Revista Brasileira de Farmacognosia

Brazilian Journal of Pharmacognosy

16(4): 562-567, Out./Dez. 2006

Recebido em 13/01/06. Aceito em 20/07/06

Artigo

Desenvolvimento e validao da metodologia de quantificao

gravimtrica de resina glicosdica em fitoterpicos contendo
Operculina macrocarpa (L.) Urban
Luciana R. Lima1, Haroudo S. Xavier2, Juliana L. Meira3, Pedro J. Rolim Neto1*
Laboratrio de Tecnologia dos Medicamentos, Departamento de Cincias Farmacuticas, Universidade Federal de
Pernambuco, Cidade Universitria, 50740-521, Recife, PE, Brasil,
2
Laboratrio de Farmacognosia, Departamento de Cincias Farmacuticas, Universidade Federal de Pernambuco,
Cidade Universitria, 50740-521, Recife, PE, Brasil,
3
Ncleo de Controle de Qualidade de Medicamentos e Correlatos, Departamento de Cincias Farmacuticas,
Universidade Federal de Pernambuco, Cidade Universitria, 50740-521, Recife, PE, Brasil

RESUMO: O extrato de tubrculos de Operculina macrocarpa (Jalapa do Brasil) um produto

fitoterpico, com eficcia no tratamento de constipao, como laxante. A resina quantificada
extrada com soluo hidroalcolica apresentando constituintes orgnicos e inorgnicos, podendo
ser dividida em duas fraes principais: uma solvel em ter, chamada de jalapina e outra, mais
polar, ainda pouco estudada, denominada convolvulina. O interesse principal deste trabalho
foi propor uma otimizao da metodologia gravimtrica para doseamento da resina descrita na
Farmacopia Brasileira primeira edio e sua validao com o objetivo de diminuir os custos e o
tempo de partio das fases. Os resultados obtidos na validao foram tratados estatisticamente
por anlise de varincia one-way (ANOVA) e teste t de Student. O mtodo demonstrou atender
aos requisitos de boas prticas em laboratrios exigidos pela legislao brasileira em vigor, RE n
899 de 29 de maio de 2003 da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria, sendo, portanto, sensvel,
exato e preciso para o doseamento do extrato de Operculina macrocarpa, conhecida popularmente
como Jalapa-do-Brasil.
Unitermos: Operculina macrocarpa, jalapa do Brasil, doseamento, validao, fitoterpico.
ABSTRACT: Development and validation of the gravimetric quantification of the glucoside
resin in phytomedicine containing Operculina macrocarpa (L.) Urban. The tubercle extract of
Operculina macrocarpa (Jalap of Brazil) is a phytomedicine, with effectiveness in the treatment of
constipation, as laxative. The quantified resin is extracted with hydro-alcoholic solution, presenting
organic and inorganic constituents, separable in two main fractions: one soluble in ether, called
jalapina and other, more polar, still little studied, called convolvulina. The main objective of this
work was to consider the optimization of the gravimetrical methodology for assay of the resin
described in the Brazilian Pharmacopeia, First Edition and its validation, with the objective to
diminish the costs and the partition time of the phases. The results achieved in the validation
had been statistically treated by one-way Variance Analysis (ANOVA) and t test of Student. The
method demonstrated to attend to the Good Manufacture Practice requirements for laboratories,
demanded by actual brazilian law, RE n 899 of May 29th of 2003 from the National Agency of
Sanitary Vigilance, being therefore, sensible, accurate and precise for the assay of the Operculina
macrocarpa extract, known popularly as Jalap of Brazil.
Keywords: Operculina macrocarpa, Jalap of Brazil, assay, validation, phytomedicine.

