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ING. BIOQUMICA.
MARA AZUCENA MRQUEZ LUCIO.
Alumnos
Bernal Arroyo Beatriz Adriana
IS09110411
Gonzlez Bautista Claudia Ernestina
IS09110533
ndice
INTRODUCCIN .............................................................................................................................. 1
ANTECEDENTES .............................................................................................................................. 3
Hidrocarburos .................................................................................................................................. 3
Hidrocarburos Biognicos ........................................................................................................... 3
Hidrocarburos Antrpicos ........................................................................................................... 3
Aceites lubricantes .......................................................................................................................... 3
Aceites residuales............................................................................................................................ 4
Caractersticas generales de los aceites residuales..................................................................... 6
Destino de aceites usados en Mxico .......................................................................................... 8
Consecuencias del mal uso del aceite residual ............................................................................ 9
Impacto en la salud y medio ambiente ...................................................................................... 10
Degradacin de los hidrocarburos ................................................................................................. 12
Microorganismo degradadores de hidrocarburos .......................................................................... 13
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA.......................................................................................... 19
JUSTIFICACIN ............................................................................................................................. 20
OBJETIVO GENERAL .................................................................................................................... 21
OBJETIVO PARTICULAR .............................................................................................................. 21
METODOLOGA ............................................................................................................................. 21
Esquema de trabajo ....................................................................................................................... 21
Muestreo........................................................................................................................................ 22
Obtencin de Pseudomonas .......................................................................................................... 22
Aislamiento de cepas y pruebas bioqumicas ............................................................................... 22
Preparacin del inculo ................................................................................................................. 22
Prueba degradativa ........................................................................................................................ 22
RESULTADOS ................................................................................................................................. 23
Obtencin de Pseudomonas .......................................................................................................... 23
Aislamiento de cepas y pruebas bioqumicas ............................................................................... 23
Prueba degradativa ........................................................................................................................ 24
DISCUSIONES ................................................................................................................................. 25
i
CONCLUSIN ................................................................................................................................. 27
ANEXOS........................................................................................................................................... 27
Bibliografa ........................................................................................................................................ 32
ndice de tablas
Tabla 1 Valores tpicos de composicin de los aceites minerales, indicando la funcin de
los diferentes aditivos ............................................................................................................. 4
Tabla 2 Composicin de un aceite usado segn su procedencia ............................................ 7
Tabla 3 Composicin de un aceite usado segn su procedencia ............................................ 7
Tabla 4 Frmula (en gramos por litro) ................................................................................. 29
Indice de Ilustraciones
Ilustracin 1 Reaccin de oxidacin de hidrocarburos del aceite lubricante ......................... 5
Ilustracin 2 esquema de trabajo .......................................................................................... 21
Ilustracin 3 morfologa macroscpica tentativa de ............................................................. 23
Ilustracin 4 morfologa macroscpica de la cepa ............................................................... 24
ii
RESUMEN
iii
INTRODUCCIN
Uno de los problemas ambientales ms importantes de la actualidad es la contaminacin de
ecosistemas terrestres y acuticos por derrames de hidrocarburos de petrleo y sus
derivados. En el caso de los suelos, las principales consecuencias ambientales que se
presentan despus de un evento de contaminacin por hidrocarburos son: la reduccin o
inhibicin del desarrollo de la cobertura vegetal en el lugar del derram, cambios en la
dinmica poblacional de la fauna, de la biota microbiana y contaminacin por infiltracin a
cuerpos de agua subterrneos. Adems del impacto ambiental negativo, los derrames de
hidrocarburos generan impactos de tipo econmico, social y de salud pblica en las zonas
aledaas al lugar afectado. La reglamentacin nacional considera a los aceites usados como
residuos peligrosos y de otros compuestos de impacto al ambiente.
