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DOI: 10.1159/000225915
Palabras clave
Microbiota intestinal Obesidad Diabetes Mtodos de
base molecular
Resumen
La creciente epidemia de obesidad ya ha dejado de estar
restringida slo a los pases desarrollados. En el 2005, la Organizacin Mundial de la Salud alert que en todo el mundo
haba aproximadamente 400 millones de adultos obesos y
que aproximadamente 20 millones de nios presentaban
sobrepeso. La obesidad es un problema sanitario complejo
y de consecuencias graves, como la diabetes de tipo 2 y las
enfermedades cardiovasculares y de otro tipo. Se han sealado factores conductuales, genticos y medioambientales
como contributivos del sobrepeso y la obesidad. Datos recientes indican que la poblacin de microorganismos residentes en el intestino, conocida como microbiota intestinal,
puede influir sobre la absorcin de nutrientes y el almacenamiento de energa. Se ha demostrado que la composicin
macrobitica difiere tanto entre ratones como entre humanos obesos y magros, lo que deja entrever que la modulacin de la composicin microbitica intestinal ofrece una
nueva va para el tratamiento de la obesidad y el sobrepeso.
En esta revisin se recuerdan los datos cientficos disponibles que respaldan estas especulaciones. Tambin se recopilan en esta revisin los resultados recientes obtenidos en
estudios destinados a las contribuciones de la microbiota intestinal a la diabetes.
Copyright 2009 Nestec Ltd., Vevey/S. Karger AG, Basel
Introduccin
Tabla 1. Anlisis de la composicin de los tipos principales de la microbiota intestinal con mtodos independientes de cultivos
Mtodo
Muestras
Suje- Clones/
tos
lecturas
n
n
Tipos bacterianos, %
Referencia
Heces
Hibridizacin
por transferencia
de manchas
27
6 sondas 30,6
37
0,7
0,7
30
Microscopa
por HFIS
Heces
11
13 sondas 52,6
27,7
0,2
16,7
2,8
HFIS/
flujocitometra
Heces
91
18 sondas 57,1
8,5
0,1
4,4
29,9
Bibliotecas
de clones
ARNr 16S
Heces
1
Biopsias colnicas
3
Heces
3
Heces
6
Biopsias y heces
3
Heces
12
Biopsias colnicas 14
Biopsias colnicas 190
Heces
47
295
110
744
240
13.355
18.348
235
15.172
3.753
64,8
66,3
83
58,7
51
83,7
52,8
49,2
70
31
26,4
11
14,5
48
8,0
27
22,8
n.c.
n.c.
3,6
0,9
26,6
0,6
2,0
6,4
21
n.c.
n.c.
n.d.
2
n.d.
0,2
2,9
1,3
5,6
2
4,2
3,7
3,1
n.c.
0,2
3,4
12,5
1,4
n.c.
Metagenmica
Heces
652.304
4,5
14,3
5,2
2,2
73,8b
Pirosecuenciado Heces
454 de ARNr 16S
12.766
81,2
2,5
1,7
14,6
<0,1
dejarse de lado otros factores como las alteraciones conductuales y ambientales. Recientemente, los microbios
residentes en el intestino, conocidos en conjunto como
microbiota intestinal, han sido identificados como uno
de los factores ambientales. Una mayor aproximacin a
esta poblacin microbiana podra contribuir a conocer su
potencial como medio teraputico para tratar la obesidad.
de especies dominantes, mientras que los de baja resolucin pueden proporcionar informacin cuantitativa de
grupos bacterianos seleccionados dentro de la microbiota dominante o un perfil dinmico de la poblacin microbiana.
Los mtodos de configuracin, como la reaccin de
cadena de polimerasas (RCP) acoplada a electroforesis
en gel de gradiente desnaturalizante, han sido muy tiles para comparar poblaciones diferentes. Estas herramientas han sido utilizadas con xito para monitorizar
desplazamientos de comunidades bacterianas, no slo
en el tubo GI de humanos y diversos animales [2225],
sino tambin en otros diversos entornos, como el ecosistema marino [26] o el ecosistema del suelo. Aunque menos frecuentemente, tambin se han utilizado el polimorfismo de longitudes de fragmentos de restriccin y
el polimorfismo de conformacin monocatenario. Aunque estos mtodos no son cuantitativos, podran adaptarse para proporcionar resultados cuantitativos por
inclusin de un estndar interno de concentracin de
ADN conocida [27] o una combinacin de RCP cuantitativa con electroforesis capilar [28]. No obstante, estos
mtodos slo pueden detectar las especies dominantes
que constituyen alrededor del 1% de la poblacin bacteriana total.
