TABLA DE CONTENIDO

INTRIDUCCIN....................................................................................................3
OBJETIVOS..........................................................................................................4
Objetivo General:..............................................................................................4
Objetivos Especficos:.......................................................................................4
METODOLOGA...................................................................................................5
A.

MEDIOS DE CULTIVOS.............................................................................5

B.

TINCIN DE GRAM.................................................................................13

C.

SOLUCIONES DE SUELO Y AGUA PARA RECUENTO EN PLACA......16

D.

METODO DE SISEMBRA........................................................................20

E.

DESCRIPCIN MACROSCOPICA DE MICROORGANISMOS..............22

RESULTADO......................................................................................................24
A.

MEDIOS DE CULTIVOS...........................................................................24

B.

TINCIN DE GRAM.................................................................................24

C.

SOLUCIONES DE SUELO Y AGUA PARA RECUENTO EN PLACA......25

D.

METODO DE SISEMBRA........................................................................25

E.

DESCRIPCIN MACROSCOPICA DE MICROORGANISMOS..............25

DISCUCIN........................................................................................................27
A.

MEDIOS DE CULTIVOS...........................................................................27

B.

TINCIN DE GRAM.................................................................................27

C.

SOLUCIONES DE SUELO Y AGUA PARA RECUENTO EN PLACA......27

D.

METODO DE SISEMBRA........................................................................28

E.

DESCRIPCIN MACROSCOPICA DE MICROORGANISMOS..............28

OBJETIVOS
Objetivo General:
Clasificar los microorganismos empleados en procesos biotecnolgicos de bioremediacin.

Objetivos Especficos:
- Identificar equipos y elementos de laboratorio.
- Conocer Medidas de seguridad.
- Realizar anlisis de microorganismos, presentes en el agua, suelo y aire.

METODOLOGA
Al inicio de cada laboratorio tenemos que tener en cuenta las siguientes
medidas de seguridad e higiene:
Elementos de proteccin personal:

Bata.

Guantes.

Tapabocas o protector naso-vocal.

Gafas.
Higiene

Lavar.

Desinfectar.

Estelarizar o pringar.
A. MEDIOS DE CULTIVOS
1. Pesar 5 g Agar Nutritivo.
Imagen. 1.

2. Vertir 250 ml de Agua Destilada en un Matras.

Imagen. 2.

3. Adicionar los 5 g de Agar Nutritivo al Matras que contiene Agua

Destilada.
Imagen. 3.

4. Utilizar un agitador magntico para disolver, se deja por 5 minutos al

mximo de revoluciones.
Imagen. 4.

5. Colocar un tapon de algodn y gasa en la boca del Matras.

Imagen. 5.

6. Se debe sellar con papel aluminio.

Imagen. 6.

7. Se prepara gelatina adicionando un cubo de magui.

Imagen. 7.

8. En un beaker se adiciona 70 ml de gelatina.

Imagen. 8.

9. Se debe tapar con papel aluminio.

Imagen. 9.

10. Beaker se deja junto al mechero encendido.

Imagen. 10.

11. El Matras se debe ingresar a un recipiente con agua caliente por un

tiempo de 5 minutos.
Imagen. 11.

12. Esta solucin se vierte en tubos de ensayo, una cantidad aproximada de

un .
Imagen. 12.

13. Para hacer al anterior proceso sin que la solucin se contamine se debe
calentar la boca de Matras en un mechero y la misma la del tubo de
ensayo.
Imagen. 13.

14. Luego estos tubos se les inserta un tapn de algodn y se deben sellar
con papel de aluminio.
Imagen. 14.

15. Se vierte un poco de la solucin en una caja de Petri, se sella con cinta
de enmascarar y se envuelve en papel de aluminio.
Imagen. 15.

16. Los tubos de ensayo, beaker y la caja de Petri, deben ser refijerados en
una nevera.
Imagen. 16.

B. TINCIN DE GRAM
1. Se toma muestra con Asa Redonda.
2. Se esparce en el Porta Objetos.

3. Fijar la muestra, flameando el Porta Objetos con un mechero por la parte

inferior (debajo) del Porta Objetos.
4. Aplicar a la muestra del Porta Objetos Colorante Cristal Violeta por un
(1) minuto.
Imagen. 17

5. Aplicar lugol por un (1) minuto.

Imagen. 18

6. Aplicar alcohol/acetona por un (1) minuto.

Imagen. 19

7. Aplicar colorante de contraste por un (1) minuto.

Imagen. 20

8. Aplicar solucin salina para lavar.

9. Secar la parte inferior (debajo) del Porta Objetos.

10. Mirar en el Estereoscopio e identificar Gram + / Gram -.

Imagen. 21

C. SOLUCIONES DE SUELO Y AGUA PARA RECUENTO EN PLACA

1. En una gramera se pesan 10 g de suelo.
Imagen. 22

2. En un Matras se miden 90 ml de Solucin Salina.

Imagen. 23

3. Luego se vierte los 10 g de suelo al Matras con 90 ml de Solucin

Salina.
Imagen. 24

4. El Matras se coloca en un Agitador Magnetico hasta que la mescla se

omogenice.

