LABORATORIO N 2:

CROMATOGRAFA

Asignatura: Laboratorio de Higiene Ambiental.

Seccin: 979.
Carrera: Ingeniera en Prevencin de Riesgos, Calidad y Medio Ambiente.
Nombre: - Sebastin lvarez.
- Carolina Flores.
- David Malverde.
- Diego Ossandon.
- Patricio Prez.
Grupo: 2.
Docente: Joselyn Albanez.
Fecha: 10/06/2015.

INTRODUCCIN
El presente informe es una documentacin cualitativa de la cromatografa realizada en el
laboratorio n 231 el da 29/05/2015 bajo la supervisin de la docente Joselyn Albanez. Se
emple la tcnica de cromatografa capa fina con el propsito de identificar el color de los
sustratos que fueron separadas. Esto requiri la utilizacin de agua, acetona ter etlico y
acetona cloroformo que sirvieron como agentes disolventes para separar los sustratos unidos.
Por lo tanto, al tener en cuenta la variedad de los diluyentes se pueden comparar la cantidad de
sustratos separados por cada diluyente de modo que se pueda determinar cul es la ms
eficaz.
Los sustratos fueron proporcionados por la docente a cargo. As mismo, las placas
cromatogrficas y luz ultravioleta fueron provistos por la docente con el fin de detectar, por
mtodo fsico, aquellas muestras separadas que no son perceptibles al ojo humano.
El objetivo principal del presente informe es la exposicin analtica y ordenada de los diversos
resultados obtenidos por cada diluyente.
Los objetivos especficos del presente documento surgen en respuesta a la necesidad de
formular una base slida del objetivo principal. Por tanto, se distingue el primer objetivo como la
identificacin y evaluacin de los efectos de cada diluyente sobre cuatro sustratos mediante la
tcnica de cromatografa de capa fina y el segundo objetivo es la determinacin del diluyente
con mayor efectividad.
La tcnica es bien explicada de la siguiente manera segn Frederic, H. & Reyes, J., (1983) El
sustrato a analizar se coloca cerca de la superficie absorbente en forma de una pequea
mancha circular, obtenida aplicando una gota de solucin de la muestra y dejando secar. Luego
se sumerge la placa en el disolvente <<revelador>> que constituye la fase mvil. El disolvente
asciende por la placa por capilaridad, arrastrando consigo el sustrato. Antes de que alcance el
extremo superior de la placa, se detiene el flujo de disolvente retirando la placa de la cmara y
se marca con un lpiz la posicin alcanzada por el frente del disolvente. Se seala tambin la
posicin de la mancha de sustrato. Si esta mancha es coloreada, su localizacin es inmediata;
si es incolora, debe hacerse visible de algn modo (p.323).
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL MATERIALES Y MTODOS
1. Se procedi a trazar con un lpiz grafito una lnea horizontal a 0,5 cm de la zona inferior
de tres cromatofolios y se cortaron las dos esquinas de forma diagonal a la lnea.
2. Se marcaron cinco puntos separados de forma equitativa sobre la lnea trazada en cada
cromatofolio.
3. Por medio de capilares se vertieron tres microgotas por frasco (cuatro frascos con flores
y alcohol) en cada cromatofolio posicionado sobre papel, de modo que los cuatro frascos
fuesen correlativos a los cuatros primeros puntos marcados.
4. En el quinto punto de cada cromatofolio se procedi a verter tres gotas de cada frasco,
de modo que queden todos los sustratos unidos en dicho punto.
5. Se tomaron las tres placas cromatogrficas con pinzas y se colocaron de forma vertical
en tres frascos correlativamente.
6. Se aadieron los tres solventes orgnicos (agua, acetona ter etlico y acetona
cloroformo) uno por cada frasco, de modo que se llenase lo ms cerca posible de los
sustratos y luego se taparon con Matraces de Erlenmeyer.
7. Se retiraron las placas del frasco en el instante en que los disolventes llegaron cerca del
extremo superior de stas y se situaron en un papel.
8. Se observ la separacin de determinados sustratos y se registraron los resultados.

