Validacin de la determinacin de la DQO en la

unidad analtica del CEBI

"

I. Aguilera, S. Rodrguez, R. M. Prez, J. Buzn, M. Camacho

Centro de Estudios de Biotecnologa Industrial, Facultad de Ciencias Naturales, Universidad de Oriente

Resumen
La validacin de mtodos de ensayos constituye una premisa para la realizacin de servicios y una
garanta de la calidad de los resultados para brindar. En el presente trabajo se realiz una validacin de
adecuacin para la determinacin de la Demanda Qumica de Oxgeno (DQO) en el laboratorio analtico
del CEBI. La misma consisti en validar el empleo de un termoreactor para el calentamiento de las
muestras y dos mtodos de deteccin: espectrofotomtrico y volumtrico. Para ello se determinaron
parmetros como linealidad, precisin, exactitud , lmites de deteccin y determinacin. Como resultado
del trabajo, se concluye que se pueden emplear ambos mtodos de deteccin para los anlisis de DQO
de las muestras que se procesan en el laboratorio, y se logr la validacin de adecuacin para el mtodo
de reflujo cerrado y deteccin espectrofotomtrica para la determinacin de la DQO.
Palabras clave: validacin de mtodos analiticos, demanda qumica de oxgeno (DQO).

Abstract
The validation of analytical methods assays constitutes a premise for the realization of services and
a guarantee of the quality of the results. At presently work is carried out a validation for the determination
of the Chemical Demand of Oxygen (COD) in the Analytical Laboratory of the Industrial Biotechnology
Center (CEBI). The same one consisted on validating the employment of a termoreactor for the heating
of the samples and two detection methods: spectrophotometric and volumetric. They were determined
parameters like lineality, precission, accuracy, detection and determination limits. As a result of the work
it was concluded that both detection methods can be used for the analyses of COD of the samples that
are processed in the analytical laboratory and the validation was achieved for the closed reflux method
with spectrophotometric detection for the determination of the COD.
Key words: validation of analitycal methods, chemical oxygen demand (COD).

Introduccin
La validacin de procedimientos analticos es un
tema de gran importancia para el anlisis qumico y
una exigencia prctica para los centros donde se
realizan. Actualmente, en nuestro pas, el Ministerio
de Educacin Superior se ha dado a la tarea de
acreditar laboratorios de ensayos en las universidades
del pas. El laboratorio de Qumica del Medio Ambiente

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del Departamento de Qumica, conjuntamente con el

de analtica del CEBI, se encuentra dentro de los
implicados en cumplir este reto en nuestra Universidad.
La acreditacin de ensayos es necesaria para ofrecer
servicios confiables a los clientes del territorio e
incrementar la competitividad de nuestros laboratorios,
teniendo en cuenta la necesidad del monitoreo de
contaminantes en la regin, para lo cual ofrecemos
servicios cientfico-tcnicos.

Los mtodos ms comunes para estimar la

contaminacin orgnica se basan en la
determinacin global de las materias oxidables
presentes en el agua y que son susceptibles de
oxidarse a partir del oxgeno del medio, pues los
mtodos que determinan especficamente cada
una de las sustancias orgnicas presentes, son mas
laboriosos.
Para el anlisis global de la materia orgnica
contaminante, actualmente son usados los siguientes
mtodos:
- La Demanda Qumica de Oxgeno (DQO),
medida de las materias oxidables por el dicromato
de potasio en medio cido.
- La Demanda Biolgica de Oxgeno (DBO):
medida de las materias orgnicas biodegradables.
La DQO puede considerarse como una medida
aproximada de la demanda terica de oxgeno. La
DQO se define como la cantidad de oxgeno que es
equivalente a la cantidad de dicromato de potasio,
el cual es consumido por las materias disueltas y en
suspensin, cuando la muestra es tratada por dicho
oxidante en las concentraciones definidas.
Existen muchas modificaciones para la
determinacin de DQO por oxidacin con dicromato
de potasio. Este mtodo es preferido sobre otros que
utilizan distintos agentes oxidantes por poseer una
mayor capacidad para oxidar (oxida entre un 95 y un
100 % de los compuestos orgnicos presentes) y por
ser aplicable a una gran variedad de muestras, adems
de su fcil manipulacin.
Para la digestin de la materia orgnica, se reportan
los mtodos por reflujo abierto y reflujo cerrado,
realizndose la deteccin del mismo por mtodos
volumtricos o espetrofotomtricos.
La determinacin de la DQO se encuentra entre
los mtodos ms habituales solicitados por nuestros
clientes al Laboratorio de Qumica Analtica del CEBI,
constituyendo uno de los puntales de nuestros servicios
cientfico-tcnicos.
Puede un laboratorio contar con los equipamientos
ms modernos, que si no tiene mtodos apropiados y
validados para los ensayos que satisfagan las

