UNIVERSIDAD PRIVADA

DE TACNA
Escuela Profesional de
Tecnologa Mdica-Laboratorio
Clnico y Anatoma Patolgica
Bioqumica Clnica I
Practica N 13
Amilasa
Docente: Luisa
Alumna: Ponce Huanca Estefany
Ciclo: IV ciclo
Tacna
Per
2014
Practica N 13: Amilasa

Objetivo
Conocer y aplicar la tcnica para la determinacin de actividad enzimtica de la
amilasa y determinar los niveles de amilasa en nuestras muestras normales
(compaeros) y patolgicas (pacientes).
Materiales
-Tubos de ensayo
-Centrifuga
-Bao Maria
-Espectrofotometro
-Muestra (suero de sangre y saliva)
-Reactivo A y B
-Agua destilada
Procedimiento
Colocamos 1ml de reactivo A en 5 tubos: Tubo control, tubo de sangre, tubo de
muestra, tubo de saliva y tubo de saliva 10 veces diluida.
Despus lo pusimos a incubar por 5 minutos a 37C en bao maria, luego
agregamos 20ul de las muestras, las llevamos a incubar a 37C por 7 minutos y
medio, para despus agregar 1 ml de reactivo B, mezclamos y por ultimo
agregamos 7 ml de agua destilada.

2.- Determinacin de amilasa en orina, Su uso diagnstico y las tcnicas

que se pueden emplear.
Es un examen que mide la cantidad de amilasa en la orina. La amilasa es
una enzima que ayuda a digerir carbohidratos, y es producida principalmente
en el pncreas y en las glndulas que producen la saliva.
Uso diagnstico: Este examen se hace para diagnosticar pancreatitis y otras
enfermedades que afectan el pncreas.
Tcnicas que se pueden emplear:
Laboratorio general:

Leucositosis: Con desviacin a la izquierda secundaria al proceso toxico

inflamatorio pancretico que por lo tanto no indica infeccin.
Hematocrito: En los casos ms graves puede haber hemoconcentracin
con valores de hematocrito que excedan el 50%, debido a la prdida de
plasma hacia el espacio retropancretico y la cavidad peritoneal.
Hiperglucemia: Secundaria a mltiples factores, entre ellos la menor
produccin de insulina, el aumento en la liberacin de glucagn y la mayor
produccin de glucocorticoides y de catecolaminas suprarrenales.
Parmetros
de
Colestasis
(BILIRRIBINA,
FAL,
GAMAGLUTAMILTRANSPEPTIDASA Y TRANSAMINASAS): La elevacin de
estos parmetros es indicativa del compromiso del drenaje biliar y apoya el
origen biliar de esta enfermedad. La hiperbilirrubinemia (mayor a 4mg/dl)
aparece aproximadamente en el 10% de los pacientes y los niveles retornan
a la normalidad en 4 a 7 das.
Hipocalcemia: Se presenta en un 25% de los casos. Es indicativo de
necrosis grasa peripancretica, ya que se ha observado que existe
saponificacin intraperitoneal del calcio por los cidos grasos en zonas de
necrosis grasa, con grandes cantidades (hasta 6 gr.) disueltas o suspendidas en
el lquido asctico.
Diagnstico por imgenes:
Estudios Radiolgicos. Aunque hay una o ms anomalas radiolgicas en ms
del 50% de los pacientes, los hallazgos son inconstantes e inespecficos. Entre
ellos se destacan en la Rx directa de abdomen:
leo localizado que suele afectar el yeyuno (asa centinela).
leo generalizado con niveles hidroaereos.
Signo del colon interrumpido, que se debe a la dilatacin aislada del colon
transverso.
Distensin duodenal con niveles hidroaereos
La presencia de calcificaciones en el rea pancretica en ocasiones puede
sugerir una pancreatitis crnica de base.
Masa que con frecuencia es un pseudoquiste.

