16100179

UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR
FACULTAD DE QUMICA Y FARMACIA
VALIDACIN DEL MTODO ANALTICO POR CROMATOGRAFA

LQUIDA DE ALTA PRESIN (HPLC) DE UN JARABE MULTIVITAMINICO
CON CIPROHEPTADINA
TRABAJO DE GRADUACION PRESENTADO POR

MARA ELENA RIVAS ALAS
SILVIA ADALIA RODRGUEZ ROMERO
PARA OPTAR AL GRADO DE

LICENCIATURA EN QUMICA Y FARMACIA
OCTUBRE DE 2007
SAN SALVADOR, EL SALVADOR, CENTRO AMERICA
UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR
Rectora
Dra. Maria Isabel Rodrguez
Secretaria General
Licda. Alicia Margarita Rivas de Recinos
Facultad de Qumica y Farmacia
Decano
Lic. Salvador Castillo Arvalo
Secretaria
MSc. Miriam del Carmen Ramos de Aguilar
COMIT DE TRABAJO DE GRADUACION
Coordinadora General
Licda. Mara Concepcin Odette Rauda Acevedo
Asesora de Area de Control de Calidad de Productos Farmacuticos,

Cosmticos y Veterinarios:
MSc. Roco Ruano de Sandoval
Asesora de Area de Control de Calidad de Productos Farmacuticos,

Cosmticos y Veterinarios:
Licda. Zenia Ivonne Arvalo de Mrquez
Docente Directora
Licda. Berta Ernestina Contreras Palma
Docente Director
Lic. Eliseo Ernesto Ayala Meja
AGRADECIMIENTOS
Agradecemos de manera especial el apoyo del Laboratorio Farmacutico

Nacional, ya que nos brindo la oportunidad de realizar nuestra investigacin
poniendo a nuestra disposicin sus instalaciones y equipos, todo el soporte
tcnico necesario, la formacin y capacitacion profesional para la realizacin
del trabajo de investigacin.
Agradecemos profundamente a nuestros queridos docentes directores Licda.

Berta E. Contreras y Lic. Eliseo E. Ayala por tomar este reto y seguir hasta el
final con nosotras, por compartir sus conocimientos, su experiencia, por el
tiempo dedicado a la realizacion de este trabajo y sobre todo por la amistad que
ha surguido de trabajar en conjunto ya que sin su ayuda no hubiera sido posible
la realizacin de este proyecto.
Mara Elena y Silvia Adalia
DEDICATORIA
A Diosito quien es nuestro soporte, por darnos vida, fuerza, fe, por no dejarnos
caer, ayudarnos en todo momento , por tu luz y gua, por no desampararnos en
las adversidades, por tus respuestas a las oraciones, por haber llegado hasta
donde estamos, por las promesas cumplidas y sobre todo por el inmenso amor
que nos brindas.
A nuestros amados padres quienes son nuestra fortaleza, nuestros guas,
gracias por su amor y ejemplo que sin su ayuda este sueo no se hubiera
realizado, este es nuestro regalo a sus esfuerzos, a su dedicacin, al amor que
da a da nos brindan, papi mami lo logramos.
A nuestras familias y amigos por creer en nosotras, y siempre ayudarnos a salir
adelante, por estar con nosotras en las buenas y en las malas, por compartir
nuestras tristezas y alegrias, por el inmenso cario demostrado a pesar de las
circunstancias y a pesar de nuestra ausencia siguen creyendo en nosotras.
A mi amiga y compaera de tesis por todos los buenos y malos momentos que
compartimos, por tomar la decisin conmigo y llegar hasta este momento, por la
paciencia, cario y sobre todo la amistad que surgui del compartir da a da
todas nuestras penas y alegras.
Mara Elena y Silvia Adalia
INDICE
Resumen
Pg
Capitulo I
1.0 Introduccin
xix
Capitulo II
2.0 Objetivos
2.1 Objetivo General
22
2.2 Objetivos Especificos
22
Capitulo III
3.0 Marco Terico
24
3.1 Validacin de Metodologa Analtica
25
3.2 Tipos de Validacin
26
3.3 Parmetros para la Validacin de Mtodos Analticos
27
3.4 Generalidades de Cromatografa Lquida de Alta Presin
31
3.5 Generalidades de las Vitaminas
40
3.6 Generalidades de Ciproheptadina
43
Capitulo IV
4.0 Diseo Metodolgico
47
4.1 Tipo de estudio
47
4.2 Investigacin bibliogrfica
47
4.3 Investigacin de campo
47
4.4 Protocolo de Validacin Vitaminas
49
4.5 Protocolo de Validacin Ciproheptadina HCl
93
Capitulo V
5.0 Resultados y Analisis de Resultados
120
5.1 Anlisis de Resultados
140
Capitulo VI
6.0 Conclusiones
145
Capitulo VII
7.0 Recomendaciones
Bibliografa
Glosario
Anexos
148
INDICE DE ANEXOS
N1 Cuadros de Resultados
N2 Figuras de Graficas
N3 <1225>Validacion de Metodos Farmacopeicos
INDICE DE CUADRO
CUADRO N
1. Precisin del sistema para Tiamina HCl
2. Adecuabilidad del sistema para Tiamina HCl
3. Resolucin cromatogrfica para Tiamina HCl
4. Linealidad del sistema para Tiamina HCl
5. Exactitud para Tiamina HCl
6. Repetibilidad para Tiamina HCl
7. Linealidad del mtodo para Tiamina HCl
8. Porcentaje de recobro para Tiamina HCl
9. Precisin del mtodo para Tiamina HCl (da 1)
10. Precisin del mtodo para Tiamina HCl (da 2)
11. Estabilidad analitica para Tiamina HCl
12. Robustez para Tiamina HCl
13. Tolerancia para Tiamina HCl
14. Precisin del sistema para Riboflavina
15. Adecuabilidad del sistema para Riboflavina
16. Resolucin cromatogrfica para Riboflavina
17. Linealidad del sistema para Riboflavina
18. Exactitud para Riboflavina
19. Repetibilidad para Riboflavina
20. Linealidad del mtodo para Riboflavina
21. Porcentaje de recobro para Riboflavina

22. Precisin del mtodo para Riboflavina (da 1)
23. Precisin del mtodo para Riboflavina (da 2)
24. Estabilidad analitica para Riboflavina
25. Robustez para Riboflavina
26. Tolerancia para Riboflavina
27. Precisin del sistema para Nicotinamida
28. Adecuabilidad del sistema para Nicotinamida
29. Resolucin cromatogrfica para Nicotinamida
30. Linealidad del sistema para Nicotinamida
31. Exactitud para Nicotinamida
32. Repetibilidad para Nicotinamida
33. Linealidad del mtodo para Nicotinamida
34. Porcentaje de recobro para Nicotinamida
35. Precisin del mtodo para Nicotinamida (da 1)
36. Precisin del mtodo para Nicotinamida (da 2)
37. Estabilidad analitica para Nicotinamida
38. Robustez para Nicotinamida
39. Tolerancia para Nicotinamida
40. Lmite de deteccin para Nicotinamida
41. Lmite de cuantificacin para Nicotinamida
42. Precisin del sistema para Piridoxina HCl
43. Adecuabilidad del sistema para Piridoxina HCl

44. Resolucin cromatogrfica para Piridoxina HCl
45. Linealidad del sistema para Piridoxina HCl
46. Exactitud para Piridoxina HCl
47. Repetibilidad para Piridoxina HCl
48. Linealidad del mtodo para Piridoxina HCl
49. Porcentaje de recobro para Piridoxina HCl
50. Precisin del mtodo para Piridoxina HCl (da 1)
51. Precisin del mtodo para Piridoxina HCl (da 2)
52. Estabilidad analitica para Piridoxina HCl
53. Robustez para Piridoxina HCl
54. Tolerancia para Piridoxina HCl
55. Precisin del sistema para Ciproheptadina HCl
56. Adecuabilidad del sistema para Ciproheptadina HCl
57. Resolucin cromatogrfica para Ciproheptadina HCl
58. Linealidad del sistema para Ciproheptadina HCl
59. Exactitud para Ciproheptadina HCl
60. Repetibilidad para Ciproheptadina HCl
61. Linealidad del mtodo para Ciproheptadina HCl
62. Porcentaje de recobro para Ciproheptadina HCl
63. Precisin del mtodo para Ciproheptadina HCl (da 1)
64. Precisin del mtodo para Ciproheptadina HCl (da 2)
65. Estabilidad analitica para Ciproheptadina HCl

66. Robustez para Ciproheptadina HCl
67. Tolerancia para Ciproheptadina HCl
68. Lmite de deteeccin para Ciproheptadina HCl
69. Lmite de cuantificacin para Ciproheptadina HCl
INDICE DE FIGURAS
FIGURA
N1 Grfica linealidad del sistema para Tiamina HCl
N2 Grfica linealidad del mtodo para Tiamina HCl
N3 Grfica linealidad del sistema para Riboflavina
N4 Grfica linealidad del mtodo para Riboflavina
N5 Grfica linealidad del sistema para Nicotinamida
N6 Grfica linealidad del mtodo para Nicotinamida
N7 Grfica linealidad del sistema para Piridoxina HCl
N8 Grfica linealidad del mtodo para Piridoxina HCl
N9 Grfica linealidad del sistema para Ciproheptadina HCl
N10 Grfica linealidad del mtodo para Ciproheptadina HCl
ABREVIATURAS
a
= Ordenada en el origen
= Valor de la pendiente
CPH = Ciproheptadina
CV
= Coeficiente de variacin
= Cochran
= Altura de pico
HPLC= Cromatografa Liquida de Alta Presin

K
= Factor de capacidad
Ka
= Constante de distribucin del soluto A
= Longitud del empaque de la columna
LC
= Limite de Cuantificacin
LD
= Limite de Deteccin
= Molar
mAU = Milivoltios
mg
= Miligramos
mL
= Mililitros
mM
= Milimoles
= Nmero de eventos
= Nmero de platos tericos
psi
Unidades de presin
Coeficiente de correlacin
= Resolucin
r2
= Coeficiente de determinacin
RS
= Resolucin cromatogrfica
RSD = Desviacin estndar relativa

RTCA= Reglamento Tcnico Centro Americano
S
= Desviacin estndar
= Factor de cola
Tr
= Tiempo de retencin
VIT
= Vitaminas
Vm
= Volumen del soluto en la fase mvil
VPT = Validacin de producto terminado

Vs
= Volumen del soluto en la fase estacionaria
= Ancho de pico
= rea
= Media aritmtica
Factor selectividad
Microgramos
000
= Nmero correlativo del protocolo
RESUMEN
En el presente trabajo de graduacin se ha Validado el Mtodo Analtico por

Cromatografa Lquida de Alta Presin (HPLC) para la cuantificacin de un
Jarabe Multivitaminico con Ciproheptadina HCl, cuantificando 4 de las
Vitaminas que forman parte del Complejo B las cuales son: Vitamina B 1
(Tiamina Clorhidrato), Vitamina B2 (Riboflavina), Vitamina B3 (Nicotinamida),
Vitamina B6 (Piridoxina Clorhidrato) y el Estimulante del Apetito Ciproheptadina
HCl. Dicho jarabe es fabricado en un Laboratorio Farmacetico Nacional, la
validacin se realiz en un perodo de 2 meses (Octubre - Noviembre),
utilizando un Cromatgrafo Lquido de Alta Presin (HPLC) marca MERCK
Hitachi LaChrom Elite con
Detector
Arreglo de Diodos, dentro del
Departamento de Control de Calidad. Se evaluaron 12 parmetros de

desempeo por ser un mtodo desarrollado y no oficial, los cuales fueron
Precisin del Sistema, Adecuabilidad del Sistema, Linealidad del Sistema,
Exactitud, Repetibilidad del Mtodo, Linealidad del Mtodo, Precisin del
Mtodo, Estabilidad Analtica de la Muestra, Lmite de Deteccin, Lmite de
Cuantificacin, Robustez y Tolerancia, con estos parmetros se demostr que
la tcnica analtica es confiable de acuerdo al
estudio estadstico de
los
resultados obtenidos en la parte experimental para la cuantificacin de los

activos en estudio. La metodologa analtica cumple con los criterios de
aceptacin para todos los parmetros evaluados a excepcin de la robustez y
tolerancia con los cambios establecidos en el protocolo esto no implica que el

mtodo no sea robusto y tolerante con otro tipo de variaciones.
La validacin de mtodos analticos es parte fundamental del desarrollo de una

formulacin y de la tcnica de Anlisis en el control de la calidad de una forma
farmacutica, ya que es durante esta secuencia de pruebas y anlisis, donde el
farmacutico descubre si la metodologa analtica cumple con el propsito para
lo cual fue diseadas segn las exigencias actuales con respecto a la aplicacin
RTCA 11.03.39.06 Productos farmacuticos. Validacin de mtodos analticos
para la evaluacin de la calidad de los medicamentos, publicado en el Diario
Oficial el 12 de enero de 2007, se refieren a los parmetros de desempeos de
procedimientos analticos fsico qumicos, entre ellos la categora I de principios
activos, donde se especifica los parmetros de desempeo que aplica para la
validacin los cuales son: exactitud, especificidad, linealidad, intervalo de
confianza. De acuerdo al reglamento, la validacin realizada se cumple por lo
que el mtodo analtico utilizado para la cuantificacin de Jarabe Multivitaminico
con Ciproheptadina HCl satisface los requisitos para la aplicacin analtica
deseada; es decir cumple con el propsito para el cual fue diseado.
CAPITULO I
INTRODUCCION
xix
1.0 INTRODUCCION
En la actualidad, los Laboratorios Farmacuticos Nacionales deben cumplir con
normas que incluyen una serie de procedimientos para la evaluacin de los
niveles de calidad, por lo tanto, se necesita operar bajo un sistema de garanta
de la calidad, que incluye una extensa documentacin de las actividades para la
produccin de mdicamentos de alta calidad que van a satisfacer las
necesidades para lo cual se han elaborado, por ello es importante un Control
de la Calidad en los medicamentos.
En esta investigacin se realiz la Validacin del Mtodo Analtico de
Cuantificacin para un Jarabe Multivitamico con Estimulante del Apetito a base
de Ciproheptadina HCl, utilizando como Mtodo Analtico la Cromatografa
Lquida de Alta Presin (HPLC). La validacin incluye los parmetros de
desempeo y criterios de aceptacin para demostrar que el Mtodo Analtico
cumple con el propsito para el cual fue diseado, el cual es cuantificar los
principios activos del Jarabe Multivitaminico con Estimulante del apetito.
Al inicio de los aos 70s, los incidentes de contaminacin en parenterales de
gran volumen, estimul la creacin regulaciones adicionales en Estados Unidos
y en otros lugares, debido a esto se da inicio a la Validacin; en los aos 80s la
Validacin de mtodos analiticos se realizaba en cada pas de acuerdo a sus
regulaciones internas. Conforme el mundo se ha ido globalizado, dichos
requerimientos se han ido armonizando entre s, de tal forma, que se favorezca
el
intercambio
comercial;
existe
hoy
en
da
la
International
xx
Conference on Harmonisation (ICH), que ha emitido una serie
de guas
internacionales entre las que se encuentran guas para la Validacin de los

Mtodos Analticos, la Q2A y la Q2B. Anque para la Industria Farmacutica la
gua de anlisis es la Farmacopea de los Estados Unidos (United States
Pharmacopoeia, USP), se hace tambien uso de libros no Oficiales que ofrecen
metodologas analticas alternas.
El profesional farmacutico es el responsable de los procesos farmacuticos y

por lo tanto de la calidad de stos (materia prima, producto intermedio, producto
a granel y producto terminado). El objetivo final de un dictamen de calidad, es la
liberacin o no de un producto en base a las especificaciones previamente
establecidas, que estn dadas por los resultados obtenidos al aplicar los
mtodos analticos, si estos no son farmacopicos y no estn validados, se
corre el riesgo de ser una decisin errnea y afecta al usuario del producto y
por ende a la misma empresa.
La finalidad de esta investigacin es la Validacin del Mtodo Analtico para la

cuantificacin del Jarabe Multivitaminico con Estimulante del Apetito; y el
cumplimiento de las exigencias de calidad de los medicamentos elaborados en
un Laboratorio Farmacutico Nacional.
CAPITULO II
OBJETIVOS
2.0 OBJETIVOS
2.1 OBJETIVO GENERAL
Validar el Mtodo Analtico por Cromatografa Lquida de Alta

Presin (HPLC) de un Jarabe Multivitaminico con Ciproheptadina.
2.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS
2.2.1 Desarrollar dos protocolos para la Validacin del Mtodo Analtico,

uno para la cuantificacin de Vitaminas y otro para Ciproheptadina
en un Jarabe Multivitamnico con Estimulante del Apetito por medio
de Cromatografa Lquida de Alta Presin (HPLC).
2.2.2 Cuantificar cuatro de las Vitaminas del complejo B: Vitamina B1

(Tiamina Clorhidrato), Vitamina B2 (Riboflavina), Vitamina B3
(Nicotinamida), Vitamina B6 (Piridoxina Clorhidrato).
2.2.3 Cuantificar la Ciproheptadina HCl por medio de Cromatografa
Lquida de Alta Presin (HPLC).
2.2.4 Establecer
una
evidencia
documentada
que
demuestre
el
desempeo del mtodo analtico de cuantificacin, si es factible

para
la
obtencin
de
resultados
demostrados estadsticamente.
reproducibles,
confiables
CAPITULO III
MARCO TEORICO
24
3.0 MARCO TERICO
Un Mtodo Analtico se define como la descripcin de la secuencias de

actividades, recursos materiales y parmetros establecidos que se deben
cumplir, para llevar a cabo el anlisis de un componente especfico de la
muestra. Como todo proceso de medicin este debe ser confiable para ser
utilizado con un propsito definido. La validacin de mtodos analticos es el
proceso por medio del cual se demuestra por estudios de laboratorios, que la
capacidad del mtodo satisface los requisitos para la aplicacin analtica
deseada; es decir cumple con su propsito.(5)
Los mtodos analticos estn definidos como un sistema crtico en el
aseguramiento de la calidad en una empresa farmacutica ya que impacta de
manera directa en la calidad de anlisis del producto.(3)
Los Laboratorios Farmacuticos deben cumplir con la Garanta de Calidad que
es la suma total de todas las actividades organizadas, que se adoptan con el
objeto de garantizar que los productos farmacuticos, posean la calidad
requerida para el uso al que estn destinados.
Para alcanzar la Garanta de Calidad es necesario el cumplimiento de las

Buenas Prcticas de Manufactura (BPM) que son un conjunto de normas y
procedimientos relacionados entre s, destinados a garantizar que los productos
25
tengan y mantengan la Identidad, Pureza, Potencia e Inocuidad requerida

dentro de su perodo de vida til. (9)
Las Buenas Prcticas de Laboratorio (BPL) son normas, directrices que
describen el entorno mnimo para la realizacin de los anlisis ,(9) puede decirse
que adems son sistemas y condiciones de trabajo bajo las cuales los anlisis
se planifican, realizan, controlan, registran y se presentan. Cumpliendo estas
normas se pretenden proporcionar la Calidad y Validez de los datos de anlisis.
3.1 Validacin de Metodologa Analtica
La Validacin de un procedimiento de medida establece, mediante anlisis

sistemticos de laboratorio, que las caractersticas de dicho procedimiento
cumplen las especificaciones relativas al uso previsto. El proceso de Validacin
permite el conocimiento de las caractersticas de funcionamiento del mtodo y
proporciona un alto grado de confianza en el mismo y en los resultados
obtenidos al aplicarlo. (3)
La Validacin analtica, consiste en el establecimiento de una evidencia
documentada que demuestre con alto grado de probabilidad, que el mtodo es
lo suficientemente fiable para producir el resultado previsto dentro de los
intervalos definidos. (3)
26
3.2 Tipos de Validacin
- Validacin Retrospectiva: es el establecimiento de evidencia documentada

de que un sistema hace lo que se pretende que debe hacer en base a la
revisin y anlisis de informacin histrica.(5)
- Validacin Prospectiva: es el establecimiento de la evidencia documentada
de que un sistema hace lo que se pretende que deben hacer en relacin a un
protocolo previamente planeado.(5)
- Validacin Concurrente: es el estudio que se lleva a cabo para demostrar y
establecer una evidencia documentada de que un proceso hace lo que esta
previsto basado en resultados obtenidos paralelamente durante la distribucin
del producto que involucra al proceso en cuestin.(5)
- Validacin Esbelta: estudio que se lleva a cabo para demostrar y establecer
una evidencia documentada de que un proceso hace lo que est previsto
basado en resultados que consideran en su estudio la identificacin de atributos
crticos de calidad.(4)
- Revalidacin: la introduccin de un cambio que pueda afectar la idoneidad
del Mtodo Analtico establecido por la Validacin, podr exigir una nueva
Validacin.(4,7)
27
3.3 Parmetros para la Validacin de Mtodos Analticos: las caractersticas

de desempeo del mtodo analtico se expresa en funcin de los siguientes
parmetros analticos:
- Linealidad: del sistema y/o del mtodo es la capacidad de este para asegurar
que los resultados analticos obtenidos directamente o mediante una
transformacin matemtica bien definida, son proporcionales a la concentracin
del analito dentro de un intervalo definido. Este parmetro se expresa mediante
la construccin de una curva de calibracin. La pendiente de la recta de
calibracin debe ser constante en todo el intervalo de aplicacin del
procedimiento de medida.
(2,3)
- Precisin: La precisin de un mtodo analtico es el grado de concordancia

entre los resultados de las pruebas individuales cuando se aplica el
procedimiento
repetidamente
mltiples
muestreos
de
una
muestra
homognea. La precisin de un mtodo analtico habitualmente se expresa por

la Desviacin Estndar (S) o la Desviacin Estndar Relativa (Coeficiente de
Variacin Cv).(3,4)
- Repetibilidad: es la medida de la precisin de un mtodo realizado en las
mismas condiciones, sobre la misma muestra, por un mismo analista, en el
28
mismo laboratorio, en los mismos equipos, reactivos en una misma secuencia

de anlisis realizados, generalmente, en un corto intervalo de tiempo.(4,7)
- Precisin Intermedia: es la medida de la precisin de los resultados de un
mtodo analtico efectuado sobre la misma muestra pero en condiciones
diferentes (diferentes analistas, aparatos, das, etc.)(3,7)
- Exactitud: La exactitud de un mtodo analtico es la cercana de los
resultados de prueba obtenidos con el valor verdadero. Si la diferencia entre el
valor hallado y el valor verdadero es pequea, la exactitud es buena. Una
diferencia grande significa que la exactitud es inadecuada y revela la existencia
de errores determinados que deberan corregirse ya sea durante el anlisis o en
el proceso de preparacin de muestras.(2,3)
- Selectividad - Especificidad: se consideran equivalentes y se definen como
la capacidad del mtodo analtico para medir exacta y especficamente el
analito, sin interferencia de impurezas, productos de degradacin, o excipientes
que puedan estar presentes en la matriz de la muestra.(3,4,7)
- Lmite de Deteccin: es la menor concentracin (o cantidad) de analito que
se puede detectar con razonable certeza por un Mtodo Analtico dado. Es un
parmetro de gran importancia en los ensayos lmites, anlisis de trazas, y de
productos de degradacin del analito o contaminantes externos. Generalmente
se expresa como concentracin mnima de analito en la muestra .(3,4,5)
29
- Lmite de Cuantificacin: es la menor concentracin de analito que puede

ser determinada con Precisin y Exactitud aceptables, bajo las condiciones
experimentales establecidas. Se expresa, al igual que el Lmite de Deteccin
como concentracin de analito. Ambos lmites pueden determinarse mediante la
relacin seal/ ruido. Este procedimiento ser de aplicacin en el caso de
mtodos instrumentales. Algunos autores sealan la variante de anlisis
repetidos con o sin correccin de lectura frente a un blanco en el caso de
mtodos espectroscpicos y cromatogrficos, respectivamente.(3,4,5)
- Tolerancia: tambin conocida como fortaleza, resistencia; es el grado de
reproducibilidad de los resultados de las pruebas obtenidos mediante el anlisis
de las mismas muestras en diversas condiciones.(3,4,5)
- Robustez: la robustez de un mtodo analtico es la medida de su capacidad
para no resultar afectados por variaciones pequeas pero deliberadas.(3,4)
- Sensibilidad: es una medida del factor de respuesta del instrumento como
una funcin de la concentracin. Normalmente se mide como la pendiente de la
curva de calibracin. Como valor se puede reportar el promedio para las curvas
obtenidas en los ensayos de estandarizacin y en la medicin de muestras,
indicando su desviacin estndar.(4,7)
- Criterios de Validacin a evaluar en funcin del tipo del mtodo analtico:
el procedimiento de los ensayos vara de acuerdo a las determinaciones que se
30
quieren evaluar. Considerando esta variedad para los ensayos, es lgico que
diferentes mtodos requieran diferentes esquemas de validacin.
Se deben validar los siguientes procedimientos analticos qumicos, fsicos y

microbiolgicos:
CATEGORIA I: pruebas cuantitativas del contenido del (los) principio(s) activo(s),
constituyen procedimientos qumicos o microbiolgicos que miden el (los)
analito(s) presente(s) en una muestra determinada.(2, 7)
CATEGORA II: pruebas para la determinacin del contenido de impurezas o de
valores lmites para el control de impurezas. Pueden ser pruebas cuantitativas o
una prueba cualitativa para determinar si la impureza est presente en la
muestra por encima o por debajo de un valor lmite especificado. Cualquiera de
los dos pretende reflejar las caractersticas de pureza de la muestra. Los
parmetros de validacin requeridos por una prueba cuantitativa son diferentes
a los de una prueba de cumplimiento de lmite.(2,5)
CATEGORA
III:
pruebas
fsico
qumicas
de
desempeo.
Constituyen
procedimientos de ensayo que miden caractersticas propias del desempeo del

medicamento, por ejemplo la prueba de disolucin. Las caractersticas de la
validacin son diferentes a las de las otras pruebas, aunque las pueden
incluir.(2,7)
CATEGORA IV: pruebas de identificacin. Aquellas que se realizan para
asegurar la identidad de un analito en una muestra. Esto normalmente se
realiza por comparacin de una propiedad de la muestra, contra la de un
33
estndar de referencia, por ejemplo espectros, comportamiento cromatogrfico,

reactividad qumica y pruebas microcristalinas.(4)
3.4 GENERALIDADES DE CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA PRESION