necesidades del cliente, no lograr la aceptacin y

el reconocimiento de los mismos. Es por ello, que
el presente trabajo tiene como objetivo realizar
una validacin de adecuacin de la tcnica de
DQO por el mtodo de reflujo cerrado, utilizando
dicromato de potasio como agente oxidante en
nuestras condiciones de laboratorio, para aguas y
aguas residuales.

Materiales y mtodos
Equipos y materiales
Las determinaciones fueron realizadas utilizando
equipos y cristalera calibrada y validada por el CEN.
Los reactivos son de calidad apropiada para los
ensayos realizados.

Mtodos de anlisis
Descripcin del mtodo de calentamiento
con reflujo abierto y deteccin volumtrica
1. Tomar con pipeta una alcuota de muestra de 1
mL e introducirlo en un erlenmeyer de 50 mL
con boca adaptable.
2. Aadir 1 mL de solucin de dicromato de potasio
0,25 N y 0,04 g de H2SO4.
3. Se adicionan 3 mL de cido sulfrico
concentrado, el cual contiene Ag 2SO 4. La
mezcla se refluja durante 15 min, sobre bao de
arena.
4. Se diluye la mezcla hasta aproximadamente 10
mL con agua destilada y se valora el exceso de
K 2Cr 2O 7 con sulfato de amonio ferroso,
utilizando ferrona como indicador.
5. Se trata un blanco de la misma forma, aadiendo
1 mL de H2O (d).
(Vb- Vm) N 8 000
DQO mg/L=
mL de muestra

donde:
Vb = mL de Fe (NH 4)2 (SO4) consumidos en el
ensayo del blanco.
Vm = mL de Fe (NH4)2 (SO4) consumidos para
la muestra.
N= Concentracin de Fe (NH4)2 (SO4).
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Descripcin del mtodo de calentamiento con

termoreactor de DQO y deteccin
espectrofotomtrica
1. Homogeneizar la muestra.
2. Encender el reactor DQO y precalentar a 150 0C
3. Quitar el tapn de tubo de reactivo, y mantenindolo
con un ngulo de 450, aadir 2 mL de la muestra.
4. Cerrar hermticamente y agitar cuidadosamente.
5. Preparar blanco de reactivos.
6. Calentar los tubos durante 2 h.
7. Enfriar aproximadamente 20 min y agitar varias
veces.
8. Realizar lectura en espectrofotmetro a 620 nm
contra blanco de reactivos.

Preparacin de curva de calibracin

Se tomaron alcuotas de la solucin patrn de ftalato
cido de potasio, de modo que la concentracin se
encuentrara en el intervalo de 0-1 000 mg/L de DQO,
y se realiz el mismo tratamiento que a las muestras.

% recuperacin =

Lmite de deteccin y de determinacin

Se realizaron determinaciones de DQO en
muestras blanco para n= 20.
Procesamiento estadstico
Se realizaron pruebas de hiptesis, test de Student
para comparacin de muestras, y pruebas de Fisher
para comparacin de varianzas; adems de pruebas
de regresin y correlacin. Para ello, se emple el
programa computacional STARGRAPHICTM.

