CONAMET/SAM 2006

EFECTO DE P. aeruginosa (PAO1) SOBRE ACEROS AL CARBONO J55 Y N80

USADOS EN LA RECUPERACIN SECUNDARIA DE PETRLEO
C.Eliana Martinez Shapasnikoff (1) D.Alberto Keitelman (2)
Comisin Nacional de Energa Atmica - Unidad de Actividad Materiales
Av. General Paz 1499 - (1650) Villa Maip - San Martn Buenos Aires Argentina
e-mail: (1) elmartin@cnea.gov.ar
(2) Repsol YPF- Centro de Tecnologa Argentina
Baradero 777 (1925) Ensenada Buenos Aires Argentina
e-mail: adkeitelmane@repsolypf.com
RESUMEN
Actualmente en Argentina ms del 70% del petrleo producidoon shore se extrae por recuperacin
secundaria. En el tratamiento de agua de produccin para recuperacin secundaria, en el propio reservorio
y en los pozos productores e inyectores, se generan diversos problemas operativos, entre ellos el
bioensuciamiento y la corrosin inducida microbiolgicamente (MIC).
Los mecanismos por los cuales ocurre la MIC no estn totalmente dilucidados ni existe un acuerdo
completo acerca de ellos. El presente trabajo presenta resultados parciales y forma parte de un proyecto
ms amplio que tiene como objeto realizar un aporte al entendimiento de los mecanismos de accin de los
microorganismos en la MIC.
Los aceros al carbono, y dentro de stos, las aleaciones J55 y N80 -denominacin de acuerdo a Normas
API, correspondientes a un acero ferrtico-perltico y a un acero martenstico revenido, respectivamenteson frecuentemente utilizados en la construccin del tubing y del casing en los pozos de produccin
petrolfera por recuperacin secundaria y por tanto es importante evaluar su comportamiento en contacto
con microorganismos y estudiar si existe alguna influencia de la microestructura tanto en la formacin del
biofilm como en la biocorrosin. Para esto se utilizaron cultivos puros de Pseudomonas aeruginosa
PAO1, adaptadas para desarrollarse en agua de produccin de un pozo petrolero de la Cuenca Neuquina
Superior.
Se realizaron ensayos estticos sin circulacin de fluido ni agitacin, en envases cerrados, a temperatura
controlada (25 C). No se insufl aire en el interior de los recipientes, el volumen libre sobre la solucin
aport el oxgeno necesario para el desarrollo biolgico. Los resultados obtenidos en los medios con
inculo bacteriano fueron contrastados con blancos estriles para intentar separar el fenmeno inorgnico
del biolgico. Cada condicin se evalu por triplicado. El tiempo de duracin de los ensayos vari de
cinco a diez das.
Inicialmente se determin el grado de cubrimiento de las probetas y la variacin de parmetros tales como
el pH, la conductividad y el hierro disuelto.
La evaluacin de corrosin generalizada se bas en la medicin de la prdida de peso de los especmenes
ensayados durante diez das. Se siguieron los procedimientos de la Norma ASTM G1, utilizando como
solucin de limpieza citrato de amonio al 20%, en ciclos de 20 minutos a 75 C. Las tasas de corrosin
obtenidas mostraron diferencias apreciables en el comportamiento de ambas aleaciones, siendo mayores
para J55 con relacin a N80, tanto en condiciones estriles como en presencia de microorganismos -20%
y 30% respectivamente-. Es probable que este resultado est ligado al mayor contenido de carbono del
J55 y su presencia localizada en la fase perltica como cementita, reconocida como sitio preferencial
eficiente para la reduccin del oxgeno, principal reaccin catdica al pH del ensayo.
La aleacin J55 present una mayor tasa de corrosin -15%- en el medio inoculado respecto del estril
atribuible a la actividad bacteriana. En el caso de la aleacin N 80 no se observ la misma tendencia.
Se analiz la relacin de iones de hierro ligados a la superficie / iones de hierro en solucin para ambas
aleaciones. Se encontr que esta relacin es mayor en el caso de la aleacin J55 con respecto a la N80,
tanto en condiciones estriles como en los medios inoculados.
Para estudiar la corrosin localizada se realizaron observaciones por Microscopa Electrnica de Barrido
(SEM) no detectndose el fenmeno en los tiempos ensayados.
Se observaron, tambin por SEM, las distintas etapas de formacin del biofilm sobre ambas aleaciones,
encontrndose mayor proporcin de microorganismos ssiles sobre la aleacin J55, lo que probablemente
estara vinculado con la diferencia de comportamiento evidenciada en la evaluacin de la corrosin
generalizada.
Palabras Clave: biocorrosin, MIC, aceros al carbono, recuperacin secundaria de petrleo

