Manual de PRC en Calidad en Microb Diagnost

LABORATORIO DE ANLISIS ESPECIALES
Y DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO
MCM-01
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE ASEGURAMIENTO DE CALIDAD

EN MICROBIOLOGIA DIAGNOSTICA
INDICE
1. Introduccin
2. Objetivo y campo de aplicacin
3. Referencias
4. Definiciones
5. Preparacin y esterilizacin de material
6. Control de autoclaves
7. Preparacin de Medios de Cultivo
8. Control de calidad de medios de cultivo
9. Control de calidad de tinciones
10. Condiciones ambientales
11. Tratamiento In Situ de Residuos Biolgico infecciosos
12. Bibliografa
13. Anexos
Fecha de Emisin MOTIVO: Cumplir con la NOM-166-SSA1- FECHA MODIF.

15/01/ 2004
1997, NMX-17025 e ISO-9001-2000
Enero-2005
Revisin. No.01
TITULAR : Q.B.P. Ana Mara Ramrez O.
COPIA CONTROLADA No.

MCM-01

1. INTRODUCCIN.
Uno de los propsitos del laboratorio de Microbiologa Diagnstica, es la obtencin
de resultados de alta calidad por medio del uso de mediciones precisas, confiables y
adecuadas para tal fn.
El xito de la calidad debe estar bien fundamentada culminando con la generacin de
resultados confiables teniendo bin establecido un programa de control de calidad.
En los ltimos aos el Laboratorio de Microbiologa cuenta con grandes avances
tecnolgicos en aislamientos, identificacin, metodologa estandarizada que permite
obtener datos reproducibles como lo es identificacin bacteriana por tcnicas
miniaturizadas, lectores automticos de pruebas bioqumicas, metodologas para la
cuantificacin de microorganismos en lquidos corporales, aguas, alimentos y medio
ambiente, as como pruebas de sensibilidad deteccin de inhibidores bacterianos en
alimentos.
Este crecimiento de nivel tecnolgico ha repercutido en la calidad de los diversos
anlisis, los cuales han pasado del simple diagnstico clnico a una ayuda indiscutible
para conformar la etiologa de una infeccin, evaluacin de la calidad microbiolgica y
sanitaria de un producto un proceso microbiolgico, siendo una gua para establecer
un diagnstico una evaluacin de calidad de un producto condiciones sanitarias de
un establecimiento donde se producen alimentos.
La exactitud y precisin de los resultados exige ms al Laboratorio en cuanto a la
seguridad de sus dictmenes, obligndolo que est a la altura de sus
responsabilidades y esta seguridad solo puede existir si el Laboratorio desarrolla sus
funciones bajo un meditado, laborioso y peridico control de calidad en todos sus
aspectos, tanto tcnicos como administrativo. Se delega la autoridad, ms nunca la
responsabilidad.
2. OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACIN.
El objetivo del presente manual es describir de manera ordenada todos los
procedimientos de deben llevarse a cabo en un Laboratorio de Microbiologa y su
aplicacin en el rea clnica, as como en el rea de aguas y alimentos.
3. REFERENCIAS:
Bacteriological Analytical Manual, 1998. Food and Drug Administration, 8. Edicin,
Revisin A. AOAC International, Gaithersburg, MD 20877 U.S.A.

15/01/ 2004
1997, NMX-17025 e ISO-9001-2000
Enero-2005
Revisin. No.01

MCM-01

Murray P. R., Baron E.J., Pfaller M.A. 1999 Manual of Clinical Microbiology. 7a. Ed.,
American Society for Microbiology, ASM Press, Washington, D. C.
Norma Oficial Mexicana NOM-065-SSA-1993, Que establece las especificaciones
sanitarias de los medios de cultivo. Generalidades.
4. DEFINICIONES.
5. PREPARACIN Y ESTERILIZACIN DE MATERIAL.

