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MONOGRAFA

PRODUCCIN DE
ANTIBITICOS

Grupo:
Bordn Ariel
Damico Johana
Farina Cristian
Lucero Marcos

Introduccin:
La mayora de las personas conoce acerca de la
existencia de antibiticos, y su empleo es un hecho frecuente
en el mundo entero hace varios aos. La biotecnologa, por su
parte, se considera un desarrollo reciente. Sin embargo, la
biotecnologa se encuentra presente en la vida cotidiana ms
de lo que la gente se imagina, hace muchos aos. Por
ejemplo, pocos conocen la relacin que existe entre los
antibiticos y la biotecnologa. De hecho, la produccin de
antibiticos que se inici a mediados del siglo XX, se
considera la primera aplicacin de la biotecnologa a la vida
cotidiana de las personas.
Para comprender mejor esta afirmacin, se debe recordar
a qu se llama biotecnologa y definir qu es un antibitico.
La biotecnologa se define tradicionalmente como el
empleo de organismos vivos para la obtencin de un bien o
servicio til para el hombre. Actualmente, la biotecnologa
moderna emplea tcnicas de ingeniera gentica, e incluye la
produccin de protenas recombinantes, el mejoramiento de
cultivos vegetales y del ganado, el empleo de organismos
para limpiar el medio ambiente, y otras aplicaciones
industriales.
Los antibiticos son por definicin molculas con
actividad antimicrobiana, que incluyen una gran cantidad de
compuestos pertenecientes a diferentes familias qumicas.
Son metabolitos secundarios, producidos en la mayora de los
casos despus de la fase de crecimiento. Los primeros
procesos para la produccin de penicilina, que fue el primer
antibitico
conocido,
implicaban
el
crecimiento
de
Penicillium notatum sobre la superficie de un medio liquido
(Czapek-Dox-glucosa). El periodo de incubacin era
usualmente de 6-12 das y posteriormente la penicilina se
extraa con solventes previa separacin del micelio.
La historia de las innovaciones en la produccin de
penicilina comenz en 1945 con el descubrimiento de una
nueva especie, Penicillium chrysogenum, la cual permiti
incrementar los rendimientos del producto y trabajar en
cultivo sumergido empleando lactosa como fuente de carbono

y energa, y agua de macerado de maz (com-steep liquor)


como fuente de nitrgeno.
Las distintas penicilinas son producidas a partir de P.
chrysogenum por adicin de una apropiada cadena
carboxlica en cantidad adecuada en el medio de cultivo, pero
solamente tienen valor teraputico la penicilina G y la V.
Ambas tienen un espectro y actividad similar, pero la
penicilina V es ms estable a pH cido, lo que permite su
administracin por va oral.
La produccin de penicilina como otros procesos
biotecnolgicos est dominada por su aspecto competitivo
entre los grandes laboratorios productores, que realizan
permanentes esfuerzos de mejoramiento en cada rea del
proceso: cepa, fermentacin y separacin. El proceso a
grandes rasgos implica el cultivo de P. chrysogenum en
reactores de volumen creciente hasta una escala de 115.000
l, separacin del micelio por filtracin y extraccin del
antibitico del caldo, seguida por la cristalizacin o
precipitacin cida del mismo.
Historia:
Aunque desde hace milenios el hombre usaba
empricamente en el tratamiento de heridas y otras
enfermedades, tierra y vegetales que son fuentes de mohos y
bacterias productores de antibiticos y ya en el siglo pasado
varios investigadores hicieron notar la accin bactericida de
diversos hongos, no es hasta 1928 con el descubrimiento
fortuito en el St. Marys Hospital de Londres por Fleming de un
hongo que contamin y destruy varios cultivos de
Staphylococcus, que se inicia la era antibitica en la medicina,
por tratarse de hongos del tipo Penicillium notatum,
Fleming llam al compuesto que producan, penicilina.
No es hasta 10 aos despus, en 1938 Howard Florey y
el doctor Ernesto Chain consiguieron aislar un polvo amarillo,
muchas veces mas activo contra las bacterias que el caldo de
cultivo original, ensayado por Fleming. El polvo era muy
impuro, pero era promisorio en la lucha contra las infecciones
bacterianas de los animales, y slo hacia 1941 es posible
acumular suficiente medicamento para iniciar ensayos clnicos

en pacientes afectados de sepsis por Streptococcus y


Staphylococcus.
Desde 1942 se comienza la expansin y desarrollo del
antibitico en los Estados Unidos, se alcanzan grandes
avances en su depuracin y usos clnicos en estudios
efectuados en la Universidad de Yale y en la Clnica Mayo, y
en 1943 se haban tratado ya 200 pacientes con el nuevo
producto. Hacia 1950 se logra la produccin masiva del
frmaco en los Estados Unidos y se llega a 150 toneladas en
ese ao (200 trillones de U de penicilina.1-3
En la misma dcada del 50 se crea la primera penicilina
semisinttica, fenoximetilpenicilina hacia 1954 y en 1959 se
introduce
la
meticilina,
primera
de
la
generacin
antiestafiloccica. Hacia finales de los aos 60 comienza a
usarse la carbenicilina y as se da inicio a las penicilinas con
propiedades antipseudomnicas y ya desde 1984 se inicia el
uso del cido clavulnico asociado a las penicilinas, comienza
la era de los inhibidores de betalactamasas.
Estructura qumica
La penicilina es una sustancia antibitica producida por
los hongos Penicillium notatum y P. chrysogenum de la
familia Aspergilliaceaes. Es un hongo de color verde azulado
que posee delgadas hifas sumergidas como tambin areas
tabicadas de las cules arrancan conidiforos ramificados. Es
considerada un antibitico betalactmico, que ataca la pared
bacteriana que protege a la clula, su espectro bacteriano
alcanza a los cocos Gram positivos y Gram negativos,
espiroquetas y bacterias Gram positivas.
El ncleo activo de las penicilinas es el cido 6aminopenicilnico, constituido por una estructura Iactmicotiazolidinica anillada, la cual se une a una cadena lateral
variable.