(HPLC)
La cromatografa es una tcnica de separacin de los constituyentes de una
mezcla. Se ha convertido en un mtodo analtico de primer orden para
identificar y cuantificar los compuestos en una fase lquida o gaseosa
homognea. El principio bsico se fundamenta en los equilibrios de distribucin
de los compuestos presentes entre dos fases no miscibles de la que una,
llamada fase estacionaria, que se encuentra inmovilizada en una columna y la
otra, llamada fase mvil, la cual se desplaza sobre la fase estacionaria.
La elusin es el proceso en el cual, se separan los solutos a travs de una fase
estacionaria por el movimiento de una fase mvil a velocidades diferentes lo
que conduce a la separacin de los componentes, utiliza una presin muy
elevada para forzar el paso del disolvente por una columna que contiene
partculas muy finas, consiguiendo as separaciones de gran resolucin.(4)
Deriva de una evolucin de la cromatografa en columna, cuyos resultados, en
trminos de selectividad y de resolucin han mejorado mucho por la
miniaturizacin y la utilizacin de fases estacionarias muy elaboradas .(4,6)
33
De todos los mtodos analticos e instrumentales, la cromatografa es el que

tiene el mayor campo de aplicabilidad y por ello, ocupa una posicin dominante.
La tcnica ha mejorado considerablemente desde sus principios., actualmente
se dispone de cromatgrafos que renen alrededor de una columna optimizada
y miniaturizada (para poder separar microcantidades de muestras) todo un
conjunto de accesorios destinados a asegurar la repetibilidad de las
experiencias sucesivas por el perfecto control de los diferentes parmetros de
separacin. Para anlisis sucesivos de una misma muestra, realizados en
condiciones idnticas a diferentes intervalos, los tiempos de retencin son
reproducibles con variaciones de pocos segundos.(6)
El detector es un dispositivo capaz de convertir una propiedad fsica, no medible
directamente, en una seal elaborable y ofrecernos informacin sobre la
naturaleza y magnitud de la propiedad fsica.
Caractersticas de los detectores:
-Sensibilidad: Medida de la efectividad de un detector para convertir la muestra
en una seal elctrica medible.
-Linealidad: Rango de masa o concentracin de muestra sobre el cual el
detector mantiene una sensibilidad constante sin una desviacin arbitraria.
El significado prctico de la linealidad del detector es el que le indica al analista
la concentracin para la cual el detector es confiable. Hay dos lmites en la
curva de linealidad:
33
-El lmite de concentracin inferior, que es dado por el lmite de deteccin.

-El lmite Superior, definido por un porcentaje de desviacin arbitrario de la
curva de linealidad.
El ruido es cuantificado por el promedio de la amplitud pico-pico de la seal. El
significado de conocer el nivel de ruido de un detector es un factor determinante
en la determinacin de la cantidad mnima detectable y el lmite inferior del
rango lineal.
La separacin efectuada se conserva en un registro individual llamado
cromatograma. Un cromatograma es una imagen que traduce visualmente en
una pantalla o en un papel la evolucin, en funcin del tiempo, de un parmetro
que depende de la concentracin instantnea del soluto a la salida de la
columna. Este grfico se obtiene gracias a un detector situado a la salida de la
columna.(6)
La cromatografia esta basada en el equilibrio de un soluto entre una fase
estacionaria y una fase movil, la resolucin de componentes de una mezcla
depende de 4 factores:
-Selectividad
-Eficiencia
-Tiempo de retencin
-La columna
34
- RESOLUCIN CROMATOGRFICA
Es una medida cuantitativa de su capacidad para separar dos analitos A y B la
resolucin de cada columna queda definida como:
2((tR) B - (tR) A)
RS = -------------------WA +W B
Donde:
Rs = Resolucin Cromatogrfica
tR = tiempo de retencin
W = ancho de pico
Se puede mejorar la resolucin para una fase estacionaria determinada
alargando la columna, lo que incrementa el nmero de platos. Sin embargo, una
consecuencia adversa de aadir platos teoricos es un incremento en el tiempo
necesario para la separacin de los componentes.(6)
- FACTOR DE CAPACIDAD ()
Actualmente, se conoce como factor de retencin (k). El factor de retencin es
un parmetro experimental importante que se utiliza para describir las
velocidades de migracin de los solutos en columnas. Para el soluto A, el factor
de retencin, k se define como: k = ( KA . VS) / VM
35
Donde:
KA = constante de distribucin del soluto A
VS = volumen del soluto en la fase estacionaria
VM =volumen del soluto en la fase mvil. (6)
- EFICIENCIA
La Eficiencia de una columna cromatogrfica depende del ensanchamiento de
banda que ocurre cuando un compuesto pasa a travs de la columna. Para las
mediciones cuantitativas de la eficiencia de las columnas cromatogrficas se
emplean dos trminos: (1) altura del plato H y (2) cantidad de platos o nmero
de platos tericos N. Los dos estn relacionados por la ecuacin: N=L/H
Donde:
N = nmero de platos tericos
H = altura del pico
L = longitud del empaque de la columna (en cm)
La eficiencia de las columnas cromatogrficas aumenta a medida que es mayor
el nmero de platos tericos N y la altura H es menor. Se observan grandes
diferencias en la eficiencia de las columnas como resultado de las diferencias
en el tipo de columna y de las fases: mvil y estacionaria. En trminos de
nmero de platos tericos, la eficiencia puede variar desde unos centmetros
hasta varios cientos de miles; la altura de los platos vara desde unas dcimas
hasta milsimas de centmetro y son comunes incluso mas pequeas.
36
- SELECTIVIDAD
El factor de selectividad () de una columna para dos solutos, A y B, se define
como la relacin de la constante de distribucin del soluto retenido con ms
fuerza, B, y la constante de distribucin del soluto retenido con menos fuerza.
KB
= -----KA
Donde:
= selectividad
KB = constante de distribucin de la especie retenida con ms fuerza, especie
B.
KA = constante de la especie retenida con menos fuerza, es decir, la especie A,
que eluye ms rpido.
De acuerdo con esta definicin, la selectividad () siempre es mayor que la
unidad.
La columna es el corazn de la cromatografa ya que es alli donde se efectua la
separacin, la seleccin del tipo de columna depende de la solubilidad de la
muestra, el peso molecular y la estructura de los compuestos.
La columna es un tubo estrecho que contiene la fase estacionaria a travs de la
cual se hace pasar la fase mvil por presin.
37
- INSTRUMENTACIN
Los componentes bsicos de un sistema para el Cromatografo Lquido de Alta
Presin (HPLC) son:
-Depsitos para la fase mvil (disolventes)
-Sistema de bombeo para proporcionar presin a la fase mvil
-Sistema de inyeccin de muestras
-Columna cromatogrfica
-Termosttos para las columnas
-Detectores
-Sistema para el tratamiento de datos y registrador
DETECTOR
HORNO Y COLUMNA
INTEGRADOR
DE DATOS
INYECTOR
BOMBA
Fig1. Componentes bsicos de un sistema para HPLC.
RESERVORIOS
38
Como algunas de las fases mviles usadas en Cromatografa Lquida de Alta

Presin (HPLC) pueden ser qumicamente activas como cidos, bases o
lquidos corrosivos, es esencial que los componentes del sistema estn
fabricados con materiales resistentes, por lo que la mayora de las partes en
contacto con la fase mvil suelen estar fabricadas con acero inoxidable.
Los disolventes ms usados en Cromatografa Lquida de Alta Presin (HPLC),
son agua, soluciones tampn acuosas (Buffer) y solventes orgnicos como el
metanol. Deben ser espectroscpicamente puros, exentos de partculas slidas
y desgasificados, esto se lleva a cabo con un gas inerte muy poco soluble como
el Helio, utilizando ultra sonidos, en lnea o al vaco.
La muestra despus de ser desgasificada y filtrada por filtro de 45 micras es
inyectada en el sistema por la vlvula de inyeccin. La bomba pasa el eluyente
a travs del loop (tuberia que dosifica la muestra), barriendo la muestra hacia y
a travz de la columna, los componentes se detectan como picos, los picos se
pueden identificar por su tiempo de retensin y se cuantifican por su rea bajo
la curva.
Los recipientes que se utilicen para almacenar la fase mvil tienen que ser
inertes, es decir, el disolvente no deber extraer especie alguna del material
con el que estn construidos. Suelen ser botellas de vidrio y tubos de tefln.
Estn provistos de unos filtros, indispensables para eliminar los gases disueltos
y partculas que pueda contener la fase mvil.
39
Debido a las elevadas presiones de trabajo y al pequeo tamao de las

partculas de la fase estacionaria, se utiliza una bomba que es la encargada de
introducir la fase mvil o disolvente a travs de la columna.
Los sistemas de bombeo debern reunir las siguientes caractersticas:
-
Generar presiones superiores a 6000 psi.
Capaces de cubrir un amplio rango de flujo entre 0,1 y 10 mL/min con una
precisin del 0,5 % y que est libre de pulsaciones.
Construidos con materiales inertes respecto a los disolventes empleados.
El material exterior de las columnas cromatogrficas suele ser de acero y el

material interior puede estar compuesto de una fase inversa, fase normal,
intercambio inico y exclusin por tamao que provee diferente selectividad, la
longitud vara de 5 a 30 cm y un dimetro de 1 a 5 mm. La eficacia de las
columnas aumenta al disminuir el tamao de las partculas de la fase
estacionaria. El tamao tpico de las partculas es de 3-10 g.
Las columnas son de alto costo y se degradan con facilidad por eso se protege
la entrada de la columna con otra ms corta llamada pre-columna la cual retiene
por adsorcin la impurezas de forma irreversible.(7)
No es necesario el control estricto de la temperatura de la columna, pero las
separaciones resultan ms reproducibles cuando la temperatura se mantiene
constante. Los instrumentos comerciales modernos estn equipados con
hornos que regulan la temperatura de la columna.
40
El papel del detector es indicar los momentos de aparicin de los componentes,

y proporcionar indicacin cuantitativa y cualitativa de los mismos. El detector
utilizado depende de la naturaleza de la muestra y deber reunir una serie de
caractersticas como son, tener una sensibilidad elevada, buena estabilidad y
reproducibilidad. Amplio margen de respuesta lineal, insensible a cambios en la
presin y la temperatura. Se pueden clasificar de la forma siguiente:
Detectores ms utilizados es el de absorbancia ultravioleta. Su fundamento es
la espectrofotometra de absorcin de luz visible y ultravioleta de un
componente a una determinada longitud de onda. Los ms potentes son los que
utilizan un montaje de fotodiodos para registrar el espectro completo de cada
soluto que pasa por el detector. Los datos de absorbancia se representan en
funcin de la longitud de onda y del tiempo.(8)
3.5 GENERALIDADES DE LAS VITAMINAS

TIAMINA CLORHIDRATO
Formula Qumica: C12H17ClN4OS HCl
Peso Molcular: 337,27
Nombre Qumico: Thiazolium 3-[(4-amino-2 methyl-5-pyrimidinyl) mehyl]-5- 2hy-droxyethyl) 4 - methyl-, chloride, monohydrochloride.
La solucin oral de Tiamina Clorhidrato contiene no menos de 90,0 por ciento
y no ms de 250,0 por ciento de Tiamina Clorhidrato (C 12H17ClN4OS HCl),
declarada en la etiqueta.(4)
41
Envasado
almacenamiento:
Conservar
en
envases
impermiables,
resistentes a la luz.(4)
Descripcin: polvo cristalino o cristales de color blanco, por lo general con un
color leve caracterstico. Cuando se expone al aire, el producto anhidro adsorbe
rpidamente aproximadamente 4 % de agua. Funde aproximadamente 248C,
con algo de descomposicin.(4)
Solubilidad: facilmente soluble en agua, soluble en glicerina, poco soluble en
alcohol, insoluble en ter y benceno.(4)
La Tiamina Clorhidrato (Vitamina B1), fue el primer miembro que se identifico
del Complejo B, la falta de Tiamina produce un tipo de Neuritis conocida como
Beribery.
Aplicaciones Terapeticas:
el nico uso terapetico establecido de la
Tiamina Clorhidrato es en el tratamiento o la profilaxia de la defiencia de la

misma.(1)
RIVOFLAVINA
Formula Qumica: C17H20N4NaO9 2H2O
La solucin oral de Riboflavina contiene no menos del 90,0 por ciento y no
ms del 150,0 por ciento de Riboflavina (C17H20N4NaO9 2H2O), declarada en la
etiqueta. (4)
Descripcin: polvo cristalino fino de color amarillo a naranja leve.(4)
42
Solubilidad: moderadamente soluble en agua, cuando est seco, la luz difusa

no la afecta, pero cuando est en solucin la luz induce a un fcil deterioro. Es
higroscpico.(4)
Envasado
Almacenamiento:
Conservar en
envases impermeables,
resistentes a la luz.(4)
Aplicacin Teraputica: la nica aplicacin teraputica establecida de la
Rivoflavina es el tratamiento de la enfermedad causada por deficiencia que es
la aparicin de mal de garganta, estomatitis, dermatitis ceborreica de la cara y
anemia.(1)
NICOTINAMIDA
Formula Qumica: C6H6N2O
Peso Molcular: 122.17
La solucin oral de Nicotinamida contiene no menos del 90 por ciento y no
ms del 150 por ciento de Nicotinamida (C6H6N2O), declarada en la etiqueta
Descripcin: polvo cristalino o cristales de color blanco es inodoro o con olor
leve, funde aproximadamente 235C.(4)
Solubilidad: Moderadamente soluble en agua; facilmente soluble en agua
hirviendo, en alcohol en ebullicin y en soluciones de hidroxidos y carbonatos
alcalinos, prcticamente insoluble en eter.(4)
El cido Nicotinico tambin se conoce como Nicotinamida, termino introducido
para
evitar
confusin
entre
la
Vitamina
la
Nicotina
alcaloide.
43
Aplicacin Teraputica: se utiliza en la profilaxia de la D Pelagra y teraputica

de la misma.(1)
PIRIDOXINA CLORHIDRATO
Frmula Qumica: C8H11NO3 HCl
Nombre Qumico: [3,4-Pyridinedimethanol, 5-hydroxy-6-methyl-hydrochloride
Clorhidrato de piridoxol.
La solucin oral de Clorhidrato de Piridoxina contiene no menos del 90,0 por
ciento y no ms de 150,0 por ciento de la cantidad de Clorhidrato de Piridoxina
(C8H11NO3 HCl), declarada en la etiqueta .(4)
Envasado y almacenamiento: conservar en envases resistentes a la luz.(4)
Descripcin: polvo cristalino o cristales de color blanco o prcticamente
blanco. Es estable al aire y es afectado lentamente al exponerse a la luz solar.
Sus soluciones tienen un pH de aproximadamente 3.(4)
Solubilidad: facilmente soluble en agua, poco soluble en alcohol, insoluble en
eter.(4)
Aplicaciones Teraputicas: es escencial en la nutricin de los seres
humanos.(1)
3.6 GENERALIDADES DE LA CIPROHEPTADINA
Nombre Qumico: 4-(5H-Dibenzo[a,d]ciclohepten-5-ilidene)-1-metil piperidina
hidrocloruro sesquihidrato.
Frmula Molcular : C21H21N 11/2H2O.
45
Peso Molcular: 350,9.

La solucin oral de Ciproheptadina Clorhidrato contiene no menos del 90,0 por
ciento y no ms de 110,0 por ciento de la cantidad de Ciproheptadina base
C21H22N declarada en la etiqueta.(4)
Descripcin: polvo cristalino, blanco o ligeramente amarillento, prcticamente
inodoro.
Solubilidad: una parte de Ciproheptadina es soluble en 275 partes de agua, en
35 de etanol, en 26 de cloroformo y en 1,5 de metanol. Prcticamente es
insoluble en ter.(4)
Empaque y almacenamiento: Se debe proteger de la luz y la humedad.
Mecanismo de accin: la Ciproheptadina es un potente antagonista de la

histamina, la acetilcolina y la serotonina. Tambin posee efecto bloqueante de
canales de calcio. Un aumento de la actividad neuronal en el hipotlamo lateral,
sugiere que este frmaco acta directamente a ese nivel, produciendo
probablemente una alteracin de la actividad de la serotonina en el centro del
apetito. En varios estudios, se ha demostrado que el tratamiento con
Ciproheptadina produce un aumento del apetito y una ganancia de peso, tanto
en nios como en adultos. El aumento de peso se produce rpidamente durante
las primeras semanas de tratamiento, pero se pierde al interrumpirlo .(1)
45
Usos clnicos: La Ciproheptadina es un potente antihistamnico y como tal es

muy eficaz para aliviar los signos y sntomas de la urticaria, el prurito, el
angioedema,
la
dermatitis
atpica
la
rinoconjuntivitis
alrgica.
La
Ciproheptadina se ha utilizado ampliamente como estimulante del apetito (a una

dosis de 12 mg/24 h en adultos) en pacientes con distintas enfermedades como
anorexia nerviosa, caquexia neoplsica, tuberculosis, etc.(1)
Efectos adversos y precauciones: el principal efecto adverso de la
Ciproheptadina es la sedacin, aunque tambin puede aparecer excitacin o
inquietud, ms frecuentemente en nios. La ganancia de peso es un efecto
adverso que se suele utilizar con fines teraputicos. Otros efectos adversos son
nuseas, vmitos, ictericia, sequedad de boca, visin borrosa y erupcin
cutnea.(1)
CAPITULO IV
DISEO METODOLOGICO
47
4.0 DISEO METODOLOGICO
4.1 Tipo de Estudio Experimental: se realiz en un Laboratorio Farmacutico

Nacional donde es fabricado el jarabe y el tiempo en el cual se realiz la parte
prctica del proceso de validacin fue en un perodo de cinco das y los anlisis
estadsticos de los resultados fue en 25 das, durante los meses de Octubre a
Noviembre de 2006.
La evaluacin se realiz utilizando blancos, placebos
analticos, estndar fortificado, por pesada individual.

4.2 Investigacin Bibliografca
Para el desarrollo del presente trabajo de graduacin la investigacin
bibliogrfica se llevo a cabo en:
-Biblioteca de la Facultad de Qumica y Farmcia de la Universidad de El
Salvador (UES).
-Biblioteca de la Universidad Salvadorea Alberto Masferrer (USAM).
-Biblioteca del Laboratorio, donde se llevo a cabo la parte experimental.
-Internet.
-Junta de Vigilancia de la Profesin Qumico Farmacutico.
4.3 Investigacin de campo
Universo: Metodologa Analtica de Cuantificacin de un Jarabe Multivitaminico
con Ciproheptadina HCl.
48
Muestra: Cuatro de las Vitaminas del complejo B: Vitamina B 1 (Tiamina

Clorhidrato), Vitamina B2 (Riboflavina), Vitamina B3 (Nicotinamida), Vitamina B6
(Piridoxina Clorhidrato) y Ciproheptadina HCl.
La Validacin fue prospectiva, la cual es requerida, particularmente para

aquellos productos que han sido introducidos en los ltimos 7 u 8 aos, o para
aquellos en los cuales se han hecho cambios en el proceso de fabricacin.(5)
El desarrollo del Programa de Validacin incluy un Protocolo de Validacin,
que consisti en un plan escrito que indica cmo la validacin fu conducida,
incluyendo los parmetros de prueba, las caractersticas del producto, equipo
de anlisis, y puntos de decisin en lo que constituye un resultado de prueba
aceptable (criterios de aceptacin).
Este documento
se revis y autoriz antes de ser ejecutado. Una vez
finalizado el estudio, el protocolo y los resultados sirvieron de base
para
documentar que la Metodologa Analtica se comporta segn lo previsto.