INTRODUO
A Operculina macrocarpa (L.) Urban uma
Covolvulaceae anual, com hbitos de trepadeira,
distribuda principalmente em regies tropicais e
subtropicais. Fazem parte tambm desta famlia as
espcies do gnero Ipomoea, que produzem a conhecida
raiz tuberosa de batata doce (Joly, 1975).
A jalapa encontrada em regies compreendidas
entre Antilhas e o Brasil, alm de regies temperadas
dos Andes Mexicanos, em regies lamacentas e de solo
562

profundo. (Planchon,1937). No Brasil encontrada em

vrios estados recebendo assim diversas sinonmias
populares, dentre as mais citadas na literatura esto:
batata-de-purga, xalapa, jalapa-de-So Paulo, purga-doAmaro Leite, jalapa-do-Brasil (Cruz, 1980; Michelin;
Salgado 2004).
Dentre as vrias utilizaes populares, as mais
freqentes so como laxante e purgativo em priso de
ventre e constipao crnica. Emprega-se tambm como
depurativo do sangue e na leucorria, diarria, disenteria,
fraqueza geral. Esta planta tem tambm a propriedade

* E-mail: prolim@ufpe.br; prolim@globo.com, Tel/Fax + 55-81-32721383

ISSN 0102-695X

Desenvolvimento e validao da metodologia de quantificao gravimtrica de resina glicosdica em fitoterpicos

de regularizar a menstruao (Cruz, 1980; Michelin;

Salgado 2004).
Classicamente a constituio qumica de
Convolvulaceae definida por dois grupos resinosos
principais, um deles solvel em ter, denominado de
jalapina e outro, mais polar, ainda pouco estudado,
denominado de convolvulina (Noda, 1987). Ainda
fazem parte da constituio das resinas outros compostos
orgnicos e inorgnicos (Shellard,1961).
A grande utilizao da Operculina macrocarpa
levou sua incluso na primeira e segunda Farmacopia
Brasileira (Brando et al., 2006).
exigncia da Agncia Nacional de Vigilncia
Sanitria (ANVISA), Resoluo (RDC Nq 48, 2004), que
regula os medicamentos fitoterpicos, que para efeito de
registro, se faz necessrio a elaborao de um relatrio
de controle de qualidade, incluindo anlises qualitativas
e quantitativas dos princpios ativos e/ou marcadores,
quando conhecidos, ou classes de compostos qumicos
caractersticos da espcie.
Sendo parte integrante da qualidade, a validao
segundo normas da ANVISA (Resoluo RE n 899,
2003), tem como objetivo garantir, por meio de estudos
experimentais, que o mtodo atenda s exigncias das
aplicaes analticas, assegurando a confiabilidade dos
resultados. Para tanto, deve apresentar especificidade,
linearidade, intervalo, preciso, sensibilidade, limite
de quantificao, exatido, adequados anlise,
demonstrando que o mtodo apropriado para a
finalidade pretendida, ou seja, a determinao qualitativa,
semi-quantitativa e/ou quantitativa de frmacos e outras
substncias em produtos farmacuticos. O uso de
ferramentas estatsticas adequadas, tais como teste T
Student e teste F, anlise de varincia, regresso linear
entre outras, esto indicadas para demonstrao dessa
evidncia objetiva da validade do mtodo (Barros,
2002).
O presente trabalho teve como objetivo
desenvolver e validar uma metodologia de doseamento
para o extrato de Jalapa do Brasil a partir de mtodo
gravimtrico.

Os parmetros avaliados foram a Robustez,

Linearidade, Especificidade, Preciso, Limite de Deteco
(LD), Limite de Quantificao (LQ) e Exatido.

MATERIAL E MTODOS

Linearidade

Material

A linearidade foi avaliada atravs do tratamento

dos dados por regresso linear pelo mtodo dos mnimos
quadrados dos pontos mdios de 3 (trs) curvas de
calibrao autnticas, contendo cinco concentraes
equivalentes a 5; 7,5; 10; 12,5 e 15 mg/mL da resina de
Jalapa.

