Universidad de Costa Rica

Facultad de Ciencias Agroalimentarias

Escuela de Agronoma
Reguladores de Crecimiento Vegetal AF-5408
Catalina Acua Gutirrez
A70049

Control hormonal de la sntesis de amilasa

Resumen
Con el objetivo de demostrar el efecto de las giberelinas sobre la
sntesis de la alfa amilasa, se realiz un ensayo utilizando dos
concentraciones de ste regulador de crecimiento; 0.1 ppm y 0.01 ppm
de GA3. Se utiliz un medio agar agua al 2% al cual se le aadi las
distintas concentraciones de regulador y almidn. Se colocaron semillas
de avena en los platos petri, a las cuales se les haba removido el
embrin previamente, y se evaluaron a las 24 y 48 horas con la ayuda
de lugol al 4%. Luego se procedi a evaluar el dimetro de la aureola
formada alrededor de la semilla con una regla. El tratamiento con 0.1
ppm de GA3 fue el que consumi ms almidn del medio en
comparacin con el de 0.01 ppm; por ende el primero present una
aureola ms marcada que el segundo. Adems, las evaluaciones
realizadas a las 48 horas presentaron mayores diferencias entre s que
los evaluados a las 24 horas.
Introduccin
La germinacin de las semillas est mediado por varios factores
como los son la temperatura, la cantidad de agua, la luz, la cantidad de
oxgeno presente en el medio donde germinar y los niveles hormonales
adecuados (Garca et al. s.f.; Simn y Moysset 2006). Una vez que las
semillas cumplen con los factores necesarios para la germinacin, se
desencadenan procesos metablicos, como lo son la sntesis de enzimas,

las cuales ayudan a acelerar el proceso de hidrlisis (Koolman 2004) del

almidn para utilizar los productos como energa, para seguir con el
proceso de germinacin.
Uno de los pasos de la germinacin es el aumento en la
produccin de giberelinas por parte del embrin. sta hormona se
encarga de codificar los genes encargados de la produccin de la alfa
amilasa, enzima que se encarga de desdoblar los almidones que se
encuentran almacenados en el endospermo, para ser utilizados por el
embrin como energa (Jordn y Casaretto 2006; Herrera et al. 2006).
La importancia de las giberelinas sobre la germinacin de las
semillas ha sido aprovechada por la industria cervecera, y para
uniformizar la germinacin de las semillas en los cultivos (Taiz y Zeiger
2006).
El objetivo de esta prctica es demostrar el efecto de diferentes
concentraciones de giberelinas sobre la sntesis de la alfa amilasa.
Materiales y mtodos
Se prepar un medio agar agua al 2% con 200 mg de almidn por
cada 100 ml de medio. El medio fue dividido en tres grupos a los cuales
se les deba adicionar diferentes concentraciones de giberelinas. El
primer tratamiento consista en adicionar una concentracin de 0.1 ppm
GA3, el segundo a una concentracin de 0.01 ppm, y al tercero no se le
adicionaba GA3 ya que era el control (anexo 1). Posteriormente se
calent el medio hasta lograr que se viera traslucido y se autoclav por
20 minutos. Luego en condiciones estriles fue dispensado en cajas
petri.
Se utilizaron 120 semillas de avena, las cuales fueron
desinfectadas con hipoclorito de sodio al 2% en agitacin por 20 min.
Luego se llevaron a una cmara estril donde se realizaron tres
enjuagues con agua desionizada autoclavada. Posteriormente se
procedi a cortar un tercio de la semilla para eliminar el embrin de
sta (Figura 1).

Embrin

Descartar

Fig.1. Sitio donde se debe de realizar

el corte de la semilla de avena.

Luego de cortadas las semillas, se procedi a poner 4 semillas por

plato petri (Figura 2), cada tratamiento cont con un total de 10 platos
petri por tratamiento para un total 40 semillas por tratamiento y 30
platos en total.

Fig. 2. Arreglo de las semillas en el plato petri

Se realizaron dos evaluaciones, una a las 24 horas y otra a las 48

horas. Para analizar los resultados se prepar una solucin de lugol al
4%, la cual fue vertida sobre cada plato petri, luego se enjuag con agua

desionizada y posteriormente se procedi a analizar el dimetro de la

aureola formada alrededor de la semilla con una regla.