Comienzos de los aos ochenta, se empez a actuar sobre los espacios contaminados el
mtodo sola consistir en retirar los residuos y/o suelo contaminado a un vertedero o
cubrirlos con una capa impermeable (confinamiento). Hoy se plantea la necesidad de
desarrollar alternativas para solucionar de forma permanente y menos costosa el problema
de los espacios contaminados (Moreno & Ortiz, 2004)
La biorremediacin surge de la necesidad de disminuir el impacto ambiental negativo de
los derrames de hidrocarburos en los diferentes ambientes (agua y suelos) usando
microorganismos, plantas o enzimas, de manera estratgica con el fin de restaurar la calidad
ambiental, de acuerdo con las necesidades y dimensiones del problema (Pardo, 2004).
La contaminacin por hidrocarburos del petrleo es una problemtica de carcter mundial
y amplia distribucin geogrfica, teniendo en cuenta que independiente de la zona afectada
(lagos, suelos, zonas freticas, ros y playas) por procesos biolgicos y fsicos, los
hidrocarburos tienen como destino final los mares y ocanos (Shanidul, 2004). Con el fin
de contrarrestar los efectos nocivos causados por la presencia del petrleo en los
ecosistemas marinos se han desarrollado tcnicas fsicas, qumicas y biolgicas que buscan
remover el mayor porcentaje del contaminante y disminuir el impacto generado tras un
derrame o acumulacin progresiva. Entre las diversas tcnicas, la biodegradacin es
1
La bioaumentacin se
ANTECEDENTES
Hidrocarburos
Los hidrocarburos son compuestos formados por tomos de carbono e hidrgeno, de gran
abundancia en la naturaleza, presentes principalmente en el petrleo. El nmero de
carbonos y su estructura qumica determina su clasificacin. Los hidrocarburos alifticos
son de cadena lineal o ramificada y puede ser saturado (alcanos) o insaturados (alquenos y
alquinos). Los hidrocarburos de cadena cclicas, pueden ser saturados (ciclo alcano) o con
uno o ms anillos bencnicos (aromticos) (Morrison & Boyd, 1985).
Hidrocarburos Biognicos
Estos son sintetizados por casi todas las plantas, animales terrestres y marinos, incluyendo
la micro biota, bacterias, plancton marino, diatomeas, algas y plantas superiores. La sntesis
de este tipo de hidrocarburos est controlada por rutas metablicas, lo cual trae como
resultado mezclas de compuestos de limitada complejidad estructural relacionada
directamente con la funcin biolgica especfica (Bedair & Al-Saad, 1992).
Hidrocarburos Antrpicos
Son aquellos introducidos como resultado de cualquier tipo de actividad humana. Los
procesos de combustin industrial contribuyen con niveles altos, debido al humo generado
por carbn, combustibles fsiles y petrleo refinado, las descargas de aguas municipales,
las actividades de transporte y los derrames son algunas de las principales fuentes de estos
contaminantes (Bidleman, Castleberry, & Foreman, 1990).
Aceites lubricantes
Los aceites lubricantes estn constituidos por una base lubricante y una serie de aditivos.
Dependiendo del uso del aceite, la base lubricante ser mineral (proveniente del petrleo
crudo), sinttica o vegetal, siendo el uso mayoritario las bases lubricantes minerales.
El aceite lubricante para motores tiene como funcin primordial evitar el contacto directo
entre superficies con movimiento relativo, reduciendo as la fraccin, calos excesivo,
desgaste, ruido, golpes, vibracin, etc.
Aceites residuales
Los aceites lubricantes son productos de uso masivo, siendo consumidos por el sector
industrial, empresas de servicios y transporte. Los puntos de generacin, as como los
actores involucrados son muy diversos, destacndose en orden de relevancia por el
volumen de generacin las estaciones de servicio y talleres de mantenimiento de vehculos
y plantas industriales. En el caso de los vehculos se estima una vida til de aceite
lubricante equivalente a los 5000 km, mientras que en los usos industriales depende del uso
especfico.