La molcula de penicilina no es grande, pero su


estructura es complicada. Posee un "ncleo" central de
tomos de carbono, hidrgeno, nitrgeno, oxigeno y azufre, y
una cadena lateral de tomos de carbono e hidrgeno. La
estructura de la cadena lateral vara con la cepa (variedad) de
hongo y el tipo de nutriente. Las cadenas laterales confieren
diversas propiedades a la penicilina. Debido a Io complejo de
su estructura an no ha sido hallado ningn mtodo artificial
para obtener la molcula de penicilina completa, por lo cual
todos los procesos de fabricacin requieren el cultivo del
hongo.
Clasificacin
Se conocen diferentes penicilinas todas las cuales
derivan de una estructura qumica fundamental comn: dos
anillos heterocclicos, uno de trazolidina y otro de betaIactama, unido por un encadenamiento emdico a un radical R
variable. Por el radical carboxilo la penicilina forma sales con
los metales alcalinos.
La clasificacin puede realizarse segn su modo de obtencin:
Naturales
Biosintticas
Semisintticas
Con diferentes subgrupos.
Algunos autores describen los siguientes grupos:
1. Bencilpenicilina y sus formas parenterales de accin
prolongada

Bencilpenicilina o Penicilina G
Penicilina benetamina
Penicilina benzatinica
Penicilina clemizol
Penicilina procalnica

2. Penicilinas absorbibles oralmente, semejantes a la


bencilpenicilina
Azidocillin
Fenetecilln
Fenoximetilpenicilina o Penicilina V
3.
Penicilinas
resistentes
staghyloccicas:
3.1 lsoxazolil-penicilinas
Cloxacillin
Dicloxacillln
Oxacillin
Fluoroxacillin
3.2 Meticillin
3.3 Nafcillin
4. Penicilinas de amplio espectro
4.1 Ampicilina
4.2 Esteras del ampicilina
Bacampicillin
Lenampicillin
4.3 Compuestos similares al ampicilina
Amoxicillin
Mecillinam (amdinocilna)
Ciclacillin
5. Penicilinas antipseudomnicas
5.1 Acilureidopenicilinas
Azlocllin
Mezlocilln

B-Iactamasas

Piperacillin
5.2 Carboxipenicilinas
Carbenicilln
Ticarcillin
6.
Penicilinas
resistentes
enterobacterias)
Foramidocillin
Temocillin

B-Iactamasas

(de

De estas penicilinas la ms importante es la Penicilina G


o bencilpenicilina que se combina con el sodio, potasio, calcio
y la procana para formar los compuestos:
Penicilina G sdica, G potsica, G clcica y Penicilina G
Procaina, que es de accin prolongada.
La penicilina V es importante, ya que es activa por va
oral. La penicilina que ms abunda en el comercio es la
penicilina G Potsica o bencil Penicilina Potsica. Se presenta
como un polvo cristalino blanco inodoro, muy soluble en agua,
tambin en alcohol y glicerina, insoluble en ter y cloroformo.
Se destruye por accin del calor, por cidos, lcalis y agentes
oxidantes y fermentos bacterianos.
Sus soluciones se deterioran a la temperatura
atmosfrica, pero refrigeradas permanecen estables por
algunos das. Las sales de Penicilina que se fabrican
actualmente permiten conservadas en estado slido sin
necesidad de refrigeracin.
Biosntesis
El anillo B-lactmico-tiazolidnico de la penicilina se
produce a partir de L-cistena y L-valina. La biosntesis se
produce por medio de un dipptido compuesto de cido L-aaminoadpico (L-a-AAA) y L-cistena. Subsecuentemente se
conecta la L-valina mediante una reaccin de epimerizacin,
dando lugar a la formacin del tripptido d-(L-a-aminoadipiI)-

L-cisteiniI-D-valina. El primer producto de la ciclacin del


tripptido que puede ser aislado es la isopenicilina N, pero no
se conocen las reacciones bioqumicas que conducen a este
intermediario. La bencilpenicilina (Penicilina G) se produce en
el intercambio de L-a-AAA (L-a-aminoadipico) con cido
fenilactico activado. El 6-APA, que no es un producto
intermediario de biosntesis, se excreta en ausencia de un
precursor de la cadena lateral.
La penicilina V es una penicilina modificada, que tiene
C5H5ooH2 (fenoximetilo). Es relativamente estable en
presencia de la acidez gstrica, es soluble en los lquidos del
duodeno y es tambin eficaz por va bucal sin
amortiguadores.