9. Se ubicaron las placas cromatogrficas bajo luz ultravioleta y se registr la presencia de

sustratos por cada placa.
RESULTADOS
En coherencia con el procedimiento experimental aplicado se obtuvieron los resultados de la
evaluacin cualitativa observable de cada sustrato separado por cada diluyente:
Tabla 1
Evaluacin Cualitativa: Sustratos con Coloracin
DISOLVENTE

SUSTRATO SEPARADO

AGUA
CLOROFORMO
TER ETLICO

PTALOS VERDES
PTALOS ROJAS
PTALOS VERDES

INTENSIDAD DEL
SUSTRATO SEPARADO
BAJO
MEDIO
ALTO

Posteriormente se procedi a evaluar cualitativamente los sustratos incoloros bajo luz

ultravioleta:
Tabla 2
Evaluacin Cualitativa: Sustratos Incoloros
DILUYENTE

SUSTRATO SEPARADO A LUZ U.V

AGUA
CLOROFORMO
TER ETLICO

NINGUNO
X
X

Finalmente se registraron los sustratos que no pudieron ser separados legtimamente:

Tabla 3
DILUYENTE

SUSTRATOS

AGUA
CLOROFORMO
ETER ETILICO

PETALOS VIOLETAS
NINGUNO
PTALOS ROJOS Y VIOLETAS
DISCUSIN

El procedimiento efectuado durante el desarrollo del experimento no es el mismo procedimiento

que los eruditos como Harold Frederic Walton y Jorge Reyes sealan como apropiado o
correcto. Esto se debe principalmente a que la cantidad de disolventes vertidos en cada frasco
no ascendi como corresponda (proximidad de la zona extrema superior de la placa
cromatogrfica), sino que se tuvo que recurrir a proporciones mayores de gotas de disolventes
y en diversas frecuencias (repeticiones). Adems, se utilizaron Matraces de Erlenmeyer en lugar

de tapas apropiadas. Por consiguiente, se tuvo un procedimiento inadecuado como principal

problema. No obstante, los resultados fueron obtenidos de igual modo; observacin de
separacin de sustratos por diversos diluyentes tanto con coloracin como incoloros.
Para que el anlisis cromatogrfico sobre cada diluyente sea realmente efectivo y
sistemticamente explicado, se requiere de un mtodo fsico como la utilizacin de luz
ultravioleta, segn Frederic, H. & Reyes, J., (1983) Si los sustratos son invisibles a la luz
ordinaria, quizs son fluorescentes bajo la luz ultravioleta (p.326).
Consecuentemente, se pueden considerar los siguientes criterios de efectividad: Cantidad de
sustratos visibles a luz ordinaria separados, cantidad de sustratos incoloros separados e
intensidad del color de los sustratos visibles a luz ordinaria separados y claridad.
1. Los diluyentes empelados fueron Agua, Cloroformo y Acetona ter Etlico.
2. El agua no separ sustratos incoloros, el cloroformo separ sustratos incoloros y
sustratos con una intensidad media y el ter etlico separ sustratos incoloros y
sustratos con intensidad alta.
3. El diluyente con mayor efectividad separ la mayor cantidad de sustratos legtimamente,
con una intensidad alta y adems necesariamente sustratos incoloros.
4. La Acetona ter Etlico es el diluyente con mayor efectividad.
CONCLUSIN
1. Respecto al principal objetivo, se ha logrado la exposicin analtica y ordenada de los
diversos resultados obtenidos por cada diluyente. Esto implica el conocimiento de los
efectos de cada diluyente (separacin), lo que concluye en el logro del primer objetivo
especfico.
2. Se han establecidos criterios para la determinacin del diluyente con mayor efectividad
(acetona ter etlico), lo que concluye en el logro del segundo objetivo especfico.
3. La cromatografa de capa fina es un mtodo de separacin que depende una variedad
de factores incluyentes.
REFERENCIAS
Frederic, H. & Reyes, J., (1983), Anlisis Qumico e Instrumental Moderno, Barcelona Espaa,
Editorial Revert, S.A.
ANEXOS
1. Sustratos utilizados:
Frascos con ptalos rojos, violetas, morados y verdes preparados con alcohol.
2. Posicin transversal de los sustratos en cada palca:
Sustrato Rojo - Sustrato Verde - Sustrato Violeta - Sustrato Morado - Todos los Sustratos.
3. Sustratos separados por diluyentes:
H2O: Sustrato rojo (hubo arrastre de sustrato violeta), CHCL3: Sustrato verde y Acetona ter
Etlico: (hubo arrastre de sustrato rojo y violeta).
4. Presencia de sustratos incoloros por diluyentes:
H2O: No - CHCL3: S - Acetona ter Etlico: S.