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PRODUCCIN
BIOTECNOLGICA
DE
CIDO LCTICO.
INTEGRANTES:
U.N.S.J
Introduccin............................................................................................................. 3
Propiedades..4
Produccin Industrial...6
Metabolismo de hexosas ...................................................................................... 10
Microorganismo elegido ........................................................................................ 11
Caractersticas del Gnero.........11
Conservacin de la cepa ....................................................................................... 12
Cintica de crecimiento ......................................................................................... 13
Composicin del medio de cultivo ......................................................................... 14
Esterilizacin de equipos ...................................................................................... 15
Biorreactor, accesorios y equipos de control ........................................................ 16
Mtodo de cultivo........17
Preparacin del inculo .................................................................................. 17
Cultivo en quimiostato...17
Determinacin de glucosa y cido lctico ............................................................. 18
Fermentacin en sistema continuo ....................................................................... 19
Recuperacin y Purificacin ................................................. .20
Esquema del Proceso de produccin.22
Usos y Especificaciones ....................................................................................... 22
Problema ............................................................................................................... 24
CONCLUSIONES ................................................................................................. 26
Anexos .................................................................................................................. 27
Bibliografia ............................................................................................................ 31
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Introduccin:
El cido lctico es un compuesto orgnico de amplia aplicacin en las industrias
qumica, farmacutica, textiles y debido a sus propiedades benficas se utiliza mucho
en la industria alimentaria (bebidas, conservantes, etc.)
Es uno de los primeros cidos orgnicos descubiertosn 1780 por el qumico sueco
Scheele, quien lo aisl de leche agria, fue reconocido como producto de fermentacin
por Blondeaur en 1847 y tan solo en 1881, Littlelon inicia la fermentacin a escala
industrial.
Industrialmente se fabrica o puede obtenerse como producto metablico de la
fermentacin controlada de cualquier medio que contenga carbohidratos, como del
azcar de las melazas, de la glucosa del maz o de la lactosa del suero de la leche,
etc., y por la accin de diversos microorganismos.
Se presenta bajo tres formas:
- Dextrgira.
- Levgira.
- Racmica.
El cido comercial es de la forma inactiva o racmica, constituida por una mezcla de
las formas dextrgira y levgira, y se vende en solucin con un 22, 44 u 85% de cido
y algunas impurezas orgnicas.
Este cido est muy diseminado en la naturaleza; se presenta como un componente
normal de la sangre y los msculos de los animales.
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Propiedades:
El cido lctico es un componente ternario, formado por tres elementos carbono,
hidrogeno y oxigeno. Es soluble en agua y en disolventes orgnicos misibles con
agua, como el alcohol y la acetona, pero en general, los alcoholes son ms eficaces en
la extraccin del cido lctico.
A continuacin se muestran en la tabla 1 y 2, las ms importantes:
(Fuente: Tesis de grado para materia en ingeniera qumica. Universidad Autnoma de Nuevo Len.
Francisco Antonio Dautant Semprum.)
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Tiene un carbono asimtrico lo cual da lugar a actividad ptica. Existen dos ismeros
pticos, el D (-) lctico y L (+) lctico y una forma racmica constituida por fracciones
equimolares de las formas L (+) y D (-). A diferencia del ismero D (-), la configuracin
L (+) es metabolizada por el organismo humano. Tanto las dos formas pticamente
activas como la forma racmica se encuentran en estado lquido, siendo incoloros y
solubles en agua. En estado puro son slidos altamente higroscpicos de punto de
fusin bajo. Ambas formas isomricas del cido lctico pueden ser polimerizadas y se
pueden producir polmeros con diferentes propiedades dependiendo de la
composicin.
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Produccin Industrial:
La obtencin por esta ruta incluye mltiples reacciones hasta obtener el producto
final, tales como:
Adicin de cido cianhdrico a acetaldehdo.
Hidrolisis de lactonitrilo.
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mejor
con
O2),
no
esporulados,
inmviles
catalasa negativo,
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Los Hongos tampoco son utilizados, puesto que en trabajos realizados a escala
industrial reportan bajos rendimientos y los productos obtenidos no poseen la calidad
deseada, lo que ha originado que el uso de hongos en estos procesos sea casi nulo.
(Fuente: Tesis de grado para materia en ingeniera qumica. Universidad Autnoma de Nuevo Len.
Francisco Antonio Dautant Semprum.)
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Metabolismo de hexosas:
La fermentacin de hexosas se realiza por tres vas:
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I.
II.
III.
fermentacin;
IV.
Microorganismo elegido:
Para
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Conservacin de la cepa:
La cepa Lactobacillus plantarum L10 se conserva a una temperatura de 80 C en
una cmara de congelacin profunda, para evitar la contaminacin y el envejecimiento
del cultivo. El medio de conservacin est compuesto de 2/3 partes de suspensin de
bacterias lcticas en medio MRS (medio de agar para evidenciar el crecimiento de
lactobacilus) y de 1/3 parte de glicerol como crioprotector. Las clulas en suspensin
se colectaron en la fase exponencial de su crecimiento.
