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Departamento de Medicina Veterinria Preventiva


Sade Pblica Veterinria
Prof. Eduardo Furtado Flores
VACINAS
I. Introduo.........................................................................................................................3
II. O sistema imunolgico......................................................................................................4
1. Defesas Inespecficas..........................................................................................4
2. Resposta Imunolgica Especfica......................................................................11
Componentes do Sistema Imunolgico
1. rgos...............................................................................................................1
4
2. Clulas...............................................................................................................1
6
3. Fagocitose.........................................................................................................2
2
4. O papel dos Fagcitos na imunidade especfica..................................................23
5. Linfcitos..........................................................................................................2
5
III.

Anticorpos......................................................................................................................

31
Citocinas (Interleucinas)........................................................................................................40
IV. Antgeno.........................................................................................................................42
Reconhecimento

de

antgeno...................................................................................45
Fases da resposta imunolgica...............................................................................................51
Resposta Primria e Secundria.............................................................................................52

Imunizao............................................................................................................................5
4
Expectativas imunolgicas da vacinao................................................................................56
Objetivos da Vacinao.........................................................................................................57
Imunidade contra vrus..........................................................................................................59
Mecanismos

de

escape...........................................................................................................64
Imunidade contra bactrias....................................................................................................
65
Mecanimos

de

escape.............................................................................................................68
VACINAS
VRICAS.............................................................................................................69
Vacinas replicativas (vrus vivo)..............................................................................69
Vacinas vivas recombinantes...................................................................................73
Vacinas com vrus inativado....................................................................................82
Vacinas de subunidade...........................................................................................84
Vacinas de protenas recombinantes.......................................................................85
Vacinas de peptdeos sintticos..............................................................................87
Vacinas de DNA....................................................................................................92
Vacinas de RNA....................................................................................................94
Imunizao contra enfermidades bacterianas.........................................................................94
Toxides................................................................................................................95
Bacterinas..............................................................................................................96
Vacinas bacterianas................................................................................................97
Adjuvantes...........................................................................................................................97
Testes de vacinas/controle de qualidade
Vacinao (vias, vacinaes polivalentes, idade, etc...)
Falhas de vacinas
Efeitos colaterais
Bibliografia

I. INTRODUO
A vacinao tem sido extremamente importante no controle de vrias enfermidades
infecciosas humanas e animais, constituindo-se em uma das formas mais eficazes e com
relao custo-benefcio mais favorvel no controle de doenas em populaes. Atualmente,
existem mais de uma centena de vacinas de uso veterinrio e dezenas de vacinas humanas em
uso. Alm dessas, vrias vacinas esto em fase de desenvolvimento ou testes e em breve
algumas delas devero estar em uso. Algumas enfermidades j foram erradicadas do mundo
pela vacinao, como o exemplo da varola. Outras encontram-se sob controle ou em vias de
erradicao, como a poliomielite e sarampo. Em animais, enfermidades como a Febre Aftosa,
Doena de Aujeszky e Peste Suna Clssica j foram ou esto sendo erradicadas de continentes
inteiros por programas baseados em vacinao. A era moderna da vacinao iniciou em torno
de 200 anos atrs, quando Edward Jenner demonstrou que poderia proteger pessoas da
enfermidade "smallpox" (varola) pela prvia exposio ao agente da "cowpox" bovina. Ele
observou que pessoas que trabalhavam com bovinos leiteiros (ordenhadores) eram mais
resistentes varola (smallpox). Como os agentes dessas enfermidades pertencem mesma
famlia de vrus (POXVIRIDAE) e possuem alguns antgenos em comum, a imunizao (ou
exposio) de pessoas com o vrus obtido a partir de crostas de leses de bovinos protegia
parcialmente contra o vrus humano em exposies subseqentes. Essas observaes e
experimentos conduzidos por Jenner constituram-se nos passos iniciais da vacinologia
moderna. Atualmente, tcnicas sofisticadas de biologia molecular tm sido empregadas com o
objetivo de aperfeioar as vacinas j existentes e de desenvolver novas vacinas. Em especial, a
manipulao gentica de agentes infecciosos tem permitido um avano muito grande na rea
de produo de vacinas. Vacinas obtidas por manipulao gentica, tambm conhecidas como
vacinas recombinantes, j esto em uso para o controle de doenas humanas (hepatite B) e
animais (herpesvrus bovino tipo 1, vrus da Doena de Aujeszky, cinomose). O nmero de
vacinas recombinantes deve aumentar significativamente nos prximos anos, pois vrias esto
atualmente em fase de desenvolvimento ou testes. Dentre estas, destacam-se vacinas
experimentais contra o HIV. A obteno de vacinas eficazes contra microorganismos como
vrus, bactrias e protozorios representa um marco na histria natural das doenas e no
combate realizado pelo homem para controlar e/ou erradicar enfermidades de populaes
humanas e animais. Por isso, a vacinologia um dos segmentos das cincias biomdicas que
mais demanda recursos e tem apresentado avanos nas ltimas dcadas.
II. O SISTEMA IMUNOLGICO

A principal funo do sistema imunolgico de um animal proteg-lo de uma ampla


variedade de agentes infecciosos potencialmente patognicos encontrados no meio ambiente.
O funcionamento adequado do sistema imunolgico essencial para os animais e para seres
humanos: a vida incompatvel com um sistema imunolgico afuncional. Todos os animais
tm que enfrentar e combater os patgenos (bactrias, vrus, fungos, parasitas e protozorios,
que causam doenas) com os quais eles compartilham o meio ambiente.
O sistema imunolgico protege os animais das infeces definindo consistente e precisamente
o que "prprio" - as clulas e antgenos

normais do animal - e defendendo contra

microorganismos e outras substncias estranhas (no-prprias). Algumas defesas usadas pelo


corpo so relativamente bvias, como a tosse ou o espirro, que permitem eliminar partculas de
p inaladas. A resposta imunolgica muito menos bvia e muito mais complexa. Envolve o
reconhecimento molecular de estruturas qumicas nos antgenos estranhos por clulas
especializadas, as quais montam uma resposta especfica contra a(s) estruturas qumicas
reconhecidas no agente estranho.
Num animal saudvel, h dois sistemas bsicos de defesa. Estes sistemas operam
constante e simultaneamente, protegendo o animal de agentes infecciosos. Eles so:
1. Defesas inespecficas, naturais ou inatas (barreiras fsicas, clulas, humorais)
2. Resposta imunolgica especfica ou adquirida.
1. Defesas inespecficas
As primeiras e mais bvias defesas so as defesas mecnicas ou fsicas. Para produzir
uma enfermidade, os microorganismos precisam penetrar no corpo do animal. A pele, plos e
mucosas constituem-se em barreiras que protegem os animais dos agentes patognicos. As
lgrimas, a saliva e o muco do aparelho respiratrio, digestivo e urogenital ajudam a lavar e
eliminar os agentes patognicos ingeridos, inalados ou introduzidos involuntariamente no
animal. Essas secrees tambm contm substncias qumicas levemente bactericidas (que
matam bactrias). Se agentes patognicos entrarem no corpo (por exemplo, junto com o ar
inalado), eles podem ficar presos por um camada de muco que reveste as vias areas. Eles
podem ento ser removidos pelo movimento ondulatrio contnuo dos clios (minsculas
estruturas semelhantes a fios de cabelo) encontrados na superfcie das clulas que revestem as
vias areas. Esses clios movem o muco contaminado (sujo), como uma escada rolante, para
um local de onde ele possa ser deglutido, ou eliminado pela tosse ou por espirro.

O pH baixo do estmago tambm representa uma barreira contra alguns


microorganismos. Alguns vrus e bactrias, aps serem deglutidos, so inativados ao passarem
pelo estmago. Isso
infelizmente no ocorre com todos os microorganismos, pois alguns resistem ao pH baixo e

so capazes de atingir o intestino e estabelecer infeco nesse local.