El principal valor de las radiografas convencionales en la pancreatitis aguda

consiste en ayudar a excluir otros diagnsticos, sobre todo una vscera perforada.
Ecografa. Suele ser el procedimiento inicial en la mayora de los pacientes en
los que se sospecha enfermedad pancretica. Su principal utilidad en la
pancreatitis aguda, es en el diagnostico etiolgico mediante la evaluacin de la
vescula y la va biliar. En cuanto al diagnstico ecogrfico de pancreatitis
aguda, se basa en la presencia de signos pancreticos y peripancreticos. El
agrandamiento de la glndula y los cambios en su forma y ecogenicidad son
signos frecuentes pero de valor relativo por su gran variabilidad en sujetos
normales. Sin embargo en la situacin clnica apropiada un pncreas
aumentado de tamao y deformado es suficiente para confirmar el diagnstico.
Un signo muy especfico es la separacin neta del pncreas con respecto a los
tejidos circundantes. En los ataques graves es comn la presencia de
colecciones liquidas bien definidas que asientan en los espacios retrogstricos
y pararrenal anterior izquierdo que tienen gran valor diagnstico. Hay que tener
en cuenta que su ya de por si baja sensibilidad para el diagnstico de
pancreatitis aguda se ve en la prctica reducida por el hecho de la frecuente
interposicin de gas, que impide la visualizacin de la glndula en ms de la
mitad de los casos en la fase inicial de la enfermedad, sin embargo, el operador
entrenado puede apreciar un agrandamiento caracterstico de la glndula.
Tomografa Computada. El papel fundamental de la TC es la clasificacin
local de gravedad ms que el diagnstico primario de pancreatitis aguda. No
obstante, en casos de diagnstico dudoso, por ligera o nula elevacin
enzimtica en suero, o en los casos de gravedad clnica en ausencia de dolor
abdominal, el papel de la TC el fundamental en el diagnstico de la
enfermedad. En estos casos se observa una glndula aumentada de tamao,
de bordes mal definidos, heterogeneidad del parnquima, presencia de
colecciones lquidas.
Es ms sensible que la ecografa, a pesar de esto por razones de costo,
empleo de radiaciones ionizantes y reducida capacidad para evaluar el sistema
biliar, la tomografa con propsito diagnstico, solo est indicada ante el
fracaso de la ecografa para reconocer el pncreas.
La realizacin de una TC antes de las 48 hs. de evolucin desde el inicio de la
enfermedad, tiende a infravalorar la gravedad del cuadro local de pancreatitis y
por tanto, el momento idneo de su realizacin es entre las 48 y 72 hs.
3.- Otros fluidos biolgicos en que se puede determinar amilasa y su uso
diagnstico.
Amilasa en suero: La amilasa es un enzima que tiene la funcin de digerir el
glicgeno y el almidn para formar azcares simples, se produce
principalmente en las glndulas salivares y en el pncreas. Cuando uno de
estas glndulas se inflama derrama la amilasa a la sangre y aparece elevado
su nivel en el anlisis de la amilasa srica. Se utiliza para evaluar la funcin del
pncreas, diagnosticar la presencia de enfermedades del mismo y para
controlar su evolucin. Tambin se utiliza para evaluar enfermedades de la

vescula biliar (piedras o litiasis), problemas intestinales, y otras enfermedades

diversas.
Amilasa salival: La amilasa se encuentra en la saliva y rompe el almidn en
maltosa y dextrina. Esta forma de amilasa tambin se llama "ptialina",/'ta L?
N/Se romper grandes molculas de almidn, insolubles en almidones
solubles, la produccin de almidones cada vez ms pequeos y en ltima
instancia, la maltosa. Ptialina acta sobre un glucosdicos lineales, pero la
hidrlisis compuesto requiere una enzima que acta sobre los productos
ramificados. Amilasa salival se inactiva en el estmago por el cido gstrico. En
jugo gstrico se ajust a pH 3,3, ptialina fue totalmente inactiva en 20 minutos a
37 C. En contraste, 50% de la actividad de la amilasa se mantuvo despus de
150 minutos de exposicin a los jugos gstricos a pH 4,3. Tanto el almidn, el
sustrato para la ptialina, y el producto son capaces de proteger parcialmente
contra la inactivacin por el cido gstrico.
Cavidad peritoneal: Normalmente hay unos 50 ml de lquido amarillo plido
claro en la cavidad peritoneal.
Se puede encontrar Amilasa: 138 a 404 mg/dl

4.- Investigue en que patologas se determina amilasa salival

Caractersticas de la Saliva.
La saliva interviene en la masticacin, deglucin, fonacin y gustacin. Tiene
un rol digestivo del almidn por la presencia de la amilasa salival. Por su accin
bactericida protege la mucosa y los dientes. Tiene tambin una funcin
endcrina.
En el hombre, el volumen excretado es de tres cuarto litro por da.
La composicin de la saliva vara entre las distintas glndulas.
La secrecin salival est dirigida por el sistema simptico y parasimptico, los
que determinan los cambios cuantitativos y cualitativos.
En el sector de Estomatologa se evalan pacientes con problemas
relacionados con la disminucin o falta de saliva (Hiposialia o Asialia), o el
exceso de la misma (Sialorrea).

