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Cromatografa lquida de
Aplicaciones
EQUIPOS
Cromatografa
Cromatgrafo de gases
1 Historia
4 Vase tambin
5 Referencias
6 Enlaces externos
Historia[editar]
El botnico ruso Mijal Tsweet1 (Mikhail Semenovich Tsweet, 1872-1919)
emple por primera vez en 1906 el trmino "cromatografa" (que proviene del
griego y que significan respectivamente chroma "color" y
graphos "escribir").
A comienzos del ao 1903, Mijail Tsweet us columnas de adsorcin de
lquidos para separar pigmentos vegetales (por ejemplo,clorofilas). Las
disoluciones se hacan pasar a travs de una columna de vidrio rellena de
carbonato de calcio, que finamente dividido de un material poroso que
interacciona de forma diferente con los componentes de la mezcla, de forma
que stos se separaban en distintas bandas coloreadas a lo largo de la
columna.
Los primeros equipos de cromatografa de gases aparecieron en el mercado a
mediados del siglo XX. A su vez, la cromatografa lquida de alta
resolucin (HPLC) comenz a desarrollarse en los aos 1960, aumentando su
importancia en las dcadas siguientes, hasta convertirse en la tcnica
cromatogrfica ms empleada. Sin embargo esto se ir modificando con el
paso de los aos.
Clasificacin de los mtodos de separacin en cromatografa[editar]
Cromatografa en papel
Cromatografa de lquidos
Cromatografa de gases
Fase
mvil
Fase estacionaria
Cromatografa en
papel
Lquido
Papel de celulosa.
Cromatografa en
capa fina
Lquido
Cromatografa de
gases
Gas
Cromatografa
lquida
en fase reversa
Lquido
(polar)
Cromatografa
lquida
en fase normal
Cromatografa
lquida
de intercambio
inico
Lquido
(polar)
Cromatografa
lquida
de exclusin
Lquido
Cromatografa
lquida
de adsorcin
Lquido
Lquido
Cromatografa de
fluidos
supercrticos
Vase tambin[editar]
1 Principio
o
2 Parmetros
o
5 Vase tambin
6 Referencias
7 Enlaces externos
Principio[editar]
Cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC)[editar]
En la HPLC isocrtica el compuesto pasa por la columna cromatogrfica a
travs de la fase estacionaria (normalmente, un cilindro con pequeas
partculas redondeadas con ciertas caractersticas qumicas en su superficie)
mediante el bombeo de lquido (fase mvil) a alta presin a travs de la
columna. La muestra a analizar es introducida en pequeas cantidades y sus
componentes se retrasan diferencialmente dependiendo de las interacciones
qumicas o fsicas con la fase estacionaria a medida que adelantan por la
columna. El grado de retencin de los componentes de la muestra depende de
la naturaleza del compuesto, de la composicin de la fase estacionaria y de la
fase mvil. El tiempo que tarda un compuesto a ser eluido de la columna se
denomina tiempo de retencin y se considera una propiedad identificativa
caracterstica de un compuesto en una determinada fase mvil y estacionaria.
La utilizacin de presin en este tipo de cromatografas incrementa la velocidad
lineal de los compuestos dentro de la columna y reduce as su difusin dentro
de la columna mejorando la resolucin de la cromatografa. Los disolventes
ms utilizados son el agua, el metanol y el acetonitrilo. El agua puede contener
tampones, sales, o compuestos como el cido trifluoroactico, que ayudan a la
separacin de los compuestos.
Una mejora introducida a la tcnica de HPLC descrita es la variacin en la
composicin de la fase mvil durante el anlisis, conocida como elucin en
gradiente. Un gradiente normal en una cromatografa de fase reversa puede
empezar a un 5% de acetonitrilo y progresar de forma lineal hasta un 50% en
25 minutos. El gradiente utilizado vara en funcin de la hidrofobicidad del
compuesto. El gradiente separa los componentes de la muestra como una
funcin de la afinidad del compuesto por la fase mvil utilizada respecto a la
afinidad por la fase estacionaria. En el ejemplo, utilizando un gradiente
agua/acetonitrilo los compuestos ms hidroflicos eluirn a mayor
concentracin de agua, mientras que los compuestos ms hidrofbicos eluirn
a concentraciones elevadas de acetonitrilo. A menudo, hace falta realizar una
serie de pruebas previas con tal de optimizar el gradiente de forma que permita
una buena separacin de los compuestos.