Espectro bacteriano
La accin de un antibitico se mide en trminos del
espectro bacteriano, la penicilina acta en un sector

restringido, se dice que su espectro es limitado. Tiene efecto


bacteriosttico (inhibiendo el desarrollo y reproduccin de los
grmenes) o bacterioltico (provocando su destruccin) segn
la dosis y tiempo de contacto.

La penicilina es particularmente activa contra bacterias


Gram positivas en especial en infecciones producidas por
estafilococos,
estreptococos,
neumococos,
algunos
Clostridium y Iactobacillus; ejerce tambin accin contra
treponema pallidum.
Es el antibitico ms usado, especialmente en
infecciones estafiloccicas, como ntrax, en heridas y
quemaduras infectadas, en el tratamiento de infecciones
neumolgicas como neumona, pleuritis y endocarditis
neumocicas, en enfermedades estreptoccicas como infeccin
puerperal, peritonitis. En infecciones gonoccicas como
gonorrea, oftalm 1.
Se usa tambin en la sfilis, en la Verruga peruana,
profilcticamente en obstetricia y antes de las intervenciones
quirrgicas.
En general la penicilina es considerada como una droga
antibitica de poca toxicidad, sin embargo puede producir
reacciones alrgicas como dermatitis, urticaria, etc.
Desarrollo de cepas
La produccin de penicilina por la cepa aislada por
Fleming era de aproximadamente 2 u.i. / ml; los procesos
actuales producen un ttulo de penicilina de aproximadamente
85.000 u.i. / ml. Esto se logr por seleccin de cepas.

La mejora del cultivo inicial se produjo en 1943 con el


aislamiento de la cepa Penicillium chrysogenum
NRRL1951.
Este microorganismo era ms adecuado para la
produccin en cultivo sumergido que la cepa original,
Penicillium notatum.
Mediante posterior mutagnesis fue aislada la cepa
WisQ176, la cual fue adoptada por la mayor parte de los
fabricantes de penicilina y fue utilizada como cepa original en
los distintos programas comerciales de mejora de cepas.
Hasta mitad de los aos 60 los mutgenos utilizados ms
frecuentemente eran los rayos X, mostaza nitrogenada y
radiaciones de longitud de onda corta. Ms recientemente han
sido utilizados como mutgenos la nitrosoguanidina, los
agentes alquilantes y los nitritos.
A principios de los 70 la mejora de cepas por el mero uso
de la mutacin haba alcanzado su lmite. El descubrimiento
de un ciclo parasexual en Penicillium chrysogenum
proporcion una forma de utilizar la recombinacin gentica
para el desarrollo de cepas. Se describieron diploides
heterocigticos que tenan ttulos de penicilina superiores a
los de las cepas haploides parentales. Sin embargo, el mayor
porcentaje de cepas con produccin superior de penicilina se
produjo a partir de los haploides segregantes de los cruces
entre mutantes de diferentes lneas.
La tcnica de fusin de protoplastos abri un nuevo
enfoque en el desarrollo de cepas de alta produccin
obtenindose rendimientos del 8% superiores a los obtenidos
por mutacin y seleccin. Adems, algunas de las cepas
resultantes han tenido mejores caractersticas de crecimiento,
como esporulacin ms estable y mejor crecimiento para la
produccin del inculo.
Requerimientos nutricionales y especficos
Adems
de
glucosa
y
lactosa,
Penicillium
chrysogenum puede utilizar una gran variedad de fuentes de
carbono y energa. Alternativamente se han usado sacarosa,

almidn, dextrinas, melaza, aceites vegetales y animales,


etanol y glicerol.
Un medio de cultivo en sistema batch puede contener
entre 30 y 40 g. 1-1 de lactosa, en tanto que si se emplea un
cultivo con alimentacin de fuente de carbono, se puede
utilizar glucosa o melaza a una concentracin final de 100 g 11. La principal fuente nitrogenada empleada hasta la dcada
del 70 fue corn-steep liquor" debido a que aumentaba los
rendimientos del antibitico probablemente al suministrar
compuestos como aminocidos, factores de crecimiento,
precursores de la cadena lateral, adems de elementos
trazas. Sin embargo, dada la variabilidad del producto entre
distintas partidas, los problemas de suministro, y tambin
debido a la introduccin de precursores especficos de la
cadena lateral, las industrias buscaron reemplazarlo. Los
productos alternativos son la harina de semilla de algodn,
extractos y peptonas, y la harina de soja. Sin embargo en
algunos casos estos productos son igualmente variables y
tanto o ms caros.
En 1976 se demostr la importancia de un suministro
continuo de amonio (por alimentacin con (NH4)2S04), que
permitiese mantener niveles del mismo de aproximadamente
20 mM. Trabajando en cultivos alimentados y modificando la
relacin nitrgeno/carbono en la alimentacin, se comprob
que cuando el cultivo estaba limitado en nitrgeno cesaba la
produccin de penicilina, la cual se restableca al ser la fuente
de carbono la limitante. El requerimiento de grandes
cantidades de NH4 + podra reflejar su necesidad para la
sntesis de glutamato, el cual es requerido para producir
valina y cistena.
El azufre se incorpora como (NH4) 2804 y con la fuente
de nitrgeno orgnica (extractos, peptona). El fsforo en
forma inorgnica se adiciona como sales de fosfato y se
aconseja mantener su concentracin entre 250 y 500 mg 1-1
con alimentacin continua. Adems se debe tener en cuenta
que el "corn-steep liquor" es una fuente importante de fsforo.
Si se desea obtener un determinado tipo de penicilina, se
debe incluir inicialmente, o bien por alimentacin en los
medios, una cantidad relativamente grande de precursor. El