El parque automotriz mundial genera alrededor del 65% de total de aceite usado generado,
mientras que el restante 35% es de origen industrial (EPA, 1991).
La denominacin aceite usado comprende a los aceites de origen mineral, que durante el
uso perdieron sus propiedades caractersticas, volvindose inapropiados para continuar su
utilizacin con el mismo propsito. Comprende a los aceites lubricantes de motores (de
vehculos y mquinas industriales), los fluidos hidrulicos y de transmisin.
Despus de su uso, el aceite lubricante adquiere concentraciones elevadas de metales
pesados producto principalmente del desgaste del motor o maquinara que lubric y por
contacto con combustibles. Adems, se encuentran con frecuencia solventes clorados en los
aceites usados, provenientes principalmente por contaminacin durante su uso (reaccin del
aceite con compuestos halogenados de los aditivos). La presencia de hidrocarburos
aromticos, solventes clorados, junto con altas concentraciones de algunos metales pesados
constituye la principal preocupacin de los aceites usados (Benavente & Gonzalo, 1999).
La descomposicin de los aceites de motor se debe especialmente a una reaccin de
oxidacin. En todos los casos, como consecuencia de su utilizacin se degradan perdiendo
las cualidades que les hacan operativos y se hace necesaria su sustitucin, generndose as
un residuo que puede ser variable en cantidad y composicin, dependiendo de la
procedencia.
La oxidacin de los hidrocarburos en fase liquida algunas veces es una reaccin de
radicales en cadena. Esta reaccin se muestra en la figura (Benavente & Gonzalo, 1999) 1.
durante ste periodo la oxidacin del aceite es muy dbil. En el motor la oxidacin se
produce de forma muy rpida, en particular por la elevada temperatura que alcanzan las
piezas prximas a la cmara de combustin (Benavente & Gonzalo, 1999)
Caractersticas generales de los aceites residuales
Se adhiere a todo desde la arena de las playas hasta las plumas de las aves.
(LGEEPA, 2001)
Caractersticas Qumicas.
Los aceites, como consecuencia de su utilizacin se degradan perdiendo las cualidades que
les hacan operativos, llegado ste punto se hace necesaria su sustitucin por otros nuevos,
generndose un residuo que puede ser variable en cantidad y composicin, dependiendo de
la procedencia.
Las caractersticas del aceite usado pueden variar dentro de un amplio margen dependiendo
de la procedencia y aplicacin del aceite, en general las contaminaciones tienen su origen
en compuestos derivados de la degradacin de los aditivos en subproductos de combustin
incompleta, polvo, partculas metlicas o en contaminaciones exteriores por mal
mantenimiento o mal almacenamiento del aceite. (Woltron, 2002)
(Dugan, 2004)
Algunos destinos ilegales de los aceites usados que presentaron riesgos sobre la salud
pblica y efectos nocivos sobre el medio ambiente, son:
La Autoridad Sanitaria, SEREMI de Salud, debe fiscalizar y controlar que los aceites
usados sean eliminados mediante tcnicas de eliminacin autorizadas de acuerdo al
Reglamento Sanitario Sobre Manejo de Residuos Peligrosos (DS N. 148/03).
Consecuencias del mal uso del aceite residual
El aceite usado de motor puede ser recolectado para utilizarlo en varios campos industriales
y de comercio. Entre ellos los usos ms comunes en los que se utiliza el aceite quemado son
(BENAVENTE R, 1999):
Destilacin.
ste proceso es empleado para producir flux de asfalto, al comienzo del proceso se destila
el aceite usado para remover compuestos voltiles, agua, etc. El destilado final es la
separacin de los aceites pesados (destilado) de los contaminantes (fondos). El producto de
la destilacin es un aceite diesel de alta calidad (bajo en cenizas y contenido de azufre) y un
subproducto de flux de asfalto (RAMREZ, 2005).
Combustin.
