UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU

DEPARTAMENTO DE FITOTECNIA
ENGENHARIA AGRONMICA

RELATRIO
PREPARO DE MEIO DE CULTURA E ISOLAMENTO DE FUNGOS FITOPATOGNICOS

DISCIPLINA: FITOPATOLOGIA
MINISTRANTE: Prof. JOS EVANDO AGUIAR BESERRA Jr.
BRUNO ARCANJO SILVA

TERESINA, JULHO/2014.

SUMRIO

INTRODUO --------------------------------------------------------------------------------------------------3

OBJETIVO DA PRTICA ------------------------------------------------------------------------------------5

METODOLOGIA------------------------------------------------------------------------------------------------5

RESULTADOS E DISCUSSO -----------------------------------------------------------------------------7

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS-----------------------------------------------------------------------8

Introduo

Em todo o mundo, os fungos so os fitopatgenos mais importantes, pois eles causam a

maioria das doenas de plantas que prejudicam a agricultura. Fungos fitopatognicos, so
responsveis por perdas considerveis em culturas economicamente importantes, alm de estar
associados induo do apodrecimento de frutas e verduras ps-colheita, diminuindo o contedo
nutricional e aproveitamento destes alimentos.
Os fungos fitopatognicos so identificados, em sua maioria, pelos sintomas que
provocam e pelos sinais presentes no hospedeiro, que so facilmente observados em campo, tais
como manchas foliares, podrides, ramos secos, exsudaes, entre outros. Os fungos causam
sintomas

locais

ou

genricos

em

seus

hospedeiros

tais sintomas

podem

ocorrer

separadamente, ou em sequncia. Em geral, os fungos causam necrose de tecidos da planta e

frequentemente causam a reduo do crescimento (nanismo)de rgos ou da planta inteira.
O isolamento de fungos fitopatognicos consiste na sua obteno em cultura pura a partir
de tecidos doentes do hospedeiro, solo ou de qualquer outro substrato. A obteno do patgeno em
cultura pura essencial em estudos de morfologia, taxonomia, reproduo e fisiologia, bem
como em testes de patogenicidade, resistncia gentica de plantas e sensibilidade a fungicidas.
A obteno de um organismo em cultura pura no significa que ele seja o agente causal da
doena. Para provar que um dado organismo o agente capaz de causar uma doena, essencial
seguir rigorosamente as seguintes regras do Postulado de Koch: associao constante do
organismo com a doena; isolamento do organismo em cultura pura; inoculao da cultura
isolada em plantas sadias, reproduo dos sintomas e sinais tpicos da doena e por fim,
reisolamento do mesmo organismo inoculado.
Diferentes tcnicas de isolamento so usadas conforme a natureza do rgo doente, o
substrato e o estdio de desenvolvimento do patgeno (vegetativo ou reprodutivo), bem
como a critrio do

operador. Todavia, os mtodos bsicos de isolamento so o direto e o

indireto.
O isolamento direto consiste na transferncia, com o auxlio de um estilete, de
estruturas do patgeno (esporos, hifas, rizomorfos, ou esclerdios) diretamente do rgo infectado
ou de outro substrato para o meio de cultura. O isolamento direto tem diversas vantagens, pois, por
meio, deste pode-se obter o organismo puro, isento de contaminaes de microrganismos
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saprfitas associados ao tecido infectado, sendo possvel saber exatamente qual organismo
est sendo transferido para o meio e podem-se estabelecer comparaes entre as estruturas
do organismo formadas na superfcie do hospedeiro e em cultura.
A tcnica de isolamento indireto consiste na transferncia, para o meio de cultura, de
pores infectadas de tecido do hospedeiro ou amostras de solo e sementes infestadas. Os mtodos
de isolamento indireto variam com o tipo de rgo ou tecido infectado (rgos lenhosos ou
carnosos, no-lenhosos ou no-carnosos) ou substrato de onde o organismo recuperado.