Foram coletadas amostras de Operculina

Macrocarpa em So Jos de Espinhais no Estado
da Paraba, numa vegetao de caatinga, situada nas
coordenadas:065050S e 371933W. A responsvel
pela identificao da espcie foi a prof. Maria Bernadete
Costa e Silva, a exsicata se encontra depositada no IPA
(Empresa Pernambucana de Pesquisa Agropecuria) sob
n de registro 66.300.
O material utilizado foi o extrato hidroalcolico
50% de Jalapa do Brasil (Operculina macrocarpa),

clorofrmio (Nuclear), citrato de potssio (Nuclear),

gua destilada, acetato de etila (Nuclear), propanol
(Merck), metaperiodato de sdio (Merck), benzidina
(Merck), placas cromatogrficas de gel de slica
Merck.
Preparao do extrato de jalapa
Foram pesados 400 g de batata de purga secas
e trituradas com tamanho de partcula entre 400 840
m e transferidas para um percolador de ao inox onde
foi submetida a um processo de macerao por 24 horas
utilizando 2000 mL de soluo hidroalcolica 50%.
Este processo foi definido a partir de ensaios
em diferentes condies, fazendo variar o tamanho
de partculas, o tempo de macerao e a proporo de
soluo hidroalcolica.
O mtodo gravimtrico (Farmacopia Brasileira
1 ed.,1926) determina que sejam tomados 20 mL de
extrato e transferidos para um funil de separao, em
seguida adiciona-se 10 mL de clorofmio, 12 g de
citrato de potssio e 12 mL de gua destilada, agita-se
vigorosamente e deixa em repouso por 12 horas. Ocorre
uma separao em duas fases: uma clorofrmica (superior)
e uma aquosa (inferior). A fase inferior descartada e a
fase superior transferida para uma cpsula previamente
tarada e concentrada em banho-maria. O resduo seco a
100C at peso constante.
Foi desenvolvida uma metodologia na qual
o citrato de potssio foi retirado e a fase quantificada
passou a ser a inferior. Tambm foi viabilizada uma
reduo no tempo de partio das fases que passou de 12
para 2 horas sem reduo na capacidade de partio das
duas fases. Esta avaliao ocorreu a partir da observao
da qualidade da partio em diferentes tempos.
Estudo da validao

Limite de deteco (LD) e Limite de quantificao

(LQ)
Os limites de deteco e o de quantificao foram
calculados pela diviso do desvio padro dos coeficientes
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Luciana R. Lima, Haroudo S. Xavier, Juliana L. Meira, Pedro J. Rolim Neto

Linearidade

y = 1,4867x - 1,2667
R2 = 0,9935

Resina (%)

25,000
20,000
15,000
10,000
5,000
0,000
0

10

15

20

Extrato (mg/mL)
Figura 1. Curva de regresso linear obtida da mdia das trs
curvas de calibrao autnticas.

Tabela 1. Resultados da anlise de varincia para linearidade

Fonte
Modelo
Residual
Falta de ajuste
Erro puro
Total

SQ
414,4083
5,6917
2,6917
3,0000
420,1000

gl
1
13
3
10
14

MQ
414,4083
0,4378
0,8972
0,3
30,0071

F
F-crtico
946,52562
4,6672
Curva linear
2,9907
3,7083
No h falta de ajuste

SQ = Soma Quadrtica; gl = Graus de Liberdade; MQ = Mdia Quadrtica

Tabela 2. Resultados da avaliao da robustez de acordo com ANOVA e teste t de Student

Parmetros
Luz
Citrato

Tempo

Variveis

Mdia

CV%

t cal

Ausncia

13,33

2,17

2,121

Presena

12,83

2,25

Ausncia

13,17

2,19

Presena
12h
6h

12,83
13,5
12,83

2,25
3,7
2,25

3h

13,17

4,38

2h

13,17

2,19

Fcal

Fcrt

2,776

2,776

1,185

4,066

lineares das trs curvas de calibrao do ensaio de

linearidade pela mdia dos coeficientes angulares
destas respectivas curvas e multiplicado por 3,0 e 10,0
respectivamente. (Resoluo RE n 899, 2003)

dos resultados foi realizada atravs da anlise de varincia

one-way (ANOVA) e teste t de Student.