requerimiento terico de fenilacetato sdico, es 0.47 g g-1 de


penicilina G cida, y de fenoxiacetato de sodio, 0.50 g g-1 de
penicilina V cida.
Es aconsejable efectuar una alimentacin continua de
estos componentes para evitar la toxicidad de los mismos
sobre la cepa y la hidroxilacin por accin del organismo.
Parmetros de produccin
La cantidad de penicilina obtenida en un fermentador
(PV) es funcin de la; concentracin de clulas (X), de la
velocidad especfica de produccin de penicilina (qp), del
tiempo de fermentacin (t) y del volumen de medio de cultivo
(V)

Donde

P = concentracin de penicilina al tiempo t f


Po = concentracin inicial de penicilina

t= tiempo de inoculacin
tf = tiempo de cosecha
Vo = Volumen inicial
V = Volumen al tiempo t
Evidentemente el objetivo es alcanzar altos valores de X
y de qp. Desde 1950 la velocidad de produccin de las cepas
(q p X) se ha incrementado 40 veces (desde 10 unidades mI-1
h-1 a 400 unidades mI-1 h-1). Entre los factores que afectan
qp se tienen el pH, la temperatura, la aireacin y la velocidad
especifica de crecimiento. El pH ptimo debe ser mantenido
alrededor de 6.5, Io cual permite adems minimizar la
hidrlisis de penicilina a cido penicilinico. Se debe tener en
cuenta que el pH puede no ser constante debido a que el

valor ptimo para crecimiento puede ser diferente del de


formacin de producto.
Los pocos estudios realizados con respecto a la
temperatura indican que el valor ptimo para crecimiento es
de aproximadamente 30 C, en tanto que el ptimo de
produccin oscila entre 20 y 25 C. Para un proceso "batch" la
temperatura puede variar entre 23 y 28 C, en tanto que para
el "batch" alimentado esa variacin est entre 25 y 27 C.
La aireacin presenta un problema especial en esta
fermentacin, debido a que al incrementarse la biomasa, y
por consiguiente la demanda de 0 2, aumenta tambin la
viscosidad del medio, Io cual crea una resistencia importante
para la transferencia de oxgeno. Por lo tanto puede ocurrir
que por encima de. un cierto valor de X el suministro de
oxigeno pueda ser insuficiente para mantener un qp mximo
por un determinado tiempo. Para superar estos problemas se
puede incrementar la potencia de agitacin, el caudal de aire,
la presin dentro del reactor, cambiar las condiciones de
cultivo o incluso trabajar con cepas modificadas que no
aumenten la viscosidad. Todo esto indica la necesidad de un
adecuado manejo del proceso y del diseo del reactor.
En un cultivo "batch" la velocidad especfica de
produccin de penicilina alcanza - valores altos al final del
crecimiento exponencial, cayendo posteriormente como se
muestra en la Figura 24.

Si la produccin se opera en sistema "batch" alimentado


el objetivo es obtener tanta biomasa como sea posible
(trmino X de la ecuacin 1) la cual debera producir penicilina
a una alta velocidad especfica (qp en ecuacin 1) por el
mayor tiempo posible. Se ha observado que el mximo valor
de qp es de aproximadamente 15 unidades por mg -1h-l, el
cual se alcanza al comienzo de la fermentacin y luego
declina. Por otra parte los productores obtienen alrededor de
60.000 unidades ml -1 en 200 h de proceso, lo que significa
una productividad media de 300 unidades ml-1 h-1. Por lo
tanto si la mxima biomasa alcanzada es de 50 mg ml-1 para
un qp de 15 unidades mg-1 h-1, la mxima productividad
debera ser de 750 unidades mI-1 h-1, lo que indica que el
promedio obtenido es menos de la mitad del mximo. Lo
expuesto indica la importancia de mantener un qp elevado.
En este sentido se ha determinado como influye sobre este
valor, la velocidad especfica de crecimiento.
El valor de u para la fase de produccin, tiene un limite
superior, el cual si es superado, la biomasa requiere un exceso
de oxigeno que lleva a una disminucin de qp, si existe una
limitacin del mismo en el reactor. EI lmite inferior de u para
la produccin vara con la cepa utilizada.

En sistemas de cultivo con alimentacin con glucosa, el valor


de qp vara linealmente con u hasta una velocidad de
alimentacin de glucosa cuyo valor oscila alrededor de 0,33 m
moles de glucosa (g biomasa)-1 h-1, el cual corresponde a un
u de 0.015 h-1. A mayores valores de velocidad de
alimentacin u se incrementa linealmente pero qp permanece
constante (Figura 25). El valor mnimo de u debajo del cual qp
desciende linealmente con u se denomina u crtico (uc). No se
conocen con precisin las causas de esta disminucin.