O segundo conjunto de defesas constitudo por clulas. Vrios tipos de leuccitos
(clulas brancas do sangue), atacam, fagocitam, destroem e eliminam agentes infecciosos ou
partculas que eles reconheam como estranhas (bactrias, vrus, clulas tumorais, clulas
infectadas, restos celulares, complexo antgeno-anticorpo, etc). As principais clulas envolvidas
nesse processo so os neutrfilos, moncitos/macrfagos, e clulas natural killer.Essas clulas
esto geralmente no sangue e so recrutadas para os tecidos onde iro combater o agente
patognico. Alm de fazer parte das defesas inespecficas, os macrfagos e clulas NK tambm
participam da resposta imunolgica especfica.
A inflamao que resulta de dano tecidual causado pelo agente patognico facilita
o acesso de clulas do sistema imunolgico e de substncias ativas (mediadores qumicos)
rea infectada. Clulas e mediadores qumicos tm um papel fundamental na restrio e
combate ao agente patognico nesses locais. Esses fatores tambm so fundamentais no reparo
e cicatrizao do tecido lesado, aps a infeco ter sido combatida.
Os interferons (IFNs) so substncias qumicas produzidas por clulas infectadas
por vrus e/ou por linfcitos e outras clulas do sistema imunolgico em resposta exposio a

antgenos. Existem duas classes de IFN: alfa () e beta () (tambm chamados de IFN noimunes ou inespecficos) e IFN gama (). Na imunidade inespecfica, os IFNs e
desempenham papel importante. So produzidos por clulas infectadas por vrus (virtualmente
qualquer clula infectada por um vrus produz esses IFNs). Os IFNs so produzidos e
secretados no meio extracelular, sendo captados por clulas vizinhas. A captao do IFN por
essas clulas confere a elas um estado de resistncia contra o vrus. Os mecanismos de
resistncia anti-viral conferidos pelo IFN so complexos e envolvem degradao de RNA viral
e inibio da sntese protica nas clulas. Em infeces vricas, as primeiras defesas orgnicas
que limitam e restringem a infeco so exercidas pelos IFNs.
O sistema complemento uma srie de protenas plasmticas cuja ativao ocorre
em forma sequencial, como uma cascata, sempre que h leso de tecidos ou parede de vasos
ou alterao dos componentes sanguneos, presena de microorganismos, ou reao antgenoanticorpo. Os componentes do sistema complemento so mediadores do processo inflamatrio,
constituindo-se, ao lado dos anticorpos, os principais efetores da resposta imune humoral. As
principais funes resultantes da ativao do complemento so a destruio de clulas
alteradas

(ou

infectadas),

facilitao

da

fagocitose

(opsonizao)

retirada

de

imunocomplexos da circulao.
As protenas que compe o sistema complemento atuam na resposta inespecfica,
como tambm participam de mecanismos ligados resposta imunolgica adquirida
(especfica).
As principais funes biolgicas dos componentes do complemento so: 1. Citlise (lise de
bactrias ou clulas infectadas por parasitas intracelulares); 2. Opsonizao de antgenos
(microorganismos ou partculas), facilitando a fagocitose; 3. Ativao da inflamao; 4.
Quimiotaxia (atrao de leuccitos para os locais de inflamao); 5. Remoo e solubilizao
de imunocomplexos.
Os componentes do complemento solveis no plasma incluem mltiplas enzimas
proteolticas, que so ativadas sequencialmente. A clivagem de uma protena torna-a ativa.
Esta cliva uma outra enzima, ativando-a e assim por diante.
Embora as protenas do complemento estejam presentes no plasma sangneo, elas so
normalmente inativas e no podem ser ativadas espontaneamente na circulao. A ativao do
sistema complemento ocorre apenas em certos locais e em resposta a determinados estmulos.

Ativao do complemento
1 - Molculas de imunoglobulinas (anticorpos), quando ligam-se a antgenos especficos
podem ativar o complemento. Por esta razo, o complemento serve como um importante
mecanismo efetor da imunidade humoral especfica. A seqncia de ativao do sistema
complemento iniciada por complexos antgeno-anticorpo chamada de via clssica do
complemento.
2 - Alguns componentes do complemento so diretamente ativados ao ligar-se diretamente
superfcie de microorganismos, desencadeando diretamente a via alternativa do complemento.
Essa via ativada independentemente da presena de anticorpos e produz uma forma solvel
de C3 convertase e associada a membrana que catalisa a protelise do C3. Na via alternativa,
a C3 convertase formada na superfcie de clulas microbianas. A ativao dessa via tambm
leva produo de vrios fragmentos com atividade biolgica e pode culminar com a
formao do complexo de ataque membranas (membrane attack complex ou MAC) e a
conseqente destruio do microorganismo (ou da clula).
A cascata do complemento
O componente central do sistema complemento uma protena chamada C3, que um fator
crtico para as funes efetoras desse sistema. As formas biolgicas ativas da C3 so produtos
de clivagem proteoltica. As vias clssica e alternativa incluem diferentes protenas que so
ativadas por diferentes caminhos para gerar enzimas chamadas C3 convertases que so capazes
de clivar a C3 e produzir C3a e C3b.
Em estgios iniciais da via clssica, molculas de anticorpos ligadas a antgenos

especficos ativam a atividade proteoltica de trs protenas do complemento, chamadas: C1,


C4 e C2, levando a formao do complexo C4b2a que funciona como a C3 convertase da via
clssica. Na via alternativa, o C3b gerado espontaneamente em baixos nveis liga-se ao
componente do complemento chamado Bb gerada pela clivagem proteoltica da protena
chamada fator B. O complexo C3bBb chamado de C3 convertase da via alternativa. A C3
convertase cliva a C3 gerando C3b. O prximo passo a ligao do C3b a C3 convertase
formando o complexo C5 convertase que catalisa a clivagem proteoltica da protena C5.
Embora as C5 convertases das duas vias sejam molecularmente distintas, elas catalisam reaes
idnticas e atuam em substratos idnticos. Uma vez clivado o C5, ambas vias terminam no
mesmo passo. O evento terminal no envolve protelise mas, ligao seqencial de vrias
protenas solveis do complemento chamadas de C6, C7, C8 e C9. A associao dessas
protenas leva formao de poros nas membranas, chamados de complexo de ataque
membrana (MAC), que causa lise osmtica das clulas.
Funes biolgicas das protenas do complemento
As funes do sistema complemento esto agrupadas em duas grandes categorias: 1.
lise celular pelo MAC e 2. efeitos biolgicos dos fragmentos proteolticos gerados na cascata
de ativao. Esses fragmentos ativos podem permanecer aderidos membrana onde o
complemento foi ativado ou podem ser liberados na corrente sangnea ou fluido extracelular.
Nesse caso, eles mediam seus efeitos pela ligao em receptores especficos presentes em uma
variedade de clulas. A resposta humoral especfica a microorganismos gera anticorpos que
ligam-se a estes organismos. Esses anticorpos ativam localmente o complemento na sua
superfcie e levam lise pela formao do MAC. Alguns microorganismos podem ativar a via
alternativa na ausncia de anticorpos tambm levando a lise celular.
1. Complexo de ataque membrana (MAC):
A C5 convertase gerada tanto na via clssica como na via alternativa inicia a ativao dos
componentes terminais da cascata do complemento que culmina com a formao do MAC. O
processo de formao do MAC inicia com a clivagem do C5 pela C5 convertase. Este o
ltimo passo enzimtico da cascata do complemento. C5 clivada em C5a que liberada e
C5b que permanece associado membrana. Aps, ocorre a ligao sequencial da C6 e C7,
complexo que se insere na membrana e em seguida associa-se ao C8. Ento, a C9 liga-se ao
complexo C5-8 para formar o MAC. O MAC composto de 12 a 15 molculas de C9
associadas a um complexo C5-8. Esse poli-C9 forma poros na membrana plasmtica. Os
poros formados pelo MAC permitem a sada passiva de molculas solveis, ons e gua mas