Robustez

Foi avaliada a partir da anlise do placebo soluo

hidroalcolica 50% em cromatografia de camada delgada,
utilizando como fase mvel: acetato de etila/propanol/
gua (5,7:3,2:1,3), fase fixa: placa cromatogrfica de gel
de slica Merck e substncia reveladora: metaperiodato

A robustez do mtodo avaliou as seguintes

variveis: presena ou ausncia de citrato, presena ou
ausncia de luz e tempo de partio das fases. A avaliao
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1,414

t crt

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Especificidade

Desenvolvimento e validao da metodologia de quantificao gravimtrica de resina glicosdica em fitoterpicos

de sdio/benzidina

RESULTADOS E DISCUSSO

Preciso

A partir do extrato fluido obtido e otimizado

no processo, controlando-se as variveis: tamanho de
partcula, tempo de macerao e proporo da soluo
extrativa, foi desenvolvida e validada a metodologia
analtica de tal maneira que o citrato de potssio, que
tinha a funo na metodologia de tornar a fase aquosa
mais densa que a clorofrmica, foi retirado e a fase
quantificada passou a ser a inferior.
O tempo de partio das fases (clorofrmica e
aquosa) foi reduzido de 12 para 2 horas, na ausncia de
citrato.
A cpsula de porcelana e o banho-maria foram
substitudos por placa de petri e chapa de aquecimento
reduzindo, assim, o tempo de anlise sem com isso
prejudicar o teor do analito.
Com a retirada do citrato de potssio e a reduo
do tempo de partio, foram reduzidos os custos analticos
tornando a metodologia mais vivel para aplicao na
rotina industrial.
Para o parmetro de linearidade, os resultados
apresentados esto ilustrados (Figura 1) e demonstraram
que o mtodo linear, tendo regresso linear estatstica
significativa, com equao da reta: Y = 1,4867(r0,0521)X
1,2667 (r 1,1073), correlacionando concentrao do
extrato (X) e porcentagem de resina obtida (Y), onde
R2 = 0,9935, o que sugere que 99,35 % dos valores so

A preciso foi avaliada nos nveis: repetitividade

e preciso intermediria. A repetitividade foi determinada
pela anlise de seis amostras individuais (sextuplicata). A
preciso intermediria foi determinada em dois dias por
dois analistas diferentes.
A repetitividade foi expressa atravs do
coeficiente de variao entre as amostras (CV) e a
preciso intermediria, alm do CV, foi avaliada pelo
teste t de Student.
Exatido
A exatido do mtodo foi avaliada a partir
da anlise de amostras em concentraes conhecidas
do extrato de Jalapa equivalentes a 50, 100 e 150%
da concentrao terica analisada. Os resultados
foram avaliados atravs do teste t de Student pareado,
comparando-se os resultados em relao ao valor terico
definido para cada concentrao analisada.
Todas as anlises foram realizadas em triplicatas
e para cada parmetro avaliado foram preparadas curvas
controles dirias com as concentraes de 5, 10 e 15 mg/
mL.
Tabela 3. Resultados da Repetitividade.

Concentrao (ppm)
3
4

13

13

14,5

13,5

14

14

Mdia

D.P.

CV%

13,67

0,61

4,43

Tabela 4. Resultados da preciso intermediria.

Dias
1
2

Analistas

Concentrao (%)
2

Mdia

CV%

13

13,5

13,5

13,33

2,16

II

13

13,5

14

13,5

3,70

14

14

13,5

13,83

2,09

II

13

13

14

13,33

4,33

Tabela 5. Resultados do teste t de Student para preciso intermediria.

Analistas 1 e 2 no 1 dia

t calc
0,500

Analistas 1 e 2 no 2 dia

1,341

Analista 1 no 1 e 2 dia

2,121

Analista 2 no 1 e 2 dia

0,377

t crt

2,776

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Luciana R. Lima, Haroudo S. Xavier, Juliana L. Meira, Pedro J. Rolim Neto

Tabela 6. Resultados da exatido do mtodo.