Los datos cuantitativos de la comunidad bacteriana
pueden obtenerse con otros enfoques, como la hibridizacin de transferencia de manchas, la RCP cuantitativa o
en tiempo real, o la hibridizacin fluorescente in situ.
A pesar de su baja sensibilidad, las hibridizaciones por
transferencia de manchas han proporcionado informacin cuantitativa exacta sobre grupos bacterianos en
muestras humanas utilizando sondas diseadas especficamente para fijar como objetivo una amplia gama taxonmica [29]. La RCP en tiempo real o cuantitativa ha sido
muy til para la cuantificacin de especies subdominantes, es decir, las que aparecen en cantidades reducidas. No
obstante, la validacin del mtodo podra ser laboriosa:
tanto el diseo de las secuencias del iniciador para especies bacterianas, de las que se dispone de informacin
limitada sobre el gen ARNr 16S en las bases de datos,
como la optimizacin de las condiciones reactivas y la
correlacin con el nmero de clulas podran ser todava
bastante problemticos. Alternativamente, un mtodo
atractivo que no precisa la extraccin de cidos nucleicos
y que ha sido utilizado frecuentemente para analizar
muestras bacterianas complejas es la hibridizacin fluorescente in situ en combinacin con la microscopa ptica epifluorescente o la flujocitometra. En este caso, las
sondas se marcan con un colorante fluorescente y se di-
41
42
de grasa corporal en los ratones libres de grmenes se deba a la supresin de la lipognesis de novo heptica y a la
inhibicin del almacenamiento de triglicridos en tejidos
adiposos blancos. Este ltimo efecto est causado por una
produccin excesiva del inhibidor de la lipoproteinlipasa
Faia (factor adipoctico inducido por el ayuno o ANGPTL4) en el intestino de ratones carentes de grmenes.
Teniendo en cuenta que la hidrlisis por la lipoproteinlipasa de los triglicridos circulantes es crucial para la captacin de los cidos grasos por los adipocitos, un incremento del Faia circulante resulta en un bloqueo de la captacin de cidos grasos y el almacenamiento de grasa. El
papel primordial del Faia como mediador entre la microbiota intestinal y la regulacin del peso corporal fue demostrado por Bckhed y cols. [37] en animales carentes
de los genes implicados en la produccin del Faia. Ratones knock-out-Faia libres de grmenes llegaron a adquirir
un estado de obesidad tras el consumo de una dieta rica
en grasas, al contrario que los controles de tipo natural
libres de grmenes. Adems, los ratones knock-out-Faia
mostraron una expresin reducida de PGC-1 y las enzimas participantes en la oxidacin de cidos grasos, confirmando el papel clave del Faia en esta va metablica.
En una situacin propensa a la obesidad, como el consumo de una dieta rica en grasa y azcar, de estilo occidental, los animales libres de grmenes no presentaron obesidad [37]. El fenotipo magro persistente en los ratones
libres de grmenes se asociaba a un incremento de la
AMP-cinasa fosforilada en el hgado y la musculatura. La
AMP-cinasa es un sensor de energa intracelular que,
cuando es fosforilada, ataca a los genes implicados en la
oxidacin de los cidos grasos, permitiendo suponer la
presencia de un incremento de la combustin de grasas
en ratones libres de grmenes. Es probable que la activacin de la AMP-cinasa y los niveles elevados del Faia sean
dos mecanismos independientes que induzcan la oxidacin de las grasas y la proteccin de los ratones libres de
grmenes frente a la obesidad inducida por la alimentacin. Es incluso ms importante resear que estos ensayos demuestran las complicadas relaciones existentes entre la microbiota intestinal y la intervencin sobre el peso
del hospedador.