Resultados y discusin
Como habamos referido anteriormente la
determinacin de la DQO constituye uno de los
anlisis que con ms frecuencias se solicitan a nuestra
Unidad Analtica para el monitoreo o deteccin de la
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Linealidad: De la solucin patrn, se tomaron

alcuotas correspondientes a 200, 400, 600, 800, 1 000
mg/L de DQO, y se realiz el mismo tratamiento para
n= 10.
Precisin: Se realiz por determinacin de la
desviacin standard y C.V de los resultados del
anlisis para n= 10 de muestras sintticas para tres
niveles de concentracin en condiciones de
repetibilidad.
Exactitud o veracidad: Se realiz mediante un
ensayo de recuperacin para n= 10. Se tom la
muestra a la cual se reconoci la concentracin de
DQO y se le adicion una cantidad conocida del
analito que deba corresponder con la cantidad del
analito presente en la muestra.

FG muestra x analito - muestra s / analito IJ 100

H cantidad de analito aadido K

Se calcul el valor medio (X), desviacin estndar

(DE), y se aplic un anlisis estadstico mediante una
prueba t de Student para 95 % de confiabilidad,
comparando con el 100 % de recobrado.

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Metodologa de validacin del mtodo

analtico

contaminacin orgnica de aguas industriales,

residuales; ya sea para servicios cientfico-tcnicos,
o proyectos de investigacin del Centro.
Aun cuando se encuentra reportado este mtodo
en el Standard Methods /1/, se hace necesario
realizar una validacin de adecuacin del mismo a
las condiciones de trabajo de nuestro laboratorio;
as como prever variantes que permitan la realizacin
de este ensayo en situaciones emergentes o de
contingencia, sin que por ello se afecte la calidad e
inmediatez del servicio.
Se presenta como solucin alternativa para la
realizacin de la determinacin de la DQO, el
empleo de un bao de arena en sustitucin de un
termoreactor. Al contar con una gran cantidad de
datos experimentales, se procedi a la comparacin
del mtodo de determinacin de la DQO con la
utilizacin de ambas variantes, empleando, en
ambos casos como va de digestin, el reflujo
cerrado y la deteccin por espectrofotometra
visible a una l de 620 nm.

Los resultados obtenidos de la comparacin de

varianza y de medias de los resultados
experimentales entre ambas variantes son
reflejados en la tabla 1.

A continuacin se procedi a la comparacin de

los dos mtodos clsicos utilizados para la
determinacin de este parmetro de importancia
ambiental. El primero (mtodo 1) consiste en la
digestin a reflujo abierto con un bao de arena y
utilizando como va de deteccin la determinacin
volumtrica /2/; el segundo (mtodo 2) consiste en
la digestin a reflujo cerrado con un termoreactor,
utilizando como va de deteccin por
espectroscopa visible. Los resultados del anlisis
estadsticos se reflejan en la tabla 2.

Como se deriva del anlisis estadstico, ambas

variantes resultan similares para el mtodo en cuestin
que analizamos, por lo que podra emplearse el
calentamiento de las muestras con un bao de arena
pudiendo emplear otras fuentes de energa para el
calentamiento cuando las condiciones lo requieran.