El problema por lo tanto es determinar que factores de la


biomasa o del entorno limitan el valor de qp para tratar de
superarlos. Si el oxigeno es el limitante del crecimiento, se
demuestra una relacin lineal entre el valor de u y la
velocidad especfica de consumo de oxigeno (qO2). De Io
anteriormente expuesto se deduce que durante la fase de
produccin o crecimiento lento en un sistema de produccin
industrial batch" alimentado (la glucosa es el sustrato
limitante) se debern mantener valores adecuados de u y qo2
para lograr un qp apropiado.
Para la mayora de las fermentaciones industriales el u
de produccin es menor de 0.01 h-1. Se debe cuidar en esta
fase no tener un exceso de glucosa debido a que el mismo
puede ocasionar una inhibicin de la actividad o de la sntesis

de enzimas involucradas en la biosntesis de penicilina. A


pesar de que la limitacin de hexosa disponible es esencial
para el xito del proceso, el valor de u puede ser controlado
por otros nutrientes, habindose demostrado que la eleccin
del nutriente limitante (oxgeno, fsforo, sulfato, amonio,
magnesio) tiene un efecto marcado sobre el metabolismo
energtico.
La relacin entre qp y u podra indicar la necesidad de
prolongar un estado fisiolgico particular de las clulas. Se ha
comprobado por estudios en cultivo continuo que existe una
correlacin entre la velocidad especfica de crecimiento y la
morfologa celular, la cual corresponde a un estado fisiolgico
determinado.
Para un valor de qp mayor de 0,023 h -1 se observa
solamente crec-miento vegetativo, en tanto que debajo de
0,014 h-1 comienza a tener lugar la formacin de conidias.
Debido a que bajas velocidades de crecimiento son de
gran importancia en muchos procesos fermentativos, es una
necesidad dilucidar para esos casos que funciones celulares
tienen lugar. Luego, se podra estabilizar la funcin deseada,
como produccin de penicilina, por periodos prolongados de
tiempo. Un valor mnimo de u podra indicar tambin la
necesidad de reemplazar clulas viejas o alteradas, las cuales
han perdido irreversiblemente su capacidad de sntesis de
penicilina.
La duracin de la fermentacin de penicilina puede estar
limitada por la capacidad- de transferencia de oxigeno del
reactor. Como ya se indic, en algn momento la
concentracin celular puede exceder el suministro de oxgeno
necesario para mantener un valor alto de qp y la sntesis
disminuye.
En algunos procesos la presencia de txicos, inhibidores o
factores no conocidos pueden causar una disminucin en el
valor de qp. sobre todo al final de la fase de produccin.
Proceso
Fabricacin industrial de la penicilina

EI hongo utilizado industrialmente para la produccin de


penicilina es Penicillium chrysogenum. EI primer sistema
de produccin de penicilina fue el conocido como mtodo de
superficie", donde el hongo creca en la superficie de una capa
de medio de cultivo en bandejas. Pero despus de 1944, el
desarrollo del mtodo de fermentacin sumergida permiti
disminuir los requerimientos de espacio y, consecuentemente,
los costos de produccin. Este ltimo mtodo es el que se usa
actualmente a nivel industrial.

1)

Preservacin del cultivo

Para la correcta preservacin de los microorganismos se


mantienen en tubos inclinados que contienen agar nutritivo
como una suspensin en medio liquido congelado a una
temperatura de -20 C y -100C (donde puede mantenerse
por varios aos).
Antes de comenzar un proceso a partir de un cultivo, el
operador debe realizar una exhaustiva evaluacin que
asegure el mantenimiento de las caractersticas de la cepa, lo
cual implica determinar el grado de esporulacin, la
productividad y caractersticas morfolgicas, lo que incluye
ensayos en agitadores y en fermentadores de laboratorio
2)

Preparacin del inculo

La preparacin del inculo debe realizarse para la siembra


en el tanque de prefermentacin. Las esporas congeladas de
la cepa se llevan lentamente a temperatura ambiente
(1Clmin) y luego se resuspenden mediante adicin de H 2O
destilada estril en la correspondiente ampolla, la
concentracin ptima de esporas es de 5 x 103 por ml. El
contenido de la ampolla se transfiere a un medio de
mantenimiento en agar inclinado en botellas cilndricas de
vidrio con tapones de rosca que permiten una buena aireacin
cuando estn cerrados.