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no permitem a sada de molculas grandes como as protenas. Essa situao resulta no influxo
de gua e ons nas clulas, levando lise osmtica. Bactrias ou clulas infectadas por
microorganismos intracelulares, como os vrus, so destrudas desse modo.
2. Opsonizao e promoo de fagocitose; C3b e iC3b ligam-se superfcie das clulas
infectadas e atuam como opsoninas, por ligarem-se especificamente a receptores na superfcie
de neutrfilos e macrfagos. Essas clulas possuem receptores de membrana, que reconhecem
o C3b e iC3b. O reconhecimento e ligao nesses receptores promove um contato prximo

entre o fagcito e as partculas a serem fagocitadas, o que facilita a fagocitose. Receptores


para o complemento e receptores para a poro Fc cooperam para mediar a ligao e a
fagocitose das partculas opsonizadas.
3. Anafilotoxinas e ativao da inflamao: C3a, C4a e C5a so chamados de anafilotoxinas
por que induzem a liberao de mediadores inflamatrios solveis que causam rpido aumento
na permeabilidade vascular. Receptores para C3a e C4a so expressos em mastcitos,
basfilos, clulas do msculo liso e linfcitos. Receptores para C5a

so expressos nos

mastcitos, basfilos, neutrfilos, moncitos e macrfagos e clulas do endotlio vascular. O

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maior efeito das anafilotoxinas ao ligar-se em basfilos e mastcitos a liberao de grnulos


contendo aminas vasoativas como a histamina e heparina. A histamina aumenta a
permeabilidade vascular e estimula a contrao da musculatura lisa dos vasos, aumentando o
fluxo de sangue para os locais de inflamao.
4. Quimiotaxia para leuccitos a C5a quimiottica para neutrfilos e estimula a migrao
direta dessas clulas

sob um gradiente de concentrao. Em resposta ao estmulo

quimiottico, os leuccitos saem do sangue atravs de espaos entre as clulas endoteliais e


migram nos tecidos em direo ao local da inflamao. Nesse local, eles exercero suas
atividades de combate ao agente agressor. A C5a tambm pode ter um efeito direto no
endotlio dos vasos causando aumento da permeabilidade vascular independente da liberao
de histamina pelos mastcitos. A combinao desses efeitos serve para promover o acmulo de
protenas plasmticas e clulas para uma resposta inflamatria aguda efetiva a infeces e
partculas estranhas.
5. Solubilizao e fagocitose de imunocomplexos: os imunocomplexos podem ser lesivos por
se depositarem na parede dos vasos, ativar o complemento e levar a reaes inflamatrias nos
tecidos vizinhos. A limpeza dos imunocomplexos pode ser mediada pelo complemento pelas
clulas do sistema monofagoctico fagocitrio. Essa funo largamente mediada pelo C1 na
superfcie de eritrcitos. Complexos so adsorvidos pelo cR1 expresso na superfcie dessas
clulas devido a alta afinidade entre o CR1 e C3b. Clulas fagocitrias do fgado e bao so as
responsveis pela remoo dos imunocomplexos das molculas de Cr1 na superfcie dos
eritrcitos quando esses passam pelos sinusides desses rgos.
Trs propriedades caracterizam a resposta natural ou inata:
1. inespecfica. Ou seja, desencadeada e exerce suas funes independentemente
do agente envolvido.
2. desencadeada independente de exposio prvia ao agente.

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3. No aumenta de intensidade em exposies subseqentes (no possui memria).


Observao: Vrios componentes da resposta natural ou inata (macrfagos, NK,
complemento) atuam tambm durante a resposta imunolgica adquirida, complementando e
interagindo com os fatores responsveis por aquela resposta (anticorpos, linfcitos). Ou seja,
esses componentes so efetores tanto da resposta natural como da resposta adquirida.
Resposta imunolgica especfica
O segundo conjunto de defesas do organismo contra agentes estranhos constituido
pela resposta imunolgica especfica ou adquirida. especfica porque resulta da exposio a
agentes patognicos e direcionada especificamente contra o agente que a induziu. Como
resultante, os seus mecanismos efetores sero direcionados especificamente esse agente. Esse
tipo de resposta chamado genericamente de resposta imunolgica e a resistncia especfica
associada a ela chamada de imunidade. A imunidade, ou resistncia adquirida, pode ser
adquirida ativamente (pela vacinao ou pela exposio ao agente), ou passivamente (recebida
da me atravs do colostro ou pela placenta; ou ainda pela administrao de soro imune
especfico).
As respostas imunolgicas especficas esto associadas a outros tipos de leuccitos,
diferentes dos envolvidos na resposta natural inespecfica. Os leuccitos envolvidos nesse tipo
de resposta so os linfcitos e so encontrados em maior quantidade e a maior parte do tempo
no tecido linftico (linfonodos, bao, acmulos linfides nos tecidos) e tambm circulando no
sangue. A circulao dos linfcitos no sangue e a sua localizao nos tecidos linfides
importante para a sua funo de encontrar, reconhecer e combater os agentes patognicos.
Embora possa parecer que os linfcitos so clulas predominantemente sanguneas, a sua
grande maioria est localizada nos tecidos linfides. nesses locais que eles exercem as suas
funes principais. Uma vez que os linfcitos encontrem o agente agressor (microorganismos,
por exemplo), o seu contato com o agente desencadeia uma srie de alteraes, que incluem
ativao, proliferao e diferenciao celular; comunicao qumica com outros componentes
do sistema imunolgico, produo de imunoglobulinas (anticorpos). Todas essas atividades
tm por objetivo combater o agente patognico encontrado.
H dois tipos principais de resposta imunolgica especfica:
- Imunidade humoral ou sistmica. Esse tipo de imunidade mediado por imunoglobulinas
(Igs) sricas, tambm chamadas de anticorpos. Esses anticorpos possuem vrias atividades

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direcionadas ao combate aos agentes patognicos. As imunoglobulinas so produzidas por uma


classe especial de linfcitos (linfcitos B), que se diferenciam em plasmcitos (clulas
produtoras de anticorpos) aps contato e estimulao por um antgeno especfico. Ou seja, o
contato com o antgeno estimula os linfcitos B, que se diferenciam em plasmcitos que
passam a produzir imunoglobulinas (anticorpos) especficos contra o agente que os estimulou.
- Imunidade celular ou IMC (imunidade mediada por clulas). mediada por linfcitos
especficos (linfcitos T auxiliares; linfcitos T citotxicos), os quais atacam diretamente
clulas infectadas (linfcitos citotxicos) e/ou liberam substncias qumicas (interleucinas) que
ativam e estimulam outras clulas a combater o agente infeccioso (linfcitos T auxiliares).
Um dos resultados da resposta imunolgica especfica a produo de clulas de memria
linfcitos T e B - que so especficos para o agente que induziu a sua produo. Essas clulas
tem um tempo de vida prolongado, podendo durar vrios anos ou por toda a vida do animal.
Se o agente patognico for novamente encontrado mesmo anos depois - as clulas de
memria auxiliam o organismo a responder mais depressa. A produo de clulas T e B de
memria ocorre apenas quando a imunidade foi adquirida ativamente, atravs de uma infeco
natural ou de vacinao. A gerao de uma induo a formao de clulas de memria
constitui-se em um dos objetivos principais da vacinao. Ento, quando h exposio a um
agente patognico, o sistema imunolgico responde atravs da produo de linfcitos B e T de
duas categorias: 1. Efetores, que iro responder diretamente contra o agente (seja atravs da
produo de anticorpos, interleucinas ou agindo diretamente contra o agente) e 2. De
memria, que so especificos contra o agente, mas no iro agir nessa ocasio. Ficaro como
uma populao de reserva, para quando o organismo for exposto novamente ao agente,
consiga responder mais rapidamente e efetivamente.
Trs propriedades caracterizam a resposta imunolgica adquirida:
1. especfica para o agente que a induziu.
2. Depende de exposio prvia ao agente
3. Aumenta de intensidade em exposies subsequentes (possui memria)
Resposta imunolgica (resumo)
Quando um agente patognico penetra no organismo e comea a se multiplicar, o
sistema imunolgico comea uma corrida contra o tempo. O objetivo combater e eliminar o
patgeno e clulas infectadas ou lesadas antes que a infeco supere as defesas do corpo,

