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Curso de Hematologa semestre B Dirigido para alumnos del 8 semestre de

la Carrera de Qumico Farmacutico Bilogo de la Universidad Jurez del Estado
de Durango FCQ-GP. Maestra: Ma. Guadalupe Ernestina Gonzlez Yez.
Agosto-diciembre 2014.

Prctica VIII. Fragilidad osmtica de los eritrocitos de

carnero
La membrana celular de los eritrocitos es flexible, pero carece de
elasticidad, lo que significa que la clula se rompe si le entra agua hasta exceder
un volumen crtico. La susceptibilidad de los eritrocitos a hemlisis en solucin
hipotnica guarda una relacin inversa con su tamao, por lo que es interesante
notar que los glbulos rojos de carnero estn entre los ms pequeos encontrados
entre los mamferos. Por otra parte, como la resistencia de los eritrocitos a la
hemlisis puede aumentar o disminuir en estados de enfermedad, se debe
considerar la importancia que tiene controlar las condiciones de mantenimiento de
los animales de laboratorio y el manejo de los reactivos biolgicos que se
producen a partir de ellos, para mantener su calidad, tomando en cuenta que cada
especie animal tiene sus propias caractersticas fisiolgicas. Por ejemplo, se ha
indicado que, respecto a la sangre, entre distintas especies vara el tiempo de
coagulacin, la fragilidad celular, la composicin del suero, el pH y otras
caractersticas como ha sucedido con reportes hechos en Costa Rica por (Muoz
J, 1989). Dnde los eritrocitos resultaron ser que resultaron ser ms resistentes a
la hemlisis al realizar pruebas de fragilidad osmtica.
Fragilidad osmtica
Material:

Sangre desfibrinada o con heparina sdica.

Reactivo NaCl (1%).

Agua destilada.

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Pipetas y propipetas.

12 tubos de vidrio limpios (+10ml).

Centrifuga.

Gradilla.

Guantes.

Marcador indeleble.

Tcnica:

En un matraz Erlen meyer de 125 ml que contenga de 10 a 15 pequeas perlas de vidrio

se vierten en 7 ml de sangre del paciente.

Colocar el matraz en un agitador mecnico durante 10 minutos o en su defecto agitarlo

manualmente hasta que no se oiga el ruido de las perlas,

. Decantar 2 ml de sangre desfibrinada a un tubo de 5 ml estril.

Hacer lo mismos pasos con un testigo normal.

. Incubar por 24 horas a 37 C.

Con la sangre restante hacer la prueba de fragilidad osmtica de 30 minutos usando tubos
de 13 x 100 estriles de la siguiente manera.

Muestra problema y muestra control.

Tubo
1

BUFFER mL
0.90

4.50

H20mL
0.50

SANGRE mL
0.05

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0.80

4.00

1.00

0.05

0.70

3.50

1.50

0.05

0.60

3.00

2.00

0.05

0.50

2.50

2. 50

0.05

0.40

2.00

3.00

0.05

0.20

1.00

4.00

0.05

0.00

0.00

5.00

0.05

7. Mezclar bien las soluciones antes de agregar la sangre desfibrinada y al agregar esta, mezclar
por inversin usando papel parafilm.
8. Incubar 30 minutos a temperatura ambiente.
9. Centrifugar 5 minutos a 3,000 r.p.m.
10. Leer la absorbancia del sobrenadante a 546 nm frente a blanco de agua. Hacer diluciones de
1:2 o ms en el caso de no poder leer directamente.
11. Para la fragilidad osmtica de 24 horas se procede de igual manera.
12. Correr un testigo normal simultneamente al problema.
13. Graficar en papel milimtrico: Abscisas Concentracin de Cloruro de Sodio y Ordenadas el %
de hemlisis.
CLCULOS (nota: tomar en cuenta las diluciones realizadas). % de Hemlisis = D.O de cada tubo
(del 1 al 15)/ D.O del tubo 16 X 100.

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