Resultados y discusin
La Figura 2 muestra que s existen diferencias significativas entre
el tratamiento de 0.1 ppm y el control, de igual forma el de 0.1 ppm y el
de 0.01 ppm; sin embargo no se encontraron diferencias significativas
entre el control y el tratamiento 0.01 ppm (anexo 2). El mayor dimetro
de aureola fue formado por el tratamiento de 0.1 ppm GA 3, alcanzando
0.4 cm, seguido por el tratamiento de 0.01 ppm con 0.3 cm y por ltimo
el control con 0.16 cm.

Fig.3. Dimetro de la aureola formada alrededor de las semillas de

avena para tres diferentes tratamientos evaluado a las 24 horas.
Las barras verticales corresponden al error estndar. (*p<0.02)

El control present crecimiento de un halo a pesar de que no se le

aadi GA3 al medio. Este resultado resalta la importancia de remover
por completo el embrin de la semilla, ya que ste pudo haber sido el
responsable de crear ese halo (Figura 4). Esto se podra mejorar
haciendo un corte a la mitad de la semilla en vez de un tercio de sta,

para asegurarse de remover por completo el embrin; por esa razn es

que no hay diferencias significativas con el tratamiento de 0.01 ppm.

Fig.4. Ejemplo de semilla a la que no se le removi el embrin por completo

A las 48 horas todos los tratamientos presentaron diferencias

significativas entre s (anexo2). La Figura 5, en comparacin a la Figura
4, muestra una diferencia en el crecimiento del halo al dejarlo 24 horas
ms, para un total de 48 horas. En el caso del tratamiento con 0.1 ppm
de GA3 se puede apreciar que el dimetro pasa de tener un halo de 0.4
cm a las 24 horas, a uno de 1.2 cm a las 48 horas; el tratamiento de
0.01 ppm pas de tener una aureola de 0.3 cm a 0.8 cm a las 48 horas.
El control disminuy su halo ya que pas de un dimetro de 0.16 cm a
0.04.

Fig.5. Dimetro de la aureola formada alrededor de las semillas de

avena para tres diferentes tratamientos, evaluado a las 48 horas.
Las barras verticales corresponden al error estndar. (*p<0.02).

El cambio en el dimetro de la aureola en el control se atribuye al

corte realizado sobre la semilla ya que como se explic anteriormente,
pudo haber sido causa de partes restantes del embrin.
Como se pudo apreciar comparando ambas figuras, el tiempo tiene
un efecto sobre la degradacin del almidn en el medio. Esto se debe a
que la actividad enzimtica cambia conforme transcurre el tiempo, ya
que se va consumiendo el sustrato, hasta que se agota y la reaccin
enzimtica eventualmente comienza a disminuir (Primo 1995). Es muy
probable que a las 24 horas se estuviera iniciando actividad enzimtica,
que fue desencadenada por la sealizacin por parte de las giberelinas,
para comenzar la produccin de la alfa amilasa, por lo que sta enzima
estaba comenzando a consumir el almidn al momento de la evaluacin.
A las 48 horas de tratamiento es muy probable que la enzima haya
digerido an ms almidn del medio, logrndose as un halo de mayor
tamao de aureola en los tratamientos con giberelinas (Figura 6).
Las giberelinas cumplen una funcin muy importante durante la
germinacin de la plntula ya que sta hormona se encarga de ingresar
al endospermo y llegar a las clulas de la aleurona, promoviendo as la
sntesis de alfa amilasa (Taiz y Zeiger 2006; Santamarina et al. s.f.). La

transcripcin del gen que codifica a la alfa amilasa se incrementa en

presencia de las giberelinas (Curtis et al. 2006). En la Figura 4 y 5 se
muestra que existe una diferencia significativa entre las concentraciones
de GA3. Al haber una mayor concentracin de sta hormona en el medio,
en el caso de 0.1 ppm, genera que se codifique ms alfa amilasa que si
hubieran concentraciones menores, como es el caso de 0.01 ppm. Esto
demuestra lo dependiente que es la generacin de la alfa amilasa a las
concentraciones de giberelinas presentes en el medio.