5.1 Material.
5.1.1 El material utilizado en el rea de microbiologa est comprendido
por:
a) Material de vidrio: Matraces erlenmeyer, matraces aforados, buretas,
pipetas de vidrio volmenes 10, 5 y 1 ml, vasos de precipitados, tubos de
ensaye 20x24, 16x150, 13x100, 12x75 y
campanas de fermentacin y cajas de petri de vidrio desechables.
b) Papel de envoltura, cinta adhesiva cinta testigo,
Guantes de asbesto, guantes de latex desechables tijeras, regla, etc.
c) Utensilios de cocina como cucharas, tenedores y cuchillos.

15/01/ 2004
1997, NMX-17025 e ISO-9001-2000
Enero-2005
Revisin. No.01

MCM-01

5.2 Control de Calidad de lavado del material de vidrio.
El material utilizado en la preparacin y envasado de medios de cultivo deber
ser cuidadosamente lavado y enjuagado, ya que los restos de detergente
pueden afectar a las bacterias, as como tambin ocasionar cambios de pH,
color alteraciones en los componentes de los mismos.
5.2.1
Lavado del material de vidrio.

a. El material contaminado deber ser previamente esterilizado para
poder pasar el proceso de lavado.
b. Deber usarse detergente para laboratorio a las concentraciones
indicadas por el fabricante, de acuerdo al grado de suciedad del
material.
c. Se proceder a lavar el material con detergente, utilizando
escobillones adecuados al tamao del recipiente que se est
lavando; para las cajas de Petri se utilizar una esponja suave
para evitar ralladuras.
d. Enjuagar el material tres veces con agua corriente purificada si
se considera que en agua de la red hay alta concentracin de
sales y una vez con agua destilada.
e. Dejar escurrir el material en posicin invertida a temperatura
ambiente secar en el horno 30-60 a 60C
5.2.2. Pruebas para verificar la limpieza del material de vidrio.

a. Llenar el material de vidrio a probar con agua destilada,
vaciarla y ver si se cubre con una capa continua de agua, con
esto se verifica que no se tenga residuos de grasa.
b. La eliminacin del detergente y un enjuague adecuado
comprueba utilizando una solucin al 0.1 % de azul de
Bromotimol, el cual es un indicador de pH 6.0 7.6 que
da un color amarillo en una reaccin cida y azul en una
reaccin alcalina o solucin alcohlica de Rojo de Metilo al 1%,
la cual se utiliza igual que la anterior y vira tambin a amarillo
cuando hay residuos de detergente.

15/01/ 2004
1997, NMX-17025 e ISO-9001-2000
Enero-2005
Revisin. No.01

MCM-01

a. Preparacin de solucin indicadora Azul de Bromotimol al 0.1 %
Reactivos:
Azul de bromotimol
NaOH 0.1 N
Agua destilada
0.1 g
2.0 mL
100 mL
Pulverizar 0.1 g del indicador en un mortero y mezclar con 2 mL

de una solucin de NaOH 0.1 N. La mezcla bin homogeneizada
se disuelve en 100 mL de agua destilada. Conservar en frasco

ambar a temperatura ambiente.
b. Preparacin de solucin alcohlica de rojo de metilo al 1%:
Disolver 0.1 gramos de rojo de metilo en 300 mL de alcohol
etlico (etanol) y adicionar 200 mL de agua destilada.
Procedimiento:
Se colocan 2 a 5 gotas del indicador en el material de vidrio en
Estudio y se hace un testigo positivo con una gota de detergente
Interpretacin:
En el Material bien lavado, el indicador no debe cambiar su color
Original, mientras que en el testigo el indicador cambia a amarillo.
Si en un lote de material, hay resultado positivo, deber rechazarse
Todo el lote de material y volver a realizar el lavado.
5.2.3. Control de calidad de material de vidrio.
- Descartar el material roto, rayado despostillado
- Verificar la limpieza de material
- Verificar la esterilidad del material
5.2.4. Verificacin de esterilidad