El protocolo fue estructurado en orden secuencial, donde debe seguirse paso a
paso las indicaciones establecidas.
49
4.4 PROTOCOLO DE VALIDACION VITAMINAS

PROTOCOLO DE VALIDACIN
Nombre del Producto :
Multivitamnico con Estimulante del Apetito a base de Ciproheptadina
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTVIT001
Tipo de Validacin: Prospectiva
Nombre del Activo :Tiamina HCl ( Vit. B1 )

5.0 mg / 5mL
Riboflavina (Vit B2)
2.0 mg / 5mL
Nicotinamida ( Vit. B3)
2.0 mg / 5mL
Piridoxina HCl (Vit. B6)
10.0 mg / 5mL
Referencia Bibliogrfica : USP 29 NF 24, Mtodo Adaptado
1-Alcance:
Metodologa Analtica para la cuantificacin de cuatro de las Vitaminas del
Complejo B, en Jarabe Multivitaminico con Estimulante del Apetito a base de
Ciproheptadina, por medio de Cromatografa Lquida de Alta Presin (HPLC),
elaborado en un Laboratorio Farmacutico Nacional.
2-Objetivo:
Demostrar la eficacia del mtodo analtico para la cuantificacin de cuatro de
las Vitaminas del Complejo B las cuales son Tiamina
Clorhidrato (Vit. B1),
Riboflavina (Vit B2), Nicotinamida (Vit. B3), Piridoxina Clorhidrato (Vit. B6) en
Jarabe Multivitaminico con Ciproheptadina HCl.
3-Responsabilidades:
-
Es responsabilidad del Gerente de Control de Calidad la autorizacin del

protocolo para su ejecucin.
Es obligacin del Coordinador de Validacin velar por el cumplimiento del

protocolo de validacin.
Cada analista realizar
los pasos establecidos en este protocolo.
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTVIT001

5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
El analista deber reportar los datos obtenidos por medio de un anlisis

estadstico.
El analista debe preparar las soluciones a utilizar as como tambin la fase

mvil, y asegurarse que las condiciones de operacin
del equipo sean
adecuadas antes de utilizarlo.
4-Caractersticas a evaluar del Jarabe Multivitaminico con Ciproheptadina

HCl:
Liquido transparente color amarillo, con aroma a pia, contenido en un frasco
P.V.C. color mbar.
Se analizar el ensayo de potencia de cada una de las vitaminas en el Jarabe
Multivitaminico:
La solucin oral de Clorhidrato de Tiamina contiene no menos de 90,0 por
ciento y no ms de 250,0 por ciento de Clorhidrato de
Tiamina
(C12H17ClN4OSHCl), declarada en la etiqueta. (4)

La solucin oral de Riboflavina contiene no menos del 90,0 por ciento y no
ms del 150,0 por ciento de Riboflavina (C17H20N4O92H2O), declarada en la
etiqueta.
(4)
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTVIT001

5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
La solucin oral de Nicotinamida contiene no menos del 90,0 por ciento y no

ms del 150,0 por ciento de Nicotinamida (C6H6N2O), declarada en la etiqueta
La solucin oral de Clorhidrato de Piridoxina contiene no menos del 90,0 por
ciento y no ms de 150,0 por ciento de la cantidad de Clorhidrato de Piridoxina
(C8H11NO3 HCl), declarada en la etiqueta. (4)
5-Parmetros a Evaluar
-
Precisin del Sistema
Adecuabilidad del Sistema
Linealidad del Sistema
Exactitud
Reproducibilidad del Mtodo
Linealidad del Mtodo
Precisin del Mtodo
Estabilidad Analtica de la Muestra
Lmite de Deteccin
Lmite de Cuantificacin
Robustez
Tolerancia
52
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTVIT001

5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
6-Recursos a utilizar:
6.1-Equipo General
-
Balanza analtica, Mettler Toledo modelo AX205, Delta Range
Ultra sonido, Branson modelo 221DR-MTH.
Bomba al vaco, General Electric, modelo 5KH330N16HX.
Cabina de extraccin de gases LABCONCO, para manipulacin y

preparacin de reactivos.
6.2-Equipo Analtico
-
pH-metro Digital Orion modelo 520 con electrodo combinado de vidrio, con
censor de temperatura.
Cromatgrafo Lquido de Alta Presin (HPLC) Merck Hitachi LaChrom Elite,

Detector Arreglo de Diodos L-2450, Horno L1300, Automuestreador L2200,
Bomba L2130.
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTVIT001

5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
7- Materiales
7.1-Material General:
-
Vaso de precipitado con capacidad de 30 mL, 100 mL, 500mL,1000 mL,

1500 mL
Probeta de 250 mL y 1000 mL
Micro esptula
Embudo cnico
Papel filtro Whatman # 1
Filtro Membrana de Nylon 0.2 m 47 mm Whatman
Filtro de Nylon Acrodisc 0.2 m
Jeringa con capacidad de 10 mL
Papel glassin
7.2-Material Volumtrico Clase A:

-
Pipetas Volumtricas de 0.5 mL, 1 mL, 2 mL, 5 mL, 10 mL,
Balones volumtricos de 10 mL, 25 mL, 50 mL, 100 mL, 1000 mL, (todo
material de vidrio lavado antes de cada uso con jabn alcalino, agua
desmineralizada)
54
5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
8-Reactivo de Uso General.

-
Agua Desmineralizada
Acido Fosfrico 3 M
Fosfato de sodio monobsico
Metanol HPLC
Agua HPLC
Acetonitrilo HPLC
Heptano Sulfonado de Sodio
9-Estndares de Trabajo
-
Tiamina Clorhidrato (Vit. B1 )
Riboflavina 5-fosfato (Vit. B2)
Nicotinamida (Vit. B3)
Piridoxina Clorhidrato (Vit. B6)
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTVIT001
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTVIT001

5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
10-Preparacin de Soluciones con Estndares

10.1-Solucin Madre I (80%) de Tiamina:
Pesar un equivalente a 128.0 mg de Tiamina Clorhidrato ( Vit. B 1 ), transferir a
un baln de 100.0 mL adicionar 15 mL de solucin solvente y agitar por 10
minutos, aforar con solucin solvente
(descrita posteriormente).
Se Tomar una alcuota de 1.0 mL de la Solucin Madre I (80%) de Tiamina

Clorhidrato y transferir a un baln de 50.0 mL aforar con solucin solvente, esta
solucin tiene una concentracin de 25.6 g/mL de Tiamina Clorhidrato (Vit.
B1).
128.0 mg Vit B1
15 mL solucin solvente
100.0 mL
Aforar con solucin solvente
1.0 mL
50.0 mL (25.6 g/mLVit B1)

aforar con solucin solvente
10.2-Solucin Madre I (80%) de Riboflavina:

Pesar un equivalente a 51.2 mg de Riboflavina, transferir a un baln de 100.0
mL adicionar 15 mL de solucin solvente y agitar por 10 minutos, aforar con
solucin solvente (descrita posteriormente).
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Cdigo:VPTVIT001

5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
Se Tomar una alcuota de 1.0 mL de la Solucin Madre I (80%) de Riboflavina

y transferir a un baln de 50.0 mL aforar con solucin solvente, esta solucin
tiene una concentracin de 10.24 g/mL de Riboflavina (Vit B2).
51.2 mg Vit B2
100.0 mL
1.0mL
50.0 mL (10.24 g/mL Vit. B2)

10.3-Solucin Madre I (80%) de Nicotinamida:

Pesar un equivalente a 51.2 mg de Nicotinamida ( Vit. B 3), transferir a un baln
de 100.0 mL adicionar 15 mL de solucin solvente y agitar por 10 minutos,
aforar con solucin solvente (descrita posteriormente).
Se Tomar una alcuota de 1.0 mL de la Solucin Madre I (80%) de
Nicotinamida y transferir a un baln de 50.0 mL aforar con solucin solvente,
esta solucin tiene una concentracin de 10.24g/mL de Nicotinamida ( Vit. B3).
51.2 mg Vit. B3
100.0 mL
1.0 mL
50.0 mL (10.24 g/mL Vit. B3)

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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
10.4-Solucin Madre I (80%) de Piridoxina Clorhidrato:

Pesar un equivalente a 256.0 mg Piridoxina Clorhidrato (Vit. B 6) transferir a un
baln de 100.0 mL adicionar 15 mL de solucin solvente
y agitar por 10
minutos, aforar con solucin solvente (descrita posteriormente).

Se Tomar una alcuota de 1.0 mL de la Solucin Madre I (80%) de Piridoxina
solucin tiene una concentracin de 51.2 g/mL Piridoxina Clorhidrato (Vit. B6)
256.0 mg Vit. B6
100.0 mL
1.0 mL
50.0 mL (51.2 g/mL Vit. B6)

10.5-Solucin Madre II (90%) de Tiamina Clorhidrato:

Pesar un equivalente a 144.0 mg de Tiamina Clorhidrato (Vit. B 1), transferir a
Se Tomar una alcuota de 1.0 mL de la Solucin Madre II (90%) de Tiamina
solucin tiene una concentracin de 28.8g/mL de Tiamina Clorhidrato (Vit. B1)
58
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTVIT001

5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
144.0 mg Vit B1
100.0 mL
1.0 mL
50.0 mL (28.8 g/mLVit B1)

10.6-Solucin Madre II (90%) de Riboflavina:

Se Tomar una alcuota de 1.0 mL de la Solucin Madre II (90%) de Riboflavina
y transferir a un baln de 50.0 mL aforar con solucin solvente, esta solucin
tiene una concentracin de 11.52 g/mL de Riboflavina (Vit B 2).
57.6 mg Vit B2
100.0 mL
1.0mL
50.0 mL (11.52 g/mL Vit. B2)

10.7-Solucin Madre II (90%) de Nicotinamida:

Pesar un equivalente a 57.6 mg de Nicotinamida ( Vit. B3), transferir a un baln
59
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTVIT001

5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
Se Tomar una alcuota de 1.0 mL de la Solucin Madre II (90%) de

esta solucin tiene una concentracin de 11.52 g/mL de Nicotinamida ( Vit.
B3).
57.6 mg Vit. B3
100.0 mL
1.0 mL
50.0 mL (11.52 g/mL Vit. B3)

10.8-Solucin Madre II (90%) de Piridoxina Clorhidrato:

y agitar por 10

Se Tomar una alcuota de 1.0 mL de la Solucin Madre II (90%) de Piridoxina
solucin tiene una concentracin de 57.6 g/mL Piridoxina Clorhidrato (Vit. B6).
288 mg Vit. B6
100.0 mL
1.0 mL
50.0 mL (57.6 g/mL Vit. B6)

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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
10.9-Solucin Madre III (100%) de Tiamina Clorhidrato:

Pesar un equivalente a 160 mg de Tiamina Clorhidrato ( Vit. B1), transferir a un
minutos, aforar con solucin solvente
y agitar por 10
(descrita posteriormente).
Se Tomar una alcuota de 1.0 mL de la Solucin Madre III (100%) de Tiamina

solucin tiene una concentracin de 32.0 g/mL de Tiamina Clorhidrato ( Vit.
B1)
160 mg Vit B1
100.0 mL
1.0 mL
50.0 mL (32.0 g/mLVit B1)

10.10-Solucin Madre III (100%) de Riboflavina:

Se Tomar una alcuota de 1.0 mL de la Solucin Madre III (100%) de
Riboflavina y transferir a un baln de 50.0 mL aforar con solucin solvente, esta
solucin tiene una concentracin de 12.8 g/mL de Riboflavina (Vit B 2).
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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
64 mg Vit B2
100. 0 mL
1.0mL
50.0 mL (12.8 g/mL Vit. B2)

10.11-Solucin Madre III (100%) de Nicotinamida:

Pesar un equivalente a 64.0 mg de Nicotinamida (Vit. B 3), transferir a un baln
esta solucin tiene una concentracin de 12.8 g/mL de Nicotinamida (Vit. B3).
64 mg Vit. B3
100.0 mL
1.0 mL
50.0 mL (12.8 g/mL Vit. B3)

10.12-Solucin Madre III (100%) de Piridoxina Clorhidrato:

y agitar por 10
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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL

Piridoxina Clorhidrato y transferir a un baln de 50.0 mL aforar con solucin
solvente, esta solucin tiene una concentracin de 64 g/mL
Piridoxina
Clorhidrato (Vit. B6).

320 mg Vit. B6
100.0 mL
1.0 mL
50.0 mL (64 g/mL Vit. B6)

10.13-Solucin Madre IV (120%) de Tiamina Clorhidrato:

Pesar un equivalente a 192.0 mg de Tiamina Clorhidrato (Vit. B 1), transferir a
Se Tomar una alcuota de 1.0 mL de la Solucin Madre III (100%) de Tiamina
solucin tiene una concentracin de 38.4 g/mL de Tiamina Clorhidrato (Vit.
B1).
192.0 mg Vit B1
100.0 mL
1.0 mL
50.0 mL (38.4 g/mLVit B1)

63
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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
10.14-Solucin Madre IV (120%) de Riboflavina:

Se Tomar una alcuota de 1.0 mL de la Solucin Madre IV (120%) de
76.8 mg Vit B2
100.0 mL
1.0mL
50.0 mL (15.36 g/mL Vit. B2)

10.15-Solucin Madre IV (120%) de Nicotinamida:

Pesar un equivalente a 76.8 mg de Nicotinamida ( Vit. B3), transferir a un baln
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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
esta solucin tiene una concentracin de 15.36 g/mL de Nicotinamida ( Vit.

B3).
76.8 mg Vit. B3
100.0 mL
1.0 mL
50.0 mL (15.36 g/mL Vit. B3)

10.16-Solucin Madre IV (120%) de Piridoxina Clorhidrato:

y agitar por 10

solvente, esta solucin tiene una concentracin de 76.8 g/mL
Piridoxina
Clorhidrato (Vit. B6)

384 mg Vit. B6
100.0 mL
1.0 mL
50.0 mL (76.8 g/mL Vit. B6)

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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
10.17-Solucin Madre V (160%) de Tiamina Clorhidrato:

Pesar un equivalente a 51.2 mg de Tiamina Clorhidrato ( Vit. B1 ), transferir a
minutos, aforar con solucin solvente.
Se Tomar una alcuota de 5.0 mL de la Solucin Madre V (160%) de Tiamina
solucin tiene una concentracin de 51.2 g/mL de Tiamina HCl ( Vit. B1 )
51.2 mg Vit B1
100.0 mL
5.0 mL
50.0 mL (51.2 g/mL Vit. B1)
10.18-Solucin Madre V (160%) de Riboflavina:

Se Tomar una alcuota de 2.0 mL de la Solucin Madre V (160%) de
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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
51.2 mg Vit B2
100.0 mL
2.0mL
50.0 mL (20.48 g/mL Vit. B2)

10.19-Solucin Madre V (160%) de Nicotinamida:

Se Tomar una alcuota de 2.0 mL de la Solucin Madre V (160%) de
51.2 mg Vit. B3
100.0 mL
2.0 mL
50.0 mL (20.48 g/mL Vit. B3)

10.20-Solucin Madre V (160%) de Piridoxina Clorhidrato:

y agitar por 10
minutos,
posteriormente).
aforar
con
solucin
solvente
(descrita
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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
Se Tomar una alcuota de 2.0 mL de la Solucin Madre V (160%) de Piridoxina

solucin tiene una concentracin de 102.4 g/mL Piridoxina Clorhidrato (Vit. B6)
256 mg Vit. B6
100.0 mL
2.0 mL
50.0 mL (102.4 g/mL Vit. B6)

10.21-Solucin Madre VI (200%) de Tiamina Clorhidrato:

Pesar un equivalente a 64.0 mg de Tiamina Clorhidrato (Vit B 1), transferir a un
y agitar por 10

Se Tomar una alcuota de 5.0 mL de la Solucin Madre VI (200%) de Tiamina
solucin tiene una concentracin de 64.0 g/mL de Tiamina Clorhidrato (Vit B1).
64.0 mg Vit B1
100.0 mL
5.0 mL
50.0 mL (64.0 g/mL Vit. B1)

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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
10.22-Solucin Madre VI (200%) de Riboflavina:

Se Tomar una alcuota de 2.0 mL de la Solucin Madre VI (200%) de
solucin tiene una concentracin de 25.6 g/mL de Riboflavina (Vit B2).
64.0 mg Vit B2
100.0 mL
2.0mL
50.0 mL (25.6 g/mL Vit. B2)

10.23-Solucin Madre VI (200%) de Nicotinamida:

69
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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
64.0 mg Vit. B3
100.0 mL
2.0 mL
50.0 mL (25.6 g/mL Vit. B3)

10.24-Solucin Madre VI (200%) de Piridoxina Clorhidrato:

y agitar por 10

solvente, esta solucin tiene una concentracin de 128.0 g/mL de Piridoxina
128.0 mg Vit. B6
100.0 mL
5.0 mL
50.0 mL (128.0 g/mL Vit. B6)

10.25-Solucin Madre VII (260%) de Tiamina Clorhidrato:

Pesar un equivalente a 83.2 mg de Tiamina Clorhidrato (Vit. B 1), transferir a un
y agitar por 10
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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
Se Tomar una alcuota de 5.0 mL de la Solucin Madre VII (260%) de Tiamina

solucin tiene una concentracin de 83.2 g/mL de Tiamina Clorhidrato (Vit B1).
83.2 mg Vit B1
100.0 mL
5.0 mL
50.0 mL (83.2 g/mL Vit. B1)

10.26-Solucin Madre VII (260%) de Riboflavina:

Se Tomar una alcuota de 2.0 mL de la Solucin Madre VII (260%) de
solucin tiene una concentracin de 33.28 g/mL de Riboflavina (Vit B2).
66.56 mg Vit B2
100.0 mL

2.0mL
50.0 mL (33.28 g/mL Vit. B2)
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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
10.27-Solucin Madre VII (260%) de Nicotinamida:

66.56 mg Vit. B3
100.0 mL
2.0 mL
50.0 mL (33.28 g/mL Vit. B3)

10.28-Solucin Madre VII (260%) de Piridoxina Clorhidrato:

y agitar por 10

solvente, esta solucin tiene una concentracin de 166.4 g/mL de Piridoxina
72
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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
166.4 mg Vit. B6
100.0 mL
(166.4 g/mL Vit. B6)
5.0 mL
50.0 mL (166.4 g/mL Vit. B6)

Los
estndares de trabajo hay que ajustarlos ya que no se encuentran al
100%, se debe de secar en el desecador un da antes de ser utilizados y

guardarlo en un desecador. Las cantidades de las concentraciones finales se
determinaron en base a la resolucin de los picos de cada una de las
Vitaminas.
10.29 Blanco: consiste en la mezcla de solventes que son utilizados en la
preparacin de las muestras.
10.30 Placebo: contiene todos los componentes de la formulacin del jarabe
incluyendo la Ciproheptadina Clorhidrato sin tomar en cuenta las vitaminas.
10.31 Placebo Analtico: consiste en el placebo ms una cantidad equivalente
al 100% de la concentracin declarada de cada una de las vitaminas.
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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
11-Preparacin de Soluciones
11.1-Buffer Fosfato pH 2.5 10mM:
Pesar exactamente 1.3799 g de fosfato de sodio monobsico, transferir a un
baln volumtrico de 1000 mL , agregar 500 mL de agua destilada, disolver con
agitacin magntica por 10 minutos, hasta disolucin completa, aforar con agua
destilada, transferir esta solucin a un beaker con capacidad de 1500 mL ,
verificar el pH y si es necesario ajustar hasta un pH de 2.5 con acido fosfrico
3M.
11.2-Solucin Solvente Metanol:Buffer Fosfato pH 2.5 10mM (25:75)
Para 1000 mL de la solucin, colocar en un beaker de 1000 mL, adicionar 250
mL de metanol y 750 mL de buffer fosfato pH 2.5 10mM y homogenizar la
solucin con agitacin mecnica.
11.3-Buffer fosfato pH:2.5, 10mM conteniendo Heptano sulfonado de sodio

5 mM:
Pesar exactamente 1.3799 g de fosfato de sodio y 1.01125 g de heptano
sulfonado de sodio , transferir a un baln volumtrico de 1000 mL , adicionar
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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
500 mL de agua grado HPLC , disolver por 10 minutos con agitacin magntica,
aforar con agua grado HPLC, transferir a un beaker de 1500 mL y ajustar el pH
2.5 con gotas de acido fosfrico.
11.4-Fase mvil para la cuantificacin de las vitaminas: Metanol: Buffer
fosfato 10mM pH 2.5 conteniendo Heptano sulfonado de sodio 5 mM.
Para 1000 mL de fase mvil colocar en un beaker de 1000 mL, 250 mL de
Metanol grado HPLC y adicionar 700 mL de buffer fosfato 10 mM contiendo
heptano sulfonado de sodio 5 mM, homogenizar la solucin con agitacin
mecnica, filtrar esta solucin por medio de un filtro Membrana de Nylon 0.2 m
47 mm Whatman, con ayuda de una bomba al vaco, verter la solucin filtrada
en un frasco con capacidad de 1000 mL y colocar en el ultrasonido por 10
minutos para desgasificar.
12- Parmetros a Evaluar

12.1-Precisin del Sistema
Se prepara por separado seis muestras a partir de la Solucin madre III (ver
preparacin de soluciones), tomando seis alcuotas individuales de 1.0 mL de
cada una de las vitaminas y aforar a 50.0 mL, se inyectan por separado.
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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
Con los datos de los resultados obtenidos se calcula la Desviacin Estndar (S)
y el Coeficiente de Variacin (CV) utilizando un programa en Excel con las
siguientes frmulas de:
= Media aritmtica
=y
n
S = Desviacin Estndar
S = n ( y2 )-( y )2
n(n1)
CV = Coeficiente de Variacin
CV = S x 100
n = nmero de eventos
y = reas (las reas se trabajan individualmente para cada una de las
vitaminas).
Criterio de Aceptacin
CV 1.5 %
12.2-Adecuabilidad del Sistema
Se inyectan cinco replicas de la solucin III para la adecuabilidad (ver
preparacin de soluciones descritas anteriormente). Se reporta la respuesta del
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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
analito de cada una de las vitaminas, calculando el Coeficiente de Variacin

(CV).
En los cromatogramas obtenidos se determinar el factor de cola (T), la
resolucin (R) y la precisin de la inyeccin (CV). Los clculos se realizarn en
un programa de Excel con las siguientes frmulas:
Media aritmtica
=y
N
Desviacin Estndar
S=
n ( y2 )-( y )2
n(n1)
Coeficiente de Variacin
CV= S x 100
y =rea de Pico
CV 2 %
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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
12.3-Linealidad del Sistema.