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tendo como resultado a progresso da infeco que pode resultar em doena severa e
eventualmente a a morte.
Podem ser necessrios 7 a 10 dias para o desenvolvimento de uma resposta imunolgica
especfica (linfcitos T citotxicos, T auxiliares, anticorpos) contra o agente. Enquanto isso, o
organismo defende-se atravs de respostas imunolgicas inespecficas ou naturais. Leuccitos
procuram o agente patognico, clulas bacterianas ou partculas virais, e tentam destru-lo. So
ativadas defesas como o sistema complemento, que ativa o processo inflamatrio e auxilia no
combate infeco (opsonizao, lise de bactrias, etc...). So produzidos mediadores como
os IFNs que conferem resistncia aos vrus. Clulas e mediadores inflamatrios so recrutados
ao local da infeco para combater e controlar o agente. Os mecanismos desencadeados pela
resposta natural tem dois objetivos: 1. Controlar ou limitar a infeco, at que as defesas
especficas estejam prontas e 2. Preparar e auxiliar no desenvolvimento da resposta especifica.
Em muitos casos, a resposta inespecfica consegue limitar e combater a infeco, mesmo antes
da resposta imunolgica adquirida estar desenvolvida totalmente.
A partir dos 4-5 dias aps a infeco, comeam a aparecer os componentes da
resposta imunolgica adquirida (que foram induzidos pela exposio ao agente). At ento,
foram os componentes da resposta inespecfica que limitaram e combateram o agente
patognico. O tempo que leva para o aparecimento da resposta especfica tempo necessrio
para o reconhecimento do antgeno, ativao das clulas imunolgicas (B, T), proliferao
dessas clulas e finalmente diferenciao. Esse perodo de aproximadamente 4-5 dias para
linfcitos T e de 7-10 dias para linfcitos B. Ento, fica evidente a importncia da imunidade
inespecfica, que encarrega-se de controlar e limitar o agente enquanto a resposta especfica
no est totalmente desenvolvida, e isso leva alguns dias. A partir do desenvolvimento da
resposta especfica, esta passa a combater o agente e responsvel pela eliminao do agente e
recuperao clnica do animal na infeco primria.
Quando de uma segunda exposio ao agente, a resposta muito mais rpida, pois os
componentes especficos (linfcitos T e B) ativados e proliferados durante a exposio
primria, j esto em maior nmero. Por isso, na resposta imunolgica secundria os
componentes especficos so os maiores responsveis pelo combate ao agente.
Componentes do sistema imunolgico

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1. rgos
O sistema imunolgico um sistema complexo de rgos, chamados genericamente
de rgos linfides, distribuidos pelo corpo do animal. De acordo com a sua funo, os rgos
do sistema imunolgico so classificados em 1.primrios e

2. secundrios.

Os rgos

primrios ou centrais so os principais locais de linfopoiese (produo de linfcitos). Nesses


locais os linfcitos so produzidos a partir de clulas progenitoras, se diferenciam, proliferam e
sofrem maturao, tornando-se clulas funcionais. No perodo embrionrio, a hematopoiese
inicia no saco vitelnico e fgado fetal. nesses rgos que os linfcitos adquirem seus
receptores de superfcie, que iro permitir o reconhecimento e ligao especfica com os
antgenos. tambm nos rgos primrios que os linfcitos reativos contra antgenos prprios
do organismo so destruidos ou inativados (seleo negativa). Os rgos linfides primrios
dos mamferos so a medula ssea (principalmente de ossos chatos), onde todos os linfcitos
so produzidos (T, B ); o fgado no perodo fetal, quando apresenta funo de hematopoiese;
e o timo, onde os linfcitos T amadurecem e atingem a sua competncia funcional. Nas aves,
os linfcitos B originam-se na Bursa de Fabricius, da a denominao linfcitos B. Nos
mamferos, o rgo equivalente Bursa a medula ssea. A medula ssea do esterno, das
vrtebras, dos ossos ilacos e da costela a principal responsvel pela hematopoiese.
Os rgos linfides secundrios incluem os linfonodos, bao, amgdalas, assim como
acmulos no encapsulados de clulas linfides distribuidos pelo organismo. Os agregados
linfides localizados sob as superfcies mucosas (vias areas, trato digestivo, urogenital) so
denominados MALT (mucosa-associated lymphoid tissue), cujo exemplo mais conhecido so
as placas de Peyer no intestino delgado. Os linfcitos produzidos e amadurecidos nos rgos
linfides primrios migram at os rgos secundrios, onde iro residir e interagir entre si e
com antgenos, provocando um processo denominado de expanso clonal. Essa expanso de
clones especficos de linfcitos ocorre em resposta ao reconhecimento e contato com
antgenos especficos e tem como objetivo aumentar a populao de clulas reativas contra um
agente determinado.

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Os rgos secundrios esto localizados estrategicamente, junto aos possveis locais


de entrada de agentes patognicos. Os linfonodos se distribuem por todo o corpo, de modo
que a linfa drenada dos mais diferentes locais seja direcionada e filtrada nesses rgos. Os
linfonodos, assim como os outros rgos secundrios so os locais onde

as clulas

linfocitrias (linfcitos B e T) entram em contato com os antgenos dos agentes infecciosos.

Praticamente todos os rgos e vrios tecidos de sustentao possuem agregados pouco


definidos de tecido linfide. Dessa forma, todo o antgeno que penetrar no organismo, por
qualquer via, ser primeiro conduzido pela
via linftica a algum tecido linfide. Ali inicia a interao entre o antgeno e as clulas do

sistema imunolgico. Portanto, praticamente nenhum antgeno deve ter acesso a circulao
sangunea sem antes ter sido investigado e atacado pelo sistema imunolgico em um rgo
linfide secundrio. Antgenos que forem direta ou indiretamente introduzidos na corrente

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sangnea sero filtrados no bao onde haver o contato antignico com as clulas do sistema
imunolgico.
2. Clulas
As clulas envolvidas na resposta imune pertencem linhagem hemacitopoitica,
cujas clulas progenitoras (clulas tronco ou hemocitoblastos) encontram-se na medula ssea.
Essas clulas podem dar origem a qualquer das clulas sanguneas (Figura). O processo de
hematopoiese inicia na fase fetal e continua por toda a vida do animal. As clulas mais
importantes no sistema imunolgico so os leuccitos, os quais diferenciam-se a partir de duas
linhagens : linfide e mielide. Da linhagem linfide diferenciam-se os linfcitos B,T e as
clulas NK. Da linhagem

mielide diferenciam-se os moncitos, macrfagos, neutrfilos, eosinfilos e basfilos. Os


leuccitos podem ser classificados morfologicamente conforme a presena de grnulos no
citoplasma em granulcitos (neutrfilos, basfilos, eosinfilos) e agranulcitos (linfcitos,
moncitos). Outra forma de classificao quanto a forma do ncleo: polimorfonucleares e
mononucleares.
Os linfcitos T e B so componentes do sistema imunolgico especfico, enquanto as
outras clulas tambm atuam como efetoras das defesas inespecficas do organismo.