Para el aprovechamiento energtico de los aceites usados se pueden seguir dos caminos
diferentes en funcin de las instalaciones en las que se va a realizar la combustin:
El primer camino.- El aceite quemado se destina como combustible en instalaciones con
alta potencia trmica, altas temperaturas, gran consumo de combustible y alta produccin
de gases. El mayor ejemplo de esto son los hornos de clinker en las cementeras, estos
hornos queman el aceite usado y los contaminantes de ste especialmente los metales
quedan incorporados al cemento, por lo que no representa problemas de contaminacin
atmosfrica.
El segundo camino.- Puede ser usado en la aplicacin de tratamientos fsico-qumicos ms
complejos con el fin de fabricar un combustible que pueda tener un espectro de utilizacin
ms amplio en instalaciones con menos potencia trmica o en motores de combustin y
calderas (FLOREZ PIEDRAHITA, 2001).
El aceite es uno de los residuos con mayor potencial para ser empleado como combustible
por su elevada capacidad calorfica. La transformacin del aceite usado a energtico
requiere de la aplicacin de un tratamiento tendiente a adecuar las condiciones del aceite a
las caractersticas propias del proceso de combustin, consistente bsicamente en la
aplicacin de dos etapas: adecuacin del aceite usado mediante procesos de filtracin para
retirar partculas gruesas y remocin de partculas finas, mediante procesos de
sedimentacin y centrifugacin. Estas etapas involucran la adicin de desemulsificantes,
para el rompimiento de las emulsiones formadas con el agua (PANTOJA, 1995).
Regeneracin.
Biodegradacin.
Se refiere al proceso a travs del cual un ser vivo modifica un compuesto sin llegar a
mineralizarlo. En algunos casos el producto resultante puede ser incluso ms txico y
perjudicial que la sustancia de partida (Fernando., 1990).
Impacto en la salud y medio ambiente
En la actividad petrolera, las disposiciones y el manejo habitual de hidrocarburos y
combustibles, en algunos casos conlleva a la contaminacin del ambiente, cuando tanques,
oleoductos y diversas instalaciones sufren daos. Los lquidos migran hacia el suelo, subsuelo
(zona vadosa) y hacia el agua subterrnea (zona saturada acufero) o superficialmente hacia
un bajo topogrfico o curso de agua, y sus componentes voltiles a la atmosfera. No solo las
contaminaciones se producen por roturas de los sistemas de almacenaje o de transporte, sino
que el mal manejo del producto puede provocar impactos negativos en la ecologa regional
(Vasallo, 2002).
10
Pozos de explotacin.
Bateras de separacin.
11
Si se arroja al suelo, ste contiene una serie de hidrocarburos, metales y aditivos que
favorecen su penetracin y dispersin en el terreno, destruye el humus vegetal y
acaba con la fertilidad del suelo.
estabilizacin
qumica
la
biodegradacin
del
contamnate
por
procesos
fsicos
(evaporacin,
dispersin,
dilucin),
qumicos
12
13
del
petrleo,
las
bacterias
degradadoras
de
HC
son
considerados
14
orgnicos),
Corynebactrium,
Brevibacterium,
Flavobacterium,
Caulobacter,
Micrococcus,
Celullomonas,
Mycobacterium,
Clostridium,
Pseudomonas,
Las Arthrobacter
y Nocardia son
bacterias del tipo corniformes colonizan una gran variedad de micro ambientes. En el suelo,
tambin se encuentran en menor proporcin las bacterias del gnero Beijerinckia, Derxia,
Azomonas, y otros (Burges, 1971).