Para el estudio de la linealidad del sistema se usar una curva de calibracin en
un intervalo de concentracin (80-260 % de la cantidad terica declarada para
cada una de las vitaminas), que incluye 5 concentraciones diferentes. El anlisis
se realizar con tres replicas.
Se prepararn tres replicas a siete niveles de concentracin (80%, 90%, 100%,

120% 160%, 200%, 260%)
de la solucin de referencia por pesadas
independientes (ver preparacin de soluciones). Se medir la respuesta

analtica bajo las mismas condiciones de medicin, se reportar la relacin
concentracin vrs. respuesta analtica.
Calcular el valor de la pendiente (b), la ordenada en el origen (a), el coeficiente
de correlacin (r), el coeficiente de determinacin (r2) y el intervalo de confianza
para la pendiente (IC(1)), los clculos se realizarn en un programa de Excel
empleando las siguientes frmulas :
Pendiente
b = n xy - xy
n x2 (x)2
n = nmero de eventos (concentracin respuesta del analito)
78
5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
Ordenada al Origen
a = y b1x
n
r=
xy - xy
n
[(x2 - (x)2 ) (y2) - (y)2]

n
n
Coeficiente de determinacin
r2 =
[n(xy)-((x)(y))2] .
[n(x2)-(x)2(ny2)-(y)2]
Intervalo de confianza para la pendiente

IC(1)= b t0.975,n-2 Sb
Sb1= S y/x =
S y/x =
1
x ( x) 2
n
2
y2 b1 xy + b0 y
n2
r 0.99
r2 0.98
IC(1), no debe incluir el cero.
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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
12.4-Exactitud
Preparar tres muestras seleccionando tres concentraciones dentro del rango de

la linealidad (80%,100%,160%), se analizarn las muestras por tres replicas.
Calcular el media aritmtica (), desviacin estndar (S), coeficiente de
variacin (CV) y Test de Student, los clculos se realizarn en un programa de
Excel empleando las siguientes frmulas:
Media aritmtica
=y
N
Desviacin Estndar
S=
n ( y2 )-( y )2
n(n1)
CV= S x 100
y =rea de Pico
Criterios de aceptacin:
Si el t
exp
<t
tabla
significa que el mtodo analtico tiene la exactitud requerida.
80
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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
12.5- Repetibilidad del Mtodo
Preparar cinco placebos al 100% de lo rotulado de cada una de las vitaminas

(Solucin Madre III), por un mismo analista, a las mismas condiciones usando
como referencia la sustancia empleada a la adicin del placebo analtico.
Se Tomar una alcuota de 1.0 mL de la solucin madre (Solucin Madre III) y

transferir a un baln de 50.0 mL aforar con solvente, inyectar por separado las
muestras.
Placebo analtico
Cantidad
adicionada (mg)
Cantidad
recuperada (mg)
Porcentaje de
recobro

variacin (CV), intervalo de confianza para la medida poblacional IC() del
porcentaje de recobro,
CV < 2%
El Intervalo de Confianza para la media poblacional IC(), debe de incluir el
100%.
81
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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
12.6-Linealidad del Mtodo e Intervalo de confianza.
Para el estudio de este parmetro se har la preparacin de muestras con

diferentes niveles de cada una de las vitaminas, que representan el 80%, 90%,
100%, 120% y 160%, 200% y 260% de la concentracin terica del principio
activo en el jarabe, segn la formulacin propuesta. Simultneamente, se
analizar la linealidad del mtodo y el intervalo. El anlisis se realizar con tres
replicas
de cada Solucin Madre I, II, III, IV, V, IV Y IIV (anteriormente
descritas)
Cantidad adicionada vrs cantidad recuperada r2 0.98
El Intervalo de Confianza para la pendiente IC(1) debe incluir la unidad.
El Intervalo de Confianza para el punto de origen IC( 0), debe incluir el cero.
El IC() debe incluir slo el 100%.
El CV del porcentaje de recuperacin no debe ser mayor al 2% para mtodo
cromatogrficos.
82
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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
12.7-Precisin del mtodo (Precisin Intermedia)
Este estudio se deber realizar a partir de la preparacin de cinco muestras a

diferentes niveles de concentracin, que representan el 80%, 90%, 100%, 120%
y 160 % de la concentracin terica de cada una de las vitaminas. El anlisis se
realizar con tres replicas
de cada Solucin Madre I, II, III, IV y V
(anteriormente descritas) se efectuar las valoraciones por 2 analistas en 2 das

diferentes.
Calcular la media aritmtica (), desviacin estndar (S), coeficiente de
variacin (CV), los clculos se realizarn en un programa de Excel empleando
las siguientes frmulas:
Media aritmtica
=y
N
Desviacin Estndar
S=
n ( y2 )-( y )2
n(n1)
CV= S x 100
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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
y =rea de Pico
CV 2%
12.8-Estabilidad Analtica de la muestra:

Se debe analizar una muestra homognea con tres replicas, fraccionar cada
una de las preparaciones de acuerdo a las condiciones de inters, procesar tres
muestras para cada condicin de almacenamiento hasta la etapa preestablecida. Analizar las muestras al trmino de cada condicin de almacenaje;
0, 6, 24, 36 horas, utilizando una solucin al 100.0%
Se Tomar una alcuota de 1.0 mL de la Solucin Madre III y transferir a un
baln de 50.0 mL aforar con solvente, inyectar por separado tres muestras.
Calcular la media aritmtica y su diferencia absoluta al anlisis inicial y de cada
condicin de almacenaje.
/di/ 2%
/di/ = diferencia absoluta de la media
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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
12.9-Limite de Deteccin del analito:

El analista debe determinar la cuantificacin de las muestras del blanco y de
los placebos analticos, las respuestas de estas muestras deben estar en un
intervalo de concentracin del analito. Determinar aquella cantidad del analito
que genere una respuesta con respecto a la muestra blanco en una proporcin
de 3 a 1 esto corresponde a la concentracin asociada al lmite de deteccin.
Muestra
Seal analtica (reas)
Blanco o ruido
3 veces el ruido
+ reas de picos
Analito (g/mL)
0.10
0.20
0.30
0.40
0.50
LD se estima en X g/mL que es la cantidad del analito inmediatamente
posterior a tres veces el ruido.
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5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
12.10-Limite de Cuantificacin:
Determinar la seal de muestra (blanco) y la seal analtica de muestras
(placebo analtico) a concentraciones conocidas del analito, determinar la
cantidad del analito cuya seal sea similar o mayor de la muestra blanco en una
porcin de 10 a 1 lo que corresponde a la cantidad asociada del limite de
cuantificacin.
Muestra
Blanco o ruido
10 veces el ruido
Analito (g/mL)
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
LC se estima en X g/mL que es la cantidad del analito inmediatamente
posterior a diez veces el ruido.
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTVIT001

5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
12.11-Robustez:
Preparar tres diferentes proporciones de fase (baja, normal y alta) en cada
condicin de operacin se analiza la misma muestra con tres replicas.
Reportar el contenido de potencia del analito para las muestras de condicin
normal de operacin, y para las muestras de las otras condiciones de operacin
expresadas por porcentaje.
Condicin
Baja
Normal
Alta
Muestra
72%
75%
78%
Calcular la media aritmtica y diferencia absoluta

/di/ 2%
87
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTVIT001

5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
12.12-Tolerancia
Se fijarn 2 condiciones de uso (cambio de reactivos y cambio de columna) y se
analizar una misma muestra por duplicado o triplicado a cada condicin. Se
reportar el contenido del analito de todas las muestras.
Muestra
Columna 1
Columna 2
Muestra
Reactivo 1
Reactivo 2
Se calcular la media aritmtica (), desviacin estndar (S) y coeficiente de

variacin (CV) del contenido del analito. los clculos se realizarn en un
programa de Excel empleando las siguientes frmulas :
Media Aritmtica
=y
n
Desviacin Estndar
S=
n ( y2 )-( y )2
n(n1)
n= nmero de eventos de contenido
CV= S x 100
88
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTVIT001

5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
CV 2%
13-Tcnica de anlisis para Jarabe Multivitaminico con estimulante del

apetito (Cuantificacin de Vitaminas)
13.1-Preparacin del Estndar de Multivitaminas
Pesar exactamente 160.0 mg de Vitamina B 1, 64.0 mg de Vitamina B2, 320.0
mg de Vitamina B6, 64.0 mg Nicotinamida, transferir cada una a un mismo baln
volumtrico de 100 mL, agregar 50 mL del solvente y colocar el baln en
ultrasonido por 15 minutos hasta disolucin completa, aforar con solvente. De
esta solucin tomar una alcuota de 1.0 mL con pipeta volumtrica y transferir a
un baln de 50 mL, aforar con solvente, filtrar con filtro 0.2 m.
Esta solucin contiene 32.0 m de Vitamina B 1, 12.8 g de vitamina B2, 64.0 g
de Vitamina B6, 12.8 g de Nicotinamida.
Los estndares deben de ajustarse al 100% para cada una de las vitaminas
89
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTVIT001

5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
Esquema de Preparacin de Estndar de Multivitaminas

160.0 mg Vit. B1
100 mL solvente* (ver preparacin de soluciones)
64.0 mg Vit B2
64.0 mg Vit. B3
320.0 mg Vit. B6
2.0 mL
50 mL solvente*
32.0 g /mL Vit. B1
12.8 g /mL Vit B2
12.8 g /mL Vit. B3
64.0 g /mL Vit. B6
13.2-Preparacin de Muestra para la cuantificacin de las multivitaminas

en Jarabe Multivitaminico con estimulante del apetito
Tomar una alcuota de 10.0 mL de jarabe multivitaminico, adicionar a un baln
de 25.0 mL, y aforar con solvente. De esta solucin pipetear 2.0 mL y transferir
a un baln de 25.0 mL aforar con solvente, filtrar con filtro 0.2 m.
Esta solucin contiene 32.0 g de Vitamina B 1, 12.8 g de vitamina B2, 12.8 g
de Vitamina B6, 64 g de Nicotinamida.
90
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTVIT001

5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
Esquema de Preparacin de muestra de Jarabe Multivitaminico

10.0 mL jarabe
25.0 mL solvente
10.0 mg Vit. B1
4.0 mg Vit B2
4.0 mg Vit. B3
20.0 mg Vit. B6
2.0 mL
25.0 mL solvente
32.0 g /mL Vit. B1
12.8 g /mL Vit B2
12.8 g /mL Vit. B3
64.0 g /mL Vit. B6
13.3-Condiciones Cromatogrficas
Columna: Selec B y precolumna Selec B
Longitud de onda 280 nm
Temperatura ambiente
Flujo 1.5 mL/min.
Volumen de Inyeccin 20 L
13.4-Procedimiento General
-Despus de la preparacin de las soluciones que se van a inyectar se debe de
acondicionar el equipo.
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTVIT001

5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
-Se debe asegurar de que los frascos de
solventes
estn llenos, y se
programa el equipo para purgar las lneas.

-Adecuar las condiciones del Cromatgrafo lquido de Alta Presin (HPLC),
segn las especificaciones.
-Escoger el mtodo de Multivitaminas con Estimulante y programar el mtodo
segn el tiempo de retencin y el tiempo de las corridas.
-Colocar las muestras previamente filtradas en viales de 2 mL y taparlos,
colocarlos en una bandeja con capacidad para 200 muestras, el orden dentro
de la bandeja depende de la programacin en el mtodo identificndolas en una
tabla de muestras.
- Inyectar el estndar por medio de una corrida de prueba, para hacer los
ajustes en el mtodo, si fuese necesario.
- Programar el equipo para inyectar por medio del automuestreador cada una
de las soluciones.
- El programa del equipo graficara los cromatogramas y resultados de las
inyecciones de cada una de las diferentes soluciones.
-El reporte que el equipo proporciona dar la concentracin de las soluciones,
numero de platos tericos, la asimetra del pico entre otros datos.
92
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTVIT001

5.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
2.0 mg / 5mL
10.0 mg / 5mL
13-Referencia bibliogrfica:
-Asociacin Espaola de Farmacuticos de la Industria, Validacin de
Mtodos Analticos, AEFI, seccin Catalana.
-Diplomado de Buenas Practicas de Laboratorio en la Industria
Farmacutica, Validacin de Mtodos Analticos, Martha Elena Polanco,
Abril 2006.
- The United States Pharmacopeial Convention, Inc. United States
Pharmacopeia of the United States of America,(USP) 29 Edicin en
espaol 2006, Twinbrook, Parkway, Roekvill
-ICH Harmonized Tripartite Guideline, Text on Validation of Analytical
Procedures, Q2A, 27 October 1994.
Procedures, Methodology Q2S, 6 November 1996.
93
4.5 PROTOCOLO DE VALIDACION CIPROHEPTADINA

Nombre del Activo :Ciproheptadina HCl
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
1-Alcance:
Metodologa Analtica para la cuantificacin de Ciproheptadina como
estimulante
del apetito
en
un
Jarabe Multivitamnico
por medio de
Cromatografa Lquida de Alta Presin (HPLC), elaborado en un Laboratorio

Farmacutico Nacional.
2-Objetivo:
Demostrar que la metodologa analtica es eficaz para la cuantificacin de
Ciproheptadina en un Jarabe Multivitamnico.
3-Responsabilidades:
-
Es responsabilidad del Gerente de Control de Calidad la autorizacin del

protocolo para su ejecucin.
Es obligacin del Coordinador de Validacin velar por el cumplimiento del

protocolo de validacin.
Cada analista realizar los pasos establecidos en este protocolo.
El analista debe de preparar las soluciones a utilizar as como tambin la

fase mvil, y asegurarse que las condiciones de operacin del equipo sean
adecuadas antes de utilizarlo.
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
El analista deber reportar los datos obtenidos por medio de un anlisis

estadstico.
4-Caractersticas a evaluar de Jarabe Multivitaminico con Estimulante del

Apetito a base de Ciproheptadina:
Lquido transparente color amarillo, con aroma a pia, contenido en un frasco
P.V.C. color mbar.
Se realizar el ensayo de potencia para cuantificar la cantidad de
Ciproheptadina en el Jarabe Multivitaminico:
La Solucin Oral de Ciproheptadina Clorhidrato (C21H22N.HCl) contiene no
menos de 90 por ciento y no ms de 110 por ciento de la cantidad de
Ciproheptadina base (C21H22N) declarada en la etiqueta
5-Parmetros a Evaluar
-
Exactitud
Reproducibilidad del Mtodo
95
Precisin del Mtodo
Lmite de Deteccin
Lmite de Cuantificacin
Robustez
Tolerancia
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
6-Recursos a utilizar:
6.1-Equipo General
-
Balanza analtica, METTLER TOLEDO modelo AX205, Delta Range
Ultra sonido, BRANSON modelo 221DR-MTH.
Bomba al vaco, GENERAL ELECTRIC, modelo 5KH330N16HX.
Cabina de extraccin de gases LABCONCO, para manipulacin y

preparacin de reactivos.
6.2-Equipo Analtico
-
pH-metro DIGITAL ORION modelo 520 con electrodo combinado de vidrio

y sensor de temperatura.
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
Cromatgrafo Lquido de Alta Presin (HPLC) MERCK Hitachi LaChrom

Elite, Detector Arreglo de Diodos L-2450, Horno L1300, Automuestreador
L2200, Bomba L2130.
7-Materiales:
7.1-Material General:
-Vasos de precipitado con capacidad de 30 mL, 100 mL, 500mL
-Probeta de 250 mL, 1000 mL
-Papel filtro Whatman # 1
-Filtro Membrana de Nylon 0.2 m 47 mm Whatman
-Filtro de Nylon Acrodisc 0.2 m
-Jeringa con capacidad de 10 mL
-Papel glassin.
7.2-Material Volumtrico Clase A:
-Pipetas Volumtricas de 0.5 mL, 1 mL, 2 mL, 5 mL, 10 mL,

-Balones volumtricos de 10 mL, 25 mL, 50 mL, 100 mL, 1000 mL, (todo
material de vidrio lavado antes de cada uso con jabn alcalino, agua destilada).
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
8-Reactivo de Uso General.

-
Agua Desmineralizada
Acido Fosfrico 3 M
Fosfato de potasio monobsico
Metanol HPLC
Agua HPLC
Acetonitrilo HPLC
8.1-Estndares de Trabajo
-
Clorhidrato de Ciproheptadina
9-Preparacin de Soluciones con estndares

Todas las soluciones deben de ser de preparacin reciente.
98
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
9.1-Solucin Madre I (80%):

Pesar un equivalente a 40.0 mg de Ciproheptadina Clorhidrato estndar de
trabajo, transferir a un baln volumtrico de 100 mL adicionar 15 mL de Metanol
y agitar por 10 minutos, aforar con agua desmineralizada, tomar una alcuota de
4.0 mL de la Solucin anterior y transferir a un baln volumtrico de 100 mL
aforar con agua desmineralizada, esta solucin tiene una concentracin de 16.0
g/mL.
40.0 mg Ciproheptadina HCl
15 mL metanol
100.0 mL
Aforar con agua desm
5.0 mL
100.0 mL (16 g/mL)

aforar con agua desm.
9.2-Solucin Madre II (90%) :

trabajo, transferir a un baln de 100.0 mL adicionar 15 mL de Metanol y agitar
por 10 minutos, aforar con agua desmineralizada, tomar una alcuota de 4.0 mL
de la Solucin anterior y transferir a un baln de 100.0 mL aforar con agua
desmineralizada, esta solucin tiene una concentracin de 18.0 g/mL.
15 mL metanol
100.0 mL
5.0 mL
100.0 mL (18.0 g/mL)

99
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
9.3-Solucin Madre III (100%):

15 mL metanol
100.0 mL
5.0 mL
100.0 mL (20.0 g/mL)

9.4-Solucin Madre IV (110%):

15 mL metanol
100.0 mL
5.0 mL
100.0 mL (22.0 g/mL)

100
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
9.5-Solucin Madre V (120%):

15 mL metanol
100.0 mL
5.0 mL
100.0 mL (24.0 g/mL)

El estndar de trabajo hay que ajustarlo ya que no se encuentra al 100%, se

debe de secar en la estufa a 60C por 2 horas un da antes de ser utilizado y
guardarlo en un desecador.
10-Preparacin de soluciones
10.1-Preparacin Buffer fosfato pH 3.8
Pesar exactamente 1.36 g de Fosfato Potsico monobsico y transferir a un
baln volumtrico de 1000 mL y agitar con agitador magntico por 5 minutos, y
aforar con Agua HPLC, ajustar el pH con acido fosfrico 3M.
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
10.2-Fase mvil para la cuantificacin de Ciproheptadina:Buffer fosfato pH

3.8: Acetonitrilo (50:50)
Para la preparacin de 1000.0 mL de solucin de fase mvil, medir 500 mL de
buffer fosfato pH 3.8 y adicionarle 500 mL de acetonitrilo y agitar para
homogenizar la solucin, filtrar esta solucin por medio de un filtro Membrana
de Nylon 0.2 m 47 mm, con ayuda de una bomba al vaci, verter la solucin
filtrada en un frasco de vidrio con capacidad de 1000.0 mL y colocar en el
equipo HPLC.
Las soluciones no son desgasificadas antes de colocarlas en el equipo ya que
el equipo esta provisto con un desgasificador automtico.
11- Parmetros
11.1-Precisin del Sistema
Se preparan por separado seis muestras a partir de la Solucin madre III (ver
preparacin de soluciones), tomando seis alcuotas individuales de 4.0 mL y
aforarlas a 100.0 mL, las cuales tendrn una concentracin de 20.0 g/mL ,se
inyectaran por separado.
N muestra
Concentracin
Porcentaje
reas
20.0 g/mL
100 %
*reas de picos
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
Con los datos de los resultados obtenidos se calcular la Desviacin Estndar

(S) y el Coeficiente de Variacin (CV), los clculos se realizarn en un
programa de Excel empleando las siguientes frmulas :
= Media aritmtica
=y
n
S = Desviacin Estndar
S=
n ( y2 )-( y )2
n(n1)
CV = Coeficiente de Variacin
CV = S x 100
y = reas de picos
CV 1.5 %
11.2-Adecuabilidad del Sistema

Se inyectar cinco replicas de la Solucin Madre III (20.0 g/mL) de
adecuabilidad. Reportar la respuesta del analito, calculando el Coeficiente de
Variacin (CV).
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
N muestra
Concentracin
Porcentaje
reas
20.0 g/mL
100 %
20.0 g/mL
100 %
20.0 g/mL
100 %
20.0 g/mL
100 %
20.0 g/mL
100 %
* reas de picos
En los cromatogramas obtenidos se determinar el factor de cola (T), la
resolucin (R) y la precisin de la inyeccin (Coeficiente de variacin). Los
clculos se realizarn en un programa de Excel empleando las siguientes
frmulas :
Media aritmtica
=y
N
Desviacin Estndar
S=
n ( y2 )-( y )2
n(n1)
CV = S x 100
y =rea de Pico
CV 2 %
104
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
11.3-Linealidad del Sistema.
Para el estudio de la Linealidad del Sistema se usar una curva de calibracin

en un intervalo de concentracin desde 16.0 hasta 24.0 g/mL (80-120 % de la
cantidad terica declarada), que incluye 5 concentraciones diferentes( 80%,
90%, 100%, 110%, 120 %). El anlisis se realizar con tres replicas.
N muestra
Concentracin
Porcentaje
Replicas
16.0 g/mL
80 %
18.0 g/mL
90 %
20.0 g/mL
100 %
22.0 g/mL
110 %
24.0 g/mL
120 %
Se medir la respuesta analtica bajo las mismas condiciones de medicin, se

reportar la relacin concentracin vrs respuesta analtica.
Calcular el valor de la pendiente (b1), la ordenada en el origen (b0), el
coeficiente de determinacin (r2) y el intervalo de confianza para la pendiente
(IC(1)), los clculos se realizarn en un programa de Excel empleando las
siguientes frmulas :
Pendiente
b = n xy - xy
n x2 (x)2
n = nmero de eventos (concentracin respuesta del analito)
105
Ordenada en el Origen
a = y b1x
n
r=
(x-x)-(y-y) .
(x_x)2 (y-y)2
Coeficiente de determinacin
r2 =
[n(xy)-((x)(y))2] .
[n(x2)-(x)2(ny2)-(y)2]
IC(1)= b1 t0.975,n-2 Sb1
Sb1= S y/x =
1
x ( x) 2
n
Desviacin estndar de regresin
S y/x =
y2 b1 xy + b0 y
n2
r 0.99
r20.98
IC(1), no debe incluir el cero.
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
11.4-Exactitud
Preparar tres muestras seleccionando tres concentraciones dentro del rango de

la linealidad (80%,100%,120%), se analizarn las muestras por tres replicas.

variacin (CV) y Test de Student, los clculos se realizarn en un programa de
Excel empleando las siguientes frmulas:
Media aritmtica
=y
n
Desviacin Estndar
S=
n ( y2 )-( y )2
n(n1)
Cv = S x 100
y =rea de Pico
Si el t exp < t tabla significa que el mtodo analtico tiene la exactitud requerida.
107
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
11.5-Repetibilidad del Mtodo
Preparar cinco placebos al 100% de lo rotulado (Solucin Madre III), por un

mismo analista, a las mismas condiciones usando como referencia la sustancia
empleada a la adicin del placebo analtico.
Calcular el media aritmtica () desviacin estndar (S) y coeficiente de

variacin (CV), intervalo de confianza para la medida poblacional IC() del
porcentaje de recobro. Los clculos se realizarn en un programa de Excel
empleando las siguientes frmulas:
Media aritmtica
=y
n
Desviacin Estndar
S=
n ( y2 )-( y )2
n(n1)
CV = S x 100
y =rea de Pico
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
CV < 2%
El Intervalo de Confianza para la media poblacional IC(), debe de incluir el
100% o que el promedio aritmtico del porcentaje de recobro se incluya en el
intervalo 98-102% para mtodo cromatogrfico.
11.6-Linealidad del Mtodo e Intervalo de Confianza.
Para el estudio de este parmetro se har la preparacin de muestras con

diferentes niveles de Ciproheptadina, que representan el 80%, 90%, 100%,
110% y 120 % de la concentracin terica del principio activo en el jarabe,
segn la formulacin propuesta. Simultneamente, se analizar la linealidad del
mtodo y el intervalo de confianza. El anlisis se realizar con tres replicas de
cada Solucin Madre I, II, III, IV y V (anteriormente descritas).
N muestra
Concentracin
Porcentaje
Replicas
16.0 g/mL
80 %
18.0 g/mL
90 %
20.0 g/mL
100 %
22.0 g/mL
110 %
24.0 g/mL
120 %
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
CV = S y/x x 100
Coeficiente de determinacin r2 0.98
El Intervalo de Confianza para la pendiente IC(1) debe incluir la unidad.
El Intervalo de Confianza para el punto de origen IC( 0), debe incluir el cero.
El IC() debe incluir solo el 100%
El CV del porcentaje de recuperacin no debe ser mayor al 2% para mtodo
cromatogrficos.
11.7-Precisin del mtodo (Precisin Intermedia)
Este estudio se realizar a partir de
la preparacin de cinco muestras a
diferentes niveles de Ciproheptadina, que representan el 80%, 90%, 100%,

110% y 120 % de la concentracin terica del principio activo en el jarabe,
segn la formulacin propuesta. El anlisis se realizar con tres replicas de
cada Solucin Madre I, II, III, IV y V (anteriormente descritas) se efectuar las
valoraciones por 2 analistas en 2 das diferentes .
110
Analista
Da
N muestra
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
Concentracin
Porcentaje
16.0 g/mL
18.0 g/mL
20.0 g/mL
22.0 g/mL
24.0 g/mL
16.0 g/mL
18.0 g/mL
20.0 g/mL
22.0 g/mL
24.0 g/mL
16.0 g/mL
18.0 g/mL
20.0 g/mL
22.0 g/mL
24.0 g/mL
16.0 g/mL
18.0 g/mL
20.0 g/mL
22.0 g/mL
24.0 g/mL
80%
90%
100%
110%
120%
80%
90%
100%
110%
120%
80%
90%
100%
110%
120%
80%
90%
100%
110%
120%
# Replicas
Calcular la media aritmtica () desviacin estndar (S) y coeficiente de

variacin (CV), los clculos se realizarn en un programa de Excel y con ayuda
de las siguientes frmulas :
Media aritmtica
=y
n
Desviacin Estndar
S=
n ( y2 )-( y )2
n(n1)
Cv = S x 100
111
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
y =rea de Pico
CV 2%
11.8-Estabilidad Analtica de la muestra:

Se analizar una muestra homognea con tres replicas, fraccionar cada una de
las preparaciones de acuerdo a las condiciones de inters, procesar tres
muestras para cada condicin de almacenaje hasta la etapa pre-establecida,
Analizar las muestras al termino de cada condicin de almacenaje;
0, 6, 24,36 horas, utilizando una solucin al 100.0%
Se Tomar una alcuota de 4.0 mL de la Solucin Madre III y transferir a un
baln de 100.0 mL aforar con agua desmineralizada, esta solucin tiene una
concentracin de 20.0 g/mL, inyectar por separado tres muestras.
Tiempo de almacenamiento en el inyector
Muestra
0 horas
6 horas
24 horas
36 horas
* Porcentajes de concentracin
Calcular la media aritmtica y su diferencia absoluta al anlisis inicial y de cada
condicin
de
almacenaje.
112
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
/di/ 2%
/di/ = diferencia absoluta de la media
11.9-Limite de Deteccin del analito:

El analista debe determinar la cuantificacin de las muestras del blanco y de
los placebos analticos, las respuestas de estas muestras deben estar en un
intervalo de concentracin del analito. Determinar aquella cantidad del analito
que genere una respuesta con respecto a la muestra blanco en una proporcin
de 3 a 1 esto corresponde a la concentracin asociada al lmite de deteccin.
Muestra
Blanco o ruido
3 veces el ruido
Analito (g/mL)
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
Lmite de Deteccin se estima en X g/mL que es la cantidad del analito
inmediatamente posterior a tres veces el ruido.
113
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
11.10-Limite de Cuantificacin:
Determinar la seal de muestra (blanco) y la seal analtica de muestras
(placebo analtico) a concentraciones conocidas del analito, determinar la
cantidad del analito cuya seal sea similar o mayor que la muestra blanco, en
una porcin de 10 a 1 lo que corresponde a la cantidad asociada del limite de
cuantificacin.
Muestra
Blanco o ruido
10 veces el ruido
Analito (g/mL)
0.4
0.8
1.2
1.6
2.0
Lmite de Cuantificacin se estima en X g/mL que es la cantidad del analito
inmediatamente posterior a diez veces el ruido.
11.11-Robustez:
Preparar tres diferentes proporciones de fase (baja, normal y alta, en base a la
proporcin de los solventes en la fase especificados en la metodologa
114
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
analtica) en cada condicin de operacin se analiza la misma muestra con tres

replicas. Reportar el contenido de potencia del analito para las muestras de
condicin normal de operacin, y para las muestras de las otras condiciones de
operacin expresadas en porcentaje.
Baja
Normal
Alta
Muestra
48:52
50:50
52:48
Calcular la media aritmtica y diferencia absoluta

/di/ 2%
11.12-Tolerancia.
Se fijar 2 condiciones de uso (cambio de REACTIVO I : Fosfato de potasio
dibasico anhidro, REACTIVO II : Fosfato de potasio monobsico, y cambio de
COLUMNA I : LiChroCART 250 - 4
LiChrospher 60 RP-Selec B( 5 mcm),
COLUMNA II : LiChroCART 250 - 4 LiChrospher 100 RP- 18 ( 5 mcm). Se

analizar una misma muestra por lo menos por triplicado a cada condicin. Se
reportar el contenido del analito de todas las muestras.
115
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
Muestra
Columna 1
Columna 2
Muestra
Reactivo 1
Reactivo 2
Calcular la media aritmtica (), desviacin estndar (S) y coeficiente de

variacin (CV) del contenido del analito. Por medio de un programa en Excel
empleando las siguientes frmulas:
Media Aritmtica
=y
n
Desviacin Estndar
S=
n ( y2 )-( y )2
n(n1)
n= nmero de eventos de contenido

CV = S x 100
CV 2%
116
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
12-Tcnica de anlisis para Jarabe Multivitamnico con Estimulante del

Apetito (Cuantificacin de Ciproheptadina)
12.1 Preparacin del Estndar de Ciproheptadina
Pesar exactamente 50.0 mg de estndar de Ciproheptadina HCl (ajuste al 100%
el estndar de trabajo), transferir a un baln volumtrico de 100.0 mL, agregar
15 mL de metanol y colocar el baln en ultrasonido por 10 minutos hasta
disolucin completa, aforar con agua desmineralizada . De esta solucin tomar
una alcuota de 4.0 mL con pipeta volumtrica y transferir a un baln de 100.0
mL, aforar con metanol, filtrar con filtro de jeringa nylon de 0.2 g.
Esta solucin contiene 20.0 g/mL de Ciproheptadina HCl.
Esquema de Preparacin de Estndar de Ciproheptadina Clorhidrato

100.0 mL Agua desmineralizada
4.0 mL
100.0 mL agua desmineralizada

(20.0 g /mL Ciproheptadina HCl)
117
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
12.2-Preparacin de Muestra para la cuantificacin de Ciproheptadina

Clorhidrato en Jarabe Multivitaminas con Estimulante del Apetito
Tomar una alcuota de 5.0 mL de Jarabe Multivitamnico, adicionar a un baln
de 100.0 mL, y aforar con agua desmineralizada, filtrar con filtro de jeringa nylon
de 0.2 m. Esta solucin contiene 20.0 g/mL de Ciproheptadina Clorhidrato.
Esquema de Preparacin de muestra de Jarabe Multivitaminico

5.0 mL
(2mg de Ciproheptadina HCl)
100.0 mL agua desmineralizada

(20.0 g /mL Ciproheptadina HCl)
12.3-Condiciones Cromatogrficas
Columna: Selec B y precolumna selec B
Longitud de onda 250 nm
Temperatura: 30C
Flujo 1.0 mL/min.
Volumen de Inyeccin 20 g/L.
12.4-Procedimiento General
-Despus de la preparacin de las soluciones que se van a inyectar, se debe
acondicionar el equipo.
118
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
-Se debe asegurar que los frascos de solventes estn llenos, y se programa el
equipo para purgar las lneas.
-Adecuar las condiciones del Cromatgrafo lquido de Alta Presin (HPLC),
segn las especificaciones.
-Escoger el mtodo de Ciproheptadina y programar el mtodo segn el tiempo
de retencin y el tiempo de las corridas.
-Colocar las muestras previamente filtradas en viales de 2 mL y taparlos,
colocarlos en una bandeja con capacidad para 200 muestras, el orden dentro
de la bandeja depende de la programacin en el mtodo identificndolas en una
tabla de muestras.
- Inyectar el estndar por medio de una corrida de prueba, para hacer los
ajustes en el mtodo, si fuese necesario.
- Programar el equipo para inyectar por medio del automuestreador cada una
de las soluciones.
- El programa del equipo graficar los cromatogramas y resultados de las
inyecciones de cada una de las diferentes soluciones.
-El reporte que el equipo proporciona, dar la concentracin de las soluciones,
nmero de platos tericos, la asimetra del pico entre otros datos.
119
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Fecha : 11-2006
Cdigo:VPTCPH002
2 mg / 5 mL
13-Referencia bibliogrfica:
-Asociacin Espaola de Farmacuticos de la Industria, Validacin de Mtodos
Analticos, AEFI, seccin Catalana.
-Diplomado de Buenas Practicas de Laboratorio en la Industria Farmacutica,
Validacin de Mtodos Analticos, Martha Elena Polanco, Abril 2006.
-The
United
States
Pharmacopeial
Convention,
Inc.
United
States
Pharmacopeia of the United States of America,(USP) 29 Edicin en espaol

2006, Twinbrook, Parkway, Roekvill
Procedures, Q2A, 27 October 1994.
Procedures, Methodology Q2S, 6 November 1996.
CAPITULO V
RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS
121
5.0 RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS

En este capitulo se plasma por medio de cuadros los resultados obtenidos en la
Validacin del Mtodo Analtico por Cromatografia Liquida de Alta Presion
(HPLC) de un Jarabe Multivitaminico con Ciproheptadina, detallando cada uno
de los analitos en estudio y el analsis de los resultados.
122
Codigo:VPTVIT001
Fecha:15/03/07
TIAMINA CLORHIDRATO EN JARABE MULTIVITAMINICO

CON ESTIMULANTE DEL APETITO
PARMETROS EVALUADOS
RESULTADO
CRITERIO DE ACEPTACIN
DICTAMEN

Media Aritmtica
Desviacin Estndar ( S )
Coeficiente de Variacin ( CV )
979543
12873.18
1.31
----CV 1.5 %
CUMPLE

Factor de Capacidad
Resolucin
Asimetra
1.85
21.61
2.58
0.96
CV 2.0 %
-------
10127
0.51
0.9999
0.9998
20676.04
-1558.64
--CV 2.0 %
r 0.99
r2 0.98
--CUMPLE
CUMPLE
CUMPLE
IC (1), no debe incluir el cero
CUMPLE
0.94
0.89
--CV 2.0 %
--CUMPLE
G Cochran
0.8519
Si G exp < G tabla el mtodo analtico

tiene homogeneidad de varianzas
CUMPLE
Test de Student
0.1687
Si t exp < t tabla el mtodo analtico tiene

la exactitud requerida
CUMPLE
Repetibilidad del Mtodo

Media Aritmtica
Intervalo de confianza para la media
poblacional (IC ())
100.39
0.9312
0.9312
100.80
99.20

Pendiente
Coeficiente de correlacin ( r )
Coeficiente de determinacin ( r2 )
(IC (1))
Exactitud

Pendiente
Intervalo de confianza para punto de
origen (IC (0))
poblacional (IC ())
(IC (1))
Ver anexo 1 y anexo 2
9906.2
1.54
0.9981
0.9963
7761.58
54405.58
100.14
97.68
10104.14
9708.25
CUMPLE
CV 2.0 %
----CUMPLE
Debe estar entre el intervalo 98-102 %
CUMPLE
--CV 2.0 %
r 0.99
r2 0.98
--CUMPLE
CUMPLE
CUMPLE
IC (0), debe incluir el cero
CUMPLE
IC (), debe incluir el 100 %
CUMPLE
CUMPLE
-----
123
Codigo:VPTVIT001
Fecha:15/03/07

PARMETROS EVALUADOS
Precisin del Mtodo
G Cochran
RESULTADO
DICTAMEN
1.33
1.33
--CV 2.0 %
--CUMPLE
0.2965

CUMPLE
Si t exp < t tabla el mtodo analtico
CUMPLE
Test de Student
1.71

Diferencia absoluta /di/ cero horas
Diferencia absoluta /di/ 6 horas
0.00
0.48
3.35
7.16
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
CUMPLE
CUMPLE
NO CUMPLE
NO CUMPLE
Robustez
Diferencia absoluta /di/ baja
Diferencia absoluta /di/ normal
Diferencia absoluta /di/ alta
3.02
0.00
3.90
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
NO CUMPLE
Media Aritmtica
4139586
---
---
42534.59
---
---
CV 2.0 %
NO CUMPLE
Tolerancia
4.45
G Cochran
0.7970
Test de Student
0.00062

CUMPLE
CUMPLE
Efectuado por: Maria Elena Rivas
fecha: Mar-07
Verificado por: Silvia Adalia Rodrguez
fecha: Mar-07
124
Codigo:VPTVIT001
Fecha:15/03/07

INFORME DE DESVIACIONES
Parmetro: Robustez
Desviacin: Se obtuvo una diferencia absoluta de un 3.02 y 3.90 %
Justificacin de la aceptacin: La metodologa de anlisis para la cuantifiacin
de Tiamina Clorhidrato no acepta variaciones en los porcentajes de las fases.
Parmetro: Estabilidad analitica

Desviacin: Las lecturas tomadas despus de 6 horas de analizada la muestra,
vara con un aumento significativo.
Justificacin de la aceptacin: El analisis no debe durar ms de 6 horas ya que
tiempos ms prolongados no se asegura la obtencin de buenos resultados.
Parmetro: Tolerancia
Desviacin: Se obtuvo un coeficiente de variacion de 4.45 %
de Tiamina Clorhidrato no es tolerante a cambio de reactivos y/o fase
estacionaria .
125
Codigo:VPTVIT001
Fecha:15/03/07

INFORME DE VALIDACION DEL ENSAYO
Resultados: Conforme a los establecido

Dictamen: La metodologia analitica para la cuantificacin de Tiamina
Clorhidrato, bajo las condiciones establecidas est VALIDADO
Redactado por: Maria Elena Rivas
f._____________
fecha: Marzo-07
Aprobado: Silvia Adalia Rodrguez
f.______________ fecha: Marzo-07
126
Codigo:VPTVIT001
Fecha:15/03/07
RIBOFLAVINA EN JARABE MULTIVITAMINICO

PARMETROS EVALUADOS
RESULTADO
DICTAMEN

Media Aritmtica
905374
20816.45
2.30%
----CV 1.5 %
CUMPLE

Factor de Capacidad
Resolucin
Asimetra
1.66%
4.64
1.14
0
CV 2.0 %
-------
9558.7
0.71
0.9997
0.9993
20676.04
-1558.64
--CV 2.0 %
r 0.99
r2 0.98
--CUMPLE
CUMPLE
CUMPLE
CUMPLE
1.01
1.02
--CV 2.0 %
--CUMPLE
G Cochran
0.4424

CUMPLE
Test de Student
1.0936

CUMPLE

Media Aritmtica
poblacional (IC ())
100.61
0.9184
0.91
100.78
99.21

Pendiente
Intervalo de confianza para la pendiente (IC
(1))
Exactitud

Pendiente
Intervalo de confianza para punto de origen
(IC (0))
poblacional (IC ())
Intervalo de confianza para la pendiente (IC
(1))
9462.1
1.35
0.9986
0.9973
325380.27
-335548.27
100.80
98.25
11569.67
7354.53
CUMPLE
CV 2.0 %
----CUMPLE
Debe estarentre el intervalo 98-102 %
CUMPLE
--CV 2.0 %
r 0.99
r2 0.98
--CUMPLE
CUMPLE
CUMPLE
CUMPLE
CUMPLE
CUMPLE
-----
127
Codigo:VPTVIT001
Fecha:15/03/07

PARMETROS EVALUADOS
RESULTADO
DICTAMEN
Precisin del Mtodo

1.59
1.59
--CV 2.0 %
--CUMPLE
G Cochran
0.37

CUMPLE
Test de Student
0.84
CUMPLE

0.00
0.64
4.53
7.52
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
CUMPLE
CUMPLE
NO CUMPLE
NO CUMPLE
Robustez
0.63
0.00
1.60
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
CUMPLE
975278
---
---
74734.32
---
---
2.30
CV 2.0 %
NO CUMPLE
G Cochran
0.55
Tolerancia
Media Aritmtica
Test de Student
0.00377

CUMPLE
CUMPLE
fecha: Mar-07
fecha: Mar-07
128
Codigo:VPTVIT001
Fecha:15/03/07

Parmetro: Presicin del sistema

Desviacin: Se obtuvo un coeficiente de variacin de 2.30%
Justificacin de la aceptacin: aplicando la distribucion t de Student se
demuestra que la t experimental es menor a la t de tablas, indicando que no hay
diferencia significativa en los resultados.
Parmetro: Estabilidad analtica

Desviacin: Las lecturas tomadas despus de 6 horas de analizada la muestra,
de Riboflavina no es tolerante a cambio de reactivos y/o fase estacionaria .
129
Codigo:VPTVIT001
Fecha:15/03/07


Dictamen: La metodologia analitica para la cuantificacin de Riboflavina, bajo
las condiciones establecidas est VALIDADO
f._____________
fecha: Marzo-07
f._____________
fecha: Marzo-07
130
Codigo:VPTVIT001
Fecha:15/03/07
NICOTINAMIDA EN JARABE MULTIVITAMINICO

PARMETROS EVALUADOS
RESULTADO
DICTAMEN

Media Aritmtica
439546
5307.92
1.21%
----CV 1.5 %
CUMPLE

Factor de Capacidad
Resolucin
Asimetra
1.90%
6.25
3.40
0.97
CV 2.0 %
-------

Pendiente
4491.8
0.57
0.9999
0.9998
--CV 2.0 %
r 0.99
r2 0.98
--CUMPLE
CUMPLE
CUMPLE

(IC (1))
9967.68
-984.10
CUMPLE
0.84
0.84
--CV 2.0 %
--CUMPLE
Exactitud
CUMPLE
0.7489

CUMPLE
Test de Student
0.0357

CUMPLE

Media Aritmtica
poblacional (IC ())
99.79
0.7156
0.72
100.41
99.20
G Cochran

Pendiente
origen (IC (0))
poblacional (IC ())
(IC (1))
4365.5
1.29
0.9987
0.9973
5625.29
-28438.19
98.11
95.97
4474.1
4256.86
-----
CV 2.0 %
--CV 2.0 %
r 0.99
r2 0.98
--CUMPLE
CUMPLE
CUMPLE
--CUMPLE
CUMPLE
CUMPLE
CUMPLE
NO CUMPLE
CUMPLE
131
Codigo:VPTVIT001
Fecha:15/03/07

PARMETROS EVALUADOS
Precisin del Mtodo
G Cochran
RESULTADO
DICTAMEN
1.43
1.42
--CV 2.0 %
--CUMPLE
0.2333

CUMPLE
CUMPLE
Test de Student
2.16

0.00
1.56
3.81
6.51
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
CUMPLE
CUMPLE
NO CUMPLE
NO CUMPLE
Robustez
1.48
0
0.68
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
CUMPLE
Media Aritmtica
455643.25
---
---
24750.29
---
---
2.88
CV 2.0 %
NO CUMPLE
G Cochran
0.72

CUMPLE
Test de Student
0.00
CUMPLE
0.10
LD es la cantidad del analito

inmediatamente posterior a 3 veces el
ruido
CUMPLE
0.50
LC es la cantidad del analito

ruido
CUMPLE
Tolerancia
Limite de Deteccin
Concentracin en mcg/mL
Limite de Cuantificacin
fecha: Mar-07
fecha: Mar-07
132
Codigo:VPTVIT001
Fecha:15/03/07

Parmetro: Estabilidad analitica
Desviacin: Las lecturas tomadas despus de 6 horas de analizada la muestra
de Nicotinamida no es tolerante a cambio de reactivos y/o fase estacionaria .

Dictamen: La metodologia analitica para la cuantificacin de Nicotinamida, bajo
las condiciones establecidas est VALIDADO
f. ____________
fecha: Marzo-07
f. ____________
fecha: Marzo-07
133
Codigo:VPTVIT001
Fecha:15/03/07
PIRIDOXINA CLORHIDRATO EN JARABE MULTIVITAMINICO

PARMETROS EVALUADOS
RESULTADO
DICTAMEN

Media Aritmtica
798689
10824.17
1.36%
----CV 1.5 %
CUMPLE

Factor de Capacidad
Resolucin
Asimetra
1.63%
8.98
3.39
0.92
CV 2.0 %
-------
8060.3
0.49
0.9998
0.9996
17919.49
-1798.89
--CV 2.0 %
r 0.99
r2 0.98

Pendiente
(IC (1))
Exactitud
CUMPLE
--CUMPLE
CUMPLE
CUMPLE
0.98
0.91
--CV 2.0 %
--CUMPLE
G Cochran
0.8648

CUMPLE
Test de Student
0.03297

tiene la exactitud requerida
CUMPLE

Media Aritmtica
poblacional (IC ())
99.97
0.7573
0.13
100.62
99.32

Pendiente
origen (IC (0))
poblacional (IC ())
(IC (1))
8132.0
1.54
0.9988
0.9974
107950.23
-163106.23
100.113
97.987
8996.35
7267.65
CV 2.0 %
----CUMPLE
CUMPLE
--CV 2.0 %
r 0.99
r2 0.98
CUMPLE
CUMPLE
CUMPLE
CUMPLE
-----
CUMPLE
CUMPLE
CUMPLE
134
Codigo:VPTVIT001
Fecha:15/03/07

PARMETROS EVALUADOS
RESULTADO
DICTAMEN
1.73
1.73
--CV 2.0 %
--CUMPLE
Precisin del Mtodo


CUMPLE
CUMPLE
G Cochran
0.3797
Test de Student
1.016

0.00
0.61
3.60
6.31
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
CUMPLE
CUMPLE
NO CUMPLE
NO CUMPLE
Robustez
3.13
0.00
3.40
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
NO CUMPLE
Media Aritmtica
3378230
---
---
51313.30
---
---
3.30
CV 2.0 %
NO CUMPLE
G Cochran
0.57
Tolerancia
Test de Student
0.00174

CUMPLE
CUMPLE
fecha: Mar-07
fecha: Mar-07
135
Codigo:VPTVIT001
Fecha:15/03/07

Parmetro: Robustez
Desviacin: Se obtuvo una diferencia absoluta de un 3.13 y 3.40 %
de Piridoxina Clorhidrato no acepta variaciones en los porcentajes de las fases.

de Piridoxina Clorhidrato no es tolerante a cambio de reactivos y/o fase
estacionaria .
136
Codigo:VPTVIT001
Fecha:15/03/07


Dictamen: La metodologia analitica para la cuantificacin de Piridoxina
f.______________ fecha: Marzo-07
f.______________ fecha: Marzo-07
137
Codigo:VPTVIT001
Fecha:15/03/07
CIPROHEPTADINA CLORHIDRATO EN JARABE MULTIVITAMINICO

PARMETROS EVALUADOS
RESULTADO
DICTAMEN

Media Aritmtica
4000613
38374.71
0.96
----CV 1.5 %
CUMPLE

Factor de Capacidad
Resolucin
Asimetra
0.88
26.69
2.64
0.98
CV 2.0 %
-------

Pendiente
47872
0.82
0.9969
0.9939
--CV 2.0 %
r 0.99
r2 0.98
--CUMPLE
CUMPLE
CUMPLE
205187.06
-120171.06
no debe incluir el cero
CUMPLE
Exactitud
0.67
0.70
--CV 2.0 %
--CUMPLE
G Cochran
0.488

(IC (1))
Test de Student
1.9192

Media Aritmtica
poblacional (IC ())
101.44
0.5373
0.53
101.89
100.98

Pendiente
origen (IC (0))
poblacional (IC ())
(IC (1))
40209.0
0.56
0.9980
0.9961
3374576.82
-3119192.82
103.58
102.52
72357.95
8060.05
CUMPLE

CUMPLE

tiene la exactitud requerida
CUMPLE
-----
CV 2.0 %
--CV 2.0 %
r 0.99
r2 0.98
----CUMPLE
CUMPLE
--CUMPLE
CUMPLE
CUMPLE
CUMPLE
NO CUMPLE
CUMPLE
138
Codigo:VPTVIT001
Fecha:15/03/07

PARMETROS EVALUADOS
Precisin del Mtodo
RESULTADO
DICTAMEN
0.63
0.63
--CV 2.0 %
--CUMPLE

CUMPLE
0.009
CUMPLE
0.00
1.75
2.62
3.67
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
CUMPLE
CUMPLE
NO CUMPLE
NO CUMPLE
9
0
9
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
/di/ 2.0 %
NO CUMPLE
15511917.67
---
---
19714.25
---
---
0.89
CV 2.0 %
CUMPLE
G Cochran
0.50

CUMPLE
1.60
CUMPLE
0.40

ruido
---
1.20

ruido
---
G Cochran
0.3057
Test de Student
Robustez
Tolerancia
Media Aritmtica
Test de Student
Limite de Deteccin
Limite de Cuantificacin
fecha: Mar-07
fecha: Mar-07
139
Codigo:VPTVIT001
Fecha:15/03/07

Parmetro: Robustez
Desviacin: Se obtuvo una diferencia absoluta de un 9 %
de Ciproheptadina Clorhidrato no acepta variaciones en los porcentajes de las
fases.