Despus de incubar a la temperatura adecuada durante un


tiempo apropiado, aprox. 96 horas a 23C, para producir
cultivos crecidos y esporulados se aaden unos 5-10 mI de
H20 estril y se araa la superficie antes de transferir a un
frasco de 2 litros cnico que tiene un litro del medio de
cultivo, incubndose durante 24 hs a 23C.
Luego se realiza la transferencia estril del inculo del cultivo
sumergido a un aspirador u otro recipiente que se pueda
utilizar con comodidad para inocular la etapa de
prefermentacin en planta.
Medio de cultivo que se utiliza:

3)

Sacarosa 20g
NaNO3 6g
KH2PO4 1.5g
MgSO4 0.5g
CaCl2 2.5 g
H20 destilada 1 litro
Prefermentacin

Se produce el llenado del reactor con el medio de cultivo


y su posterior esterilizacin y enfriado, se procede a la
siembra del prefermentador (PF 1) con el inculo. AI comienzo
se tiene una fase de latencia, no se producir la evidencia del
metabolismo, porque los microorganismos se estn adaptando
a su nuevo ambiente.
Luego de esta etapa comienza la fase de crecimiento
donde se produce la biomasa, con un tiempo de duplicacin
de 6 hs.
Despus de transcurrir 44 hs en el primer prefermentador se
produce
el
transvase
(por
gravedad)
al
segundo
prefermentador (PF2) comenzando la segunda etapa con una
duracin de 42 hs.
En ambas etapas la temperatura deber mantenerse en
24C y pH entre 6 y 7.

Medio de cultivo a utilizar en la prefermentacin:

4)

Agua 94.3%
Melaza de caa 4.71%
NaNO3 0.56%
KH2PO4 0.15%
MgS04.7H20 0.05%
CaCl2 0.23%
Fermentacin

Se llena el reactor con el medio de cultivo, se procede al


esterilizado del mismo a 121C durante quince minutos y a su
posterior enfriado a la temperatura de fermentacin a 24C,
proceso que demora 4 hs. Una vez esterilizado el medio de
fermentacin, se procede a agregar el contenido del segundo
prefermentador (PF2) por transvase por gravedad.
Una vez conseguida la temperatura ideal de
fermentacin, se conecta el lazo de control de temperatura
que regula el caudal de H2O de enfriamiento, se accin-a el
agitador llevando la agitacin a rgimen, y se inyecta aire
esterilizado que es bombeado con un compresor.
Es esencial la regulacin de pH (de 6 a 3), porque fuera de
este intervalo las prdidas seran importantes.
La fermentacin total durar 112 hs, desde la.
inoculacin del medio con el contenido del segundo
prefermentador hasta la descarga del reactor. La produccin
de biomasa ser de 42 gil y se producirn 109/] de penicilina
Medio de cultivo a utilizar en la fermentacin:

H2O 87.35%
Lactosa 10%
Melaza de caa 1.5%
CaCO3 0.5%
KH2PO4 0.4%
Aceite Vegetal 0.25%

Descripcin del fermentador


La funcin del fermentador es la de proporcionar un
ambiente ptimo para cada proceso microbiolgico, que
permita el crecimiento eficaz de las clulas y la formacin del
producto.
Existen dos tipos de fermentadores, segn requieran o no
oxigeno: aerobios y anaerobios. En la produccin industrial de
penicilina el tipo de fermentador que se utiliza es aerbico
que opera en forma discontinua. Este tipo de fermentador
consiste en un vaso cerrado que se puede esterilizar, airear,
agitar y cuyo contenido puede tener la temperatura regulada
con un gran grado de exactitud.
Su forma es corrientemente cilndrica con fondo
redondeado y una superficie interior lisa para facilitar su
limpieza. Posee un agitador vertical y un sistema de inyeccin
de aire estril y serpentinas para mantener la temperatura
entre 23 y 25 C. Su altura suele se entre 50% y 100% mayor
que su dimetro. En toda la longitud del fermentador y
perpendicular a sus paredes se distribuyen con un espaciado
regular unas placas deflectoras (cuatro en gral.) para controlar
el flujo del lquido. Su ancho es 1/10 del dimetro.
La mayor parte de los fermentaciones industriales de
antibiticos se llevan a cabo en fermentadores de 20 a 200
m3.
Esquema del fermentador

5)

Filtracin

Una vez finalizada la fermentacin, sin detener la


agitacin se procede a la filtracin del medio fermentado a
medida que se descarga el reactor. Finalizada esta etapa se
limpia el reactor y se comienza a llenar nuevamente con caldo
de fermentacin fresco, repitindose el proceso batch.
El primer paso para la filtracin consiste en separar el
micelio del medio de cultivo empleando un filtro rotatorio a
vaco tipo cilndrico. El filtrado rico en penicilina es luego
enfriado en un intercambiador de calor a 0 - 4 C con el objeto
de disminuir la degradacin enzimtica y qumica durante las
etapas de extraccin posteriores.
6)