Hiperamilasemia secundaria a Macroamilasemia

Existen dos tipos de amilasas: la amilasa pancretica y la amilasa salival.

La amilasa que circula en la sangre no es slo de origen pancretico sino

tambin salival. Esta ltima se produce en diversos rganos, adems de las
glndulas salivales. En la determinacin rutinaria de amilasas que se hace en
los laboratorios se dosa tanto la amilasa salival como la pancretica pero se
informa errneamente el resultado como "amilasa pancretica" lo que lleva a
un error de interpretacin. El resultado de la determinacin se debe informar
slo como "amilasas", ya que en estos dosajes est incluida la amilasa salival y
pancretica. El mtodo para diferenciarlos es mediante el dosaje de
isoamilasas.
La amilasa no pancretica se une en ocasiones a una protena, generalmente
una inmunoglobulina (IgA, IgG), convirtindose as en una macromolcula que
no filtra por el glomrulo dado su tamao y por ende permanece
permanentemente elevada en la sangre sin eliminarse por la orina,
condicionando una hiperamilasemia secundaria a una macroamilasemia .
Hiperamilasemia
Existen muchas causas que pueden provocar hiperamilasemia. Algunas son:
-Pancreatitis o inflamacin del pncreas. Esto hace que los niveles de amilasa
y lipasa aumenten hasta 3 veces el lmite normal. Ambos valores deben estar
altos para hacer el diagnstico de pancreatitis.
-Tumores: los niveles de la enzima amilasa pueden aumentar en algunos
tumores pancreticos, salivales, prostticos, pulmonares y ovricos.
-Infeccin de la vescula biliar: la inflamacin de la vescula biliar (colecistitis)
puede causar niveles altos de amilasa (hiperamilasemia).
-La insuficiencia renal puede resultar en hiperamilasemia.
-Medicamentos: algunos pueden
hiperamilasemia e hiperlipasemia.

provocar

pancreatitis

con

causar

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DE TACNA
Escuela Profesional de
Tecnologa Mdica-Laboratorio
Clnico y Anatoma Patolgica
Bioqumica Clnica I
Practica N 14
Glucosa
Docente: Luisa Torres Ramos
Alumna: Ponce Huanca Estefany
Ciclo: IV ciclo
Tacna
Per
2014
Practica N 14: Glucosa

Objetivo
Definir y descaribir las funciones de la glucosa, como biomolecula y su
alteracion en los diferentes estados fisiologicos y patologicos. Realizar
cuantificcion de glucosa en muestras serics y saloivales e interpretar los
valores obtenidos.
Materiales
-Tubos de ensayo
-Centrifuga
-Bao Maria
-Espectrofotometro
-Muestra (suero de sangre y saliva)
-Reactivo de trabajo
-Agua destilada
Procedimiento
Preparamos el reactivo de trabajo utilizando los reactivos A, B y C: colocando
en un pote 500 partes de agua destilada 50 partes de reactivo A 50 partes de
reactivo B mezclamos, llevamos a 1000 partes de agua y agregamos 3 partes
de reactivo C.

Ya listo el reactivo de trabajo, usamos 7 tubos: 1 tubo blanco, 1 tubo estandar,

3 tubos de muestras del hospital y 2 tubos de muestras de nuestros
compaeros.

Colocamos 10 ul de muestra de los 5 tubos de muestras, en el tubo estandar

10 ul de estandar, y a todos los tubos les agregamos 1 ml de reactivo de
trabajo.