1. INTRODUCCIN
En la explotacin de hidrocarburos, la
recuperacin
secundaria
ha
incrementado
notablemente su participacin en la produccin,
representando en la actualidad ms del 70 % del
total del petrleo producido on shore en la
Argentina. Dos de los principales problemas
operativos -estrechamente ligados entre s- de esta
actividad
lo
constituyen
el
biofouling
(bioensuciamiento)
y la corrosin inducida
microbiolgicamente (MIC) [1]
Los aceros al carbono, y dentro de stos, las
aleaciones J55 y N80, son frecuentemente
utilizados en la construccin del tubing y del
casing en los pozos de produccin petrolfera por
recuperacin secundaria y por tanto es importante
evaluar su comportamiento en contacto con
microorganismos.
El uso de Pseudomonas aeruginosa, una de
las especies habitualmente presentes en los pozos,
es ampliamente extendido en el estudio de
biofilms, probablemente porque ha sido
intensivamente estudiada por los microbilogos
genetistas y tanto su gentica como su fisiologa
son bien conocidas [2]. Existe un modelo sobre el
crecimiento estratificado de este microorganismo
en biofilms, para el cual se utiliz la cepa PAO1
[3]; este estudio fue realizado sobre de vidrio y por
tanto no tiene en cuenta las interacciones que
pueden presentarse entre las bacterias y una
superficie metlica, cuyo comportamiento
electroqumico puede ser modificado por ellas.
La mayor parte de los investigadores
consideran a la MIC como una forma particular
de corrosin electroqumica, sin ser en s misma un
nuevo tipo de corrosin [4, 5] siendo una de las
clasificaciones ms frecuentes la que la divide en
sistemas aerbicos y anaerbicos. La MIC bajo
condiciones oxigenadas generalmente implica la
formacin de metabolitos cidos. Algunos autores
[4, 5] plantean que la corrosin aerbica del hierro
y sus aleaciones comienza por la creacin de
celdas de concentracin de oxgeno a travs de la
generacin de depsitos debidos a las bacterias
formadoras de lodo. Sin embargo, si se interpreta
el fenmeno de acuerdo al modelo de ataque
localizado desarrollado por Galvele [6, 7] la
explicacin estara en las condiciones de
acidificacin localizada generadas por la difusin
restringida debajo del biofilm por parte de los
protones producidos tanto por la hidrlisis del
metal cuanto por los metabolitos cidos
producidos por los microorganismos. La reaccin
catdica puede ser tanto la reduccin de oxgeno,
como la de los protones o ambas, dependiendo del
pH predominante fuera de la superficie cubierta
por el lodo biolgico que constituye el nodo.
Se ha observado tambin corrosin por
picado en sistemas de tratamiento de agua como
consecuencia de la MIC, que algunos autores
dividen en dos tipos: a) la MIC activa, comprende
la participacin directa de bacterias; en otras

palabras, las bacterias estn ntimamente ligadas al

proceso de corrosin. Esto puede incluir un efecto
de las bacterias sobre el pH, el oxgeno disuelto, la
secrecin de desechos corrosivos, etc.; y b) la MIC
pasiva, donde la biomasa resultante del
crecimiento biolgico es un contribuyente
indirecto de la MIC. La presencia de biomasa
podra, por ejemplo, llevar a la corrosin por
medio de un mecanismo de ataque bajo depsitos,
un caso particular de la corrosin en rendijas, de
acuerdo al modelo de ataque localizado
desarrollado por Galvele.
La morfologa de la corrosin producida
por la MIC sobre diversos materiales ha sido
rigurosamente estudiada y tambin cuantificada.
Los mecanismos detallados asociados a este
fenmeno an no son totalmente comprendidos, a
pesar de los esfuerzos enfocados en la
investigacin de los mismos [8].
Los resultados presentados en este trabajo
son parciales y forman parte de un proyecto ms
amplio que tiene como objeto realizar un aporte al
entendimiento de los mecanismos de la MIC.