Tipos de HPLC[editar]
Cromatografa de fase normal[editar]
La cromatografa de fase normal o normal phase HPLC (NP-HPLC) fue el
primer tipo de sistema HPLC utilizado en el campo de la qumica, y se
Dimetro interno[editar]
El dimetro interno de una columna de HPLC es un aspecto crtico que
determina la cantidad de muestra que se puede cargar a la columna y tambin
influye en su sensibilidad. Las columnas de dimetro interno ms grande
(>10mm) se utilizan normalmente en la purificacin de compuestos para su
utilizacin posterior. En cambio, las columnas de dimetro interno menor (45 mm) se utilizan en el anlisis cuantitativo de las muestras, y se caracterizan
por el aumento la sensibilidad y la minimizacin del consumo de disolventes
que conllevan. Estas columnas se suelen denominar columnas de rango
analtico y normalmente estn asociadas a un detector UV-VIS. Aparte, existen
otros tipos de columnas, como las de tipo capilar, con un dimetro inferior a
0.3 mm, utilizadas principalmente en espectrometra de masas.
Medida de las partculas[editar]
La mayora de HPLC tradicionales se realizan con una fase estacionaria unida
al exterior de partculas esfricas de silica. Estas partculas pueden tener
diferentes medidas, siendo las de 5\mum de dimetro las ms utilizadas.
Partculas ms pequeas ofrecen una mayor superficie y una mejor separacin,
pero la presin que se requiere por obtener una velocidad lineal ptima
aumenta de forma inversamente proporcional al cubo del dimetro de la
partcula. Esto significa que disminuir la medida de las partculas a la mitad,
aumentara la resolucin de la columna, pero a la vez, aumentara la presin
necesaria en un factor de ocho.
Tamao de poro[editar]
Muchas fases estacionarias son porosas para proporcionar una mayor
superficie. Los poros pequeos proporcionan una mayor superficie mientras
que los poros de mayor medida proporcionan una cintica mejor,
especialmente para los compuestos de tamao ms grande; por ejemplo, una
protena que sea ligeramente ms pequea que el tamao de los poros puede
entrar, pero difcilmente saldr con facilidad.
Presin del sistema[editar]
La presin de las bombas es variable segn el modelo y fabricante, pero su
rendimiento se mide en su habilidad para generar un flujo constante y
reproducible. La presinpuede lograr valores de hasta 40 MPa (o unas 400
atmsferas). Los aparatos ms modernos de HPLC incorporan mejoras para
poder trabajar a presiones ms altas y, por lo tanto, poder utilizar partculas de
tamao ms pequeo en las columnas (< 2 micrmetros). Estos nuevos
aparatos, denominados ultra performance liquid chromatography(UPLC)
pueden trabajar con valores de hasta 100 MPa de presin (unas 1000
atmsferas). (Hay que tener en cuenta que las siglas UPLC son una marca
registrada de Waters Corporation aunque a veces se utilizan de forma general
para designar este tipo de aparatos).
Aplicacin
Separacin, identificacin, purificacin y cuantificacin de una gran variedad de compuestos
qumicos.
Descripcin
Modelos disponibles
Jasco HPLC Model HSS-900.
Ms informacin
Poole, C.F; Poole, S.K. Chromatography today Elsevier, New York, pp 545-595, 1991.
seccypiq@quim.ucm.es
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Cromatografa lquida de
Cromatografa lquida
La Cromatografa lquida, tambin conocida como Cromatografa de
lquidos, es una tcnica de separacin y no debe confundirse con una tcnica
cuantitativa o cualitativa de anlisis. Es una de las tcnicas analticas
ampliamente utilizadas, la cual permite separar fsicamente los distintos
componentes de una solucin por la adsorcin selectiva de los constituyentes
de una mezcla. En toda cromatografa existe un contacto entre dos fases, una
fija que suele llamarse fase estacionaria, y una mvil (fase mvil) que fluye
permanente durante el anlisis, y que en este caso es un lquido o mezcla de
varios lquidos. La fase estacionaria por su parte puede
ser almina, slice o resinas de intercambio inico que se encuentran
disponibles en el mercado. Los intercambiadores inicos son matrices slidas
que contienen sitios activos (tambin llamados grupos ionognicos) con carga
electrosttica (positiva o negativa). De esta forma, la muestra queda retenida
sobre el soporte slido por afinidad electrosttica. Dependiendo de la relacin
carga/tamao unos constituyentes de la mezcla sern retenidos con mayor
fuerza sobre el soporte slido que otros, es decir sern adsorbidos, lo que
provocar su separacin. Las sustancias que permanecen ms tiempo libres en
la fase senil, avanzan ms rpidamente con el fluir de la misma y las que
quedan ms unidas a la fase estacionaria o retenidas avanzan menos y por
tanto tardarn ms en salir o fluir. ste es el principio fundamental de la
cromatografa. Un ejemplo notable es la cromatografa de intercambio inico.
Las columnas ms utilizadas son las de slice.
== Mtodos de cromatografa lquida ==
Mtodo
Abreviat
Mecanismo predominante
ura
Lquido, slido o
de adsorcin
LSC
Lquido
LLC
Fase enlazada
BPC
Afinidad
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