15/01/ 2004
1997, NMX-17025 e ISO-9001-2000
Enero-2005
Revisin. No.01

MCM-01

Cajas de petri:
- Tomar al azar el 5 % de las cajas esterilizadas por cada lote
cajas de petri desechables.
- Aadir 20 mL de agar cuenta estandar.
- Incubar a 35C durante 7 das
- Observar presencia ausencia de UFC
- Registrar los resultados en una libreta.
Pipetas:
- Tomar al azar el 5 % de pipetas estriles por cada lote
- Aspirar con cada pipeta un caldo nutritivo como soya tripticasena.
- Verter el contenido en un recipiente estril incubar a 35C durante
14 das.
- Observar si hay no crecimiento de microorganismos y
registrar la informacin en una libreta.
Todo el material de vidrio y utensilios de cocina son envueltos y esterilizados en
autoclave por calor hmedo a 121C por 15 20 en horno a 170C por calor seco 2
horas.
Todo el material de vidrio se reutiliza, esterilizndolo cada vez, lavndolo con
detergente especial para material de laboratorio como Extrn, enjuagndolo con agua
destilada y es preparado nuevamente para su reuso.
6. CONTROL DE AUTOCLAVES
Las autoclaves con previamente lavadas y el material por esterilizar ya preparado se
coloca en canastillas recipientes protectores que eviten que se moje el material y
que solamente les llegue el calor hmedo durante el proceso de esterilizacin.
Se lleva un registro en bitcora con fecha, autoclave utilizada, material en proceso de
esterilizacin, tiempo en que la autoclave llega a 15 libras, tiempo de esterilizacin que
puede ser 15 a 20, dependiendo del tipo de material y tiempo en que la presin baja
a 0 libras. Para verificar si el proceso de esterilizacin es correcto, esto se verifica con
un indicador biolgico que son ampolletas de Sterikon que contienen esporas de
Bacillus stearothermophilus, las cuales se colocan en el centro de la autoclave y
despus son incubadas en horno a 60C por 48 hrs, observndose si ocurre no vire
de violeta a amarillo.

15/01/ 2004
1997, NMX-17025 e ISO-9001-2000
Enero-2005
Revisin. No.01

MCM-01

Cuando el proceso de esterilizacin fu correcto no hay vire lo cual nos indica que
hubo destruccin de las esporas de esta bacteria termoflica. Este procedimiento se
realiza mnimo una vez al mes en las cargas de autoclaves con material limpio y
material sucio, llevndose registro de estos resultados en la bitcora correspondiente.
7. PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO.
Los medios de cultivo utilizados en el aislamiento de microorganismos deben
cumplir con las especificaciones sanitarias segn la Norma Oficial Mexicana NOM065-SSA-1993, Que establece las especificaciones sanitarias de los medios de
cultivo que de manera general se debe seguir el siguiente procedimiento:

15/01/ 2004
1997, NMX-17025 e ISO-9001-2000
Enero-2005
Revisin. No.01

MCM-01

NORMAS GENERALES PARA LA PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO
1. Almacenar los medios de cultivo bin cerrados, protegidos de la luz, en un
lugar fresco y seco, de preferencia a una temperatura menor a 25C y
conservar en refrigeracin los medios que as lo especifiquen.
2. Siempre anotar en el recipiente del medio deshidratado la fecha de recepcin
del mismo en el laboratorio, as como tambin la fecha de apertura para su
primer uso.
3. Leer la etiqueta antes de preparar cualquier medio.
4. Los medios debern ser preparados en cristalera limpia que haya sido
enjuagada con agua destilada desionizada.
5. Nunca llenar los recipientes donde se llevan a ebullicin y/ esterilizacin los
medios, a ms de dos terceras partes de su capacidad.
6. Pesar el medio deshidratado en una balanza verificada. No dejar abierto el
frasco que contiene el medio ms que el tiempo necesario y una vez pesado el
polvo reconstituido con el volumen de agua destilada requerido.
7. Utilizar siempre agua destilada y verificar diariamente su conductividad.
8. Homogeneizar la suspensin y en el caso de los medios que contengan agar
dejar hidratar 10 a 15 minutos.
9. Calentar por un minuto a temperatura de ebullicin los medios slidos,
agitando frecuentemente. Con ello se asegura una completa solubilizacin y
dispersin del agar y del resto de los componentes.
10. El recipiente con el medio, procurar calentarlo sobre una parrilla tela de
asbesto para evitar que tengo contacto directo con el fuego.
11. Los medios de cultivo lquidos por lo general no requieren calentamiento para
su disolucin, despus de reposar el tiempo indicado.
12. Verificar el pH despus de disolver el medio. Dependiendo del medio de
cultivo. Para ajustar el pH se puede emplear NaOH 1N, HCl 1N cido
tartrico.