Objetivo

Realizar o preparo de meio de cultura, este sendo o BDA.

Armazenar corretamente o meio de cultura.
Distribuir o meio de cultura em placas de petri para o isolamento indireto do fungo
Colletotrichum gloeosporioides, causador da Antracnose do cajueiro, a partir de folha de
caju infectada.

Metodologia

Autoclave

Erlemeyer com BDA

Pesou-se o meio de cultura (20g) e em seguida, transferiu-se o mesmo para um Erlemeyer de

500 ml. Adicionou-se 250 ml de gua destilada e fechou-se a boca do frasco com tampo (chumao
de algodo + papel alumnio). Autoclavou-se a 121C por 20 minutos. Aps decorridos os 20
minutos, esperou-se a temperatura baixar, retirou-se os frascos e armazenou-se os mesmo.
Para o isolamento do fungo, transferiu-se o meio de cultura para placas de petri, pegou-se
folhas de cajueiro com antracnose, lavou-se as folhas bem com gua e sabo para eliminar
patgenos indesejveis na superfcie foliar, lavou-se bem as mos e antes de comear o isolamento,
esterilizaram-se as mos com lcool, dentro de uma Capela de fluxo laminar, para evitar
contaminao do ambiente, foram retirados trs fragmentos da folha de cajueiro com antracnose,
com o auxilio de uma lmina esterilizada atravs de uma chama, sendo que estes fragmentos so
retirados de locais bem prximos infeco, pois se for retirado do local infectado, a chance de
isolar o fungo desejado muito pouca, pois l se encontram outros fungos, sendo estes saprfitas,
com o auxilio de uma pina, tambm esterilizada atravs da chama, colocou-se os trs fragmentos
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em soluo de etanol 70% durante 1 minuto, retirou-se as mesmas do etanol e colocou-as em

soluo de hipoclorito de sdio 1% durante 1 minuto, logo aps colocou-se os fragmentos
mergulhados em gua esterilizada durante 1 minuto, esterilizou-se novamente a pina para poder
retirar um pedao de papel filtro estril do local onde se encontrava armazenado, feito isso, retirouse os fragmentos da gua e colocou-se os mesmo em cima do papel filtro para retirada do excesso
de gua. Feito isso, pegou-se a placa de petri com meio de cultura, e plaqueou-se os fragmentos.

Resultados e Discusso

Fungo crescendo em meio de cultura.

esporos e identificao do fungo.

Lmina preparada para observao de

Decorridos nove dias desde o cultivo do material em meio de cultura, era notvel o
crescimento de um fungo, assim sendo, foram retiradas amostras desse fungo para, anlise me
microscpio, para identificao do mesmo, atravs do tipo de esporo. A lmina foi preparada com,
material do fungo que cresceu no meio de cultura, e para corar, utilizou-se o corante azul de aman,
levou-se a lmina ao microscpio, e observou-se amostra.

Esporos de Colletotrichum gloeosporioides.

em meio de cultura.

Esporos observados da amostra

do fungo que cresceu

Aps observar a lmina, e comparar os esporos visualizados com os esporos de

Colletotrichum gloeosporioides, chegou-se a concluso que eram os mesmo esporos, portanto, o
fungo isolado em meio de cultura era o Colletotrichum gloeosporioides.

Referncias Bibliogrficas

SILVA, Luciana Ferreira da. CAPACIDADE DE DETERIORAO DE CEPAS DE Eucalyptus

spp. POR FUNGOS XILFAGOS. 2011. 77 f. Dissertao (Mestrado) - Curso de Cincias
Florestais, Universidade Federal do Esprito Santo, Jernimo Monteiro - Es, 2011.
EMBRAPA. Antracnose. Disponvel

em:

<http://sistemasdeproducao.cnptia.embrapa.br/FontesHTML/Caju/CultivodoCajueiro/doencas.htm>
. Acesso em: 30 jul. 2014.