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Cintica de crecimiento:
La constante de velocidad especfica de crecimiento (Ec.1) para cada microorganismo
a partir del modelo exponencial propuesto por Shuler y Kargi, (Ec. 2).
Ecuacin de Monod
Ecuacin para la biomasa:
Ecuacin de Monod
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(Fuente: Produccin de acido lctico por Lactobacillus plantarum L10 Autores: Waldir Estela, Mojmr Rychtera, Karel
Melzoch, Elena Quillama y Erida Egoavil. Ao: 2007-publicacion. Rev. peru. biol. 14(2): 271-275 (Diciembre, 2007).
Los medios con ms de 40 g/L de glucosa se deben esterilizar por separado tanto la
fuente de carbono como la fuente de aminocidos (extracto de levadura), a fin de
proteger de la posible reaccin de Maillard (glucosilacin no enzimtica de protenas).
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Para facilitar el proceso de aislamiento y purificacin del producto final, segn estudios
realizados y publicados en Rev. peru. biol. 14(2): 271-275 (Diciembre 2007), se debe
disminuir el contenido de sales en la composicin de los medios de cultivo y por otra
parte minimiza el contenido de glucosa residual en el producto final. Lo cual se puede
observer en la taba 4 al comparar las concentraciones de medio I y II, por lo que
resulta ms adecuado el medio II.
Esterilizacin de equipos:
Para eliminar el riesgo de contaminacin deben esterilizase los medios de cultivo,
el biorreactor y otros accesorios (tubos capilares, mangueras, embudos, caeras,
vlvulas, etc.).
Para nuestro caso en particular se puede realizar una ptima esterilizacin en
autoclave a presin de 0,1 MPa, y 120 C, durante 20 minutos para
volmenes
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El diseo debe ser tal que permita mantener el cultivo puro; una vez que
todo el sistema ha sido esterilizado y posteriormente sembrado con el
microorganismo deseado.
El reactor debe poseer tambin una unidad de regulacin, para lo cul se puede
utilizar tres bombas peristlticas, dos de ellas para regular el pH, y la tercera para la
alimentacin con algn sustrato o agente antiespumante. El pH por ejemplo se regula
on line con soluciones de NaOH y H2SO4 al 20 %v/v (*).Para la aireacin del medio
de fermentacin, el biorreactor debe poseer un conducto para dirigir el aire estril hacia
su interior. La temperatura tambin se debe controlar, por ejemplo mediante una sonda
que se sumerge en el medio de cultivo dentro del biorreactor (*). Es recomendable que
todos los procesos de cultivo se monitoreen con un software que a la vez coleccione
los datos en una computadora conectada a la unidad de medicin del biorreactor.
(*)Este sistema de control y monitoreo expuesto se basa en el descripto en Rev. peru. biol. 14(2): 271-275
(Diciembre, 2007) Facultad de Ciencias Biolgicas.
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METODOS DE CULTIVO:
Preparacin del inculo:
La propagacin de las bacterias lcticas se lleva a cabo en cultivo esttico a 37 C
durante 1012 horas, luego de ello se inocula aspticamente en el biorreactor. El
inculo se prepara en dos vasos Erlenmeyer de 250 ml conteniendo en cada uno 100
ml de medio de cultivo MRS.
Cultivo continuo en quimiostato:
Se realizan 6 ensayos a diferentes tasas de dilucin (D). Todos los cultivos se
inician como cultivo batch usando el medio V, luego de un determinado tiempo, cuando
los cultivos alcanzan la fase exponencial de crecimiento se comienza a suministrar el
medio 6 y a evacuar la misma cantidad del medio fermentado. Todo el proceso se
lleva a cabo a 37 C, pH 5,8 y a velocidad de agitacin de 500 r.p.m.
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Fuente: Rev. Per. biol. 14(2): 271-275 (Diciembre, 2007) Facultad de Ciencias Biolgicas.
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Para
la
evaluacin
de
los
datos
obtenidos,
se
utiliza
el
programa
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Recuperacin y Purificacin:
La separacin, pre concentracin y purificacin del cido lctico obtenido de los
medios de fermentacin es difcil debido a la alta afinidad del cido por el agua y a su
baja volatilidad. Los tratamientos posteriores depender de la pureza deseada e
incluyen:
Tratamiento con carbn activado.
Purificacin con resinas de intercambio inico
Extraccin con solventes o esterificacin con metanol seguido por destilacin e
hidrlisis.
Sin embargo, con el fin de limitar los residuos generados en el proceso, se han
desarrollado otros mtodos de recuperacin y purificacin que incluyen clarificacin de
medios de fermentacin por microfiltracin con flujo cruzado, tratamiento con resinas,
concentracin de sales de lactato por electrodilisis, conversin de sales de lactato en
cido libre por electrodilisis con membrana bipolar y tratamientos de intercambio
inico.