15/01/ 2004
1997, NMX-17025 e ISO-9001-2000
Enero-2005
Revisin. No.01

MCM-01

13. Vaciar en tubos y esterilizar o esterilizar los medios de cultivo a 121C,
durante15 minutos o seguir las instrucciones para cada medio y vaciar en
placas de Petri estriles, dejar solidificar y verificar su esterilizacin y
funcionalidad con cepas ATCC otras de acuerdo al tipo de medio.
14. Rotular con nmero de Lote (d/m/a) y caducidad.
8. CONTROL DE CALIDAD DE MEDIOS DE CULTIVO:
EVALUACIN DE MEDIOS DE CULTIVO
Para garantizar el uso de los medios de cultivo preparados en el Laboratorio, estos deben
someterse a cuatro tipos de control:
CALIDAD DE AGUA DESTILADA:
El agua es considerada el disolvente universal y es uno de los reactivos ms
frecuentemente usados en el laboratorio clnico, por lo que debe cumplir con ciertos
patrones de calidad para su uso.
Existen diferentes instituciones organismos que clasifican el agua con base a su pureza
en grado Tipo I, II y III y se pueden observar algunas diferencias entre los valores
mximos y mnimos permitidos de una institucin a otra dependiendo del giro de la
misma, por ejemplo Comit Nacional de Estndares para Laboratorios Clnicos de los
Estados Unidos (NCCLS) define algunos valores de calidad de agua con intervalos ms
amplios que la organizacin orientada principalmente a anlisis instrumental como la
Sociedad Americana de Evaluacin de Materiales de Prueba (ASTM) y clasifican segn
las siguientes tablas:
AGUA GRADO REACTIVO
- CAP: college of American Pathologist
-
NCCLS: National Committee for Clinical Laboratory Standards

-
ASTM: American Society for Testing Materials.

-
ACS: American Chemical Society

15/01/ 2004
1997, NMX-17025 e ISO-9001-2000
Enero-2005
Revisin. No.01

MCM-01

(pendientes tablas y cuadro de calidad de agua purificada en pruebas
microbiolgicas)
CONTROL DE ESTERILIDAD:
Una parte proporcional de cada lote preparado (5%), se incuba a 35C por 24 h, para
descartar desarrollo bacteriano y otro 5% se incuba a 25-28C.
Es conveniente incubar por 5 das a 25C para descartar contaminacin por hongos. Si no
hay crecimiento en los grupos testigos, se mantiene el lote en refrigeracin para su uso
(una vez aprobado el control de funcionalidad).
CONTROL DE FUNCIONALIDAD:
El funcionamiento de los medios de cultivo puede variar segn su composicin, modo de
preparacin, etc. Por consiguiente, se hace necesario evaluar sistemticamente. Los
mtodos ms empleados:
Utillizar cepas ATCC recomendadas por el fabricante y evaluar de acuerdo a los
resultados con las diversas cepas.
Mtodo de Miles-Misra-Irwin :siembra en espiral
Mtodo de Mossel y cols: Tcnica ecomtrica que consiste en sembrar 10 ul de una
suspensin de un cultivo de 18 h en 10 mL de caldo BHI diluda en 100 ml de solucin
salina estril y mezclada perfectamente.( Revisar mtodo en Manual de Bacteriologa
Diagnstica).
ESQUEMA