Dictamen: La metodologia analitica para la cuantificacin de Ciproheptadina
f._____________
fecha: Marzo-07
f._____________
fecha: Marzo-07
140
5.1 ANALISIS DE RESULTADOS

5. 1.1
La tcnica de anlisis cumple con la precisin del sistema para Tiamina

Clorhidrato, Nicotinamida, Piridoxina Clorhidrato y Ciproheptadina
Clorhidrato ya que los resultados demuestran una estrechez de
concordancia entre la serie de mediciones de la misma muestra con un
coeficiente de variacin menor al 2 %; sin embargo para Riboflavina
presenta un grado de dispersin entre la serie de mediciones de la
misma muestra con un CV = 2.3 %; aplicando la distribucin
t de
student se demostr que la t exp < t tabla, indicando que no hay

diferencia significativa en los resultados, la diferencia de 0.3 %
encontrada se vuelve insignificante, concluyendo que el mtodo cumple
con la precisin.
5.1.2 Cumple con la precisin del mtodo para todos los analitos en estudio y
no demuestra diferencia significativa entre los resultados obtenidos
siendo estos menores al Coeficiente de Variacin que debe se menores
a 2 %.
5.1.3 En la adecuabilidad el sistema opera correctamente, dado que la

resolucin y repetibilidad del sistema cromatogrfico son adecuadas para
el anlisis, obteniendo resultados con un Coeficiente de Variacin menor
141
a un 2 %, esto asegura la confiabilidad en los resultados del mtodo

analtico.
5.1.4 La linealidad del sistema y del mtodo se cumple dentro del rango de
concentracin establecido en el protocolo para cada uno de los analitos
en estudio, lo resultados obtenidos en el coeficiente de correlacin es
mayor a 0.99 % y el coeficiente determinacin es mayor a 0.98 %, por lo
que el mtodo de cuantificacin es satisfactorio y tiene la capacidad de
obtener resultados que demuestran que la seal del analito es
directamente proporcional a la concentracin del mismo en la matriz.
5.1.5 La exactitud se cumple para todos los analitos en estudio, obteniendo

resultados con un coeficiente de variacin menor al 2 %, se utilizo la
distribucin t student, resultando un t exp < t tablas determinando que no
existe diferencia significativa entre el porcentaje de recuperacin y el
100%; se aplic la prueba de G de Cochran para determinar si el factor
concentracin tiene alguna influencia en los resultados para la
determinacin de exactitud, a 3 concentraciones establecidas en el
protocolo, obteniendo una G exp < G tabla, por lo que el factor
concentracin no influye en la variabilidad de los resultados.
142
5.1.6 En la estabilidad analtica de la muestra, dado que los analitos evaluados

se encuentran en un diluyente voltil (Metanol), con el paso del tiempo
tienden a concentrarse por lo que se evapora el solvente dando
resultados de porcentaje ms elevados con diferencia significativa al
porcentaje inicial de la muestra, su estabilidad esta limitada a un periodo
de 6 horas aproximadamente, donde el coeficiente de variacin no
excede al 2 % para todos los analitos en estudio.
5.1.7 Cumple la robustez para Riboflavina, sin embargo para los dems
analitos en estudio no cumple, la diferencia absoluta entre los resultados
es mayor a 2 %, lo cual podra estar influenciado por cambios en el
ambiente que no son controlados, por lo tanto no implica que el mtodo
no sea robusto con otro tipo de variaciones.
5.1.8 La metodologa de anlisis para las vitaminas no es tolerante a cambio

de marca de reactivo y/o cambio de fase estacionaria (Columna), los
resultados de las pruebas realizadas, muestran un coeficiente de
variacin mayor a 2 %, sin embargo la metodologa analtica para
Ciproheptadina
Clorhidrato
es
tolerante,
no
muestra
cambios
significativos entre los resultados en ambas condiciones de cambio.
143
5.1.9 El limite de deteccin para la metodologa analtica de las vitaminas es

de 0.2 mcg/mL
y el limite de cuantificacin es de 0.5 mcg/mL de
Nicotinamida, para Ciproheptadina Clorhidrato el limite de deteccin es

de 0.40 mcg/mL y el limite de cuantificacin es de 1.20 mcg/mL, dado
que a esta concentracin la seal del analito no se confunde con la seal
ruido y no hay interferencia de los excipientes (matriz).
CAPITULO VI
CONCLUSIONES
145
6.0 CONCLUSIONES
6. 1
Para la cuantificacion del Jarabe Multivitaminico con Ciproheptadina, no

puede modificarse las condiciones normales de operacin establecidas
en la metodologia analitica ya que presenta variabilidad en los
resultados con pequeos cambios en la fase movil.
6. 2
El tiempo de duracin del analisis no tiene que exceder seis horas,

debido a la estabilidad analitica de la muestra ya que a tiempos ms
prolongados los resultados no son confiables.
6. 3
La validacin de mtodos analticos es parte fundamental del desarrollo

de una formulacin y de la tcnica de Anlisis en el control de la calidad
de una forma farmacutica, ya que es durante esta secuencia de
pruebas y anlisis, donde el farmacutico descubre si la metodologa
analtica cumple con el propsito para lo cual fue diseada.
6. 4
Segn las exigencias actuales con respecto a la aplicacin RTCA

11.03.39.06
Productos
farmacuticos.
Validacin
de
mtodos
analticos para la evaluacin de la calidad de los medicamentos, se

encuentran parmetros de desempeos de procedimientos analticos
fsico qumicos, se encuentra la categora I de principios activos; donde
se especifica los parmetros de desempeo que aplica para la
146
validacin. Dentro de la validacin realizada se han cumplido por lo que

se concluye que el mtodo analtico utilizado para la cuantificacin de
Jarabe Multivitaminico con Ciproheptadina satisface los requisitos para la
aplicacin analtica deseada; es decir cumple con el propsito para el
cual fue diseado.
CAPITULO VII
RECOMENDACIONES
148
7.0 RECOMENDACIONES
7. 1
Se debe trabajar en las condiciones normales de operacin

establecidas en el protocolo en cuanto a la fase mvil, debido a que los
activos Piridoxina Clorhidrato y Ciproheptadina Clorhidrato presentan
variabilidad al cambio de proporciones en la fase movil.
7. 2
Que el anlisis para la cuantificacin de los activos del Jarabe

Multivitaminico con Ciproheptadina HCl; el tiempo de duracin del
anlisis no sobrepase las 6 horas, para la estabilidad de la muestra, no
debe almacenarse en el equipo por ms del tiempo establecido, por lo
que a tiempos ms prolongados no se asegura la obtencin de
resultados adecuados por la volatilidad del solvente de preparacin de
la muestra.
7. 3
Que la Validacin debe ejecutarse por un equipo multidisciplinario que

aporte la destreza y la facilidad para la adecuada interpretacin de
resultados y lo requerido como son los Procedimientos Estndares de
Operacin (PEOs), especificaciones bien establecidas, plan maestro de
validacin bien definido, protocolos y reportes de calificacin, as como
los protocolos y reportes de validacin, para que los resultados
obtenidos
sean
lo
suficientemente
confiables.
149
7. 4
Que
la
tcnica
de
validacin
del
Jarabe
Multivitaminico
con
Ciproheptadina HCl, sea revalidada en un perodo de dos aos; y, a

menos que sea reformulado el producto la metodologa analtica deber
ser nuevamente revalidada.
BIBLIOGRAFIA
1. Goodman, Gilman. Las Bases Farmacolgicas de la Teraputica, Decima
Edicin. Mxico D.F. 2003, Mc Graw Hill, vol 2, p. 1773-1781.
2. Gascon, Sebastia M.C. Validacion de Metodos Analiticos, Comisin de
Normas
de
Buenas
Fabricacin
Control
de
Calidad.
p.
19,29,38,43,47,51
3. Sobern M.A. Gua de Validacin de Mtodos Analticos, Ed 2002,
Colegio Nacional de Qumicos Farmacutico Bilogos, Mxico p. 8-11,
20-21, 23-24, 30-32, 34, 38, 40.
4. The United States Pharmacopeial Convention, Inc. United States
Pharmacopeia of the United States of America,(USP) 29 Edicin en
espaol 2006, Twinbrook, Parkway, Roekville. p. 1909-2091, 3895-3898.
5. Terra Farma S.A. de C.V. Validacin de Mtodos Analticos (mdulo
2/2006/Hotel Holiday In), Diplomado de Buenas Prcticas de Laboratorio
en la Industria Farmacutica, San Salvador, El Salvador, p. 3, 4, 6, 8, 19,
25, 31, 36, 43, 44, 47-48.
6. http://www.uam.es
7. http://www.bsv.slg.cu/revistas/far/.
8. http://www.hup.es/ecl/far/vol6n8.html
9. http://www.tesisdigitales.com
GLOSARIO
Anorexia Nerviosa: consiste en un alteracin grave de la percepcin de la
propia imagen, con un temor morboso a la obesidad, lo que condiciona una
alteracin.(1)
Beriberi: es una enfermedad producida por carencia de vitamina B1 (tiamina),
presenta dos cuadros clnicos distintos uno en hijos recin nacidos de madres
con deficiencia en vitamina B1 y otro en adultos.(6)
Caquexia Neoplsica: es una de las consecuencias de las alteraciones
metablicas del paciente con cncer a lo que contribuye una inadecuada
ingesta, demandas extraordinarias, asociadas al tumor y fuertes terapias
aplicadas.(1)
Higroscpico: se refiere a todos los compuestos que atraen agua en forma de
vapor o de lquido de su ambiente. (7)
Ictericia: es la coloracin amarillenta de la piel y mucosas debida a un aumento
de la bilirrubina (valores normales de 0,3 a 1 mg/dl) que se acumula en los
tejidos, sobre todo aquellos con mayor nmero de fibras elsticas (paladar,
conjuntiva) .(4)
Loop: parte del Cromatografo liquido, en el cual se dosifica el volumen de
inyeccin de la muestra. (5)
Miscible: Que se puede mezclar, especialmente referido a lquidos solubles [el
aceite no es m.]. (miscible) .(7)
Pelagra: es una enfermedad causada por una dieta deficiente o insuficiencia

del organismo para absorber la niacina (una de las vitaminas del complejo B)
el triptfano (un aminocido). (1)
Placebo: contiene todos los componentes de la formulacin del jarabe sin
tomar en cuenta el analito a estudiar. (3)
ANEXOS
ANEXO 1
CUADROS DE RESULTADOS
CUADRO # 1: PRECISIN DEL SISTEMA PARA TIAMINA CLORHIDRATO

Y^2
MEDIA
ARITMTICA
CV
969508052496
957532703296
918379139041
954982381824
996247526884
961199846464
5757849650005
979543
12873.18
1.31
% AGREGADO % RECUPERADO Y= REAS (mAU)

100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
Media
100.52
99.90
97.83
99.76
101.90
100.09
984636
978536
958321
977232
998122
980408
5877255
CUADRO # 2: ADECUABILIDAD DEL SISTEMA PARA TIAMINA CLORHIDRATO

% AGREGADO % RECUPERADO
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
Media
98.46
97.71
101.11
102.11
100.62
Y= REAS
(mAU)
Y^2
937577
930502
962794
972337
958136
4761346
879050630929
865833972004
926972286436
945439241569
918024594496
4535320725434
MEDIA
ARITMTICA
CV
952269
17589.62
1.85
CUADRO # 3: RESOLUCIN CROMATOGRAFCA PARA TIAMINA CLORHIDRATO

REAS
ALTURA
BASE
FACTOR DE
CAPACIDAD
937577
930502
962794
972337
958136
952269
45437
44453
45402
45428
44630
45070
1.71
1.82
1.70
1.63
1.80
1.73
21.57
21.58
21.60
21.63
21.68
21.61
TIEMPO DE
PLATOS
RESOLUCIN ASIMETRA
RETENCIN
TERICOS
9.02
9.03
9.04
9.05
9.07
9.04
2.96
2.91
2.43
2.34
2.25
2.58
0.970
0.960
0.970
0.960
0.940
0.96
4679.31
4674.76
4641.90
4613.37
4604.65
4642.80
CUADRO # 4: LINEALIDAD DEL SISTEMA PARA TIAMINA CLORHIDRATO

X=%
AGREGADO
Y = REAS
X^2
Y^2
XY
80
80
80
90
90
90
100
100
100
120
120
120
160
160
160
200
200
200
260
260
260
3030
775403
791513
785775
888440
889130
874124
978095
975921
970475
1172030
1178007
1169634
1582031
1582226
1584588
1978172
1984093
1986242
2605828
2621328
2596569
29969624
6400
6400
6400
8100
8100
8100
10000
10000
10000
14400
14400
14400
25600
25600
25600
40000
40000
40000
67600
67600
67600
516300
601249812409
626492829169
617442350625
789325633600
790552156900
764092767376
956669829025
952421798241
941821725625
1373654320900
1387700492049
1368043693956
2502822084961
2503439115076
2510919129744
3913164461584
3936625032649
3945157282564
6790339565584
6871360483584
6742170571761
50885465137382
62032240
63321040
62862000
79959600
80021700
78671160
97809500
97592100
97047500
140643600
141360840
140356080
253124960
253156160
253534080
395634400
396818600
397248400
677515280
681545280
675107940
5125362460
PENDIENTE
INTERCEPTO
COEFICIENTE DE
CORRELACIN
COEFICIENTE DE
DETERMINACIN
DESVIACIN
ESTNDAR
INTERVALO DE
CONFIANZA (IC1)
10127.0
-34026
0.9999
0.9998
636987.71
20676.04
-1558.64
CV
1.04
0.96
0.40
0.37
0.09
0.21
0.48
0.51
CUADRO # 5: EXACTITUD PARA TIAMINA CLORHIDRATO

% AGREGADO
Y=%
RECUPERACIN
Y^2
REAS
80
80
80
100
100
100
160
160
160
98.87
100.93
100.20
100.33
100.11
99.55
101.73
99.31
99.39
900.42
9775.28
10186.86
10040.04
10066.11
10022.01
9910.20
10348.99
9862.48
9878.37
90090.35
775403.00
791513.00
785775.00
978095.00
975921.00
970475.00
1610288.00
1572009.00
1573380.00
t Student experimental: 0.1687

t Student tabla: 2.365
MEDIA
S^2
CV
100.0000
1.04
1.09
1.04
99.9967
0.40
0.16
0.40
100.14
1.37
1.89
1.37
0.94
1.05
0.89
G Cochran exprimental: 0.8519

G Cochran tabla : 0.8709
CUADRO # 6: REPETIBILIDAD DEL MTODO PARA TIAMINA CLORHIDRATO
% PLACEBO
ANALTICO
CANTIDAD
ADICIONADA
(mcg/mL)
CANTIDAD
RECUPERADA
(mcg/mL)
Y=%
RECUPERACIN
Y^2
MEDIA
ARITMTICA
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
32.00
32.00
32.00
32.00
32.00
32.00
32.12
32.05
31.87
32.34
32.14
31.47
100.39
100.16
99.60
101.06
100.43
98.36
600.00
10078.15
10032.03
9920.16
10213.12
10086.18
9674.69
60004.34
100.39
INTERVALO
DE
CONFIANZA
(IC)
CV
0.9312 0.9312
100.80
99.20
CUADRO # 7: LINEALIDAD DEL MTODO PARA TIAMINA CLORHIDRATO

X=%
AGREGADO
Y = REAS (mAU)
X^2
Y^2
XY
80
80
80
90
90
90
100
100
100
120
120
120
160
160
160
200
200
200
260
260
260
3030
797102
832776
805403
871012
882727
880333
1000618
951918
949987
1125229
1128962
1151635
1524086
1524007
1523967
1932213
1963856
1908617
2527837
2622008
2621602
29525895
6400
6400
6400
8100
8100
8100
10000
10000
10000
14400
14400
14400
25600
25600
25600
40000
40000
40000
67600
67600
67600
516300.000
635371598404
693515866176
648673992409
758661904144
779206956529
774986190889
1001236381924
906147878724
902475300169
1266140302441
1274555197444
1326263173225
2322838135396
2322597336049
2322475417089
3733447077369
3856730388736
3642818852689
6389959898569
6874925952064
6872797046404
49305824846843
63768160
66622080
64432240
78391080
79445430
79229970
100061800
95191800
94998700
135027480
135475440
138196200
243853760
243841120
243834720
386442600
392771200
381723400
657237620
681722080
681616520
5043883400
PENDIENTE
INTERCEPTO
COEFICIENTE DE
CORRELACIN
COEFICIENTE DE
DETERMINACIN
DESVIACIN
ESTNDAR
INTERVALO DE
CONFIANZA (IC1)
9906.2
-23322
0.9981
0.9963
624202.05
22164.09
-1558.64
CV
2.30
0.70
2.97
1.26
0.00
1.43
2.09
1.54
CUADRO # 8 : PORCENTAJE DE RECOBRO
X = CONCENTRACIN (mcg/mL)
Y = % RECUPERACIN
Y ^2
25.60
25.60
25.60
28.80
28.80
28.80
32.00
32.00
32.00
38.40
38.40
38.40
51.20
51.20
51.20
64.00
64.00
64.00
83.20
83.20
83.20
101.64
106.19
102.69
98.54
99.87
99.60
102.64
97.65
97.45
95.91
96.23
98.16
96.28
96.28
97.27
97.45
99.04
96.26
96.93
100.54
100.53
2077.15
10330.69
11276.32
10545.24
9710.13
9974.02
9920.16
10534.97
9535.52
9496.50
9198.73
9260.21
9635.39
9269.84
9269.84
9461.45
9496.50
9808.92
9265.99
9395.42
10108.29
10106.28
205600.41
MEDIA ARITMTICA
IC(1)
IC(0)
IC()
98.91
10104.14
9708.25
7761.58
54405.58
100.14
97.68
CUADRO # 9: PRECISIN DEL MTODO PARA TIAMINA CLORHIDRATO (DA 1)

% TERICO
Y = % RECUPERACIN
Y^2
REAS
(mAU)
80
80
80
90
90
90
100
100
100
120
120
120
160
160
160
98.87
100.93
100.2
100.51
100.59
98.89
100.33
100.11
99.55
99.89
100.41
99.69
101.73
99.31
99.39
9775.28
10186.86
10040.04
10102.26
10118.35
9779.23
10066.11
10022.01
9910.20
9978.01
10082.17
9938.10
10348.99
9862.48
9878.37
775403
791513
785775
888440
889130
874124
978095
975921
970475
1172030
1178007
1169634
1610288
1572009
1573380
1500.40
150088.46
MEDIA
ARITMTICA
CV
784230.33
8165
1.04
883898.00
8472
0.96
974830.33
3925
0.40
1173223.67
4312
0.37
1585225.67
21715
1.37
0.83
CUADRO # 10: PRECISIN DEL MTODO PARA TIAMINA CLORHIDRATO (DA 2)

% TERICO
Y = % RECUPERACIN
Y^2
80
80
80
90
90
90
100
100
100
120
120
120
160
160
160
103.66
100.19
103.39
101.05
101.76
100.85
101
100.38
98.31
100.33
102.98
100.92
99.4
97.97
99.86
1512.05
10745.40
10038.04
10689.49
10211.10
10355.10
10170.72
10201.00
10076.14
9664.86
10066.11
10604.88
10184.85
9880.36
9598.12
9972.02
152458.18
COEFICIENTE DE VARIACIN GLOBAL:

DESVIACIN ESTNDAR GLOBAL:
G COCHRAN EXPERIMENTAL:
G COCHRAN TABLAS:
t STUDENT EXPERIMENTAL:
t STUDENT TABLAS:
REAS
(mAU)
812994
785703
810795
893203
899483
891439
984636
978536
958321
1177140
1208179
1184041
1573380
1550843
1580761
MEDIA
ARITMTICA
CV
803164.00
15162
1.89
894708.33
4228
0.47
973831.00
13774
1.41
1189786.67
16298
1.37
1568328.00
15586
0.99
1.23
1.33
1.33
0.2965
0.6020
1.709
2.048
CUADRO # 11 : ESTABILIDAD ANALTICA PARA TIAMINA CLORHIDRATO

HORAS
24
36
REAS
% RECUPERACIN
959243
1002910
975600
964418
973108
986102
1034152
1014482
987609
1022036
1073931
1060246
97.96
102.42
99.63
98.49
99.37
100.7
105.61
103.6
100.85
104.37
109.67
107.44
/di/
MEDIA ARITMTICA
0.00
100.00
0.48
99.52
3.35
103.35
7.16
107.160
CUADRO # 12 : ROBUSTEZ PARA TIAMINA CLORHIDRATO

CONDICIN
BAJA (72:28)
NORMAL (75:25)
ALTA (78:22)
REAS
% RECUPERACIN
1126936
1080448
1058776
1092102
1065443
1121914
99.03
94.94
98.45
101.55
93.62
98.58
MEDIA ARITMTICA
/di/
97
3.02
100
0.00
96
3.90
CUADRO # 13 : TOLERANCIA PARA TIAMINA CLORHIDRATO

CONDICIN
REACTIVO I
REACTIVO II
COLUMNA I
COLUMNA II
% RECUPERACIN
REAS
99.18
101.31
99.51
111.00
93.04
95.96
99.18
101.31
99.51
103.75
99.84
96.40
1199.99
977232
998122
980408
1263214
1058776
1092102
977232
998122
980408
1069775
1029421
993947
GLOBAL
CV
MEDIA
ARITMTICA
11256.59
1.14
985254
109685.03
9.64
1138031
11256.59
1.14
985254
37940.16
3.68
1031048
42534.59
4.45
4139586
G Cochran experimental: 0.7970
CUADRO # 14 : PRECISIN DEL SISTEMA PARA RIBOFLAVINA

% AGREGADO
% RECUPERADO
Y= REAS
(mAU)
Y^2
MEDIA
ARITMTICA
CV
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
Media
102.43
100.08
100.00
104.31
106.03
102.77
903859
883117
882410
920447
935578
906834
5432245
816961091881
779895635689
778647408100
847222679809
875306194084
822347903556
4920380913119
905374
20816
2.30
CUADRO # 15 : ADECUABILIDAD DEL SISTEMA PARA RIBOFLAVINA

% AGREGADO% RECUPERADO
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
Media
Y=REAS
(mAU)
Y^2
908239
870842
894248
905642
899342
4478313
824898081121
758365788964
799679485504
820187432164
808816032964
4011946820717
102.93
98.65
101.34
102.63
101.92
MEDIA
ARITMTICA
CV
895663
14911.03
1.66
CUADRO # 16 : RESOLUCIN CROMATOGRFICA PARA RIBOFLAVINA

REAS
ALTURA
BASE
FACTOR DE
CAPACIDAD
TIEMPO DE
RETENCIN
908239
870842
894248
905642
899342
895663
113012
109955
112407
112700
111568
111928
0.57
0.55
0.56
0.57
0.55
0.56
4.65
4.63
4.63
4.65
4.63
4.64
2.26
2.25
2.25
2.26
2.25
2.25
RESOLUCIN ASIMETRA
1.14
1.16
1.16
1.12
1.12
1.14
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
PLATOS
TERICOS
1957.89
1981.35
1976.40
1973.86
1928.92
1963.68
CUADRO # 17: LINEALIDAD DEL SISTEMA PARA RIBOFLAVINA

X=%
AGREGADO
Y = REAS
X^2
Y^2
XY
80
80
80
90
90
90
100
100
100
120
120
120
160
160
160
200
200
200
260
260
260
3030
705020
720553
706821
830226
821156
827002
877469
885869
883826
1069382
1086723
1075396
1502613
1470397
1481013
1861602
1863741
1863036
2406522
2439723
2432220
27810310
6400
6400
6400
8100
8100
8100
10000
10000
10000
14400
14400
14400
25600
25600
25600
40000
40000
40000
67600
67600
67600
516300.000
497053200400
519196625809
499595926041
689275211076
674297176336
683932308004
769951845961
784763885161
781148398276
1143577861924
1180966878729
1156476556816
2257845827769
2162067337609
2193399506169
3465562006404
3473530515081
3470903137296
5791348136484
5952248316729
5915694128400
44062834786474
56401600
57644240
56545680
74720340
73904040
74430180
87746900
88586900
88382600
128325840
130406760
129047520
240418080
235263520
236962080
372320400
372748200
372607200
625695720
634327980
632377200
4768862980
PENDIENTE
INTERCEPTO
COEFICIENTE DE
CORRELACIN
COEFICIENTE DE
DETERMINACIN
DESVIACIN
ESTNDAR
INTERVALO DE
CONFIANZA (IC1)
9558.7
-54889
0.9997
0.9993
601399.53
20676.04
-1558.64
CV
1.20
0.56
0.50
0.82
1.11
0.06
0.72
0.71
CUADRO # 18 : EXACTITUD PARA RIBOFLAVINA

