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RELATRIO FINAL
UEM
CNPq
PERODO DE ABRANGNCIA DO PROGRAMA:
1/08/2011 a 31/07/2012
3. DEPARTAMENTO: DCM
5. DEPARTAMENTO: DCM
6. TTULO DO PROJETO: Anlise morfomtrica dos cinos da glndula salivar partida de ratos
8.
Relatrio contendo os
resultados finais do
projeto de iniciao
cientfica vinculado ao
PIBIC/CNPq-Fundao
Araucria-UEM
Introduo
Diabetes Mellitus (DM) a mais comum desordem metablica crnica, caracterizada por
nveis de glicose suprafisiolgicos devido deficincia na secreo de insulina, no receptor de
insulina ou em eventos ps-receptor levando a alteraes no metabolismo de carboidratos, protenas
e lipdeos (Baynes, 1991). O DM esta relacionado a comprometimento dos rins, olhos, nervos, vasos
sanguneos e corao, alm disso, perodos longos de hiperglicemia podem estar associados com
alteraes bucais, como a doena periodontal, considerada a sexta complicao mais prevalente do
DM (Souza et al., 2003).
A prevalncia da doena periodontal muito mais elevada entre os diabticos em relao
populao em geral (Taylor etl al., 2008). Muitas outras alteraes podem aparecer antes e algumas
vezes predispor a doena periodontal, como disfuno das glndulas salivares, que levam a uma
reduo do fluxo salivar e mudanas na composio da saliva, alteraes do paladar, maior tendncia
infeco bucal, prejuzo no processo cicatricial, cries, lngua saburrosa e halitose (Negrato et al.
2011).
O prejuzo no metabolismo causado pelo DM leva a progresso e agravamento do estresse
oxidativo atravs de vrios mecanismos, como a autoxidao da glicose, glicao protica e a
formao de produtos finais da glicao avanada (AGEs) (Baynes et al., 1999). Espcies reativas de
oxignio (EROs) so produzidas pelas glndulas salivares em situaes fisiolgicas, de infeco
microbiana e como resposta a hiperglicemia causada pelo DM (Turner et al., 2011).
Dentre as complicaes, mudanas na morfologia e funo das glndulas partidas de ratos
diabticos induzidos por estreptozootocina j foram relatadas por Anderson (1987). Estudos mais
recentes sugerem a baixa sensibilidade de receptores muscarnicos (Watanabe et al., 2001), mudanas
no fluxo sanguneo da glndula (Whitcher et al., 2010), aumento da atividade autofgica e
lisossomal, endocitose de protenas secretadas pelas clulas ductais e acmulo de material na
membrana basal (Mednieks et al., 2009) como possveis causas dessas alteraes.
Objetivos
O propsito deste trabalho foi investigar o efeito da suplementao oral dessas vitaminas
sobre os parmetros morfomtricos dos cinos da glndula partida de ratos diabticos induzidos
por estreptozootocina.
Materiais e Mtodo
Para o presente estudo foram utilizados 20 ratos machos Wistar (Rattus norvegicus), com 90
dias de idade, pesando em mdia de 313g, provenientes do Biotrio Central da Universidade
Estadual Maring. A pesquisa foi aprovada pelo Comit de tica em Experimentao Animal da
Universidade Estadual de Maring (UEM). As tcnicas utilizadas esto de acordo com princpios
ticos adotados pelo Colgio Brasileiro de Experimentao Animal (COBEA).
Os ratos foram divididos em quatro grupos: N (normoglicmicos); NEC (ratos
normoglicmicos suplementados com vitaminas E e C); D (ratos diabticos) e DEC (ratos diabticos
suplementados com vitaminas E e C).
Os animais dos grupos NEC e DEC receberam suplementao com vitaminas C e E por 120
dias. A vitamina C (Sigma, ST. Louis, MO, USA) foi adicionada gua (1 g.L -1 diariamente
preparado) e a vitamina E (Zhejiang NHU, China) foi incorporada na rao Nuvital (Nuvilab,
Colombo, PR, Brasil) (1% preparado a cada semana).
Aps 120 dias de experimento os ratos foram mortos, sendo previamente pesados e
anestesiados com uma dose de 40 mg.kg-1 de peso corporal de tiopental (Laboratrios Abbott,
Chicago, IL, EUA) intraperitoneal. O sangue foi coletado por puno cardaca para avaliao da
glicemia de jejum. Realizou-se laparotomia para a coleta da gordura visceral (abdominal e
epididimal). As gorduras foram pesadas e calculadas proporo para cada 100 gramas de peso
corporal.