En investigaciones realizadas por Christon et al. (1997), se logr una disminucin de
hidrocarburos cercana al 95% con la adicin de microorganismos al rea de tratamiento,
mientras que en los campos no tratados la reduccin fue del 14%. En el caso del buque
15
Los alcanos comprendidos entre 13 y 20 C han sido oxidados por bacterias de los gneros
Pseudomonas, Acinetobacter, Arthrobacter y Bacillus. Los gneros bacterianos que oxidan
parafinas con ms de 20 tomos de carbono reportados son muy pocos. Entre ellos estn
Acinetobacter sp. cepa H01-N (Micococcus cerificans), Acinetobacter sp. cepa M-1,
Arthorobacter nicotinae cepa KCCB35 Y Pseudomonas aeruginosa cepa MGP-1.
El petrleo con sus cuatro fracciones, hidrocarburos saturados, hidrocarburos aromticos,
resinas y asfaltenos, es un compuesto muy complejo, considerado el contaminante ms
extendido en la biosfera y en el ambiente marino, por lo tanto un problema global
(Alexander, 1999). Representa la mayor fuente energtica y la base para la obtencin de
materias primas para la industria. Su explotacin, transporte y refinacin generan
problemas ambientales, especialmente por derrames accidentales y de prcticas
inadecuadas de eliminacin de fuentes, como industrias y refineras de petrleo (Allsopp D,
2004).
16
pH, salinidad
tipos
de
17
Los hongos constituyen la segunda porcin ms elevada de la biomasa microbiana del suelo
y se presentan generalmente como finos filamentos. La distribucin de los hongos en el
suelo est determinada por la disponibilidad de carbono orgnico. Son considerados como
saprofitos, es decir que crecen en tejidos muertos y realizan la descomposicin de la
materia orgnica y generalmente se encuentran en la capa superior del suelo (Coyne, 2000).
Los hongos tienen la habilidad de descomponer residuos orgnicos como los azcares,
protenas, almidn y compuestos ms resistentes como hemicelulosa y lignina, lo que
permite mantener un equilibrio en los ecosistemas del suelo (Casanova, 1991). Los hongos
representan un gran depsito de nutrientes para el crecimiento potencial de
microorganismos, y subsisten en el suelo debido a los mecanismos de esporas y sus
estructuras de reposo. Los hongos del suelo metabolizan carbohidratos y pueden degradar
lignina; este tipo de microorganismos son cuantificables (Casanova, 1991). Las races de
las plantas con exudaciones radiculares estn pobladas de hongos, que movilizan los
nutrientes hacia las plantas y aumentan la capacidad de retener agua, fijar nitrgeno y
solubilizar fsforo. Adicionalmente, protegen a las races de patgenos, emitiendo
sustancias que inhiben su crecimiento.
Los grupos importantes de hongos que se encuentran en el suelo son Zygomycota,
Ascomycota, Deuteromycota y Basidiomycota. La mitad de los hongos que generalmente se
18
aslan del suelo pertenecen a los deuteromicetos, los gneros Penicillium, Geotrichum,
Aspergillus y Trichoderma. (Benzina & Verlag, 2001). El gnero Trichoderma est
compuesto por hongos que se encuentran en forma natural, en casi todos los suelos. Otros
gneros que se encuentran en el suelo, muy raramente ya que son considerados como
patgenos para las plantas son los Omicetos (Pythium y la Phytophthora) y hongos
complejos como Agaricus urenidales, estos ltimos causantes de la putrefaccin de la
madera.
La patogenecidad por hongos es una caracterstica que se origina en el suelo, las especies
que son saprofitas pueden invadir tejidos vivos y comportarse como agente patgeno. Solo
una pequea cantidad de hongos del suelo causan enfermedades a los vegetales y la
provocan con frecuencia los gneros: Armillaria, Helminthosparium, Ophiobolus,
Plasmodiophora, Rhizoctonia, Sclerotium, Verticilium, Thielaviopsis, Phytium, Fusarium
(Snchez, 2001)
Las levaduras frecuentes en el suelo son hongos imperfectos (deuteromicetes). Los gneros
de levaduras que se encuentran en el suelo son los siguientes: Candida, Rhodotorula y
Cryptococcus y las especies como Lipomyces, Schuwanniomyces, Kluyveromices,
Schizoblastoporiom, Hansenula y Cryptococcus todas se han aislado nicamente del suelo
(Atlas R. , 2001).