Conclusiones y recomendaciones
La concentracin de las giberelinas en el medio tienen un efecto
directo sobre la sntesis de la alfa amilasa, ya que se demostr que a
dosis crecientes de ste regulador se genera una mayor degradacin de
almidn en el medio.
Adems, el tiempo influye sobre la velocidad en que la enzima va
a hidrolizar el almidn ya que se observ en la evaluacin final, a las 48
horas de iniciado el experimento, que se presentaba un halo mayor que
a las 24 horas.
Se podra realizar futuros tratamientos con ms concentraciones
de giberelinas, concentraciones de manera creciente, y relacionarlas con
la velocidad de consumo del almidn en el medio. Basndose en los
resultados de tiempo del experimento, se podra evaluar por ms das
para ver cunto tarda en consumirse todo el sustrato.

Fig. 6. Tratamiento de 0.1 ppm de GA 3. (A) evaluado a las 24 horas, (B)

evaluado a las 48 horas; tratamiento 0.01 ppm de GA 3 (C)

evaluado a las 24 horas, (D) evaluado a las 48 horas; control (E)

evaluado a las 24 horas, (F) evaluado a las 48 horas.

Literatura citada
Curtis, Barnes, Schneck, Flores. 2006. Invitacin a la Biologa, 6 edicin
en Espaol. Editorial Mdica Panamericana. Espaa. 768 pp.
Garca, F., Rosell, J., Santamarina, M. Introduccin al funcionamiento de
las plantas. Editorial Universidad Politcnica de Valencia. Valencia,
Espaa. 163 pp.
Herrera, J.; Alizaga, R.; Guevara, E.; Jimnez, V. 2006. Germinacin y
Crecimiento de la Planta. Editorial Universidad de Costa Rica. San
Jos, Costa Rica. 29 p.
Jordn, M.; Casaretto, J. 2006. Hormonas y Reguladores del Crecimiento:
Auxinas, Giberelinas y Citocininas. Fisiologa Vegetal. Ediciones
Universidad La Serena. La Serena, Chile. 28 pp.
Koolman, J., Rohm, K. 2004. Bioqumica: texto y atlas. Editorial Mdica
Panamericana. Madrid, Espaa. 88p.
Primo, E. 1995. Qumica orgnica bsica aplicada: De la molcula a la
industria. Tomo II. Editorial Revert. Espaa. 1119 pp.
Santamarina, M., Rosell, J., Garca, F. s.f. Prcticas de biologa y
botnica. Editorial Universidad politcnica de Valencia. 261 p.
Simn, E., Moysset, L. 2006. Prcticas de crecimiento y desarrollo de los
vegetales. Edisions de la Universitat de Barcelona. Barcelona,
Espaa. 83 pp.
Taiz, L. Zeiger, E. 2006. Fisiologa vegetal Vol. 2. Publicacions de la
Universitat Jaume I. Castell de la Plana, Espaa. 888 pp.

Anexo 1. Clculos realizados para las concentraciones de GA 3 utilizadas

en el experimento.
La concentracin inicial de GA3 que se utiliz para la elaboracin del
ensayo fue de 500 ppm.

Para 0.1 ppm:

Cn1 * V1 = Cn2 * V2
500 ppm * V1 = 0.1 ppm * 300 ml
V1 = (0.1 ppm * 300 ml)/ 500 ppm
V1 = 0.06 ml = 60 l
Se tomaron 60 l de GA3 que se encontraba a 500 ppm y se disolvieron en 300
ml que era la cantidad que se estaba preparando de medio, para llegar a una
concentracin de 0.1 ppm.

Para 0.01 ppm:

Cn1 * V1 = Cn2 * V2
500 ppm * V1 = 0.01 ppm * 300 ml
V1 = (0.01 ppm * 300 ml)/ 500 ppm
V1 = 0.006 ml = 6 l
Se tomaron 6 l de GA3 que se encontraba a 500 ppm y se disolvieron en 300
ml que era la cantidad que se estaba preparando de medio, para llegar a una
concentracin de 0.01 ppm.

Anexo 2. Prueba t student de los datos analizados en el ensayo.

Tiempo

24

Relacin
control/0,
01
control/0,
1
0,01/0,1

48

control/0,
01
control/0,
1
0,01/0,1

Varianza

Grados
libertad

t0,02

p<0,02

0,03984

-1,66345

18

2,552

No
significativo

0,04042

-4,32566

18

2,552

Significativo

0,04313

-2,58872

18

2,552

Significativo

18

2,552

Significativo

18

2,552

Significativo

18

2,552

Significativo

0,04279
0,03633
0,05245

11,92453
20,32425
-6,14463