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A primeira linha de defesa celular composta pelos fagcitos. O termo fagcito refere-se s
clulas com atividade fagoctica. Os macrfagos teciduais (derivados dos moncitos
sanguneos) e neutrfilos so as clulas que possuem atividade fagocitria relevante. Essas
clulas so produzidas pela medula ssea, circulam pelo sangue e saem da circulao e
invadem os tecidos orientadas por mediadores qumicos liberados nos locais de inflamao. O
movimento de sada dos
vasos e invaso dos tecidos chamado de diapedese. No local da inflamao, que produzida

em
resposta ao agente patognico, os fagcitos iro exercer suas funes de fagocitose e liberao
de enzimas proteolticas, que auxiliam no processo de resoluo do processo inflamatrio e
reorganizaotecidual.
Os linfcitos constituem a principal linha de defesa do sistema imunolgico, seja
atravs da imunidade mediada por clulas (IMC) ou pela produo de anticorpos. Existem
vrios tipos de linfcitos. Os linfcitos T auxiliares (helper) coordenam toda a resposta imune,
reconhecendo o agente agressor e ativando as diferentes funes efetoras atravs de

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substncias qumicas (linfocinas). Os linfcitos T citotxicos atuam diretamente sobre as


clulas anormais, sejam elas infectadas ou tumorais, destruindo-as. Os linfcitos B ativados
pela resposta imunolgica (contato com o antgeno e linfocinas) proliferam e diferenciam-se
em plasmcitos. Os plasmcitos produzem grande quantidade de anticorpos especficos
(imnoglobulinas) que possuem papel muito importante no combate ao agente agressor.
Granulcitos (polimorfonucleares ou PMNs)
Os granulcitos so assim chamados pela presena de grandes grnulos no seu citoplasma.
Eles desempenham um importante papel como a primeira linha de ataque contra agentes
patognicos invasores, principalmente bactrias. O seu tempo de vida relativamente curto.
Duram em mdia de seis a oito horas no sangue e de dois a trs dias nos tecidos, aps a
diapedese, ao contrrio dos macrfagos teciduais que podem durar meses. Os granulcitos
representam aproximadamente 60 a 70% dos leuccitos do sangue perifrico. Sob estmulo de
fatores inflamatrios como a IL-8 (interleucina 8), saem da circulao para os tecidos.
Quando os granulcitos entram em contato com um agente patognico, liberam o contedo do
seus grnulos para destruir os patgenos. As substncias qumicas liberadas servem para vrios
propsitos, que incluem a destruio do patgeno e a comunicao qumica da invaso do
patgeno a outros
componentes do sistema imunolgico. No entanto, muitas vezes essas substncias tambm
lesam tecidos e clulas saudveis, contribuindo para o agravamento da leso inflamatria. A
funo predominante dos granulcitos a fagocitose. Os granulcitos podem ser diferenciados

em trs
subtipos de acordo com sua afinidade por corantes:
Os neutrfilos tm este nome porque seus grnulos no se coram com corantes bsicos ou
eosina (portanto, eles so neutros=neutrfilos). Originam-se da medula ssea a partir da

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maturao da linhagem mielide. Posteriormente, passam para o compartimento medular de


reserva onde podem persistir por um perodo de tempo varivel, at que haja um estmulo
perifrico inflamatrio que desencadeie o seu recrutamento, provocando sua sada para a
circulao sangnea.

So os granulcitos predominantes da circulao sangnea. Eles

circulam constantemente pelo sangue, representando em torno de 90% dos granulcitos


circulantes. O ncleo geralmente bi- ou trilobulado. O nmero de lbulos indica a idade do
neutrfilo. Tanto no sangue como nos tecidos, os neutrfilos no so capazes de se dividir e
tm vida curta.
Os grnulos no citoplasma dos neutrfilos contm enzimas como hidrolases cidas,
mieloperoxidase e lisozima. Os grnulos podem ser de dois tipos; primrios (azurfiros) que
aparecem precocemente

e apresentam a morfologia tpica dos lisossomas e que contm

mieloperoxidase e os secundrios (especficos) que so peroxidase negativos e que contm


lactoferrina, lisozima e fosfatase alcalina. No citoplasma, existem ainda grandes depsitos de
glicognio, que podem ser utilizados na gliclise possibilitando o funcionamento da clula
quando esta est em condies de anaerobiose.
Os neutrfilos so particularmente responsivos a agente quimiotticos, chegando
rapidamente aos locais de inflamao. Quando eles detectam um sinal qumico, podem deixar a
corrente sangnea, entrar nos tecidos infectados e destruir patgenos e partculas estranhas
por fagocitose. Na fagocitose, a partcula estranha ou o patgeno cercado, ingerido e
digerido. Alm de lise intracelular aps fagocitose, os neutrfilos podem destruir partculas e
agentes infecciosos no meio extracelular, atravs de suas enzimas proteolticas. Os neutrfilos
so particularmente importantes na infeco aguda e principalmente na defesa contra bactrias.
Os eosinfilos tm este nome porque os seus grnulos so facilmente corados pela
eosina. Eles tambm circulam pela corrente sangnea, constituindo de 2 a 5% dos leuccitos
circulantes. Apresentam vrios grnulos citoplasmticos e o ncleo costuma ser bilobulado.
Os eosinfilos apresentam alguma capacidade de fagocitar e tambm podem sair da corrente
sangnea e penetrar em tecidos. A sua funo principal a destruio de agentes patognicos
que so muito grandes para serem fagocitados, como certos parasitas como os helmintos.
Nesses casos, os eosinfilos liberam o contedo de seus grnulos que causam leses na
superfcie (membrana) do agente. O contato dos eosinfilos com o verme ser maior se este
estiver recoberto com anticorpos do tipo IgE ou IgG, pois os eosinfilos possuem receptores
para essas imunoglobulinas em sua membrana.
Os basfilos tm este nome porque so facilmente corados com corantes bsicos

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(alcalinos). Eles tambm circulam pela corrente sangnea, porm com pouca frequncia e tm
um papel menos direto na defesa contra agentes patognicos. Eles so capazes de liberar
substncias (histamina, heparina) que estimulam a inflamao e respostas alrgicas. Possuem
receptores para IgE na sua membrana e liberam seus grnulos quando entram em contato com
o antgeno. A liberao de histamina e outras substncias responsvel pelos efeitos clnicos
observados na resposta alrgica. Basfilos que invadem e fixam residncia nos tecidos do
origem aos mastcitos. A principal funo dos mastcitos , provavelmente, participar da
defesa contra parasitas no tubo digestivo.
Moncitos e macrfagos
O sistema mononuclear fagoctico (antigo sistema retculo-endotelial) consiste de
clulas da linhagem monoctica-macrofgica. Estas clulas apresentam morfologia semelhante
e origem comum. Possuem ncleo arredondado e so ativamente fagocticos. Os moncitos
no tm grnulos no citoplasma e, juntamente com os linfcitos, so chamados de
agranulcitos. So derivados das clulas tronco na medula ssea e tm como principais
funes a fagocitose e a apresentao de antgenos aos linfcitos T auxiliares (os macrfagos
expressam molculas do MHC classe II na sua superfcie). Alm dessas funes, os
macrfagos secretam molculas que amplificam a resposta imune, controlam a inflamao,
contribuem diretamente para o reparo de danos teciduais atravs da remoo de tecido morto,
em processamento de morte e danificado e auxiliam no processo de cicatrizao. A molcula
responsvel por mediar grande parte dessas funes a interleucina 1 (IL-1) que secretada
pelos macrfagos.
Os moncitos no fagocitam ativamente, at deixarem a corrente sangnea e entrarem nos
tecidos. Ento eles amadurecem e se tornam macrfagos, que atacam e fagocitam agentes
patognicos e partculas estranhas. Enquanto que os neutrfilos podem ser mais ativos nas
fases iniciais de uma infeco, os macrfagos so capazes de manter um ataque duradouro
contra os agentes patognicos. Nos tecidos podem permanecer por dias at meses, possuem
metabolismo ativo e so capazes de se multiplicar. Quando ocorre uma infeco, os moncitos
so atrados para a rea da infeco por substncias qumicas liberadas no processo
inflamatrio. medida que eles se deslocam para os tecidos, sob a ao de mediadores
qumicos, eles crescem, amadurecem e se tornam macrfagos. Ou seja, sofrem um processo
de modificao que os transforma em clulas

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preparadas para a sua funo. Vrios estmulos originados no local da inflamao so capazes
de atrair e estimular/ativar macrfagos. Por causa da sua migrao atravs dos tecidos para os
locais de infeco, estas clulas so algumas vezes chamadas de macrfagos circulantes.
H outros macrfagos que esto sempre localizados em certos tecidos e rgos do
corpo do animal. Estes so chamados macrfagos fixos ou residentes e de acordo com os
tecidos onde se encontram recebem denominaes diferentes : clulas de Kpfer no fgado,
macrfagos alveolares nos pulmes, clulas da micrglia no sistema nervoso central,
osteoclastos nos ossos, histicitos na derme, clulas de Langerhans na epiderme. Alm disso
so tambm encontrados no

bao, nos gnglios linfticos, na medula ssea e na cavidade peritoneal, onde esto os rgos
abdominais. Estes macrfagos desempenham um papel particularmente crtico na luta contra
agentes patognicos, que tendem a formar colnias num determinado lugar do corpo, como a