Imagen. 25

5. En Tubos de Ensayo vierta 9ml de Solucin Salina.

Imagen. 26

6. Se toma 1 ml de la mescla de suelo y solucin salina y se vierte al

primer tubo de ensayo y se homogeniza la mescla.

7. Luego se toma 1ml del primer tubo de ensayo y se vierte en el segundo,

asi mismo se hace con los 3 siguientes para un total de 5 muestras.
Imagen. 27

8. Al terminar se rotulan, se les coloca un tapn y se eligen la ltima

muestra que la 5. Para ser refrigerada. Las dems se eliminan.
Imagen. 28

D. METODO DE SISEMBRA
1. Se obtiene un Agar Nutritivo.
Imagen. 29

2. Se toma un Asa Redonda y se flamea en un mechero hasta que est

llegue a su temperatura mxima, presentando un color rojo luego se
retira.
Imagen. 30

3. Se toma el Tubo de ensayo con la muestra diluida de suelo y se flamea.

4. Se le inserta el Asa Redonda al tubo de ensayo, donde se toma una
muestra a analizar.
5. Se flamea el tubo de ensayo y se coloca el tapn.
6. El Asa se ingresa a la Caja de Petri y se hace un leve sigsag en una
parte de ella.
7. El Asa se saca y se flamea y se esteriliza con Solucin salina, se hace el
mismo proceso con la muestra de agua.

E. DESCRIPCIN MACROSCOPICA DE MICROORGANISMOS

1. Se toma un hongo.
Imagen. 31

2. El hongo se coloca en un Porta Objetos.

Imagen. 32

3. Se empieza a analizar en un estereoscopio.

Imagen. 33

4. Se toma con Asa Redonda muestra de bacteria, de la gelatina.

Imagen. 34

5. Se esparce en un Porta Objetos

Imagen. 35

6. Se analiza la muestra
Imagen. 36

RESULTADO
A. MEDIOS DE CULTIVOS
1. Se obtiene Agar Nutritivo para hacer siembra de bacterias.
2. Se realiza una preparacin de sustancias para crear bacterias y hongos
en un tiempo rpido.
3. Se obtiene Agar Nutritivo en Tubos de ensayo.

B. TINCIN DE GRAM
1. Se obtiene una bacteria Gram (Rosada)

C. SOLUCIONES DE SUELO Y AGUA PARA RECUENTO EN PLACA

1. Se obtiene la muestra de agua para hacer anlisis de bacterias en el
agua.
D. METODO DE SISEMBRA
1. Se hace la siembra de la muestra de agua para el anlisis de bacterias
existentes en el agua.

1.

E. DESCRIPCIN MACROSCOPICA DE MICROORGANISMOS

Se observa que el hongo tiene las siguientes caractersticas:
Elevacin:

Umbilicada.
Aspecto:

Opaco.
Consistencia:

Dura.
Pigmento:

Verde:
Olor:

Potrefacto.

2. Se observa que la bacteria tiene las siguientes caractersticas:

Elevacin:

Plana.
Aspecto:

Opaco.
Consistencia:

Dura.
Pigmento:

Verde en el centro y blanco alrededor.

Olor:

Potrefacto.

DISCUCIN
A. MEDIOS DE CULTIVOS
Se utiliz:
-

Elementos:

Matras.

Tubos de enzayo.

Algodn.

Cinta de enmascarar.

Papel aluminio.

Baeker.

Olla.
Equipos:

Gramera.

Agitador magntico.

Estufa elctrica.

Mechero.

Gradilla.

Caja Petri.

B. TINCIN DE GRAM
Se utiliz:
-

Elementos:

Colorante cristal violeta

Alcohol

lugol
Equipos:

Estereoscopio.

Porta Objetos.

Cubre Objetos.

C. SOLUCIONES DE SUELO Y AGUA PARA RECUENTO EN PLACA

Se utiliz:
-

Elementos:

Matras.

Tubos de enzayo.

Algodn.

Cinta de enmascarar.

Papel aluminio.

Equipos:

Gramera.

Agitador magntico.

Mechero.

Gradilla.

Beaker.

Pipeta.

D. METODO DE SISEMBRA
Se utiliz:
-

Elementos:

Tubos de enzayo.

Algodn.

Cinta de enmascarar.
Equipos:

Mechero.

Gradilla.

Caja Petri.

Asa Redonda.
E. DESCRIPCIN MACROSCOPICA DE MICROORGANISMOS

Se utiliz:
-

Elementos:

Porta Objetos.
Equipos:

Mechero.

Gradilla.

Caja Petri.

Asa Redonda.

Estereoscopio.