IHQ Mama

Patologia Cirrgica
macroscopia
colorao
clivagem
desparafinizao
processamento
microtomia
incluso - parafina
bloco
Exame Histopatolgico
Exame anatomopatolgico ATO

MDICO!
lminas
microscopia
laudo histopatolgico
Imuno-histoqumica no cncer de mama - Prof. Andra Rodrigues Cordovil Pires - Fonte Medicina Diagnstica
Fixao
Preservar os componentes da amostra tecidual.

Proteger o material de dano osmtico (distenso ou
retrao)
Para a imuno-histoqumica: tornar o antgeno insolvel,
mas ainda disponvel para a reao com o anticorpo
primrio.
A utilizao de soluo de formol a 10% tamponado ou
formol-salina melhora a imuno-reatividade do material.
Se no for possvel o preparo de formol tamponado, utilize pelo menos a
soluo de formol-salina a 10%
100ml de formol + 900 ml de soluo fisiolgica
Imuno-histoqumica
Mtodo de escolha: IHQ em material fixado em formol e

includo em parafina
Vantagens:
material coletado e processado convencionalmente: bipsias
incisionais e excisionais, core biopsy, peas cirrgicas radicais e
preparados citopatolgicos.
permite utilizao de material arquivado por muitos anos.
lminas permantentes
custo acessvel
Imuno-histoqumica
Receptor de estrognio
marcao nuclear
Oncoprotena c-erbB-2
marcao de membrana
GFAP
marcao citoplasmtica
Imuno-histoqumica
Enzima, substrato e cromgeno

mais utilizado: peroxidase - H2O2 - DAB (positividade marrom)
Padro de reao
nuclear
membrana celular
citoplasmtico
etc...
Imuno-histoqumica
Controles da reao (interno e externo)

positivo
negativo
intensidade
Controle de qualidade
intra-laboratorial
externo
Receptores hormonais
Importante fator prognstico e orientador da terapia:

RE +
hormonioterapia
RE -
sem hormonioterapia,
quimioterapia (?)
RP +
maior sobrevida,
independente do
tratamento utilizado
Quando considerar positivo?

toda imunopositividade nuclear com o anticorpo anti receptor de
estrognio deve ser considerada como resultado positivo e indicativa
de terapia anti estrognica para a paciente
(NIH - National Institutes of Health, EUA, 2001).
Como relatar o resultado?

informar o valor percentual das clulas neoplsicas do
componente infiltrante com imuno-positividade nuclear
(CAP - Colgio Americano de Patologistas, 1999).
Receptor de estrognio (negativo)
Receptor de estrognio (25-50%)
Receptor de estrognio (50-75%)
Receptor de estrognio (>75%)
Receptor de estrognio
IHQ Receptor de progesterona
Oncoprotena c-erbB-2 / Her2-neu
erbB-2: proto-oncogen que codifica o receptor para o fator

de crescimento epitelial (EGF-R).
Faz parte da famlia dos receptores de membrana celular.

c-erbB-2: oncogen que
age atravs da
superproduo de
receptores de membrana
para o EGF por amplificao
gnica.
Fator prognstico:
positivo
mau prognstico (maior proliferao e atipias
celulares, logo, encurtamento do perodo livre de metstases e

menor sobrevida)
Fator preditivo (terapia com Herceptin / Trastuzumab):

0 ou 1+ = negativo
sem imunoterapia
2 + = positivo fraco
caso FISH +
3+ = positivo forte
imunoterapia
imunoterapia
Quando considerar positivo e como relatar o resultado?

Ausncia ou menos de 10% de imunopositividade na membrana
citoplasmtica das clulas tumorais
= 0 = Negativo
Imunopositividade fraca em parte da membrana citoplasmtica em mais
de 10% das clulas tumorais
= 1+ = Negativo
Imunopositividade fraca a moderada em toda a membrana
citoplasmtica em mais de 10% das clulas tumorais
= 2+ = Fracamente positivo
Imunopositividade intensa em toda a membrana citoplasmtica em mais
de 10% das clulas tumorais
= 3+ = Fortemente positivo
A. 1+
negativo
B. 2+
positivo
C. 3+
positivo
Protena p53
Anti-oncogene que induz a clulas apoptose ou

correo de erros do DNA.
Inativao (por mutaes ou bloqueio) leva perpetuao

de clulas com erros genticos e DNA instvel. Ocorre em
pelo menos 50% das neoplasias humanas e em 10-15% dos
cnceres de mama.
Protena p53
Fator prognstico:
+
mau prognstico (instabilidade do DNA, causando novas
mutaes, logo, causando maior agressividade tumoral, com
encurtamento do perodo livre de metstases e menor sobrevida)
Inativao obsevada atravs de imunopositividade

(acmulo intranuclear da protena inativa)
No orientador de terapia
toda imunopositividade nuclear deve ser considerada como
resultado positivo
informar o valor percentual das clulas neoplsicas do componente
infiltrante com imuno-positividade nuclear
Protena p53
Antgeno de proliferao celular Ki67
Considerado o melhor marcador de proliferao celular

Fator prognstico:
> 40%
mau prognstico (grande proliferao celular, causando
maior crescimento tumoral, com encurtamento do perodo livre de
metstases e menor sobrevida).
100%
Ki67 < 40%