2. DESARROLLO
2.1. Aleaciones utilizadas
Para los ensayos se utilizaron probetas
rectificadas de tubos sin costura de las aleaciones
J55 y N80. El acero J55 es del tipo ferrticoperltico y el N80 es un acero martenstico
revenido a 640-645 C.
En la Tabla I se presenta la composicin
de los aceros utilizados y en la Figura 1 se puede
observar su microestructura.
Tabla 1. Composicin de los aceros utilizados
J 55
N 80
Composicin
C
% (x100)
39
25
Mn
% (x100)
101
126
Si
% (x100)
37
29
Cr
% (x100)
8
6
Ni
% (x100)
4
2
Mo
% (x100)
5
2
Cu
% (x100)
6
4
V
% (x1000)
2
2
Sn
% (x1000)
6
4
Al
% (x1000)
15
36
Nb
% (x1000)
1
1
Ti
% (x1000)
10
22
S
% (x1000)
1
1
P
% (x1000)
14
10
As
% (x1000)
3
2
Ca
ppm
10
16
B
ppm
1
22
N
ppm
O
ppm
H
ppm
-

El medio de cultivo fue agua de produccin

obtenida de un pozo de recuperacin secundaria de
petrleo correspondiente a la cuenca neuquina
superior, el cual fue seleccionado por ser
representativo en la produccin total de la zona.
No se agregaron nutrientes de ningn tipo. La
composicin del medio utilizado se presenta en la
Tabla II.
Los inculos se prepararon haciendo crecer
las bacterias en este medio por 48 hs. a 25 C.
Tabla II. Composicin del medio utilizado.
Composicin

(a)

Valores en ppm

Sodio
Calcio
Magnesio
Bario
Hierro Total
Potasio
Cloruros
Sulfatos
Bicarbonatos
Sulfuros Totales
Sulfuros Disueltos
Nitratos

29.022
1.327
495
0,4
8,4
10
45.221
3.031
1.990
3.2
0.3
24

Propiedades
T (in situ)
pH (in situ)
Densidad (15 C)
TDS
(b)
Figura 1. Microestructura de las aleaciones J55(a)
y N80 (b). Microscopio metalogrfico, 500x.
2.2. Preparacin de probetas
Se utilizaron probetas planas, rectificadas
de anillos cortados de los tubos, de 15x5x2 mm
aproximadamente. En el ensayo preliminar y en el
de observacin de crecimiento de biofilm, las
probetas fueron pulidas en una de sus caras con
papel abrasivo de graduacin creciente hasta grado
600 y luego pasta de diamante de 6 y 1 m
respectivamente. En los ensayos de prdida de
peso se pulieron todas las caras con papel abrasivo
hasta grado 600. Para el ltimo de estos ensayos se
realiz un orificio de 1,5 mm de dimetro a dos
tercios de la longitud mayor de las probetas.
En todos los casos las probetas fueron
limpiadas en acetona por ultra sonido. Antes de los
ensayos se las esteriliz por inmersin en alcohol
96% por 30 minutos con posterior flameado.
2.3. Bacterias, medios y preparacin de inculos
Se utilizaron para los ensayos cultivos
puros de Pseudomonas aeruginosa cepa PAO1.

42,1 C
6,4
1,05170 g/l
85.333 ppm

2.4. Condiciones de ensayo

Todos los ensayos se realizaron en frascos
cerrados de 250 ml de capacidad, con un volumen
de medio que vari de 50 a 100 ml. Los frascos
fueron esterilizados con el medio en autoclave a
121C por 20 minutos.
La temperatura de 25C fue controlada a la
dcima de grado en estufa de cultivo. Todos los
ensayos fueron de tipo esttico, sin circulacin de
fluido y sin agitacin. No se insufl aire en el
interior de los recipientes: el volumen de aire
dentro de los frascos (ms del 50% del total)
proporcion el oxgeno necesario para el desarrollo
de los microorganismos.
2.5. Ensayos
2.5.1. Ensayo preliminar
Se pusieron probetas de ambas aleaciones
en contacto con el medio: en el caso de los
controles, el ensayo fue en condiciones estriles.
Los dems frascos fueron inoculados al 10% con
P. aeruginosa PAO1. Se realizaron tres
extracciones de probetas: a las 24, 72 y 120 horas,

por triplicado, en ambas condiciones. Las probetas

se observaron por microscopa ptica de reflexin
y por microscopa de barrido electrnico (SEM).
Se control el pH, la conductividad y el hierro total
disuelto al inicio y en cada extraccin. Se control
supervivencia y pureza del cultivo.