As partidas extradas foram lavadas em soluo salina (NaCl 0,9%) para retirada de
resduos de sangue, e imediatamente transferidas para soluo de formalina 10% por um perodo de
12 horas, promovendo a ntegra fixao dos tecidos glandulares. Sequencialmente, as mesmas foram
lavadas em gua corrente para serem armazenados em lcool 70%. Utilizando-se uma srie crescente
de concentraes de alcois, os tecidos foram desidratados, diafanizados em xilol, includos em
parafina e seccionados em micrtomo com 6m espessura. Posteriormente, os cortes foram
submetidos colorao em hematoxilina-eosina (HE).
Os ratos foram mantidos em gaiolas individuais com fotoperodo (12 horas de claro/escuro) e
temperatura ambiente (24C 2) controlados. A quantidade de alimento ingerido e a gua consumida
foram avaliadas durante a ltima semana de cada ms.
As imagens dos cinos foram capturadas por cmara de alta resoluo acoplada ao
microscpio Olympus BX20, e transmitidas para microcomputador e gravadas em compact disc. Por
meio do programa computadorizado de anlise de imagens Image-Pro-Plus, foi mensurada a rea
(m2) do perfil de 100 cinos por lmina, perfazendo o total de 500 cinos em cada grupo estudado,
expressando-se os resultados em mdia das reas do cinos por grupo.
Os dados coletados foram submetidos a testes estatsticos apropriados, como anlise de
varincia e teste de Tukey para comparao dos aspectos morfomtricos dos cinos glandulares
entre os grupos. O nvel de significncia foi de 5%.
Resultados e Discusso
Os animais diabticos induzidos por estreptozootocina (grupos D e DEC) apresentaram um
quadro com caractersticas tpicas do DM: poliria, polidpsia, polifagia, hiperglicemia, perda de
gordura visceral e reduzido ganho de peso ou at mesmo perda de peso corporal. Essas alteraes
devem-se ao estado de insuficincia e/ou ausncia insulnica e hiperglicemia (Furlan et al., 2004).
Os dados fisiolgicos como peso corporal inicial com 90 dias de idade (PIC) , peso corporal final
com 210 dias de idade (PCF) , gordura visceral (gordura abdominal e epididimal) por 100 g de peso
corporal (GV) , ingesto de gua por 100g de peso corporal (IA) , ingesto de rao por 100g de
peso corporal (IR) , glicemia inicial (GI) e glicemia final (GF) dos grupos N, NEC, D e DEC so
expressos na Tabela 1.
Tabela 1 - Peso corporal inicial com 90 dias de idade (PCI), peso corporal final com 210 dias de
idade (PCF), gordura visceral (gordura abdominal e epididimal) por 100 g de peso corporal (GV),
ingesto de gua por 100g de peso corporal (IA), ingesto de rao por 100g de peso corporal
(IR), glicemia inicial (GI) e glicemia final (GF) nos animais dos grupos normoglicmico (N),
normoglicmico suplementado com vitamina C e E (NEC), diabtico (D) e diabtico suplementado
com vitamina C e E (DEC).
Parmetros
Grupos
N
NEC
DEC
PCI (g)
304 16,97 a
325,9 29,3 a
316,6 21,03
PCF (g)
460,7 56,95 a
455,4 45,39 a
341,8 26 b
298,6 56,75 b
0,9 0,51 b
307,2 18,73 a
GV (g)
2,42 0,54
2,98 0,28 a
0,46 0,10 b
IA (ml)
10,81 2,5 a
9,17 1,28 a
50,08 14,47
IR (g)
6,55 0,69
7,3 1,72 a
15,24 2 b
13,25 2,3
167,2 14,47 a
408 13,4 b
406,6 6,61 b
Gl (mg dl-1)
180,7 17,32 a
47,22 10,45 b
b
GF (mg dl-1)
179,8 19,29 a
166,2 17,06 a
420,1 8,22 b
413,6 49,8 b
Mdias seguidas por letras diferentes na mesma linha so estatisticamente diferentes de acordo com o teste de Tukey
(p < 0,05).
3000
2000
1000
NEC
DEC
Grupos
Figura 1 Mdia da rea acinar da partida dos grupos: normoglicmicos (N), normoglicmicos
suplementados com vitaminas E e C (NEC), dibticos (D) e diabticos suplementados com vitaminas
E e C (DEC).
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