% AGREGADO
Y=%
RECUPERACIN
Y^2
REAS
80
80
80
100
100
100
160
160
160
99.18
101.37
99.44
99.44
100.39
100.16
99.58
97.63
99.47
896.66
9836.67
10275.88
9888.31
9888.31
10078.15
10032.03
9916.18
9531.62
9894.28
89341.43
705020
720553
706821
877469
885869
883826
1478537
1449542
1476811
9184448
MEDIA
S^2
CV
99.9967
1.20
1.43
1.20
99.9967
0.50
0.25
0.50
98.89
1.10
1.20
1.11
Promedio
1.01
0.96
1.02
CUADRO # 19 : REPETIBILIDAD DEL MTODO PARA RIBOFLAVINA
% PLACEBO
ANALTICO
CANTIDAD
ADICIONADA
(mcg/mL)
CANTIDAD
RECUPERADA
(mcg/mL)
Y=%
RECUPERACIN
Y^2
MEDIA
ARITMTICA
CV
INTERVALO
DE
CONFIANZA
(IC)
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
12.80
12.80
12.80
12.80
12.80
12.80
12.71
12.83
12.80
13.09
12.79
12.78
100.58
100.39
100.16
102.43
100.08
100.00
603.64
10116.34
10078.15
10032.03
10491.90
10016.01
10000.00
60734.43
100.61
0.9184
0.91
100.78
99.21
CUADRO # 20 : LINEALIDAD DEL MTODO PARA RIBOFLAVINA

X = % AGREGADO
Y = REAS
X^2
Y^2
XY
80
80
80
90
90
90
100
100
100
120
120
120
160
160
160
200
200
200
260
260
260
3030
738353
735646
731110
809435
798656
817531
920263
882734
892325
1051943
1067820
1083260
1415377
1403795
1452776
1829822
1832489
1825513
2377808
2475057
2460803
27602516
6400
6400
6400
8100
8100
8100
10000
10000
10000
14400
14400
14400
25600
25600
25600
40000
40000
40000
67600
67600
67600
516300.000
545165152609
541175037316
534521832100
655185019225
637851406336
668356935961
846883989169
779219314756
796243905625
1106584075249
1140239552400
1173452227600
2003292052129
1970640402025
2110558106176
3348248551684
3358015935121
3332497713169
5653970884864
6125907153249
6055551404809
43383560651572
59068240
58851680
58488800
72849150
71879040
73577790
92026300
88273400
89232500
126233160
128138400
129991200
226460320
224607200
232444160
365964400
366497800
365102600
618230080
643514820
639808780
4731239820
PENDIENTE
INTERCEPTO
COEFICIENTE DE
CORRELACIN
COEFICIENTE DE
DETERMINACIN
DESVIACIN
ESTNDAR
9462.1
-5084
0.9986
0.9973
595930.41
CV
0.50
1.17
2.17
1.47
1.80
0.19
2.15
1.35
CUADRO # 21 : PORCENTAJE DE RECOBRO PARA RIBOFLAVINA

X = CONCENTRACIN
(mcg/mL)
Y = % RECUPERACIN
Y ^2
10.24
10.24
10.24
11.52
11.52
11.52
12.80
12.80
12.80
15.36
15.36
15.36
20.48
20.48
20.48
25.60
25.60
25.60
33.28
33.28
33.28
103.88
103.49
102.85
97.98
96.66
98.66
104.29
100.04
101.13
97.66
99.13
100.56
95.33
94.55
97.85
98.23
98.37
98.00
98.01
102.01
101.43
2090.11
10791.05
10710.18
10578.12
9600.08
9343.16
9733.80
10876.40
10008.00
10227.28
9537.48
9826.76
10112.31
9087.81
8939.70
9574.62
9649.13
9676.66
9604.00
9605.96
10406.04
10288.04
208176.59
MEDIA ARITMTICA
IC(1)
IC(0)
IC()
99.53
11569.67
7354.53
325380.27
-335548.27
100.80
98.25
CUADRO # 22: PRECISIN DEL MTODO PARA RIBOFLAVINA (DA 1)

% TERICO
Y = % RECUPERACIN
Y^2
REAS (mAU)
80
80
80
90
90
90
100
100
100
120
120
120
160
160
160
99.18
101.37
99.44
100.49
99.40
100.11
99.44
100.39
100.16
99.28
100.89
99.83
99.58
97.63
99.47
1496.66
9836.67
10275.88
9888.31
10098.24
9880.36
10022.01
9888.31
10078.15
10032.03
9856.52
10178.79
9966.03
9916.18
9531.62
9894.28
149343.38
705020
720553
706821
830226
821156
827002
877469
885869
883826
1069382
1086723
1075396
1478537
1449552
1466811
MEDIA
ARITMTICA
CV
710798.00
8496
1.20
826128.00
4598
0.56
882388.00
4381
0.50
1077167.00
8805
0.82
1464966.67
14580
1.00
0.81
CUADRO # 23: PRECISIN DEL MTODO PARA RIBOFLAVINA (DA 2)

% TERICO
Y = % RECUPERACIN
Y^2
REAS (mAU)
80
80
80
90
90
90
100
100
100
120
120
120
160
160
160
102.91
100.12
102.53
96.40
97.78
97.85
102.43
100.08
100.00
99.89
101.75
100.21
98.80
96.16
99.11
1496.02
10590.47
10024.01
10512.40
9292.96
9560.93
9574.62
10491.90
10016.01
10000.00
9978.01
10353.06
10042.04
9761.44
9246.75
9822.79
149267.40
731460
711666
728803
796414
807833
808357
903859
883117
882410
1076042
1096044
1079410
1466811
1427605
1471397

G COCHRAN TABLAS:
t STUDEN EXPERIMENTAL:
MEDIA
ARITMTICA
CV
723976.33
10744
1.48
804201.33
6749
0.84
889795.33
12185
1.37
1083832.00
10709
0.99
1455271.00
24069
1.65
1.27
1.59
1.59
0.3700
0.6020
0.840
2.048
CUADRO # 24 : ESTABILIDAD ANALTICA PARA RIBOFLAVINA

HORAS
24
36
REAS
% RECUPERACIN
953944
960321
947074
942078
939908
961103
1016694
989803
984400
1000938
1034627
1041182
100.02
100.69
99.30
98.77
98.55
100.77
106.60
103.78
103.21
104.94
108.48
109.16
/di/
MEDIA ARITMTICA
0.00
100.00
0.64
99.36
4.53
104.53
7.52
107.527
CUADRO # 25: ROBUSTEZ PARA RIBOFLAVINA

CONDICIN
BAJA (72:28)
NORMAL (75:25)
ALTA (78:22)
REAS
% RECUPERACIN
979596
976226
935285
979659
951396
961283
100.80
100.45
97.68
102.32
97.90
98.91
MEDIA
ARITMTICA
/di/
101
0.63
100
0.00
98
1.60
CUADRO # 26 : TOLERANCIA PARA RIBOFLAVINA

CONDICIN
REACTIVO I
REACTIVO II
COLUMNA I
COLUMNA II
% RECUPERACIN
REAS
99.94
101.59
98.47
102.96
96.24
100.80
99.94
101.59
98.47
103.40
100.25
96.38
1200.03
920447
935578
906834
1000573
935285
979659
920447
935578
906834
1124377
1090065
1047653
GLOBAL
CV
MEDIA
ARITMTICA
14378.68
1.56
920953
33339.09
3.43
971839
14378.68
1.56
920953
38433.20
3.53
1087365
74734.32
2.30
975278


CUADRO # 27: PRECISIN DEL SISTEMA PARA NICOTINAMIDA

% AGREGADO
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
Media
% RECUPERADO Y= REAS (mAU)

100.54
99.65
98.55
99.47
102.06
99.47
442115
438181
433371
437423
448777
437411
2637278
Y^2
MEDIA
ARITMTICA
CV
195465673225
192002588761
187810423641
191338880929
201400795729
191328382921
1159346745206
439546
5307.92
1.21
CUADRO #28 : ADECUABILIDAD DEL SISTEMA PARA NICOTINAMIDA

% AGREGADO% RECUPERADO
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
Media
97.80
93.40
95.69
97.25
97.25
Y= REAS
(mAU)
Y^2
430071
410756
420821
428768
427679
2118095
184961065041
168720491536
177090314041
183841997824
182909327041
897523195483
MEDIA
ARITMTICA
CV
423619
8029.78
1.90
CUADRO # 29: RESOLUCIN CROMATOGRAFCA PARA NICOTINAMIDA

REAS
ALTURA
BASE
FACTOR DE
CAPACIDAD
430071
410756
420821
428768
427679
423619
61564
59640
60742
61092
60474
60702
0.55
0.54
0.52
0.52
0.50
0.53
6.25
6.25
6.25
6.25
6.25
6.25
TIEMPO DE
PLATOS
RESOLUCIN ASIMETRA
RETENCIN
TERICOS
2.90
2.90
2.90
2.90
2.90
2.90
3.38
3.43
3.43
3.38
3.39
3.40
0.970
0.960
0.950
0.980
0.970
0.97
4434.66
4440.27
4423.16
4357.12
4321.12
4395.27
CUADRO # 30 : LINEALIDAD DEL SISTEMA PARA NICOTINAMIDA

X=%
AGREGADO
Y = REAS
X^2
Y^2
XY
80
80
80
90
90
90
100
100
100
120
120
120
160
160
160
200
200
200
260
260
260
3030
347807
356136
351513
397236
400191
397095
438392
441929
438883
526583
531933
522074
707875
706694
704139
886317
884767
884875
1155295
1163390
1169217
13412341
6400
6400
6400
8100
8100
8100
10000
10000
10000
14400
14400
14400
25600
25600
25600
40000
40000
40000
67600
67600
67600
516300.000
120969709249
126832850496
123561389169
157796439696
160152836481
157684439025
192187545664
195301241041
192618287689
277289655889
282952716489
272561261476
501087015625
499416409636
495811731321
785557824489
782812644289
783003765625
1334706537025
1353476292100
1367068393089
10162848985563
27824560
28490880
28121040
35751240
36017190
35738550
43839200
44192900
43888300
63189960
63831960
62648880
113260000
113071040
112662240
177263400
176953400
176975000
300376700
302481400
303996420
2290574260
PENDIENTE
INTERCEPTO
COEFICIENTE DE
CORRELACIN
COEFICIENTE DE
DETERMINACIN
DESVIACIN
ESTNDAR
INTERVALO DE
CONFIANZA (IC1)
4491.8
-9419
0.9999
0.9998
282543.45
9967.68
-984.10
CV
1.19
0.44
0.44
0.94
0.27
0.10
0.60
0.57
CUADRO # 31 : EXACTITUD PARA NICOTINAMIDA

% AGREGADO
Y=%
RECUPERACIN
Y^2
REAS
80
80
80
100
100
100
160
160
160
98.86
101.22
99.91
99.69
100.49
99.80
101.27
99.53
99.19
899.96
9773.30
10245.49
9982.01
9938.10
10098.24
9960.04
10255.61
9906.22
9838.66
89997.66
347807
356136
351513
438392
441929
438883
718254
705860
703441
4502215

MEDIA
ARITMTICA
S^2
CV
100.00
1.18
0.90
1.18
99.99
0.43
0.18
0.43
100.00
1.12
3.24
1.12
Promedio
0.84
1.44
0.84

CUADRO # 32 : REPETIBILIDAD DEL MTODO PARA NICOTINAMIDA

CANTIDAD
CANTIDAD
% PLACEBO
Y=%
ADICIONADA RECUPERADA
ANALTICO
RECUPERACIN
(mcg/mL)
(mcg/mL)
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
12.80
12.80
12.80
12.80
12.80
12.80
12.79
12.89
12.80
12.90
12.78
12.64
99.69
100.50
99.80
100.54
99.65
98.58
598.76
Y^2
MEDIA
ARITMTICA
CV
INTERVALO
DE
CONFIANZA
(IC)
9938.10
10100.25
9960.04
10108.29
9930.12
9718.02
59754.82
99.79
0.7156
0.72
100.41
99.20
CUADRO # 33 : LINEALIDAD DEL MTODO PARA NICOTINAMIDA

X=%
80
80
80
90
90
90
100
100
100
120
120
120
160
160
160
200
200
200
260
260
260
3030
Y = REAS
350409
345086
348247
376161
370069
381039
446212
428212
430843
504233
513930
515821
663991
665963
668407
856970
866513
852586
1106447
1152121
1144609
12987869
X^2
6400
6400
6400
8100
8100
8100
10000
10000
10000
14400
14400
14400
25600
25600
25600
40000
40000
40000
67600
67600
67600
516300.000
Y^2
122786467281
119084347396
121275973009
141497097921
136951064761
145190719521
199105148944
183365516944
185625690649
254250918289
264124044900
266071304041
440884048081
443506717369
446767917649
734397580900
750844779169
726902887396
1224224963809
1327382798641
1310129762881
9544369749551
XY
28032720
27606880
27859760
33854490
33306210
34293510
44621200
42821200
43084300
60507960
61671600
61898520
106238560
106554080
106945120
171394000
173302600
170517200
287676220
299551460
297598340
2219335930
PENDIENTE
INTERCEPTO
COEFICIENTE DE
CORRELACIN
COEFICIENTE DE
DETERMINACIN
DESVIACIN
ESTNDAR
4365.5
-11407
0.9987
0.9973
274932.99
CV
0.77
1.46
2.23
1.22
0.33
0.83
2.16
1.29
CUADRO # 34 : PORCENTAJE DE RECOBRO DE NICOTINAMIDA

X = CONCENTRACIN
10.24
10.24
10.24
11.52
11.52
11.52
12.80
12.80
12.80
15.36
15.36
15.36
20.48
20.48
20.48
25.60
25.60
25.60
33.28
33.28
33.28
Y = % RECUPERACIN
100.75
99.22
100.13
94.47
92.94
95.70
101.47
97.38
97.98
95.70
97.55
97.90
94.02
94.30
94.64
96.80
97.88
96.30
95.17
99.10
98.45
2037.85
Y ^2
10150.56
9844.61
10026.02
8924.58
8637.84
9158.49
10296.16
9482.86
9600.08
9158.49
9516.00
9584.41
8839.76
8892.49
8956.73
9370.24
9580.49
9273.69
9057.33
9820.81
9692.40
197864.06
MEDIA ARITMTICA
IC(1)
IC(0)
IC()
97.04
4474.1
4256.86
5625.29
-28438.19
98.11
95.97
CUADRO # 35: PRECISIN DEL MTODO PARA NICOTINAMIDA (DIA 1)

% TERICO
Y=%
RECUPERACIN
Y^2
REAS (mAU)
80
80
80
90
90
90
100
100
100
120
120
120
160
160
160
98.86
101.23
99.91
99.76
100.51
99.73
99.69
100.50
99.81
99.95
100.96
99.09
101.70
99.95
99.60
1501.25
9773.30
10247.51
9982.01
9952.06
10102.26
9946.07
9938.10
10100.25
9962.04
9990.00
10192.92
9818.83
10342.89
9990.00
9920.16
150258.40
347807
356136
351513
397236
400191
397095
438392
441929
438883
526583
531933
522074
718254
705860
703441
MEDIA
ARITMTICA
CV
351818.67
4173
1.19
398174.00
1748
0.44
439734.67
1916
0.44
526863.33
4935
0.94
709185.00
7947
1.12
0.82
CUADRO # 36: PRECISIN DEL MTODO PARA NICOTINAMIDA (DIA 2)

% TERICO
80
80
80
90
90
90
100
100
100
120
120
120
160
160
160
Y=%
RECUPERACIN
103.85
101.36
104.44
100.45
101.77
101.47
100.54
99.65
98.55
100.80
103.28
101.14
99.60
98.33
100.30
1515.53

G COCHRAN TABLAS:
t STUDEN TABLA:
Y^2
REAS (mAU)
10784.82
10273.85
10907.71
10090.20
10357.13
10296.16
10108.29
9930.12
9712.10
10160.64
10666.76
10229.30
9920.16
9668.79
10060.09
153166.14
365367
356615
367458
399956
405237
404050
442115
438181
433371
531093
544143
532871
703441
694437
708213
1.42
1.43
0.2333
0.6020
2.16
2.048
MEDIA
ARITMTICA
CV
363146.67
5752
1.58
403081.00
2771
0.69
437889.00
4379
1.00
536035.67
7077
1.32
702030.33
6996
1.00
1.12
CUADRO # 37: ESTABILIDAD ANALTICA PARA NICOTINAMIDA

HORAS
24
36
REAS
% RECUPERACIN
431740
445978
432587
441447
440439
448888
460896
453871
445478
452237
472438
470969
98.85
102.11
99.04
101.07
100.84
102.77
105.52
103.92
101.99
103.54
108.17
107.83
/di/
MEDIA ARITMTICA
0.00
100.00
1.56
101.56
3.81
103.81
6.51
106.51
CUADRO # 38 : ROBUSTEZ PARA NICOTINAMIDA

CONDICION
BAJA (72:28)
NORMAL (75:25)
ALTA (78:22)
REAS
% RECUPERACIN
480814
482876
464010
485058
488077
496223
98.31
98.73
97.78
102.22
99.80
101.56
MEDIA
ARITMTICA
/di/
98.52
1.48
100.00
0.00
100.68
0.68
CUADRO # 39 : TOLERANCIA PARA NICOTINAMIDA

CONDICIN
REACTIVO I
REACTIVO II
COLUMNA I
COLUMNA II
% RECUPERACIN
99.14
101.72
99.14
105.95
94.88
99.18
99.14
101.72
99.14
103.35
99.61
97.03
1200.00
REAS
437423
448777
437411
518151
464010
485058
437423
448777
437411
466218
449341
437719
GLOBAL

CV
MEDIA
ARITMTICA
6558.70
1.49
441203.67
27292.90
5.58
489073.00
6558.70
1.49
441203.67
14330.02
3.18
451092.67
24750.29
2.88
455643.25

CUADRO # 40: LIMITE DE DETECCIN

PARA NICOTINAMIDA
CUADRO# 41: LIMITE DE CUANTIFICACIN

PARA NICOTINAMIDA
Muestra
rea
Muestra
rea
Blanco
B x 3 veces
2044
6132
Blanco
B x 10 veces
2044
20440
Concentracin
mcg/mL
0.10
0.20
0.30
0.40
0.50
Concentracin
mcg/mL
0.50
1.00
1.50
2.00
2.50
reas
9470
11880
14703
20345
26491
reas
31945
36164
62974
49315
54688
CUADRO # 42: PRECISIN DEL SISTEMA PARA PIRIDOXINA CLORHIDRATO

% AGREGADO
% RECUPERADO
Y= REAS
(mAU)
Y^2
MEDIA
ARITMTICA
CV
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
Media
100.76
99.99
98.69
100.91
102.89
100.56
799919
793762
783490
799919
816781
798262
4792133
639870406561
630058112644
613856580100
639870406561
667131201961
637222220644
3828008928471
798689
10824.17
1.36
CUADRO # 43: ADECUABILIDAD DEL SISTEMA PARA PIRIDOXINA CLORHIDRATO

% AGREGADO
% RECUPERADO
Y= REAS
(mAU)
Y^2
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
Media
100.09
97.49
101.92
100.59
99.43
794613
773948
809106
798511
789558
3965736
631409819769
598995506704
654652519236
637619817121
623401835364
3146079498194
MEDIA
ARITMTICA
CV
793147
12914.08
1.63
CUADRO # 44: RESOLUCIN CROMATOGRFICA PARA PIRIDOXINA CLORHIDRATO

REAS
ALTURA
BASE
FACTOR DE
CAPACIDAD
TIEMPO DE
RETENCIN
794613
773948
809106
798511
789558
793147
91888
89522
91358
90876
898412
252411
0.99
0.81
0.97
0.83
0.88
0.90
8.98
8.98
8.97
8.98
8.98
8.98
3.99
3.99
3.98
3.99
3.99
3.99
RESOLUCIN ASIMETRA
4.000
5.300
3.530
2.480
1.640
3.39
PLATOS
TERICOS
0.910
0.900
0.930
0.930
0.920
0.92
5371.45
5323.35
5202.56
5193.15
5203.15
5258.73
CUADRO # 45: LINEALIDAD DEL SISTEMA PARA PIRIDOXINA CLORHIDRATO

X=%
AGREGADO
80
80
80
90
90
90
100
100
100
120
120
120
160
160
160
200
200
200
260
260
260
3030
Y = REAS
X^2
Y^2
XY
633287
645805
638840
727451
729793
725073
791487
798328
791718
951643
956658
944272
1287102
1289558
1286311
1588719
1588864
1596956
2082935
2097541
2106393
24258734
6400
6400
6400
8100
8100
8100
10000
10000
10000
14400
14400
14400
25600
25600
25600
40000
40000
40000
67600
67600
67600
516300
401052424369
417064098025
408116545600
529184957401
532597822849
525730855329
626451671169
637327595584
626817391524
905624399449
915194528964
891649609984
1656631558404
1662959835364
1654595988721
2524028060961
2524488810496
2550268465936
4338618214225
4399678246681
4436891470449
33164972551484
50662960
51664400
51107200
65470590
65681370
65256570
79148700
79832800
79171800
114197160
114798960
113312640
205936320
206329280
205809760
317743800
317772800
319391200
541563100
545360660
547662180
4137874250
PENDIENTE
INTERCEPTO
COEFICIENTE DE
CORRELACIN
COEFICIENTE DE
DETERMINACIN
DESVIACIN
ESTNDAR
8060.3
7809
0.9998
0.9996
507041.48
CV
0.98
0.32
0.49
0.66
0.13
0.30
0.57
0.49
INTERVALO DE
CONFIANZA
(IC1)
17919.49
-1798.89
CUADRO # 46: EXACTITUD PARA PIRIDOXINA CLORHIDRATO

Y= %
% AGREGADO RECUPERACI
N
80
99.02
80
101.01
80
99.92
99.70
100
100.56
100
99.73
100
101.56
160
99.93
160
98.68
160
900.11
Y^2
REAS
9805.0
10203.0
9984.0
9940.1
10112.3
9946.1
10314.4
9986.0
9737.7
90028.64
633287
645805
638840
791487
798328
791718
1298871
1275667
1262049
8136052
MEDIA
ARITMTICA
S^2
CV
99.98
1.00
0.99
1.00
100.00
0.49
0.24
0.49
100.06
1.44
2.09
1.44
Promedio
0.98
1.11
0.91
CUADRO # 47 : REPETIBILIDAD DEL MTODO PARA PIRIDOXINA CLORHIDRATO
% PLACEBO
ANALTICO
CANTIDAD
ADICIONADA
(mcg/mL)
CANTIDAD
RECUPERADA
(mcg/mL)
Y=%
RECUPERACIN
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
64.00
64.00
64.00
64.00
64.00
64.00
63.87
64.42
63.88
64.55
64.05
63.22
99.70
100.56
99.73
100.76
100.36
98.70
599.81
Y^2
MEDIA
ARITMTICA
CV
INTERVALO
DE
CONFIANZA
(IC)
9940.09
10112.31
9946.07
10152.58
10072.13
9741.69
59964.87
99.97
0.7573
0.13
100.62
99.32
CUADRO # 48 : LINEALIDAD DEL MTODO PARA PIRIDOXINA CLORHIDRATO