15/01/ 2004
1997, NMX-17025 e ISO-9001-2000
Enero-2005
Revisin. No.01

MCM-01

(Pendiente cuadro de ejemplo de medios , cepas testigo, incubacin y resultados

esperados).............
CONTROL DE CADUCIDAD:
Despus de preparar los medios de cultivo en los que se recomienda tengan las placas
un grosor de 4 mm, rotular el nombre del medio, fecha de preparacin, almacenar
protegidos de la luz solar y el calor, conservar en bolsas de plstico en refrigeracin a 48C, los cuales se mantienen alrededor de dos meses.
Los medios de cultivo en tubos con tapn de rosca bien cerrados y a temperatura de
refrigeracin se mantienen hasta 6 meses.
CADUCIDAD DE MEDIOS DE CULTIVO

Cada una de las placas preparadas es preciso rotularlas de forma visible con el nombre
del medio de cultivo y la fecha de su preparacin.
1.__________________________________________________________________
CADUCIDAD
DE
MEDIOS
EN PLACAS,
SEGN
TEMPERATURA
ALMACENAMIENTO Y PROTECCIN.
Medio de Cultivo
En refrigeracin a 4C en bolsa de plstico
Agar Sangre
50 das
Agar Chocolate
60 das
Agar Thayer Martn
60 das
Agar Mueller Hinton
70 das
Agar EMB
70 das

15/01/ 2004
1997, NMX-17025 e ISO-9001-2000
Enero-2005
Revisin. No.01
DE

MCM-01

Agar MacConkey
70 das
Agar Sabouraud
90 das
Agar Manitol Sal
60 das
Agar S-S
50 das
2.- CADUCIDADES DE CALDOS ALMACENADOS EN DISTINTAS CONDICIONES

Medio de Cultivo
Cierre Hermtico en bolsa de

Plstico, Temp. Ambiente
Cierre Hermtico Tapn de rosca
Caldo BHI
2 4 meses
3 6 meses
Caldo Triptosa
2 4 meses
3 - 6 meses
Caldo Mueller Hinton
2 4 meses
3 - 6 meses
Caldo tetrationato
2 4 meses
3 6 meses
Caldo Selenito
2 4 meses
3 - 6 meses
Caldo urea
2 4 meses
3 6 meses

15/01/ 2004
1997, NMX-17025 e ISO-9001-2000
Enero-2005
Revisin. No.01

MCM-01

Agar inclinado TSA
2 4 meses
3 6 meses
Agar Citrato de Simmons
2 4 meses
3 6 meses
Agar hierro lisina
2 4 meses
3 6 meses
Agar TSI
2 4 meses
3 6 meses
Agar Kligler
2 - 4 meses
Agar MIO
2- 4 meses
3 6 meses
_____________________________________________________________________
(Pendiente Indicadores de pH
9. CONTROL DE CALIDAD DE TINCIONES.
10. CONDICIONES AMBIENTALES
11. TRATAMIENTO IN SITU DE RESIDUOS BIOLGICO INFECCIOSOS.
12. BIBLIOGRAFA.
13. ANEXOS

15/01/ 2004
1997, NMX-17025 e ISO-9001-2000
Enero-2005
Revisin. No.01

Manual de PRC en Calidad en Microb Diagnost

Hochgeladen von

Dokumentinformationen

Originaltitel

Copyright

Verfügbare Formate

Dieses Dokument teilen

Dokument teilen oder einbetten

Freigabeoptionen

Stufen Sie dieses Dokument als nützlich ein?

Sind diese Inhalte unangemessen?