El tubo con mayor color tiene mayor cantidad de glucosa

2.- Concepto de factor de calibracin y su utilidad para el hallazgo de la

concentracin de glucosa.
Factor de Calibracin: El cual se define como la relacin entre la
concentracin de la solucin patrn y su lectura respectiva. Posteriormente la
multiplicacin de dicho factor por la absorbancia de la muestra problema nos da
la concentracin de sta.
Factor de Calibracin = Concentracin Patrn (mg/dL)
Absorbancia del Patrn
Glucosa (mg/dL) = Absorbancia de la muestra x Factor de Calibracin
3.- Diferencias laboratoriales entre DM tipo 1 y DM tipo 2.
La diabetes mellitus es un desorden clnico asociado a varias causas. La
diabetes mellitus se divide en dos categoras, la idioptica y la secundaria.
DM tipo 1: La diabetes idioptica se divide en dos tipos importantes; insulina
dependiente e insulina no dependiente. La diabetes mellitus insulina
dependiente (IDDM) o diabetes tipo 1 se caracteriza por el desarrollo de la
cetoacidosis en la ausencia de terapia con insulina. La diabetes tipo I se
manifiesta en la infancia por lo cual tambin se conoce como diabetes juvenil y
es el resultado de una respuesta autoinmune que destruye las clulas del
pncreas.
La diabetes tipo 1 se debe a una reaccin autoinmune contra los antgenos de
los islotes del pncreas. La diabetes mellitus insulina-dependiente (IDDM) est
tambin asociada con otros procesos autoinmunes endcrinos (por ejemplo,
enfermedad de Addison. Adicionalmente, la prevalencia de enfermedades
autoinmunes es mayor en los familiares de los pacientes con IDDM.
DM tipo 2: La diabetes mellitus no insulina dependiente (tambin conocida
como diabetes tipo 2), se caracteriza por no necesitar insulina para prevenir la
cetoacidosis. La diabetes tipo 2 se refiere a la forma comn de la diabetes tipo
2 idioptica. Aunque la diabetes tipo 2 no es una enfermedad autoinmune
existe una carga gentica importante asociada a su desarrollo, sin embargo
esos genes de susceptibilidad que predisponen al desarrollo de la diabetes tipo
2 todava no han sido identificados en la mayora de pacientes. Esto se debe a
la heterogeneidad de los genes responsables de la susceptibilidad de
desarrollar diabetes tipo 2. La obesidad es el factor de mayor riesgo que
predispone a alguien a presentar diabetes tipo 2. Ciertos estudios genticos en
ratones y ratas han demostrado una relacin entre los genes responsables de
la obesidad y aquellos que pueden causar diabetes mellitus.
Hay dos tipos principales de diabetes tipo 2:

1. la de inicio tardo asociada con la obesidad

2. la de inicio tardo no asociados con la obesidad
4.- Ventajas del mtodo enzimtico para la determinacin de glucosa en
comparacin con los mtodos de Folin y Wu y de Somogyi-Nelson.
Folin y Wu: Recurre a la reduccin de iones cpricos en solucin alcalina
caliente, por efecto de la glucosa y otras sustancias reductoras de un filtrado de
sangre sin protenas. A su vez, el xido cuproso que se forma durante esta
reaccin reduce el cido fosfomolibdicoincoloroa "azul de molibdeno"; el color
se mide por espectrofotometra.
Somogyi-Nelson: Este mtodo se emplea para cuantificar hidratos de carbono
solubles reductores. Se basa en la determinacin espectrofotomtrica
(absorbancia a 520 nm) de un complejo coloreado formado entre el Cu+
(proveniente del Cu++ por oxidacin del azcar reductor presente en medio
alcalino caliente) y el arsenomolibdato. La cantidad de carbohidratos solubles
reductores presentes se determina por comparacin con una curva de
calibracin.
Segn mi criterio, el mtodo enzimtico para determinacin de glucosa, es ms
rpida ya que existe el factor de calibracin, facilitando los clculos de las
muestras ledas en el espectrofotmetro, a comparacin de los mtodos antes
mencionados que requieren de la curva de calibracin y son mas complicadas
para realizar.

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Tecnologa Mdica-Laboratorio
Clnico y Anatoma Patolgica
Bioqumica Clnica I
Practica N 15
Glucosa Post Prandial
Docente: Luisa Torres Ramos
Alumna: Ponce Huanca Estefany
Ciclo: IV ciclo
Tacna
Per
2014