X=%
AGREGADO
Y = REAS
X^2
Y^2
XY
80
80
80
90
90
90
100
100
100
120
120
120
160
160
160
200
200
200
260
260
260
3030
659484
643892
644622
702366
693112
719783
816015
782492
781800
914369
938351
941020
1233677
1238776
1248192
1594948
1604397
1576295
2061769
2133073
2132237
24060670
6400
6400
6400
8100
8100
8100
10000
10000
10000
14400
14400
14400
25600
25600
25600
40000
40000
40000
67600
67600
67600
516300.000
434919146256
414596907664
415537522884
493317997956
480404244544
518087567089
665880480225
612293730064
611211240000
836070668161
880502599201
885518640400
1521958940329
1534565978176
1557983268864
2543859122704
2574089733609
2484705927025
4250891409361
4550000423329
4546434624169
32812830172010
52758720
51511360
51569760
63212940
62380080
64780470
81601500
78249200
78180000
109724280
112602120
112922400
197388320
198204160
199710720
318989600
320879400
315259000
536059940
554598980
554381620
4114964570
PENDIENTE
INTERCEPTO
COEFICIENTE DE
CORRELACIN
COEFICIENTE DE
DETERMINACIN
DESVIACIN
ESTNDAR
8132.0
-27578
0.9988
0.9974
512123.48
CV
1.36
1.92
2.46
1.58
0.59
0.90
1.94
1.54
CUADRO # 49 : PORCENTAJE DE RECOBRO

X = CONCENTRACIN
Y = % RECUPERACIN
Y ^2
51.20
51.20
51.20
57.60
57.60
57.60
64.00
64.00
64.00
76.80
76.80
76.80
102.40
102.40
102.40
128.00
128.00
128.00
166.40
166.40
166.40
103.15
100.72
100.83
96.55
95.28
98.95
102.79
98.60
98.48
96.16
98.68
98.97
95.81
96.20
96.93
100.22
100.81
99.04
98.38
101.79
101.75
2080.09
10639.92
10144.52
10166.69
9321.90
9078.28
9791.10
10565.78
9721.96
9698.31
9246.75
9737.74
9795.06
9179.56
9254.44
9395.42
10044.05
10162.66
9808.92
9678.62
10361.20
10353.06
206145.95
MEDIA ARITMTICA
IC(1)
IC(0)
IC()
99.05
8996.35
7267.65
107950.23
-163106.23
100.113
97.987
CUADRO # 50 : PRECISIN DEL MTODO PARA PIRIDOXINA CLORHIDRATO (DIA 1)

% TERICO
Y = % RECUPERACIN
Y^2
REAS (mAU)
80
80
80
90
90
90
100
100
100
120
120
120
160
160
160
99.06
101.01
99.93
100.00
100.32
99.67
99.70
100.56
99.73
100.08
100.61
99.31
100.87
99.07
98.08
1498.00
9812.88
10203.02
9986.00
10000.00
10064.10
9934.11
9940.09
10112.31
9946.07
10016.01
10122.37
9862.48
10174.76
9814.86
9619.69
149608.76
633287
645805
638840
727451
729793
725073
791487
798328
791718
951643
956658
944272
1298871
1275677
1262949
MEDIA
ARITMTICA
CV
639310.67
6272
0.98
727439.00
2360
0.32
793844.33
3885
0.49
950857.67
6230
0.66
1279165.67
18213
1.42
0.77
CUADRO # 51 : PRECISIN DEL MTODO PARA PIRIDOXINA CLORHIDRATO (DIA 2)

% TERICO
Y = % RECUPERACIN
Y^2
REAS (mAU)
80
80
80
90
90
90
100
100
100
120
120
120
160
160
160
104.57
101.78
104.71
100.01
101.13
100.92
100.76
100.00
98.69
100.90
103.34
101.55
98.01
96.87
98.41
1511.65
10934.88
10359.17
10964.18
10002.00
10227.28
10184.85
10152.58
10000.00
9739.72
10180.81
10679.16
10312.40
9605.96
9383.80
9684.53
152411.31
668514
650728
669440
727533
735635
734111
799919
793762
783490
959444
982651
965564
1262049
1247380
1267133

G COCHRAN TABLAS:
t STUDENT TABLAS:
1.73
1.73
0.3797
0.602
1.016
2.048
MEDIA
ARITMTICA
CV
662894.00
10546
1.59
732426.33
4306
0.59
792390.33
8300
1.05
969219.67
12028
1.24
1258854.00
10257
0.81
1.06
CUADRO # 52 : ESTABILIDAD ANALTICA PARA PIRIDOXINA CLORHIDRATO

HORAS
24
36
REAS
% RECUPERACIN
803292
834588
805498
808360
820572
829312
855253
847127
828929
840280
881873
875276
98.63
102.47
98.9
99.25
100.75
101.82
105.01
104.01
101.78
103.17
108.28
107.47
/di/
MEDIA ARITMTICA
0.00
100.00
0.61
100.61
3.60
103.60
6.31
106.307
CUADRO # 53 : ROBUSTEZ PARA PIRIDOXINA CLORHIDRATO

CONDICIN
BAJA (72:28)
NORMAL (75:25)
ALTA (78:22)
REAS
% RECUPERACIN
865417
873995
847049
891815
931205
925296
96.40
97.35
97.43
102.57
103.72
103.07
MEDIA
ARITMETICA
97
100
103
/di/
3.13
0.00
3.40
CUADRO # 54 : TOLERANCIA PARA PIRIDOXINA CLORHIDRATO

CONDICIN
REACTIVO I
REACTIVO II
COLUMNA I
COLUMNA II
% RECUPERACIN
REAS
99.47
101.42
99.12
106.31
94.35
99.34
99.47
101.42
99.12
104.65
99.81
95.54
1200.02
801071
816781
798262
954428
847049
891815
801071
816781
798262
910143
868091
830936
GLOBAL
CV
MEDIA
ARITMTICA
9980.38
1.24
805371
53936.12
6.01
897764
9980.38
1.24
805371
39628.72
4.56
869723
51313.30
3.30
3378230
CUADRO # 55 : PRECISIN DEL SISTEMA PARA CIPROHEPTADINA CLORHIDRATO

% AGREGADO
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
Media
Y^2
MEDIA
ARITMTICA
CV
16127115476164
16366855086409
16182646290756
15907869010089
15475207293316
15977112191044
96036805347778
4000613
38374.71
0.96
% RECUPERADO Y= REAS (mAU)

100.38
101.12
100.55
99.70
98.33
99.91
4015858
4045597
4022766
3988467
3933854
3997138
24003680
CUADRO # 56 : ADECUABILIDAD DEL SISTEMA PARA CIPROHEPTADINA CLORHIDRATO

% AGREGADO % RECUPERADO
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
Media
101.21
101.66
100.34
101.25
100.55
101.00
Y= REAS
(mAU)
Y^2
3857131
3885067
3802785
3859227
3816039
19220249
14877459551161
15093745594489
14461173756225
14893633037529
14562153649521
73888165588925
MEDIA
ARITMTICA
CV
3844050
33805.56
0.88
CUADRO # 57 : RESOLUCION CROMATOGRAFICA PARA CIPROHEPTADINA CLORHIDRATO

REAS
ALTURA
BASE
FACTOR DE
CAPACIDAD
3857131
3885067
3802785
3859227
3816039
3844050
307083
309726
305158
308418
304612
306999
1.54
1.73
1.70
1.61
1.61
1.64
26.65
26.67
26.70
26.70
26.72
26.69
TIEMPO DE
RESOLUCIN ASIMETRA
RETENCIN
5.53
5.53
5.53
5.53
5.53
5.53
0.000
3.150
2.760
3.430
3.880
2.64
0.98
0.98
0.98
0.98
0.98
0.98
PLATOS
TERICOS
4795.68
4817.87
4897.60
4853.01
4819.18
4836.67
CUADRO # 58: LINEALIDAD DEL SISTEMA PARA CIPROHEPTADINA CLORHIDRATO

X=%
AGREGADO
Y = REAS
X^2
Y^2
XY
80
80
80
90
90
90
100
100
100
110
110
110
120
120
120
3086719
3044828
3034393
3415898
3442077
3426177
3988467
3933854
3997138
4447845
4391922
4345531
4997335
4977882
4921000
6400
6400
6400
8100
8100
8100
10000
10000
10000
12100
12100
12100
14400
14400
14400
9527834184961
9270977549584
9207540878449
11668359146404
11847894073929
11738688835329
15907869010089
15475207293316
15977112191044
19783325144025
19288978854084
18883639671961
24973357102225
24779309205924
24216241000000
1500
59451066
153000.000
242546334141324
246937520
243586240
242751440
307430820
309786930
308355930
398846700
393385400
399713800
489262950
483111420
478008410
599680200
597345840
590520000
6088723600
PENDIENTE
INTERCEPTO
COEFICIENTE DE
CORRELACIN
COEFICIENTE DE
DETERMINACIN
DESVIACIN
ESTNDAR
INTERVALO DE
CONFIANZA (IC1)
47872.0
-823829
0.9969
0.9939
702938.61
205187.06
-120171.06
CV
0.91
0.38
0.86
1.17
0.80
0.82
CUADRO # 59: EXACTITUD PARA CIPROHEPTADINA CLORHIDRATO

% AGREGADO Y =% RECUPERACIN
80
80
80
100
100
100
120
120
120
101.03
99.65
99.31
100.25
99.77
99.96
100.76
100.32
98.92
899.97
Y^2
REAS
10207.06
9930.12
9862.48
10050.06
9954.05
9992.00
10152.58
10064.10
9785.17
89997.62
3086719
3044828
3034393
3804326
3785964
3793185
4694134
4673666
4608189

MEDIA
ARITMTICA
S^2
CV
100.00
0.91
0.83
0.91
99.99
0.24
0.06
0.24
100.00
0.96
0.92
0.96
100.00
0.67
0.60
0.70

CUADRO # 60: REPETIBILIDAD DEL MTODO PARA CIPROHEPTADINA CLORHIDRATO

CANTIDAD
CANTIDAD
% PLACEBO
Y=%
ADICIONADA RECUPERADA
ANALTICO
RECUPERACIN
(mcg/mL)
(mcg/mL)
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
100.00
20.00
20.00
20.00
20.00
20.00
20.00
20.06
20.09
20.22
20.02
19.90
19.72
101.62
101.71
102.13
101.49
101.12
100.57
608.64
Y^2
MEDIA
ARITMTICA
CV
INTERVALO
DE
CONFIANZA
(IC)
10326.62
10344.92
10430.54
10300.22
10225.25
10114.32
61741.88
101.44
0.5373
0.53
101.89
100.98
CUADRO # 61: LINEALIDAD DEL MTODO PARA CIPROHEPTADINA HCl

X=%
AGREGADO
Y = REAS
X^2
Y^2
XY
80
80
80
90
90
90
100
100
100
110
110
110
120
120
120
1500
3345312
3314608
3323473
3772436
3728654
3692131
4174368
4209529
4194664
4553266
4598068
4573458
4897486
4924175
4927301
62228929
6400
6400
6400
8100
8100
8100
10000
10000
10000
12100
12100
12100
14400
14400
14400
153000
11191112377344
10986626193664
11045472781729
14231273374096
13902860651716
13631831321161
17425348199424
17720134401841
17595206072896
20732231266756
21142229332624
20916518077764
23985369120196
24247499430625
24278295144601
263032007746437
267624960
265168640
265877840
339519240
335578860
332291790
417436800
420952900
419466400
500859260
505787480
503080380
587698320
590901000
591276120
6343519990
PENDIENTE
INTERCEPTO
COEFICIENTE
DE
CORRELACIN
COEFICIENTE DE
DETERMINACIN
DESVIACIN
ESTNDAR
40209.0
127692
0.9980
0.9961
589755.85
CV
0.47
1.08
0.42
0.49
0.33
0.56
CUADRO # 62: PORCENTAJE DE RECOBRO DE CIPROHEPTADINA

X = CONCENTRACIN (mcg/mL)
Y = % RECUPERACIN
Y ^2
16.00
16.00
16.00
18.00
18.00
18.00
20.00
20.00
20.00
22.00
22.00
22.00
24.00
24.00
24.00
103.81
102.86
103.13
104.06
102.85
101.84
103.63
104.50
104.13
102.76
103.77
103.22
101.32
101.87
101.94
1545.69
10776.52
10580.18
10635.80
10828.48
10578.12
10371.39
10739.18
10920.25
10843.06
10559.62
10768.21
10654.37
10265.74
10377.50
10391.76
159290.17
MEDIA ARITMTICA
IC(1)
IC(0)
IC()
103.05
72357.95
8060.05
3374576.82
-3119192.82
103.58
102.52
CUADRO # 63: PRECISIN DEL MTODO PARA CIPROHEPTADINA HCl (DA 1)

% TERICO
Y=%
RECUPERACIN
Y^2
80
80
80
90
90
90
100
100
100
110
110
110
120
120
120
101.31
99.59
99.09
99.90
100.93
99.17
100.40
99.47
100.12
101.20
99.55
99.25
100.61
100.09
99.30
1499.98
10263.7161
9918.1681
9818.8281
9980.0100
10186.8649
9834.6889
10080.1600
9894.2809
10024.0144
10241.4400
9910.2025
9850.5625
10122.3721
10018.0081
9860.4900
150003.81
REAS
(mAU)
3346224
3289440
3273187
3759898
3798499
3732384
4154051
4115298
4141984
4562174
4487748
4474339
5089304
5063165
5023544
MEDIA
ARITMTICA
CV
3302950.33
38347
1.16
3763593.67
33212
0.88
4137111.00
19831
0.48
4508087.00
47318
1.05
5058671.00
33110
0.65
0.85
CUADRO # 64: PRECISIN DEL MTODO PARA CIPROHEPTADINA HCl (DA 2)

% TERICO
80
80
80
90
90
90
100
100
100
110
110
110
120
120
120
Y=%
RECUPERACIN
100.53
99.60
99.87
101.11
99.93
98.96
99.56
100.40
100.04
99.53
100.51
99.97
99.62
100.16
100.22
1500.01

G COCHRAN TABLAS:
t STUDENT TABLA:
Y^2
10106.2809
9920.1600
9974.0169
10223.2321
9986.0049
9793.0816
9912.1936
10080.1600
10008.0016
9906.2209
10102.2601
9994.0009
9924.1444
10032.0256
10044.0484
150005.83
REAS
(mAU)
3345312
3314608
3323473
3772436
3728654
3692131
4174368
4209529
4194664
4553266
4598068
4573458
4897486
4924175
4927301
MEDIA
ARITMTICA
CV
3327797.67
15802
0.47
3731073.67
40207
1.08
4192853.67
17650
0.42
4574930.67
22437
0.49
4916320.67
16386
0.33
0.56
0.63
0.63
0.3057
0.6020
0.009
2.048
CUADRO # 65: ESTABILIDAD ANALTICA PARA CIPROHEPTADINA HCl

HORAS
24
36
REAS
% RECUPERACIN
4025900
4059146
4041977
4124761
4134020
4071652
4131167
4179996
4123962
4175716
4185055
4200578
99.95
100.55
100.35
102.4
102.63
101.08
102.56
103.77
102.38
103.67
103.9
104.28
/di/
MEDIA
ARITMTICA
0.00
100.28
1.75
102.04
2.62
102.90
3.67
103.950
CUADRO # 66: ROBUSTEZ PARA CIPROHEPTADINA CLORHIDRATO

CONDICIN
BAJA (72:28)
NORMAL (75:25)
ALTA (78:22)
REAS
% RECUPERACIN
3444954
3446963
3446827
3811690
3827214
3767804
3440670
3415415
3427599
85.52
85.57
85.57
94.63
95.01
93.54
85.42
84.79
85.09
MEDIA
ARITMTICA
/di/
86
94
85
CUADRO # 67: TOLERANCIA PARA CIPROHEPTADINA CLORHIDRATO

CONDICIN
REACTIVO I
REACTIVO II
COLUMNA I
COLUMNA II
% RECUPERACIN
REAS
99.82
99.82
100.50
98.33
98.67
97.94
100.69
100.10
99.21
100.51
99.55
99.94
1195.07
3882749
3887890
3914309
3906952
3920374
3891643
3874306
3851542
3817118
3882752
3845449
3860669
GLOBAL

CV
MEDIA
ARITMTICA
16933.34
0.43
3894983
14375.82
0.37
3906323
28791.43
0.75
3847655
18756.43
0.49
3862957
19714.25
0.89
15511918

CUADRO # 68: LIMITE DE DETECCIN

PARA CIPROHEPTADINA HCl
CUADRO# 69: LIMITE DE CUANTIFICACIN PARA

CIPROHEPTADINA HCl
Muestra
rea
Muestra
rea
Blanco
B x 3 veces
16264
48792
Blanco
B x 10 veces
16264
162640
Concentracin
mcg/mL
0.20
0.40
0.60
0.80
1.00
reas
35809
74645
116220
143122
198235
Concentracin
mcg/mL
0.40
0.80
1.20
1.60
2.00
reas
74877
149294
206225
313194
423990
ANEXO 2
FIGURAS DE GRAFICAS
LINEALIDAD DEL SISTEMA PARA TIAMINA HCl

3000000
y = 10127x - 34026
2
R = 0.9998
2500000
REAS (mAU)
2000000
1500000
1000000
500000
0
0
50
100
150
200
250
300
% AGREGADO
Y
Pronstico para Y
FIGURA N1 GRAFICA LINEALIDAD DEL SISTEMA PARA TIAMINA HCl
LINEALIDAD DEL MTODO PARA TIAMINA HCl

3000000
y = 9906.2x - 23322
R2 = 0.9963
2500000
REAS (mAU)
2000000
1500000
1000000
500000
0
0
50
100
150
200
250
%
Y
Pronstico para Y
FIGURA N2 GRAFICA DE LINEALIDAD DEL METODO PARA TIAMINA HCl
300
LINEALIDAD DEL SISTEMA PARA RIBOFLAVINA

3000000
y = 9558.7x - 54889
R2 = 0.9993
2500000
REAS (mAU)
2000000
1500000
1000000
500000
0
0
50
100
150
200
250
300
% AGREGADO
Pronstico para Y
FIGURA N3 GRAFICA DE LINEALIDAD DEL SISTEMA PARA RIBOFLAVINA
LINEALIDAD DEL MTODO PARA RIBOFLAVINA

3000000
y = 9462.1x - 50847
R2 = 0.9973
REAS (mAU)
2500000
2000000
1500000
1000000
500000
0
0
50
100
150
200
%
Y
Pronstico para Y
FIGURA N4 LINEALIDAD DEL METODO PARA RIBOFLAVINA
250
300
LINEALIDAD DEL SISTEMA PARA NICOTINAMIDA

1400000
y = 4491.8x - 9418.8
R2 = 0.9998
1200000
REAS (mAU)
1000000
800000
600000
400000
200000
0
0
50
100
150
200
250
300
% AGREGADO
Pronstico para Y
FIGURA N5 GRAFICA DE LINEALIDAD DEL SISTEMA PARA NICOTINAMIDA
LINEALIDAD DEL MTODO PARA NICOTINAMIDA

1400000
y = 4365.5x - 11407
R2 = 0.9973
1200000
REAS (mAU)
1000000
800000
600000
400000
200000
0
0
50
100
150
200
250
Pronstico para Y
FIGURA N6 GRAFICA LINEALIDAD DEL METODO PARA NICOTINAMIDA
300
LINEALIDAD DEL SISTEMA PARA PIRIDOXINA HCl

2500000
y = 8060.3x - 7809.4
R2 = 0.9996
REAS (mAU)
2000000
1500000
1000000
500000
0
0
50
100
150
200
250
300
% AGREGADO
Pronstico para Y
FIGURA N7 GRAFICA DE LINEALIDAD DEL SISTEMA PARA PIRIDOXINA HCl
LINEALIDAD DEL MTODO PARA PIRIDOXINA HCl

2500000
y = 8132x - 27578
R2 = 0.9974
REAS (mAU)
2000000
1500000
1000000
500000
0
0
50
100
150
200
250
%
Y
Pronstico para Y
FIGURA N8 GRAFICA LINEALIDAD DEL METODO PARA PIRIDOXINA HCl
300
LINEALIDAD DEL SISTEMA PARA CIPROHEPTADINA HCl

6000000
REAS (mAU)
y = 47872x - 823829
R2 = 0.9939
4000000
2000000
70
80
90
100
110
120
130
% AGREGADO
Pronstico para Y
FIGURA N9 GRAFICA DE LINEALIDAD DEL SISTEMA PARA CIPROHEPTADINA HCl
LINEALIDAD DEL MTODO PARA CIPROHEPTADINA HCl

5270000
y = 40209x + 127692
R2 = 0.9961
REAS (mAU)
4770000
4270000
3770000
3270000
2770000
70
80
90
100
110
120
% AGREGADO
Y
Pronstico para Y
FIGURA N10 GRAFICA LINEALIDAD DEL METODO PARA CIPROHEPTADINA HCl
130
ANEXO 3
<1225> VALIDACION DE METODOS FARMACOPEICOS

16100179

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UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR

FACULTAD DE QUMICA Y FARMACIA

VALIDACIN DEL MTODO ANALTICO POR CROMATOGRAFA

TRABAJO DE GRADUACION PRESENTADO POR

PARA OPTAR AL GRADO DE

Facultad de Qumica y Farmacia

COMIT DE TRABAJO DE GRADUACION

Asesora de Area de Control de Calidad de Productos Farmacuticos,

Asesora de Area de Control de Calidad de Productos Farmacuticos,

Agradecemos de manera especial el apoyo del Laboratorio Farmacutico

Agradecemos profundamente a nuestros queridos docentes directores Licda.

Mara Elena y Silvia Adalia

Mara Elena y Silvia Adalia

2.2 Objetivos Especificos

3.1 Validacin de Metodologa Analtica

3.2 Tipos de Validacin

3.3 Parmetros para la Validacin de Mtodos Analticos

3.4 Generalidades de Cromatografa Lquida de Alta Presin

3.5 Generalidades de las Vitaminas

3.6 Generalidades de Ciproheptadina

4.1 Tipo de estudio

4.2 Investigacin bibliogrfica

4.3 Investigacin de campo

4.4 Protocolo de Validacin Vitaminas

4.5 Protocolo de Validacin Ciproheptadina HCl

5.1 Anlisis de Resultados

21. Porcentaje de recobro para Riboflavina

43. Adecuabilidad del sistema para Piridoxina HCl

65. Estabilidad analitica para Ciproheptadina HCl

HPLC= Cromatografa Liquida de Alta Presin

= Constante de distribucin del soluto A

= Longitud del empaque de la columna

= Nmero de platos tericos

RSD = Desviacin estndar relativa

= Volumen del soluto en la fase mvil

VPT = Validacin de producto terminado

= Volumen del soluto en la fase estacionaria

= Nmero correlativo del protocolo

En el presente trabajo de graduacin se ha Validado el Mtodo Analtico por

Arreglo de Diodos, dentro del

Departamento de Control de Calidad. Se evaluaron 12 parmetros de

resultados obtenidos en la parte experimental para la cuantificacin de los

tolerancia con los cambios establecidos en el protocolo esto no implica que el

La validacin de mtodos analticos es parte fundamental del desarrollo de una

Conference on Harmonisation (ICH), que ha emitido una serie

internacionales entre las que se encuentran guas para la Validacin de los

El profesional farmacutico es el responsable de los procesos farmacuticos y

La finalidad de esta investigacin es la Validacin del Mtodo Analtico para la

2.1 OBJETIVO GENERAL

Validar el Mtodo Analtico por Cromatografa Lquida de Alta

2.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS

2.2.1 Desarrollar dos protocolos para la Validacin del Mtodo Analtico,

2.2.2 Cuantificar cuatro de las Vitaminas del complejo B: Vitamina B1

desempeo del mtodo analtico de cuantificacin, si es factible

3.0 MARCO TERICO

Un Mtodo Analtico se define como la descripcin de la secuencias de

Para alcanzar la Garanta de Calidad es necesario el cumplimiento de las

tengan y mantengan la Identidad, Pureza, Potencia e Inocuidad requerida

3.1 Validacin de Metodologa Analtica

La Validacin de un procedimiento de medida establece, mediante anlisis

3.2 Tipos de Validacin

- Validacin Retrospectiva: es el establecimiento de evidencia documentada

3.3 Parmetros para la Validacin de Mtodos Analticos: las caractersticas

- Precisin: La precisin de un mtodo analtico es el grado de concordancia