JUSTIFICACIN
Uno de los problemas en el contexto ambiental lo representan los residuos peligrosos, los
generados en mayor cantidad aproximadamente el 54% corresponde a derivados del
petrleo. De estos los aceites lubricantes que al terminar su vida til, en algunos casos su
manejo y disposicin son inadecuados de acuerdo a las normas existentes, que en
consecuencia son vertidos al ambiente y contaminando aguas, aire y suelo principalmente
este ltimo.
En una ciudad circulan alrededor de 180 mil vehculos los cuales generan aproximadamente
2 millones de litros de aceite automotriz usado de los cuales aproximadamente solo 240 mil
litros, tiene un uso adecuado siendo utilizado para la produccin de ladrillo, el resto tiene
un destino incierto, ya sea, para la produccin de ladrillo en la periferia de la ciudad o bien
en vertido en lotes baldos, drenaje y aceras entre otras, causando un grave dao al
ambiente de la ciudad y por consecuencia a la salud pblica (EPA, 1991).
En los ltimos aos se han implementado una serie de tecnologas para remediar los suelos
contaminados por hidrocarburos, de estas, la biorremediacin ha mostrado mayor eficiencia
en la degradacin de los contaminantes hasta formas menos txicas, mitigando la polucin
ambiental. (Casanova, 1991)
Por tal motivo el presente trabajo utiliz Pseudomonas aprovechando su capacidad para
degradar hidrocarburos presentes en aceite automotriz usado, el cual se encuentra como
contaminante recalcitrante en suelos y aguas de la ciudad.
Con base a esta investigacin se pueden plantear estrategias similares para la remediacin
de los sitios contaminados, tanto por desperdicio de aceites de motor usados de trilladoras,
20
entre otros, con similares condiciones, traducindose as en empresas que llevan a cabo
iniciativas de soluciones ambientales, que promueven el desarrollo y difusin de
tecnologas amigables y como consecuencia empresas ms competitivas y con mayor
responsabilidad social. (Atlas R. M., 2002).
OBJETIVO GENERAL
Obtencin de Pseudomonas y evaluacin de su capacidad degradativa de hidrocarburos
que componen el aceite residual
OBJETIVO PARTICULAR
Evaluar la resistencia que tiene pseudomona en medios de cultivo que contienen
aceite residual como nica fuente de carbono.
METODOLOGA
Esquema de trabajo
Muestreo
Se hace una extraccin de suelo a 20 cm de profundidad tomando como referencia las
especificaciones de la NOM-138-SEMARNAT/SS-2003, la cual establece que se tomarn 4
puntos de muestreo por ser un rea con medidas cercanas a 0.1 y stas se homogenizan
para obtener nicamente 1 muestra.
Obtencin de Pseudomonas
Se realizan diluciones tomando un gramo de suelo de la muestra obtenida y se agrega a 9
ml de agua destilada estril, luego de agitar, se realizan las diluciones seriadas hasta 10 -3
empleando para los recuentos las diluciones entre 10-2 y 10-3. El recuento para las bacterias
se realiza en medio King A, a las cajas de Petri solidificadas se les adiciona 0.1 ml de la
dilucin por la tcnica de vaciado en placa y se exponen a 35C por 24 horas (Gmez et al,
2009). Se tomarn como colonias sospechosas aquellas que macroscpicamente presenten
una tonalidad verde-azulado.