TABLA 1. RESULTADOS DE LOS ANLISIS ESTADSTICOS REALIZADOS PARA COMPARAR EL

EMPLEO DE TERMOREACTOR O BAO DE ARENA

Parmetro
Media

Con termoreactor
999,60

Con bao de arena

1 000,70

Desviacin estndar

4,16

4,08

Varianza

17,37

16,67

Grados de libertad

Test de Fisher: F= 1,0419 p= 0,9521; p> 0,05 se cumple H0:1= 2 (n.s)

Test de Student : t= 0,5960 p= 0,5585; p> 0,05 se cumple H0: 1= 2 (n.s)

TABLA 2. RESULTADOS DE LOS ANLISIS ESTADSTICOS REALIZADOS PARA COMPARAR LOS DOS
MTODOS PROPUESTOS PARA LA DETERMINAR DQO

Parmetro

Mtodo 1

Mtodo 2

998,50

999,60

Desviacin estndar

4,22

4,16

Varianza

17,83

17,37

Media

Grados de libertad

Test de Fisher: F= 1,0262 p= 0,9698; p> 0,05 se cumple H0: 1 = 2 (n.s)

Test de Student: t= 0,5262 p= 0,5650; p> 0,05 se cumple H0: 1= 2 (n.s)

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Como se puede apreciar, para las condiciones

experimentales en que se desarrollan los mtodos se
cumple la hiptesis de igualdad, tanto de medias como
varianzas; por lo que los resultados obtenidos
al emplear uno u otro mtodo, no difieren
significativamente para un 95 % de confianza, por lo
tanto, ambos pudieran ser empleados para las muestras
que se realizan en el laboratorio de analtica.
Partiendo de estos resultados, y teniendo en cuenta
la posibilidad de procesar un mayor nmero de
muestras a la vez y contando con el equipamiento
requerido, se realiz la validacin del mtodo a reflujo
cerrado (mtodo 2) con la utilizacin del termoreactor.
Adems de las ventajas referidas, y apoyndonos
en los resultados estadsticos anteriormente mostrados,
aun cuando las diferencias entre ambos mtodos no
son estadsticamente significativas, se observa una
mayor precisin en el mtodo seleccionado para

validar y un mayor acercamiento a los valores reales

ensayados.
Para la validacin del mtodo, se procedi a la
determinacin de algunos de los parmetros referidos
en el Proyecto de Norma Cubana para la "Validacin
de mtodos de ensayos qumicos" /3/.
La figura 1 representa la curva de calibracin a
travs de la cual se realiza la evaluacin de la
linealidad del mtodo, al aplicar la regresin lineal para
n= 10, con el objetivo de obtener la recta de mejor
ajuste. Para ello, se determinaron muestras de
concentraciones desde 0-1 000 mg/L. Al obtener un
coeficiente de correlacin y de regresin lineal por
encima de los lmites establecidos (r 0,99 y r2 0,98)
nos indica una alta correspondencia entre la
concentracin y la respuesta analtica para las diez
determinaciones realizadas, para un 95 % de
confiabilidad.

0,2

A (620 nm )

0,16
0,12

y = 0,002x

0,08

r2= 0,998 9
r= 0,999 4

0,04
0
0

200

400

600

800

1000

Conc.(mg/l)

Fig. 1. Curva de calibracin para la determinacin de la DQO.

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1200

La precisin del mtodo se evalu a travs de la

determinacin de la desviacin tpica relativa (CV)
para tres niveles de concentracin que abarcaron el
intervalo de concentracin en que se encuentran las
muestras que nos llegan al laboratorio, y en condiciones
de repetibilidad. En la tabla 3 se reportan los resultados
de este estudio.

Como se aprecia, el C.V obtenido para los tres

niveles de concentracin, es menor que lo permitido
como lmite para mtodos espectrofotomtricos
(< 10 %), demostrando que el mtodo es preciso para
las concentraciones establecidas en las condiciones
de trabajo.