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colonizao dos alvolos pulmonares (pequenas bolsas de ar) durante uma pneumonia. Ao
contrrio dos linfcitos, que podem penetrar nos tecidos e recircular no sangue, os macrfagos
so raramente recirculantes (exceo: clulas foliculares dendrticas). Ou seja, existe uma
populao de moncitos circulantes (sem atividade fagoctica) que podem eventualmente ser
recrutados a locais de inflamao. Nesse processo so ativados, tornando-se fagocticos
(macrfagos). Alm dos moncitos que em resposta a estmulos inflamatrios tornam-se
macrfagos, existe uma populao de macrfagos j residentes nos tecidos (em cada tecido
recebe uma denominao diferente). Em resposta a um processo infeccioso, tanto os

moncitos/macrfagos recrutados do sangue como os j residentes so ativados e passam a


combater o agente patognico.
Fagocitose
O processo da fagocitose crtico para um sistema de defesa inespecfico eficaz e
tambm apia o desenvolvimento da imunidade especfica. Ocorre em vrias etapas:
1. Aderncia: a membrana celular do fagcito adere superfcie do patgeno. Alguns agentes
patognicos tm grande cpsulas ou camadas proticas de revestimento que dificultam a
aderncia. A aderncia fica mais fcil se o patgeno tiver sido opsonizado (revestido por
protenas do complemento ou por anticorpos). Os macrfagos possuem receptores na sua
membrana para componentes do complemento e para anticorpos, o que facilita a fagocitose
de partculas opsonizadas. Partculas opsonizadas so fagocitadas com eficincia muito
maior do que partculas no opsonizadas. 2. Ingesto: a membrana plasmtica do fagcito

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estende projees chamadas pseudpodos (pseudo=falso; podo=p), que envolvem o


patgeno, que fica ento dentro de uma
2. vescula chamada fagosoma. 3. Digesto: o fagosoma agora livra-se da membrana celular e
entra no citoplasma. No citoplasma, eles entram em contato e funde-se com lisossomas
(vesculas que contm enzimas digestivas e substncias bactericidas), formando um
fagolisossoma. O fagolisossoma destroi a maioria dos tipos de bactrias em 10 a 30
minutos. O fagolisossoma agora contm apenas material no digervel, sendo ento
chamado do corpo residual. Este corpo move-se na direo da membrana celular e
descarrega o seu lixo para fora da clula.

O papel dos fagcitos na imunidade especfica


O principal papel dos fagcitos como um mecanismo de defesa inespecfico. Os
fagcitos cercam e atacam qualquer agente patognico, clula ou partcula (como o plen),
reconhecidos como estranhos, os ingerem e tentam destru-los. Ento, uma das principais
funes dos fagcitos a fagocitose. Todavia, os fagcitos tambm desempenham um papel
fundamental no desenvolvimento da imunidade especfica. Lembramos que uma resposta
imunolgica especfica representa o desenvolvimento de defesas dirigidas contra um agente
patognico especfico; a velocidade e a eficcia da resposta imunolgica especfica melhoram a
cada invaso subseqente do agente patognico.
Uma vez que um patgeno tenha sido ingerido e digerido por um macrfago,
fragmentos desse patgeno, vem superfcie do macrfago sendo apresentados (expostos) por

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molculas conhecidas como MHC, ou Complexo Maior de Histocompatibilidade, aos


linfcitos T. Protenas de bactrias, fungos, vrus, protozorios, alm de outros
microorganismos so apresentadas pelos macrfagos aos linfcitos T. Dependendo do tipo de
antgeno e do tipo do MHC (classe I e II) que o apresenta, o antgeno ser reconhecido por um
tipo de linfcito T (auxiliar ou citotxico), desencadeando um de dois tipos bsicos de
imunidade especfica (humoral ou celular).
As clulas apresentadoras de antgeno (APCs) so uma populao heterognea de
leuccitos com capacidade imunoestimulatria. Essas clulas so encarregadas de processar e
apresentar antgenos aos linfcitos. Alm dos fagcitos, clulas epiteliais, clulas dendrticas e
endoteliais, alm de linfcitos B tambm podem apresentar antgenos aos linfcitos T
auxiliares. As clulas apresentadoras de antgeno encontram-se principalmente na pele e
rgos linfides. A encontram-se as clulas de Langerhans, clulas foliculares dendrticas
(linfonodos, bao, MALT).
As clulas dendrticas apresentam projees na membrana citoplasmtica semelhantes
a espinhos. Entre essas clulas esto as clulas dendrticas interdigitantes e as clulas
foliculares dendrticas. As clulas dendrticas interdigitantes esto presentes no interstcio de
vrios rgos. So abundantes nas reas ricas em clulas T do linfonodo e do bao. Na
epiderme, recebem a denominao de clulas de Langerhans. So clulas muito eficientes na
apresentao de antgenos a linfcitos T auxiliares. So capazes de carrear antgenos desde a
epiderme at o linfonodo mais prximo para dar incio resposta imune. As clulas foliculares
dendrticas esto presentes no centro germinativo dos folculos linfticos dos linfonodos, bao
e dos agregados linfocitrios associados s mucosas (MALT).

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Linfcitos
Os linfcitos so derivados da linhagem linfide de clulas que deriva-se das clulas
tronco da medula ssea. Desenvolvem-se nos rgos linfides primrios e transitam pelo
sangue at os rgos linfides secundrios. Os linfcitos esto distribuidos pelo organismo,
principalmente nos rgos linfides como linfonodos, bao e medula ssea. Alm disso, essas
clulas esto constantemente recirculando pelo sangue.

Os linfcitos so as clulas responsveis pelo reconhecimento do antgeno e pela


montagem da resposta imunolgica. Como h diferentes formas de resposta imunolgica

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(mediada por anticorpos, por clulas, memria imunolgica), existem tambm diferentes tipos
de linfcitos. Existem vrias populaes e subpopulaes de linfcitos, cada qual com
caractersticas e funes efetoras diferentes. As subpopulaes de linfcitos no podem ser
distinguidas com base na sua estrutura e morfologia (no so distingveis ao microscpio
ptico) e sim atravs de marcadores (protenas) de superfcie. Por isso, muitas vezes as
populaes de linfcitos so denominadas pelos marcadores de membrana que os mesmos
possuem (ex:CD8, CD4).
Em geral, as populaes de linfcitos no podem ser distinguidas pela microscopia. A
exceo est nos linfcitos grandes com grnulos no citoplasma chamados de clulas NK
(natural killer). Dentre os linfcitos, trs populaes principais podem ser reconhecidas:
linfcitos B, linfcitos T e NK. As duas primeiras so encarregadas da resposta imunolgica
especfica e a ltima envolvida na resposta inespecfica. Os linfcitos B apresentam como
marcadores de superfcie as imunoglobulinas (Igs), das classes IgD e IgM. Os linfcitos T
apresentam como marcadores o TCR (T cell receptor) e CD3. Diferentes populaes de
linfcitos T podem apresentar outros marcadores, alm do TCR e CD3 que as diferenciam. As
clulas NK no apresentam marcadores de superfcie. Por isso so tambm chamadas de
clulas nulas (null cells).A especificidade da resposta imunolgica determinada pelos
linfcitos por que essas clulas tm a capacidade de reconhecer especificamente os diferentes
antgenos.
Os linfcitos B originam-se na medula ssea e completam a sua maturao nos
linfonodos e outros acmulos linfides perifricos, aps contato com o antgeno. Os linfcitos
B caracterizam-se por apresentar imunoglobulinas (classes IgD e IgM) em sua superfcie.
Essas imunoglobulinas funcionam como receptores para estabelecer contato e permitir o
reconhecimento de antgenos. O prprio linfcito sintetiza essas imunoglobulinas e as insere
na membrana. As imunoglobulinas so receptores antignicos e cada clula possui um grande
nmero (milhares) dessas molculas na superfcie. Para cada linfcito B, todas as
imunoglobulinas presentes na membrana so idnticas entre si. Desta forma, um determinado
linfcito B s se conjugar e responder a um nico determinante antignico. Uma populao
de linfcitos que deriva-se de um nico linfcito pela sua multiplicao, estimulada pelo
encontro com o antgeno, denominada de clone. Por serem derivadas de um nico
progenitor, todos os linfcitos que compe um clone apresentam as imunoglobulinas idnticas
na sua superfcie.
Os linfcitos B so encontrados no crtex dos linfonodos, zona marginal do bao,

