% para las 9 horas.
Al analizar los datos empleando una concentracin de 0.04%, se consigui un aumento en el
porcentaje de inhibicin del 68% a las 3 horas, 96 % a las 6 horas y 100% para 9 horas. El
desinfectante es eficaz en un 100% cuando se emplea una concentracin de 0.08%, para los
tres tiempos establecidos en la prueba.
Del anlisis de los resultados obtenidos (ver figura 4) con la mitad de la concentracin 1% y la
concentracin recomendada 2%, podemos decir que el desinfectante de alto nivel de STERIS a
base de perxido de hidrogeno, posee un alto poder esporicida a las 3 horas de exposicin,
puesto que logro una disminucin absoluta de poblacin bacteriana para este microorganismo.
Para este microorganismo en particular se establecieron diferentes tiempos de contacto con el
desinfectante, en este caso fueron 3, 6 y 9 horas, ya que esta especie tiene la capacidad de
formar esporas como estructuras de resistencia y al aumentar el tiempo de exposicin frente a
las diferentes concentraciones, el desinfectante puede ejercer su accin contra las esporas
impidiendo la formacin del cortex entre la membrana interna y la externa antes de la
maduracin de la espora. (Morales, 2007).
La resistencia de Bacillus subtilis, a los desinfectantes se atribuye a que los microorganismos
esporuldos forman una barrera a la entrada de los agentes antimicrobianos, ya que las
membranas que rodean el ncleo de la endospora acta como factor adicional al limitar la
penetracin del agente qumico. (Henao, 2008).
78
Cuando se evala un desinfectante frente a un microorganismo esporuldo como Bacillus

subtilis, es preciso aumentar el tiempo de exposicin por muchas razones, por ejemplo; las
esporas poseen un ncleo con un gran contenido en dipicolinato de calcio, adems el ncleo
se encuentra parcialmente deshidratado, esta caracterstica aumenta la termoresistencia de la
ensopara y al mismo tiempo le confiere resistencia frente a sustancias qumicas como el
perxido de hidrogeno. Adems, del bajo contenido en agua de la espora, el pH del citoplasma
del ncleo contiene niveles elevados de protenas especificas del ncleo denominadas
pequeas protenas acido-solubles de la espora (SASPs). Estas protenas se unen
estrechamente al ADN en el ncleo de la espora y la protegen de daos potenciales por la
radiacin UV, la desecacin y agentes qumicos (Popham y Setlow, 1996).
Los resultados obtenidos en este estudio, para cada microorganismos demuestran que el
efecto inhibitorio del desinfectante esta influenciado directamente por en tiempo de exposicin,
para este caso se recomienda usar el desinfectante de alto nivel de STERIS a base de
perxido de hidrogeno una
concentracin del 2%, con un tiempo de contacto de 5 minutos,
como lo establece el productor.

Un estudio realizado por Ho-Hyok (2007), en cual usaron los microorganismos Bacillus subtilis,
Pseudomonas aureginosa y Staphylococcus aureus como control, demostr que el perxido de
hidrogeno es 100% efectivo contra estos microorganismos a una concentracin del 3% con un
tiempo de contacto de 5 minutos para las bacterias vegetativas y mas de 2 horas para el
microorganismo esporuldo. La misma efectividad se logro en el presente estudio, frente a
todas las cepas ensayadas, con el mismo tiempo
pero a una menor concentracin del
producto al 2%.
Cuando se establece una comparacin entra las bacterias vegetativas (Pseudomonas
aeruginosa, Salmonella choleraesuis y Staphylococcus aureus), ver tabla 15 a 19. La mayor
reduccin del crecimiento microbiano se presento en la cepa de P. aeruginosa, la cual alcanzo
un porcentaje de inhibicin del 87.5% cuando se someti a una concentracin del desinfectante
de 0.04% con un tiempo de exposicin de 5 minutos. En tanto que la menor reduccin se
observo con la cepa de S. aureus, en la cual a los 10 minutos de exposicin la poblacin
disminuye has el 43.75%. Por otro lado, la cepa esporulada B. subtilis presento una
disminucin del crecimiento de 68.7% para las primeras tres horas de exposicin al
desinfectante, a una concentracin de 0.04%.
La reduccin de la poblacin en promedio fue del 100% para las concentraciones de 0.08%,
1% y 2%. Tomando como base lo anterior, podemos decir que el desinfectante de alto nivel de
STERIS a base de perxido de hidrogeno es efectivo en un 100% cuando se emplea la
concentracin recomendada por la casa comercial (2%) en el menor tiempo de exposicin; de
igual manera podemos establecer que la Concentracin mnima Inhibitoria, es decir la menor
79
concentracin del desinfectante capaz de inhibir in Vitro el crecimiento visible del