Comparado con tcnicas de adsorcin, precipitacin o filtracin por membranas, el
mtodo de extraccin por solventes con componentes organofosforados, aminas
terciarias o amonios cuaternarios; es ms selectivo y favorece la eficiencia del proceso
y la pureza del producto obtenido, sin embargo los solventes orgnicos plantean dos
problemas: son txicos para los microorganismos y el pH optimo de la extraccin y de
la fermentacin no coinciden, por lo que se ha propuesto el uso de membranas
polimricas de Triacetato de celulosa con sales de amonio cuaternario como fase
mvil y o-nitrofeniloctil eter como plastificante, para la separacin in situ de cido
lctico.
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Usos y Especificaciones:
El cido lctico y sus derivados como sales y steres son ampliamente utilizados
en la industria alimenticia, qumica, farmacutica, del plstico, textil, la agricultura,
alimentacin animal entre otros.
En la industria alimenticia se usa como acidulante y conservante. Las industrias
qumicas lo utilizan como solubilizador y como agente controlador de pH. En las
curtiembres es utilizado para remojar los cueros. En la produccin de pinturas y
resinas, puede ser utilizado como solvente biodegradable.
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Problema:
En un proceso de produccin de cido Lctico a partir de Lactobacillus Plantarum
L10, se desea esterilizar en medio de cultivo con un caudal de 2 m3/h mediante
intercambio de calor con vapor en un esterilizador continuo. El lquido contiene esporas
bacterianas en una concentracin de 5 x 1012 m-3. La energa de activacin y la
constante de Arrhenius para destruccin trmica de estos contaminantes son 283
KJ/mol y 5.7 x 1039 1/h, respectivamente. Se considera aceptable un riesgo de
contaminacin de un organismo superviviente en cada 60 das de operacin. La
tubera de esterilizador tiene un dimetro interno de 0.1 m. La longitud de la seccin
isoterma es de 24 m. La densidad del medio de cultivo es 1000 kg/m3 y la viscosidad
3.6 kg/m h. Qu temperatura se necesita en el esterilizador?
Solucin:
El nivel deseado de destruccin celular se calcula tomando como base 60 das.
Ignorando cualquier muerte celular en las secciones de calentamiento y enfriamiento,
el nmero de clulas que entran a la seccin isoterma en 60 das es:
N1 2 m3h1 (5 x1012 m3 )
24 h
(60 d ) 1.44 x1016
1d
N2, el nmero aceptable de clulas que salen durante dicho perodo es 1. Por lo tanto:
N2
1
6.9 x1017
N1 1.44 x1016
2 m3 h 1
254.6 m h 1
0.1 m 2
(
)
2
24
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(254.6 m h1 ) (24)
Pe
) 445.6 h1
2 1
D2
16.6 m h
(254.6 m h1 ) (42)
kd
) 445.6 h1
L
24 m
kd Ed
A RT
Por lo tanto:
3
1
Ed 283x10 J mol
1
1
R 8.3144 J K mol
398.4 K 125 C
kd
445.6 h 1
ln
ln
39 1
A
5.7 x10 h
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CONCLUSIONES:
A pesar de que la produccin industrial de cido lctico se inici hace ya ms de
cien aos, la investigacin sigue an muy activa, esto es debido bsicamente a dos
factores: las nuevas aplicaciones que se le han encontrado al cido por la posibilidad
que ofrece de polimerizarse y producir plsticos biodegradables; y el costo, que resulta
alto para aplicaciones a gran escala. Los investigadores proponen disminuir los costos
de produccin mediante el empleo de sustratos ms baratos como desechos agro
industriales, a travs del uso de microorganismos ms eficientes y mediante la
configuracin de procesos integrados de purificacin que permiten obtener L(+) y
D(
-) cido lctico puro. Por otro lado, la eficacia del proceso biotecnolgico que se mide
en trminos de concentracin de cido lctico, rendimiento en producto relacionado
con el sustrato consumido y velocidad de produccin, es muy variado y stos
parmetros dependen del microorganismo utilizado, de la fuente de carbono, de la
fuente de nitrgeno, del pH, la temperatura y del modo de fermentacin.
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Anexos:
A continuacin se listan algunos sustratos de fermentacin lctica diferentes a
glucosa y lactosa pura y se muestran las concentraciones, los rendimientos y las
productividades volumtricas obtenidas con stos sustratos. Luego se listan tambin
sustratos puros para la fermentacin lctica.
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Bibliografa:
Estudios sobre la produccin de cido lctico a partir de un proceso de
fermentacin de melaza. Tesis de grado para materia en ingeniera qumica.
Universidad Autnoma de Nuevo Len. Francisco Antonio Dautant Semprum.
Produccin de cido lctico por Lactobacillus plantarum L10 Autores: Waldir
Estela, Mojmr Rychtera, Karel Melzoch, Elena Quillama y Erida Egoavil. Ao:
2007-publicacion. Rev. peru. biol. 14(2): 271-275 (Diciembre, 2007).
Produccin biotecnolgica del cido lctico. www.bio.hotmail.com
Produccin Industrial del cido poli lctico. www.leia.com
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