TABLA 3. RESULTADOS DEL ESTUDIO DE LA PRECISIN DEL MTODO DE DETERMINACIN

DE DQO

Concentracin
Terica (mg/L)

Media (mg/L)
(x) (n= 10)

Desviacin
tpica relativa
(% C.V)
1,1

Sesgo

350,9

Desviacin
estndar
(D.E)
3,7

350
700

699,1

5,2

0,7

- 0,9

1 000

999,6

4,2

0,4

- 0,4

Todo mtodo analtico requiere, que sus

determinaciones se realicen de una forma veraz y
precisa, pues de ello resulta la confiabilidad de los
resultados /6/.
Los resultados obtenidos al realizar la determinacin
de DQO a un material de referencia interno (en este
caso el ftalato cido de potasio, que es el que se
reporta en bibliografa /2/ ) y reflejados en la tabla 2,

0,9

apoyan la determinacin de la veracidad, pues

evidencian correspondencia entre los resultados
encontrados y los reportados para el control. No
obstante, para evaluar la veracidad del mtodo
propuesto para la determinacin de DQO, se realiz
un ensayo de recuperacin a tres niveles de
concentracin y en condiciones de repetibilidad
(n= 10), obtenindose los siguientes resultados:

TABLA 4. RESULTADOS DEL ESTUDIO DE VERACIDAD DEL MTODO

Cantidad inicial Cantidad

de muestra
aadida
(mg/L)
(mg/L)
350
350

Cantidad
recuperada
(mg/L)
695

Recuperado
(%)

Resultado del test de Student

99,3

t exp .= -1,0540; p= 0,3193 (n.s)

500

500

998

99,5

t exp .= -0,7529; p= 0,4707 (n.s)

700

700

1403

100,4

t exp.= 1,2121; p= 0,2283 (n.s)

Los resultados expresados como recuperacin son la media de diez determinaciones.

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Para los valores obtenidos, se hizo un test de

Student (t) con datos pareados, donde se compararon
las medias de recobrado para cada nivel de
concentracin con respecto al 100 % de recobrado
(terico), teniendo como resultado la no existencia de
diferencias significativas (p 0,05) para un 95 % de
confiabilidad. Como se puede observar en la tabla
anterior, los elevados porcentajes de recobrado nos
confirman la exactitud del mtodo, al lograr valores
que no presentan diferencias significativas con el
100 %.
Segn las normas empleadas /3, 4/, basta con
probar con un solo nivel de concentracin, para
determinar la veracidad del mtodo. No obstante,
para tener mayor rango de confiabilidad de los
resultados que se obtienen en el ensayo, nos decidimos
probar con diferentes intervalos, que habitualmente
encontramos en nuestras determinaciones, como se
refiere en otros trabajos /8/. Tambin valoramos este

parmetro de validacin para la mayor concentracin,

que determinamos que es 1 000 mg/L, pues cuando
aadimos igual concentracin, se requiere hacer
diluciones para poder leer nuestras muestras. Esto
nos permitira comprobar la veracidad para muestras
donde el analito est en concentraciones superiores a
las concentraciones de la curva de calibracin. Para
ello, tomamos 10 determinaciones del recobrado como
tamao muestral, donde se obtuvo X= 98,9 %;
D.E= 3,3, y los resultados del test de Student arrojaron
una texp.= -1,0541 y una p= 0,3193; or lo que nos
permiti tener confianza en la posibilidad de realizar
determinaciones y la veracidad de los resultados de
muestras con diluciones.
Por ltimo, nos dispusimos determinar los lmites
de determinacin y de cuantificacin, para lo cual se
realizaron determinaciones a muestras blanco
(n= 20 muestras), cuyos resultados se exponen a en
la tabla 5.

TABLA 5. RESULTADOS DE LOS LMITES DE DETERMINACIN Y CUANTIFICACIN (LD Y LC)

PARMETROS

mg /l

No. de muestras

20*

Media ( x )

0,14

D.E

0,06

Xmxima

0,20

Xmnima

0,07

Lmite de deteccin

( x 3 D.E )

Lmite de cuantificacin (x 10 D.E )

0,31
0,71

* parmetro adimensional

Conclusin

A partir de los resultados anteriormente mostrados, queda establecido, que el mtodo de determinacin
de la DQO que se valida, puede analizar muestras cuya concentracin sea superior a 0,71 mg/L.

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