Concentrao

t calc

50%

1,256

100%

1,732

150%

1,844

Figura 2. Visualizao de Aucares em Placa

Cromatogrfica de Gel de Slica, eluda com Acetato
de Etila/Propanol/gua (3,7:3,2:1,3) e revelada com
Metaperiodato de Sdio/Benzidina.
1.Placebo-soluo hidroalcolica 50%
2. Extrato hidroalcolico 50% de Operculina
macrocarpa
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t crt

4,303

explicados em torno da mdia, sendo minimizado os

resduos.
A partir da anlise de varincia (Tabela 1)
podemos verificar a linearidade do mtodo e a significncia
estatstica da curva ajustada. As anlises de varincia dos
dados demonstraram que o mtodo linear, na faixa de
concentrao testada (5 15 mg/mL) e que no h falta
de ajuste do modelo com 95% de confiana.
Os limites de deteco (1,2816 mg/mL) e de
quantificao (1,9418 mg/mL) obtidos de acordo com o
tratamento descrito na RE n 899, ANVISA, mostram que
o mtodo bastante sensvel resina.
Os resultados da avaliao dos parmetros da
robustez foram avaliados por teste t de Student e anlise
de varincia one-way e esto apresentados na tabela 2.
Como os valores calculados foram menores
que os tabelados comprovou-se que no h diferena
estatisticamente significativa entre variveis dos
diferentes parmetros analisados, com um intervalo de
confiana de 95%.
O mtodo apresentou-se preciso nos dois nveis
avaliados. A repetitividade realizada em sextuplicata
com concentrao a 100%, apresentou um coeficiente
de variao (CV) de 4,43% inferior ao especificado pela
Resoluo vigente, que de 5 % (Tabela 3).
Na preciso intermediria, no foram
evidenciadas diferenas estatisticamente significativas
entre analistas e dias diferentes, empregando-se o teste t
de Student, com 95% de confiana, como observado nas
Tabelas 4 e 5, onde o t calculado inferior ao t tabelado.
Na anlise do placebo (soluo hidroalcolica
50%), no foi detectada a presena de aucares
caractersticos da resina da Jalapa comprovando-se a
especificidade do mtodo (Figura 2).
A exatido do mtodo foi comprovada pelo
estudo de trs concentraes diferentes (50%, 100%,
150%). Os resultados foram tratados pelo teste t de
Student, o qual demonstrou que o tcalculado foi inferior
ao ttabelado comprovando que no houve diferena
estatisticamente significativa entre os valores mdios
obtidos e os esperados das trs concentraes analisadas,
com um intervalo de 95% de confiana (Tabela 6). Para as
concentraes de 50%, 100% e 150%, foram encontrados
os respectivos percentuais de recuperao: 51,67%,
103,5% e 153,33%.
CONCLUSO

Desenvolvimento e validao da metodologia de quantificao gravimtrica de resina glicosdica em fitoterpicos

O mtodo apresentado foi desenvolvido

e validado com a finalidade de disponibilizar uma
metodologia alternativa para a quantificao da resina de
Operculina macrocarpa. Os resultados obtidos mostram
que o mtodo atende aos requisitos de boas prticas de
laboratrio, pois apresenta a confiabilidade requerida
para um mtodo analtico.
Alm de ser uma alternativa rpida, segura e de
baixo custo para a rotina de uma indstria farmacutica,
evidencia a vital importncia dessa ferramenta de
qualidade no desenvolvimento de metodologias analticas
voltadas para a realidade de cada empresa no segmento
de produtos fitoterpicos.
AGRADECIMENTOS
Os autores agradecem pelo financiamento
CAPES, PRONEX, CNPq e ao Laboratrio Industrial
Farmacutico Sobral.
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Resoluo RE Nq 899, ANVISA, Agncia Nacional de
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