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medula ssea e placas de Peyer do intestino, alm de outros acmulos linfides. Apenas um
pequeno nmero dessas clulas circula no sangue.
Os linfcitos B so responsveis pela imunidade humoral: em contato com antgenos
especficos, eles proliferam (multiplicam-se, originando milhares de linfcitos [clones] com
especificidade idntica) e se diferenciam em plasmcitos. Os plasmcitos ento produzem
grande quantidade de anticorpos especficos para o antgeno que originou a sua proliferao e
diferenciao. Algumas das clulas especficas que proliferaram em resposta ao antgeno no
diferenciam-se em plasmcitos, permanecendo no centro germinativo dos linfonodos. Essas
clulas constituem as clulas de memria. Diante de uma re-exposio ao mesmo antgeno, as
clulas de memria iro responder mais rpida e eficientemente, pois grande parte dos
processos de reconhecimento, ativao e proliferao j ocorreram durante a resposta inicial
(primria). A maturao/competncia funcional dos linfcitos B s ocorre aps o contato com
o antgeno especfico que geralmente ocorre nos rgos linfides secundrios (linfonodos,
bao, timo, MALT).
A maioria dos linfcitos B expressa protenas do MHC-II na membrana e apresenta
tambm outros marcadores, como CD19, CD20 e CD22. Como os linfcitos B expressam em
sua superfcie o MHC-II, podem funcionar como apresentadores de antgeno para os linfcitos
T auxiliares (ver: apresentao de antgeno).
Receptor antignico de clulas B: cada linfcito B recoberto por cerca de 200.000 a
500.000 receptores antignicos idnticos. Alm de se conjugar com o antgeno especfico e
sinalizar para a clula B responder, esses receptores tambm mediam a internalizao
(fagocitose) de antgenos. A fagocitose resulta em protelise e processamento dos antgenos e
a expresso de fragmentos peptdicos pelas molculas do MHC-II da membrana. Esses
receptores so molculas de imunoglobulinas (anticorpos) que esto inseridas na membrana.
Como as imunoglobulinas nesse caso funcionam como receptores de clulas B, so tambm
denominadas de receptores de clulas B (B cell receptors, BCR), para diferenciar das
imunoglobulinas circulantes. Em outras palavras, os anticorpos so formas solveis dos BCR
secretados pelas clulas B/plasmcitos nos fludos corpreos.
Os BCRs so estruturalmente semelhantes ao TCR (receptores de clula T) e podem
ser divididos em dois componentes funcionalmente diferentes. Um componente se conjuga ao
antgeno (regio varivel) e o outro envia o sinal apropriado para o interior da clula B. Os
sinais enviados para o interior da clula B, aps o contato com o antgeno, so os responsveis
pela ativao, proliferao e diferenciao dos linfcitos B em plasmcitos.

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Os linfcitos T so responsveis pela imunidade celular. Originam-se na medula ssea


e completam a sua maturao no timo (por isso so denominados de linfcitos T). Reconhecem
o antgeno aps processado, na superfcie de clulas apresentadoras de antgeno (APCs).
Semelhante aos linfcitos B, aps o contato com o antgeno, esses linfcitos proliferam e se
tornam efetores, no entanto, algumas clulas T tambm permanecem como clulas de memria.
Existem vrias subpopulaes de linfcitos T que so funcionalmente distintas e expressam
diferentes marcadores de superfcie (marcadores fenotpicos). Esses linfcitos reconhecem e
respondem a antgenos associados superfcie de outras clulas, apresentados por molculas
do MHC. As clulas T no reconhecem antgenos solveis, em sua conformao natural. S
reconhecem antgenos proticos (antgenos T dependentes), aps serem processados pelas
clulas apresentadoras de antgeno (APCs).
Os linfcitos T podem ser divididos em duas populaes principais:
1. Linfcitos T auxiliares (T helper, Th). So clulas reguladoras da resposta imune.
Coordenam a atividade de vrios tipos de clulas envolvidas na resposta imunolgica. Esses
linfcitos apresentam como marcador de membrana a molcula CD4. Por isso, so tambm
chamados de linfcitos T CD4. Em contato com o antgeno, proliferam e liberam as
interleucinas que atuam sobre outras clulas do sistema imunolgico (linfcitos B, linfcitos
citotxicos e macrfagos), ativando essas clulas. Os Th so mediadores tanto da resposta
imune celular (linfcitos T citotxicos) como da resposta humoral (atividade dos linfcitos B e
anticorpos). Existem duas populaes principais de linfcitos TCD4, que diferem entre si pelas
interleucinas que produzem: a) Linfcitos Th1. Secretam interleucinas que atuam
principalmente estimulando a resposta celular (estimulam Th, Tcitotxicos, macrfagos, NK);
b) Linfcitos Th2. Secretam interleucinas (IL 4, 5, 10) que atuam principalmente estimulando
a resposta humoral (estimulam a proliferao e diferenciao de linfcitos B > produo de
anticorpos).
As clulas Th s reconhecem um antgeno quando este for apresentado em
associao com uma molcula do MHC classe II. O MHC II se conjuga ao CD4 e ao receptor
de clula T (TCR). As clulas que expressam MHC II na sua superfcie so as clulas
apresentadoras de antgeno (APCs).

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2. Linfcitos T citotxicos (CTLs). So clulas T que reconhecem antgenos proticos


produzidos dentro de clulas infectadas (por vrus ou bactrias intracelulares) ou tumorais e
destroem essas clulas (citotoxicidade celular). Possuem como marcador de superfcie a
molcula CD8. Por isso so tambm chamados de linfcitos TCD8.
O mecanismo de destruio das clulas infectadas chamado de citotoxicidade e por
isso so chamados de linfcitos T citotxicos ou CTLs (cytotoxic T lymphocytes). A
citotoxicidade um processo dependente de estimulao pelas clulas T auxiliares, atravs de
interleucinas especficas. A morte da clula infectada ocorre por apoptose ou por choque
osmtico provocados pelo CTL.Para se tornar citotxico, o linfcito TCD8 depende de dois
sinais: 1.Contato com o antgeno e 2. Estmulo por interleucinas (derivadas dos linfcitos
TCD4). Essa diferenciao (de CD8 inativo para CTL) ocorre nos tecidos, aps o contato
com o antgeno. O estmulo antignico para o CD8 tornar-se citotxico ocorre atravs da
interao entre o TCR+CD8 (da membrana do linfcito) com o MHC-I+peptdeo (na
membrana da clula infectada). O CTL s reconhecer um peptdeo estranho se este for
apresentado em associao com uma molcula de MHC classe I. O MCH- I interage com o
CD8 + TCR. O MHC-I expresso virtualmente por todas as clulas, com exceo dos
neurnios. Por isso, virtualmente todas as clulas [exceo: neurnios] que venham a ser
infectadas por um vrus podem apresentar antgenos virais ao CTL e serem destrudas. Os
CD8/CTLs desempenham um papel muito importante na resposta imunolgica contra vrus.
Alm de destruir as clulas infectadas, os CTLs podem inibir ou bloquear a replicao do vrus
no interior da clula, atravs da secreo de interferons e fator de necrose tumoral (TNF).
A lise das clulas infectadas pelos CTLs ocorre por dois mecanismos principais: 1.
Lise osmtica. O CTL, em contato com a clula infectada, libera no meio extracelular