Aislamiento de cepas y pruebas bioqumicas
Para la etapa confirmativa desde las muestras positivas, es decir, las colonias sospechosas,
se toma una a dos asadas y se siembran en Agar Cetrimida Base por agotamiento del
inculo. Las placas se incuban a 35C 0.5C durante 24 horas. La produccin de
pigmentos fluorescentes verdes en las colonias constituye la prueba confirmativa positiva
para la presencia de Pseudomonas, a partir de las cuales se realiza la identificacin
bioqumica a travs de la prueba de la oxidasa (Villegas et al, 2012), siendo positiva para
sta especie de acuerdo al cuadro 1 (Callic et al, 2004).
Preparacin del inculo
De las cepas obtenidas en el Agar Cetrimida Base confirmadas como posibles
Pseudomonas se coloca una asada en 100 ml de caldo LB (Luria Bertani) en un matraz
Erlenmeyer, para obtener un enriquecimiento de dicha bacteria (Samanez, 2008), se incuba
a 35C 0.5C durante 24 horas (Villegas et al, 2012).
Prueba degradativa
Colocar en placas de Petri 15 ml de medio mnimo (M9), una vez que solidifiquen se
adicionan 500 l de aceite residual y 500 l del caldo LB inoculado con Pseudomonas y se
expanden con ayuda de un asa de Drigalsky hasta formar una fina capa en el agar. Se repite
22
la operacin en dos placas ms con las mismas cantidades de inculo y aceite residual
respectivamente para corroborar la degradacin de la fuente de carbono (Salgado, 2008).
RESULTADOS
Obtencin de Pseudomonas
El conteo hecho para las placas en medio King A tuvo un total de 3 colonias
sospechosas, que presentaron un color verde-azulado a simple vista.
23
Prueba degradativa
24
DISCUSIONES
cambios de
durante los
ensayos en medio acuoso o semislido. Dan una idea de los eventos dominantes del cultivo
as como de las condiciones a las que se ven expuestas las bacterias (Prescott; Harley;
Klein, 1995).
25
para sus
de oxgeno es
26
que la acumulacin excesiva haya provocado una lisis casi inmediata, no mostrando
resultados muy evidentes (Hubert ; Shen ; Voordouw, 1999).
CONCLUSIN
Los microorganismos nativos del suelo muestreado, tienen la capacidad de degradar los
hidrocarburos que componen el aceite residual. La adicin de nutrientes proporciona
condiciones favorables a los microorganismos para que realicen
las actividades
ANEXOS
Medio King A
Frmula (en gramos por litro)
Peptona...20
Cloruro de Magnesio..1.4
Sulfato de Potasio10
Agar10
Peptona...20
Cloruro de Magnesio.1.4
Sulfato de Potasio..10
Cetrimida0.3
Agar..13.6
Medio M9
Frmula (en gramos por litro)
Cloruro de amonio.......1.0
Fosfato de sodio..6.0
Fosfato de potasio.3.0
cloruro de sodio..0.5
Glicerol5.0
Sulfato de magnesio 1N1 ml
Cloruro de calcio 0.01M.10 ml
28
Medio King A
Casena hidrolizada cida
(
) (
(
)
)
Peptona
(
) (
(
)
)
Sulfato de Potasio
(
) (
(
)
)
Cloruro de Magnesio
(
) (
(
)
)
Agar bacteriolgico
29
) (
) (
Peptona
(
) (
Cloruro Magnsico
(
) (
Sulfato Potsico
(
) (
Agar bacteriolgico
(
) (
Agar motilidad
Triptena
(
) (
(
)
)
Cloruro de sodio
(
) (
(
)
)
Agar bacteriolgico
30
) (
(
)
)
Medio M9
Fosfato de Sodio
(
) (
(
)
)
Fosfato de Potasio
(
) (
(
)
)
Cloruro de Sodio
(
) (
(
)
)
Cloruro de amonio
(
) (
(
)
)
Agar bacteriolgico
(
) (
(
)
)
Medio LB
Extracto de levadura
(
(
(
)
)
Cloruro de Sodio
(
(
(
)
)
Bacto tristona
31
(
(
)
)
Bibliografa
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32
35