microorganismos fue de 0.08%, ya que con este valor y en el menor tiempo de contacto con el
desinfectante evaluado se alcanzaron resultados muy satisfactorios.
De acuerdo con las proporciones que se establecen en los ensayos microbiolgicos in vitro
para la evaluacin de las tres concentraciones del desinfectante segn la tcnica utilizada, en
este estudio se obtuvo resultados totalmente satisfactorios, puesto que al enfrentar las cepas
microbianas a el desinfectante de alto nivel de STERIS a base de perxido de hidrogeno a una
concentracin del 2%, recomendada por la casa comercial, se comprob que la misma ejerce
una total de inhibicin del crecimiento microbiano en un tiempo de exposicin de 5 minutos,
propuesto por la casa comercial para clulas vegetativas y 6 horas para la cepa esporulada.
Vale la pena aclarar que en este estudio no se emplearon los microorganismos especficos en
la ficha tcnica, es decir los mismos ATCC, pero estudios realizados por Ho-Hoyk (2007),
usaron
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027; Mehmi (2006), utilizo Bacillus subtilis ATCC
6633, las mismas cepas utilizadas para este estudio. Quienes reportan resultados 100%
satisfactorios para cada microorganismos cuando usaron productos con una concentracin de
perxido de hidrogeno mayor al 3%.
80
13. CONCLUSIONES
El desinfectante de alto nivel de STERIS a base de perxido de hidrogeno a una

concentracin del 2%, garantiza una reduccin total del crecimiento microbiano durante
5 minutos, lineamiento establecido por la casa comercial.
El desinfectante de alto nivel de STERIS a base de perxido de hidrogeno al 2%, la

concentracin recomendada, cumple con las normas establecidas para una solucin
desinfectante de alto nivel, puesto que desde el punto de vista microbiolgico garantiza
la reduccin total del crecimiento microbiano durante un tiempo de exposicin de 5
minutos.
Se demostr que el desinfectante de alto nivel de STERIS a base de perxido de

hidrogeno a la concentracin recomendada 2% en 5 minutos de exposicin, es un
eficaz bactericida y esporicida.
Segn los datos obtenidos se puede determinar que la mejor concentracin para el
empleo del desinfectante e alto nivel de STERIS a base de perxido de hidrogeno es la
del 2%.
La concentracin recomendada por la casa comercial 2%, es til en el caso de

Salmonella choleraesuis, Pseudomonas auroginosa, Staphylococcus aureus y Bacillus
subtilis a los 5 minutos de exposicin.
Se comprob que la destruccin y/o inhibicin de los microorganismos esta

determinada, por el tiempo de exposicin, la concentracin de desinfectante y la cepa
patgena.
Segn los resultados obtenidos en este estudio, podemos decir que la mnima
concentracin de efectividad del desinfectante ensayado es de 0.08% y que empleada
concentraciones menores no se garantiza la destruccin total de los microorganismos.
81
14. RECOMENDACIONES
Se recomienda para estudios posteriores evaluar el desinfectante de alto nivel de

STERIS a base de perxido de hidrogeno, bajo los mismos parmetros establecidos
por la casa comercial, pero a una concentracin del 3%, puesta que es la reportada por
literatura como la concentracin mnima de efectividad de los desinfectantes a base de
perxido de hidrogeno.
Se recomienda para posteriores estudios utilizar la concentracin de 3% ya que segn

bibliografa consultada es la que tiene mayor efecto bactericida.
Se recomienda realizar un numero mayor de replicas para cada estudio con el fin de
pode realizar anlisis estadsticos mas profundos.
Se recomienda evaluar distintos lotes del desinfectante de alto nivel de STERIS, con el
fin de verificar que todos cumplan con las mismas caractersticas y criterios de
evaluacin.
Se recomienda realizar pruebas de estabilidad microbiolgicas al desinfectante de alto

nivel de STERIS, para comprobar
si conserva sus propiedades cuando se encuentra
frente a condiciones adversas.
Se recomienda realizar la evaluacin in Vivo o in Situ del desinfectante de alto nivel de