Mezclado y aireacin

El proceso de fermentacin industrial aerobio debe


disponer de un sistema de aireacin y mezclado del cultivo. El

reactor de tipo tanque con aireacin convencional incluye un


sistema de agitacin mecnico consistente en un eje vertical
con varios agitadores, estos agitadores generalmente son de
turbina de discos que son muy efectivos para conseguir un
buen mezclado y una buena dispersin del aire a travs del
medio.
La adecuada aireacin es esencial para obtener un
rendimiento optimo en la produccin de Penicilina, ya que el
hongo productor de esta es un organismo aerobio por lo que
requiere la presencia de oxigeno. EI aire suministrado en el
fermentador debe ser esterilizado, ya que el aire ordinario
contiene gran cantidad de partculas y microorganismos.
El numero en que estas partculas y microorganismos
que se encuentran presentes en el aire varia en gran medida
dependiendo de la localizacin de la planta, el movimiento de
aire y el tratamiento previo de este. Como media el aire
exterior tiene de 10 a 100.000 partculas por m3 y 5 a 2000
microorganismos por m3, de estos el 50% son esporas de
hongos y el otro 50% son bacterias Gram. Negativas.
Los mtodos existentes para la esterilizacin de los
gases y del aire incluyen la filtracin, inyeccin de gas ozono,
la depuracin de gas, radiacin (UV) y- el calor. De estos
solamente la filtracin y el calor son prcticos a escala
industrial.
En los sistemas industriales el aire se esteriliza por
filiacin, actualmente estn siendo ampliamente utilizados un
sistema de filtros de cartuchos que utilizan membranas
plegadas construidas de esteres de celulosa, polisulfona y
nylon. Este tipo de sistema de filtracin mediante cartuchos
es de fcil instalacin y mantenimiento y de moderado costo.
El aire esterilizado por filtracin se introduce en el caldo
de cultivo por un inyector de aire que se encuentra situado en
el fondo del fermentador. Una vez que este aire se encuentra
agotado sale finalmente a la atmsfera a travs de una
conduccin larga que se esteriliza peridicamente. En algunos
casos puede incluirse un filtro bacteriolgico en la conduccin
de salida, para disminuir tanto como sea posible la
diseminacin de los microorganismos presentes en el aire
gastado.

7)

Recuperacin

Durante el proceso de recuperacin se separa la fase


slida que se encuentra compuesta por la biomasa y la
Penicilina de la fase lquida compuesta principalmente por
agua, trazas de penicilina y partculas menores.
Una vez finalizada la fermentacin el contenido del
reactor RF es conducido hacia un filtro de tipo rotatorio de
vaco F1 el cual permite obtener altas velocidades de filtrado.
El tiempo de filtracin ser de aproximadamente 3 horas.
8)

Extraccin

La extraccin de la Penicilina de la torta producida


durante la filtracin se realiza en un extractor en
contracorriente E1 utilizando como solvente metil propil
cetona. Una vez que el solvente a pasado por el extractor es
conducido a un evaporador V1, en el cual el solvente es
evaporado, producindose la deposicin de los cristales de
Penicilina. Una vez que se ha terminado la etapa de
evaporacin de los cristales de Penicilina son retirados del
evaporador y llevados a un secador S1. donde se produce la
extraccin de la humedad residual.
9)

Producto final

Una vez que se ha terminado la etapa de purificacin de


cristales de Penicilina son retirados del secador y se les realiza
una serie de anlisis en relacin con su potencia, esterilidad,
toxicidad, pirogeneidad, contenido de humedad, etc.
Una vez que la Penicilina ha resultado satisfactoria para
esta serie de anlisis, estar lista para su fraccionamiento y
envasado.
10) Envasado

Se envasa en condiciones aspticas en bolsas de


polietileno de 10 Kg, o en recipientes de vidrio o acero
inoxidable.
11) Subproductos del proceso
Del proceso industrial de produccin de la Penicilina se
obtienen dos subproductos que son: el lquido proveniente del
filtrado F1 y la torta proveniente del extractor E1.
El filtrado F1 es bsicamente agua la cual se elimina del
proceso sin previo tratamiento ya que no contiene ni
productos de inters ni elementos contaminantes. La torta
obtenida en E1 es sacada al aire libre y luego es preparada
para su venta a granel para la preparacin de alimentos para
animales.

ESQUEMA DEL PROCESO

Economa del proceso

Se atribuye un 80% del costo de produccin de penicilina


al proceso de fermentacin y un 20% a las etapas posteriores
de extraccin y purificacin. A su vez en el proceso
fermentativo, un elevado porcentaje en los costos
corresponde al medio de cultivo, en el cual la glucosa es el
componente de mayor valor, El mximo rendimiento
mencionado en esta fermentacin es aproximadamente 0.1 g
de penicilina por gramo de azcar. El balance de materia para
glucosa es el siguiente:
GLUCOSA CONSUMIDA = CONSUMO PARA BIOMASA +
CONSUMO
PARA
ENERGIA
DE
MANTENIMIENTO +
CONSUMO PARA
PENICILINA
Podemos entonces escribir la siguiente ecuacin:

donde Y'p/s es el rendimiento en producto que se obtendra


cuando no hay crecimiento ni mantenimiento, y los dems
trminos tienen el significado ya mencionado.
Se ha estimado que de la cantidad total de glucosa
consumida, el 20% se utiliza en la formacin de biomasa, el
10% para la produccin de penicilina, y el resto, o sea el 70%
para mantenimiento.
El valor de Y'p/s se puede estimar tericamente
mediante el conocimiento de la ruta biosinttica que conduce
al producto. En el caso de la penicilina el valor mximo terico
posible ha sido calculado en 1.1 g de penicilina g-1 de
glucosa. Tomando en cuenta el elevado consumo de glucosa
para mantenimiento es evidente que deben realizarse todava
estudios fisiolgicos con el objeto de reducir ese porcentaje.
En 1980 la produccin mundial de penicilina alcanz las
17,000 toneladas con un valor estimativo de 380 millones de
dlares. Estos dos valores son mayores que los de cualquier
otro antibitico y no son fijos sino que la produccin tiene una
significativa velocidad de crecimiento anual. Esto se debe a su