2.5.2. Ensayo de Crecimiento de Biofilm

Este ensayo se realiz sin controles
inorgnicos. Probetas de cada aleacin fueron
puestas en contacto con los microorganismos. Se
realizaron extracciones por triplicado a los 10, 20 y
30 das. Las probetas se enjuagaron con una
solucin de buffer fosfato pH 7,4 (PBS) para
producir el lavado de las bacterias planctnicas. Se
fijaron los microorganismos con glutaraldehdo al
2,5% en PBS por dos horas y luego se procedi a
la deshidratacin de las muestras en series alcoholacetona de concentracin creciente. Posteriormente
se realiz el metalizado de las mismas en la cara de
inters para su observacin por SEM.

microorganismos se pudo observar el desarrollo de

un film de aspecto mixto: productos de corrosin y
biolgico. En los controles slo se observaron
productos de corrosin. En todos los casos se
observ un alto cubrimiento de la superficie sin
llegar a ser homogneo.
Evaluacin por SEM: luego de haber
quitado la capa que cubra la cara de inters, se
metalizaron las probetas y se observaron por SEM
en busca de posibles picaduras. El tamao y la
distribucin de los huecos observados no indican
que se haya producido este fenmeno.
Medicin de pH, conductividad y hierro
total disuelto: no se produjeron variaciones
importantes en ninguno de los parmetros. El pH
inicial de 7,76 tuvo variaciones entre 7,60 y 7,90,
tanto en los controles como en los frascos con
cultivos, por lo que deben atribuirse a la naturaleza
de los productos de corrosin. La conductividad
fue prcticamente constante, variando entre 68 y
70 mS/cm.
El hierro total disuelto correspondi al
registrado en la Tabla II de composicin del
electrolito.

2.5.3. Ensayos de prdida de peso

3.2. Ensayo de Crecimiento de Biofilm
Se realizaron dos ensayos de prdida de
peso, siguiendo la norma ASTM G1-90. La
solucin de limpieza utilizada fue citrato de
amonio al 20%, en ciclos de 20 minutos a 75C en
estufa. La duracin total del ensayo fue de 10 das
y las probetas se evaluaron por triplicado. El rea
expuesta fue de aproximadamente 2 cm2.
Se midi la concentracin de hierro disuelto
total en las soluciones con un espectrofotmetro
HACH modelo DR400 (Mtodo N8008). A partir
de estos valores se calcul la cantidad de iones de
hierro en solucin en cada frasco y se compararon
con la cantidad total de hierro oxidado (prdida de
peso).
Se control el nmero de microorganismos
presentes al finalizar el ensayo por recuento en
placa utilizando como medio Agar Nutritivo (AN).
En el primer ensayo las probetas en
contacto con microorganismos y los controles se
colocaron apoyadas en el fondo de los frascos.
Para eliminar los efectos de crevice en la superficie
metlica apoyada y reducir en consecuencia la
dispersin de los resultados de prdida de peso, se
dise un segundo ensayo, con probetas perforadas
para poder realizar la suspensin de las mismas.
Debido a la imposibilidad de esterilizar las
probetas junto con los frascos en autoclave, se
dise un sistema de suspensin que permitiera
mantener las condiciones de esterilidad y prevenir
posibles contaminaciones.
3. RESULTADOS
3.1. Ensayo preliminar
Evaluacin por microscopa metalogrfica:
En los dos tipos de aleaciones en contacto con

A travs de la evaluacin de las probetas

por SEM se evidenci la presencia de
microorganismos adheridos a la superficie de
ambos tipos de probetas. Sobre las probetas de la
aleacin J55 se observ una distribucin
homognea de P. aeruginosa as como la presencia
de numerosos individuos por campo. En el caso de
la aleacin N80 la distribucin de bacterias sobre
la superficie mostr zonas colonizadas y zonas sin
colonizar, con un mayor porcentaje de estas
ltimas. El nmero de microorganismos por campo
fue escaso.
Se observaron biofilms con 10, 20 y 30
das de desarrollo. En las Figuras 2 y 3 se
muestran las imgenes obtenidas de biofilms de 10
das sobre la superficie de ambas aleaciones.

Figura 2. Imagen de SEM de probeta J55con 10

das de crecimiento de biofilm 6000 aumentos

Tabla V Hierro disuelto versus hierro oxidado

segn datos de prdida de peso. Primer ensayo
Soluciones
Hierro
Hierro
en contacto con:
disuelto oxidado
mg
mg
Con inculo
1,6
9,8
Aleacin
J 55
Control
1,1
8,5
Aleacin
N 80

Figura 3. Imagen de SEM de probeta N80 con 10

das de crecimiento de biofilm 6400 aumentos

3.3. Ensayos de prdida de peso

Las tasas de corrosin obtenidas en cada
uno de los ensayos se presentan a continuacin en
las Tablas III y IV. El hierro total en solucin
comparado con el hierro total oxidado se presenta
en las Tablas V y VI.
Tabla III Tasa de corrosin Primer ensayo
Probetas
Tasa de
corrosin
(m/ao)
Promedio
Con inculo
91 10
Aleacin J 55
Promedio
Control
81 1