Copyright:

Verfügbare Formate

Manual de PRC en Calidad en Microb Diagnost

Hochgeladen von

Copyright:

Verfügbare Formate

LABORATORIO DE ANLISIS ESPECIALES

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE ASEGURAMIENTO DE CALIDAD

Fecha de Emisin MOTIVO: Cumplir con la NOM-166-SSA1- FECHA MODIF.

COPIA CONTROLADA No.

LABORATORIO DE ANLISIS ESPECIALES

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE ASEGURAMIENTO DE CALIDAD

Fecha de Emisin MOTIVO: Cumplir con la NOM-166-SSA1- FECHA MODIF.

COPIA CONTROLADA No.

LABORATORIO DE ANLISIS ESPECIALES

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE ASEGURAMIENTO DE CALIDAD

5. PREPARACIN Y ESTERILIZACIN DE MATERIAL.

Fecha de Emisin MOTIVO: Cumplir con la NOM-166-SSA1- FECHA MODIF.

COPIA CONTROLADA No.

LABORATORIO DE ANLISIS ESPECIALES

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE ASEGURAMIENTO DE CALIDAD

Lavado del material de vidrio.

5.2.2. Pruebas para verificar la limpieza del material de vidrio.

Fecha de Emisin MOTIVO: Cumplir con la NOM-166-SSA1- FECHA MODIF.

COPIA CONTROLADA No.

LABORATORIO DE ANLISIS ESPECIALES

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE ASEGURAMIENTO DE CALIDAD

Pulverizar 0.1 g del indicador en un mortero y mezclar con 2 mL

se disuelve en 100 mL de agua destilada. Conservar en frasco

Fecha de Emisin MOTIVO: Cumplir con la NOM-166-SSA1- FECHA MODIF.

COPIA CONTROLADA No.

LABORATORIO DE ANLISIS ESPECIALES

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE ASEGURAMIENTO DE CALIDAD

Fecha de Emisin MOTIVO: Cumplir con la NOM-166-SSA1- FECHA MODIF.

COPIA CONTROLADA No.

LABORATORIO DE ANLISIS ESPECIALES

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE ASEGURAMIENTO DE CALIDAD

Fecha de Emisin MOTIVO: Cumplir con la NOM-166-SSA1- FECHA MODIF.

COPIA CONTROLADA No.

LABORATORIO DE ANLISIS ESPECIALES

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE ASEGURAMIENTO DE CALIDAD

Fecha de Emisin MOTIVO: Cumplir con la NOM-166-SSA1- FECHA MODIF.

COPIA CONTROLADA No.

LABORATORIO DE ANLISIS ESPECIALES

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE ASEGURAMIENTO DE CALIDAD

NCCLS: National Committee for Clinical Laboratory Standards

ASTM: American Society for Testing Materials.

ACS: American Chemical Society

Fecha de Emisin MOTIVO: Cumplir con la NOM-166-SSA1- FECHA MODIF.

COPIA CONTROLADA No.

LABORATORIO DE ANLISIS ESPECIALES

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE ASEGURAMIENTO DE CALIDAD

Fecha de Emisin MOTIVO: Cumplir con la NOM-166-SSA1- FECHA MODIF.

COPIA CONTROLADA No.

LABORATORIO DE ANLISIS ESPECIALES

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE ASEGURAMIENTO DE CALIDAD

(Pendiente cuadro de ejemplo de medios , cepas testigo, incubacin y resultados

CADUCIDAD DE MEDIOS DE CULTIVO

En refrigeracin a 4C en bolsa de plstico

Agar Thayer Martn

Agar Mueller Hinton

Fecha de Emisin MOTIVO: Cumplir con la NOM-166-SSA1- FECHA MODIF.

COPIA CONTROLADA No.

LABORATORIO DE ANLISIS ESPECIALES

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE ASEGURAMIENTO DE CALIDAD

Agar Manitol Sal

2.- CADUCIDADES DE CALDOS ALMACENADOS EN DISTINTAS CONDICIONES

Cierre Hermtico en bolsa de

Cierre Hermtico Tapn de rosca