En ensayos realizados en animales genticamente obesos (ob/ob) se confirm que la ganancia de peso se asociaba a cambios en la composicin de las bacterias intestinales. Estos animales son incapaces de producir leptina y, en
consecuencia, llegan a ser hiperfgicos y obesos. Se gener un inventario completo de secuencias de genes ARNr
16S a partir del contenido cecal de animales ob/ob y sus
hermanos magros (ob/+, +/+). Tras analizar ms de 5.000
43
Bacterias y diabetes
La resistencia a la insulina es una patologa concomitante con la obesidad y se correlaciona con inflamacin
crnica de baja intensidad [53]. Basndonos en datos recientes sobre el impacto que ejerce la microbiota intestinal sobre la obesidad, otros autores y nosotros mismos
hemos preconizado que la microbiota intestinal podra
contribuir al inicio de la resistencia a la insulina y al estado inflamatorio del hospedador. Indagamos esta hiptesis tratando a ratones ob/ob con antibiticos de amplio
espectro, norfloxacina y ampicilina, introducidos en su
agua para beber [54]. El tratamiento antibitico elimin
casi por completo la poblacin bacteriana intestinal. Al
final del tratamiento de dos semanas, los niveles de glucemia en ayunas se normalizaron y la tolerancia a la glucosa oral mejor notablemente en los animales tratados,
a pesar de que persista la obesidad de estos animales.
Una reduccin significativa del lipopolisacrido (LPS) y
el TNF- circulantes indicaba que la inflamacin de baja
intensidad se haba reducido. Un incremento del almacenamiento de glucgeno heptico en situacin postpranMicrobiota intestinal, obesidad y diabetes
dial y una reduccin de los triglicridos hepticos en ayunas realz adicionalmente el beneficio reductor de la poblacin de bacterias intestinales en los ratones ob/ob.
La contribucin del LPS, un componente de la membrana externa de bacterias gramnegativas en la diabetes
de tipo 2 y la obesidad, fue revisada por Wellen y Hotamisligil [53]. En ratones, el LPS circulante muestra una
pauta diurna con incremento en el ciclo de oscuridad y
reduccin en el ciclo de iluminacin. Adems, el tratamiento con una dieta rica en grasas increment la proporcin de bacterias gramnegativas en el intestino as
como los niveles de endotoxina circulantes. Cuando se
infunda LPS crnicamente en ratones, causaba obesidad
leve y resistencia a la insulina heptica [55]. En otro estudio, Cani y cols. [56] trataron con ampicilina y neomicina
a ratones obesos (ob/ob) o ratones C57BL/6J alimentados
con una dieta rica en grasas. Esta combinacin antibitica alteraba espectacularmente la composicin de la microbiota intestinal con resultado de una reduccin de la
endotoxemia y una mejora de la tolerancia a la glucosa en
ambos modelos animales. Estas observaciones son coherentes con nuestros resultados previos segn los cuales la
recuperacin de la sensibilidad a la insulina se asociaba a
una reduccin de la situacin inflamatoria, respaldando
la idea de que la modulacin de la microbiota intestinal
alivia la inflamacin de baja intensidad e intensifica la
sensibilidad a la insulina en ratones. Aunque se ha demostrado que un tratamiento antibitico a corto plazo
mejora la diabetes en ratones, los beneficios a largo plazo
y los efectos secundarios de este enfoque siguen pendientes de aclaracin.
Factores alimentarios
Los probiticos se definen como suplemento alimentario microbiano viable que influye beneficiosamente sobre el hospedador a travs de sus efectos en el tubo intestinal. Las bifidobacterias y los lactobacilos son tradicionalmente los probiticos ms corrientemente utilizados
en las intervenciones nutricionales. Se ha comprobado
que las intervenciones con probiticos alivian la intolerancia a la lactosa, incrementan la inmunidad en lactantes y reducen el riesgo de diarrea inducida por rotavirus
[ver revisin en 57]. Asimismo, se ha observado que el
aporte complementario de probiticos mejora los sntomas de diabetes en modelos de animales afectados de diabetes de tipo 1 o tipo 2. La ingestin de Lactobacillus casei
retras el inicio de diabetes en ratones diabticos no obesos as como en ratones con diabetes inducida por aloxaAnn Nestl [Esp] 2009;67:3948
45
LPS?
TNF-?
Microbiota
intestinal
Glucosa
LPS y otras
citocinas
proinamtorias?
Resistencia a
la insulina
Faia
Actividad de LPL
Captacin de AGL
Masa adiposa
Bibiloni/Membrez/Chou
TG
Glucgeno
Gluconeognesis?
Lipognesis?
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