STERIS a base de perxido de hidrogeno, con utensilios y material de hospitales y
verificar la capacidad de reduccin de los microorganismos una se trate con el
desinfectante.
82
15. CRONOGRAMA DE TRABJO
Actividad a Desarrollar
Enero
Febrero
Marzo
Abrir
Mayo
Junio
Revisin del material Bibliogrfico
Pruebas Microbiolgicas
Entrega de Trabajo Final
Julio
Sustentacin de Tesis
16. PRESUPUESTO
El material de vidrio necesario para llevar a cabo esta investigacin, fue proporcionado por la
Pontificia Universidad Javeriana y los medios de cultivos empleados para la misma, fueron
suministrados por la doctora Gretty Tarazona directora del proyecto y representante en
Colombia de la Casa Comercial STERIS.
83
17. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
ARIAS, J. 2006. Mtodos en Microbiologa Farmacutica. 1 a. edicin. Centro Editorial

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CABRERA, C. E. GOMEZ, F. ZUIGA, A. 2007.
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PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

EVALUACIN DE LA EFICACIA DE UN DESINFECTANTE DE

MEDINA CRDOBA LUZ KARIME

Artculo 23 de la Resolucin N 13 de Julio de 1946 La Universidad no se

EVALUACIN DE LA EFICACIA DE UN DESINFECTANTE DE ALTO NIVEL,

MEDINA CORDOBA LUZ KARIME

EVALUACIN DE LA EFICACIA DE UN DESINFECTANTE DE ALTO NIVEL, A BASE DE

MEDINA CORDOBA LUZ KARIME

A Dios gracias por darnos la vida y otorgarnos el conocimiento, la fortaleza, y salud

por que gracias a ustedes logramos alcanzar

nuestros conocimientos y estar mas cerca las metas profesionales.

Janeth Arias Palacios nuestras codirectora del proyecto

conocimiento, apoyo y confianza que siempre nos brindo.

A todas las personas que siempre estuvieron apoyndonos

2.3.2. Caractersticas de un buen desinfectantes

2.3.3. Factores que influyen en la eficacia de los desinfectantes

2.3.4. Mecanismos de accin de los desinfectantes

2.3.5. Resistencia de los microorganismos a los desinfectantes

2.3.6. Clasificacin de los desinfectantes segn su mecanismo de accin

2.3.6.1. Agentes que daan la membrana clula

2.3.6.2. Agentes que desnaturalizan protenas

2.3.6.3. Agentes que modifican grupos funcionales

2.3.7. Clasificacin de los desinfectantes segn su actividad

2.3.8. Clasificacin de los desinfectantes segn el mtodo de desinfeccin

2.3.8.1. AGENTES FSICOS DESINFECTANTES

2.3.9. AGENTES QUMICOS DESINFECTANTES

2.3.9.1. Productos reductores: Aldehidos

2.3.9.2. Agentes oxidantes

2.3.9.2.1. cido peractico

2.3.9.2.3. Perxido de Hidrogeno

2.3.9.2.3.1. Mecanismo de accin

2.3.9.2.3.2. Espectro de actividad

2.3.9.3. Fenoles y derivados

2.3.9.6. Compuestos Yodados

2.3.9.7. Compuestos que liberan cloro

2.3.9.9. Agentes cidos desinfectantes

2.3.9.10. cidos orgnicos

2.3.9.11. Compuestos de amonio cuaternario

2.3.9.12. Agentes desinfectantes tensioactivos anfotericos

2.3.9.13. Detergentes desinfectantes

2.4. Desinfectante de alto nivel de STERIS

3.1. Factores que influyen en el crecimiento de los microorganismos

3.3. Microorganismos Evaludos

3.3.1. Staphylococcus aureus

3.3.2. Pseudomonas aeruginosa

3.3.3. Salmonella choleraesuis

3.3.4. Bacillus subtilis

4. LIMPIEZA Y DESINFECCIN DEL MATERIAL HOSPITALARIO

4.1. Normas generales

4.2. Clasificacin de los materiales segn el riesgo de infeccin

4.2.1. Material crtico o de alto riesgo

4.2.2. Material semicrtico o de riesgo intermedio

4.2.3. Material no crtico o de bajo riesgo

5. METODOS DE EVALUACIN DE LOS DESINFECTANTES

5.1. Mtodo del coeficiente fenolico

5.2. Tcnica de dilucin en tubo

5.3. Tcnica de la placa de agar

9.2. Diseo de la Investigacin

9.2.1. Variables del estudio

9.2. Anlisis de la Informacin

9.3. Mtodos y Procedimientos

9.3.1. Preparacin del Inoculo

9.3.2. Preparacin de las concentraciones del desinfectante