Aleacin N 80

Promedio
Con inculo

69 10

Promedio
Control

62 10

Tabla IV Tasa de corrosin Segundo ensayo

Probetas
Tasa de
corrosin
(m/ao)
Promedio
Con inculo
88 5
Aleacin J 55
Promedio

Aleacin N 80

Control

74 2

Promedio
Con inculo

64 8

Promedio
Control

63 6

El recuento en placas de microorganismos

planctnicos fue, para el primer ensayo, de 4,3.105
ufc/ml y de 8.105 ufc/ml para los medios en
contacto con los aceros N80 y J55
respectivamente. En el segundo ensayo, el
recuento fue de 4,7.105 ufc/ml y de 1,3.105 ufc/ml
respectivamente.

Con inculo

1,8

6,6

Control

1,4

6,4

Tabla VI Hierro disuelto versus hierro oxidado

segn datos de prdida de peso. Segundo ensayo
Soluciones
Hierro
Hierro
En contacto con:
disuelto oxidado
mg
mg
2,1
13,2
Aleacin Con inculo
J 55
Control
1,8
11,1
Aleacin
N 80

Con inculo

1,9

9,8

Control

1,8

9,8

4. DISCUSION DE RESULTADOS
La aleacin J55 presenta en el medio estril
despus de diez das una tasa de corrosin un 20%
mayor que la del N80. Es probable que este
resultado est ligado al mayor contenido de
carbono del J55 y su presencia localizada en la
fase perltica como cementita, reconocida como
sitio preferencial eficiente para la reduccin del
oxgeno, principal reaccin catdica al pH del
ensayo. Comparando las tasas de corrosin en los
medios inoculados result la medida para el J55
alrededor de un 30% mayor que la del N80,
sugiriendo que opera un efecto similar de la
estructura ferrtica perltica en el caso de la
actividad bacteriana, a travs del incremento de la
actividad catdica
en las zonas de la
microestructura ricas en carbono.
Para la aleacin J 55, la tasa de corrosin en
el medio inoculado es un 15% superior a la del
medio estril. En el caso del N80 no se observan
variaciones apreciables de la tasa de corrosin en
el medio inoculado respecto del estril. Esto puede
vincularse con la mayor presencia bacteriana ssil
en el J55 que en el N80 detectada por evaluacin
con SEM.
En la comparacin de las mediciones de
hierro en solucin con el hierro total oxidado, se
vio en el caso del J55 una proporcin mayor de
iones de hierro ligados a la superficie metlicas
respecto de los iones hierro en solucin, en

contraste con lo ocurrido con el N80 donde esta

proporcin es menor.
El efecto del crevice por contacto con el
fondo de los recipientes (primer ensayo) parece no
tener influencia en las tasas de corrosin, pero si
sobre la dispersin de los resultados.

5. CONCLUSIONES
Se observ una diferencia importante de
comportamiento del J55 respecto del N80 frente a
la corrosin tanto en el medio estril como en el
inoculado, siendo un 20% y 30 % mayor
respectivamente.
La relacin entre las tasas de corrosin en el
medio inoculado respecto del estril mostr un
incremento del 15% en la aleacin J55 atribuible a
la actividad bacteriana. No se observa la misma
tendencia en el caso de la aleacin N80.
La relacin iones de hierro ligados a la
superficie versus iones de hierro en solucin, tanto
en los medios inoculados como en los estriles, es
mayor para la aleacin J55 que para la N80.
Se determin una mayor proporcin de
bacterias ssiles adheridas sobre el J55 respecto
del N80.
En los tiempos de ensayo estudiados no se
observ corrosin localizada.

6. REFERENCIAS
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Secundaria-YPF,
1997;
Corrosin
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Recuperacin Secundaria, 2001, Comisin de
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Pseudomonas aeruginosa, Enzyme and Microbial
Technology, Vol. 32, 2003, pp 92-98.
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Molin; Pitts; Stewart: Stratified growth in
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Corrosin Microbiolgica, 1984, Ed. Biblioteca
Mosaico
[6] J.R.Galvele: Transport processes and the
mechanism of pitting of metals, Journal of
Electrochemical Society, Vol 123, 1976, pp 464474;
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breakdown II. Full Hydrolysis of metal ions,
Corrosion Science, Vol. 21 N 8, 1981, pp 551579.
[8] Iwona Beech: Biocorrosion: towards
understanding interactions between biofilms and

metals, Current opinion in Biotechnology, Vol. 15,

2004, pp 181-186.