50%
Ki67 > 40%

0%
12
24
36
48 meses de sobrevida
Antgeno de proliferao celular Ki67
No orientador de terapia

toda imunopositividade nuclear
deve ser considerada como
resultado positivo
informar o valor percentual das
clulas neoplsicas do
componente infiltrante com imunopositividade nuclear.
IHQ no cncer de mama
Nossa experincia: IHQ em 1557 casos consecutivos de

cncer de mama, no perodo de maio de 2005 a abril de 2008
(36 meses)
Resultados: ndices de imunopositividade encontrados:

RE= 66,7% (n=1535)
RP= 63,2% (n=1496)
c-erbB-2 / Her2-neu= 16,7% (n=1332)
Triplo negativo: 16,7% (n=1319)
Concluso: os resultados obtidos esto de acordo com os

dados da literatura.
Receptor de Estrognio
> 75%
50-75%
25-50%
10-25%
< 10%
Receptor de Progesterona
neg
> 75%
50-75%
25-50%
10-25%
< 10%
neg
22%
34%
36%
37%
11%
7%
9%
6%
10%
7%
13%
8%
IHQ em 1557 casos consecutivos de cncer de mama,

no perodo de maio de 2005 a abril de 2008 (36 meses)
Receptores Hormonais
RE+ RP+
RE+ RP neg
RE neg RP neg
c-erbB-2 / Her2-neu
RE neg RP+
neg
7%
2+
3+
11%
6%
31%
53%
83%
9%
IHQ em 1557 casos consecutivos de cncer de mama,

no perodo de maio de 2005 a abril de 2008 (36 meses)
Permite a Classificao Molecular

Baseada nos padres de imuno-reatividade dos anticorpos
anti receptor de estrognio, receptor de progesterona e
oncoprotena c-erbB-2 Her2-neu e citoqueratinas basais
(citoqueratinas 5-6, 14 e 17).
Outras aplicaes: definio de invaso

Anticorpos para camada basal mioepitelial: calponina,
actina de msculo liso, citoqueratinas 5-6, citoqueratina
34 E12, p63, CD10...
Actina de musculo liso
Citoqueratinas 5-6
Calponina
Outras aplicaes: definio de tipo histolgico

Anticorpo anti Caderina-E positivo nas carcinomas
ductais e negativo nos carcinomas lobulares.
Ductos normais remanescentes positivos e tumor negativo= carcinoma lobular

Outras aplicaes: definio de leses pr-malignas

Anticorpos anti Citoqueratina 34bE12 e Citoqueratinas 5-6
so positivos nas leses hiperplsicas e negativos nas leses
com atipias e nos carcinomas in situ.
Ducto com alterao de clulas colunares com atipia (flat epithelial atypia, DIN1A)
Outras aplicaes: definio de outros tipos de neoplasias
Angiossarcoma CD31
Angiomiofibroblastoma CD34
Patologia e o futuro ?

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Patologia Cirrgica

Exame anatomopatolgico ATO

Preservar os componentes da amostra tecidual.

Mtodo de escolha: IHQ em material fixado em formol e

Enzima, substrato e cromgeno

Controles da reao (interno e externo)

Importante fator prognstico e orientador da terapia:

Quando considerar positivo?

Como relatar o resultado?

Receptor de estrognio (negativo)

Receptor de estrognio (25-50%)

Receptor de estrognio (50-75%)

Receptor de estrognio (>75%)

IHQ Receptor de progesterona

Oncoprotena c-erbB-2 / Her2-neu

erbB-2: proto-oncogen que codifica o receptor para o fator

Faz parte da famlia dos receptores de membrana celular.

Oncoprotena c-erbB-2 / Her2-neu

mau prognstico (maior proliferao e atipias

celulares, logo, encurtamento do perodo livre de metstases e

Fator preditivo (terapia com Herceptin / Trastuzumab):

Oncoprotena c-erbB-2 / Her2-neu

Quando considerar positivo e como relatar o resultado?

Oncoprotena c-erbB-2 / Her2-neu

Oncoprotena c-erbB-2 / Her2-neu

Anti-oncogene que induz a clulas apoptose ou

Inativao (por mutaes ou bloqueio) leva perpetuao

Inativao obsevada atravs de imunopositividade

Antgeno de proliferao celular Ki67

Considerado o melhor marcador de proliferao celular

Ki67 < 40%

Ki67 > 40%

Antgeno de proliferao celular Ki67

Quando considerar positivo?

IHQ no cncer de mama

Nossa experincia: IHQ em 1557 casos consecutivos de

Resultados: ndices de imunopositividade encontrados:

Concluso: os resultados obtidos esto de acordo com os

IHQ no cncer de mama

IHQ em 1557 casos consecutivos de cncer de mama,

IHQ no cncer de mama

IHQ em 1557 casos consecutivos de cncer de mama,

IHQ no cncer de mama

Permite a Classificao Molecular

IHQ no cncer de mama

IHQ no cncer de mama

Outras aplicaes: definio de invaso

Actina de musculo liso

IHQ no cncer de mama

IHQ no cncer de mama

Outras aplicaes: definio de tipo histolgico

Ductos normais remanescentes positivos e tumor negativo= carcinoma lobular

IHQ no cncer de mama

Outras aplicaes: definio de leses pr-malignas

IHQ no cncer de mama

Outras aplicaes: definio de outros tipos de neoplasias

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