baja toxicidad y la posibilidad de modificar qumicamente la


molcula, lo cual incrementa su utilidad.
A pesar de los avances logrados, muchos problemas
fundamentales sobre el control de la fermentacin de
penicilina permanecen todava sin resolver. Las futuras
mejoras en la produccin deberan considerar:
El aumento de qp max y la biomasa (X), la disminucin
de uc, la inhibicin de la hidrlisis de la penicilina, la
disminucin de la viscosidad de los caldos y del porcentaje de
carbono destinado a mantenimiento, la obtencin de cepas
con fenotipos y productividad estables, y finalmente el
mejoramiento de los sistemas de operacin como el batch
alimentado y el continuo.
Diseo de Experimento
Medio de cultivo seleccionado: Preparacin del inculo.
Obtenemos a partir de la bibliografa la cantidad ptima de
nutrientes. Para desarrollar el diseo de experimento se
tomaron valores un 20% por encima de este valor ptimo,
(representados por el signo +), y un 20% por debajo de este
mismo valor (representado por el signo -), obteniendo
diferentes resultados de todos los experimentos.
Variables
Bajo (-)
Sacarosa
16g
NaNO3
CaCl2
2g
MgSO4
0.4g

Variable
Sacarosa

Nivel ptimo

Nivel Alto (+)

20g

24g

6g

7.2g

4.8g
3g

2.5g
0.5g

1 2
+ +

3
-

4
-

5
-

Nivel

6 7 8
+ + +

0.6g

9 10 11 12 13 14 15 16
+ + +
-

NaNO3
CaCl2
MgSO4
RESULTAD
OS

+ - + - - + - - + +
+ +
+
+ - - + - - + - + + +
+ +
+ - - - + - - + - + +
+ + +
R R R R R R R R R R1 R1 R1 R1 R1 R1 R1
1 2 3 4 5 6 7 8 9 0
1
2
3
4
5
6

Conclusin
Sin duda este es un campo donde se puede y debe
seguir investigando y desarrollando nuevas tecnologas
debido a que los antibiticos requieren un mejoramiento, ya
que son productos del metabolismo secundario y suelen
generarse en concentraciones muy bajas. Es por eso que una
vez elegidas las bacterias productoras, se busca la manera de
mejorarlas en el laboratorio para transformarlas en
superproductoras. Para esto se utilizan algunas tcnicas
como la mutagnesis, que introduce cambios azarosos en el
ADN que pueden favorecer o acelerar la sntesis del
antibitico, o la ingeniera gentica que nos permite aumentar
el nmero de copias de los genes que codifican para las
enzimas que intervienen en la produccin del antibitico. De
esta forma se fabricar, a partir de una misma clula, ms
cantidad del producto final. Adems la ingeniera gentica nos
permite transferir los genes de las enzimas que participan en
la sntesis del antibitico a organismos ms fciles de crecer y
manipular, como Escherichiacoli, para que stos produzcan el
antibitico deseado.
Adems de un mejoramiento, la bsqueda de nuevos
antibiticos es probablemente ms urgente en la actualidad,
ya que muchos antibiticos que fueron alguna vez altamente
efectivos han perdido utilidad frente a los organismos
patgenos. Este hecho es el resultado de un proceso por el
cual los microorganismos desarrollan resistencia frente a
antibiticos que en el pasado les resultaban letales.

Si bien los antibiticos son compuestos qumicos producidos


naturalmente por los microorganismos, y la adquisicin de
resistencia a los antibiticos tambin es un proceso natural en
los seres vivos, se considera que el hombre ha influido en este
acontecimiento evolutivo. Se cree que el uso indiscriminado
de antibiticos por parte del hombre, ha acelerado el proceso
de seleccin natural por el cual las bacterias ms resistentes
se han visto beneficiadas frente a las ms sensibles. Estas
cepas resistentes sobreviven a la presencia del antibitico y
pueden propagarse exitosamente.
Consientes del riesgo que significa que los antibiticos sean
inocuos para los microorganismos patgenos, diferentes
centros de investigacin o compaas farmacuticas en todo
el mundo realizan extensas bsquedas de microorganismos o
de nuevas molculas antibiticas con diferentes mecanismos
de accin.
Finalmente concluimos que con este trabajo hemos
tratado de estudiar sintticamente la importancia de los
antibiticos en la vida humana y su relacin con la
Biotecnologa, as como tambin la produccin de penicilina a
nivel industrial.
Bibliografia:
- http://www.argenbio.org/index.php?
action=novedades&note=407
- https://docs.google.com/document/edit?id=1vmEND55kazVPU0WaqWkGK8czzrTVV3MqKzG6GL8HYM&h
l=es&pli=1
- http://blogs.creamoselfuturo.com/biotecnologia/2010/05/24/microorganismo-como-fuente-deproduccion-de-antibioticos/
- https://lamicrobiologiaumd.wikispaces.com/Microorganis
mos+que+producen+antibi%C3%B2ticos
- http://www.monografias.com/trabajos10/antib/antib.sht
ml#clasif#ixzz3a1wzoVW7

- http://porquebiotecnologia.com.ar/index.php?
action=cuaderno&opt=5&tipo=1&note=51