31

substncias denominadas de perforinas. Essas perforinas produzem poros (aberturas) na


membrana plasmtica da clula alvo. Com isso, ocorre influxo de gua para o interior celular,
levando morte celular por lise osmtica. 2. Apoptose. Os poros abertos pelas perforinas
permitem a entrada de substncias granulares (chamadas de granzimas), tambm secretadas
pelos CTLs, para o interior das clulas alvo, levando morte por apoptose.
Receptor antignico de clulas T (TCR): So encontrados na superfcie dos linfcitos T. Cada
linfcito possui de 10.000 a 20.000 TCRs idnticos. Por outro lado, linfcitos diferentes
possuem TCRs com especificidades diferentes. Por isso, um linfcito s se conjugar e
responder a um nico epitopo. Diferentes epitopos so reconhecidos por diferentes linfcitos.
Cada TCR consiste de duas cadeias peptdicas conjugadoras de antgenos associadas a outras
glicoprotenas que amplificam o sinal gerado pela conjugao a um antgeno e transmitem ao
interior da clula T.
Um tipo de TCR consiste de duas cadeias chamadas de e . Outro tipo de cadeias
chamadas e . De 90 99% dos TCR so /. Os TCR / podem reconhecer o antgeno
sozinho sem a participao do MHC. A variedade de TCRs disponveis em um animal
cuidadosamente regulada. Um animal deve possuir uma populao de clulas T diferentes que
podem responder a tantos antgenos diferentes quanto possvel. Ao mesmo tempo, no pode
possuir TCRs que se associem com antgenos prprios. As clulas T que possuem TCRs que
reconhecem auto-antgenos so destrudas dentro do timo (deleo clonal). Isso ocorre
durante a vida fetal e serve para impedir a resposta imune contra antgenos prprios.
Existe uma terceira populao de clulas T, que so chamadas Linfcitos T supressores cuja
funo no est bem estabelecida. Aparentemente so moduladores ou inibidores da resposta
imunolgica.
Clulas Natural Killer (NK):
Uma terceira populao de linfcitos so as chamadas clulas citotxicas naturais
(natural killer) ou simplesmente NK. So linfcitos grandes granulares, no fagocticos. As
clulas NK no recirculam e no so encontradas no ducto torcico. So encontradas
principalmente nos rgos linfides secundrios. Devido ausncia de marcadores especficos
de linfcitos B e T na membrana (no possuem imunoglobulinas, CD8 ou CD4), essas clulas
eram inicialmente chamadas de "null cells" (clulas nulas sem marcador).
As clulas NK tem a capacidade de reconhecer e destruir de modo inespecfico
clulas com alteraes na superfcie (clulas tumorais e clulas infectadas com vrus).

32

Representam uma importante linha de defesa nas infeces vricas, sobretudo nos primeiros
dias, quando ainda no existem linfcitos T e B especficos para o agente. A morte celular
induzida pelas NK ocorre por apoptose quando a NK ativada libera seus grnulos para o meio
extracelular, no espao entre a prpria NK e a clula alvo. Essas clulas diferenciam-se dos
CTLs por destrurem as clulas alteradas de modo inespecfico, independente do
reconhecimento de antgeno conjugado com o MHC. A ativao das clulas NK ocorre quando
essas clulas entram em contato com a interleucina 2 (IL-2), secretada pelos linfcitos T CD4..
A atividade das clulas NK aumentada logo aps a infeco, por ao do interferon
do tipo I (IFN-1). A citotoxicidade das clulas NK pode ser aumentada se as clulas-alvo
forem recobertas por anticorpos. As clulas NK possuem receptores que reconhecem a regio
constante (Fc) das imunoglobulinas, facilitando a sua ligao e atividade citotxica. Esse tipo
de citotoxicidade associada a anticorpos chamada de ADCC ("antibody dependent cellular
citotoxicity"). Assim, alm de desempenhar um papel importante de modo inespecfico no
incio das infeces, as clulas NK tambm participam da resposta imunolgica especfica,
tendo a sua funo facilitada pelos anticorpos.
III. ANTICORPOS
Os anticorpos so protenas plasmticas da famlia das globulinas
(por isso tambm chamados de imunoglobulinas, Igs), produzidas pelos
plasmcitos, que so clulas que derivam-se dos linfcitos B, em resposta
estmulos antignicos. As imunoglobulinas tm a capacidade de ligar-se
especificamente ao antgeno que induziu a proliferao dos linfcitos que
os produzem. A ligao das imunoglobulinas nos antgenos pode resultar
na inativao ou destruio dos mesmos, por ao direta ou com a
participao de outros componentes do sistema imunolgico (clulas,
complemento). Os anticorpos mediam uma srie de funes na resposta
imunolgica adquirida e constituem-se no principal mecanismo efetor da
resposta imunolgica humoral. Como citado anteriormente, so as formas solveis
dos receptores de linfcitos B e possuem a mesma especificidade. Ou seja, o BCR de um
determinado linfcitos B possui a mesma especificidade antignica de um anticorpo secretado
por esse linfcito. Da mesma forma, todos os BCRs e anticorpos secretados por um mesmo
linfcito B possuem a mesma especificidade. Os seus stios de ligao no antgeno so

33

idnticos e por isso reconhecem e ligam-se no mesmo antgeno. Por outro lado, BCRs e
anticorpos de diferentes clones de linfcitos B diferem em sua especificidade, ligando-se em
diferentes antgenos. Diferentemente dos linfcitos B, que permanecem grande parte do tempo
no tecido linfide, os anticorpos so liberados no plasma sanguneo e fluidos teciduais, onde
podem rapidamente localizar e ligar-se aos antgenos.
A presena de anticorpos especficos para um determinado antgeno no sangue uma
indicao segura da exposio prvia a esse antgeno. Portanto, quando se faz um teste
sorolgico para verificar ttulos (nveis) de anticorpos para um determinado agente, pode-se
estar verificando se h anticorpos suficientes para garantir proteo ou simplesmente se o
animal j foi exposto anteriormente ao agente.
Estrutura das imunoglobulinas
As Igs ou anticorpos possuem uma estrutura bsica comum, que composta por
duas cadeias proticas pesadas e duas cadeias proticas leves. Essas cadeias so ligadas entre si
por pontes dissulfeto, assumindo a forma de um

Y. Na figura a seguir, as cadeias leves esto

desenhadas em escuro e as cadeias pesadas em claro. O tratamento das Igs com proteases
como a papana resulta na clivagem da molcula na regio da dobradia (vrtice), resultando
em dois fragmentos com funes distintas (Figura): a regio Fc (assim chamada pois a regio
que fixa [liga-se] no complemento) e a regio Fab (antigen binding = liga-se no antgeno). A
regio Fc responsvel por muitas funes dos anticorpos, como ativao do complemento,
transferncia de imunidade passiva, reconhecimento por fagcitos, citotoxicidade celular
mediada por anticorpos, etc... A regio Fab a responsvel pelo reconhecimento e ligao no
antgeno (stio conjugador do antgeno). Como os dois stios conjugadores antignicos em
cada regio do Fab so idnticos, as imunoglobulinas so capazes de se ligar com dois
antgenos ao mesmo tempo. Logo, as molculas de anticorpo podem grumar bactrias em
conjunto aglutinao.
A regio Fc constante, ou seja,

no varia entre os anticorpos

produzidos por diferentes linfcitos. O stio conjugador do antgeno, que


composto por parte da cadeia leve e parte da cadeia pesada, em suas
extremidades, altamente varivel. Essa variao deve-se a diferentes
seqncias de aminocidos que podem compor essa regio. A grande
variao nesse stio que permite que os anticorpos sejam capazes de
reconhecer e ligar-se em virtualmente

34

qualquer antgeno existente na natureza. Como existe uma enorme


variedade de antgenos, deve
existir uma grande variedade de stios conjugadores. Cada anticorpo
possui um stio diferente, que capaz de reconhecer um antgeno
diferente. esse stio que confere a especificidade ao anticorpo. Ou seja,
um stio com determinada sequncia de aminocidos e conformao
reconhece e liga-se especificamente, e to somente, a um determinado
antgeno. Cada clone de linfcitos B produz anticorpos com um stio
especfico, que diferente dos stios dos anticorpos produzidos por outros
clones. Por outro lado, todos os anticorpos (e BCRs) de um determinado
clone de linfcitos B possuem o stio conjugador idntico. Ou seja, a
especificidade

desses stios (e o antgeno ao qual vai ligar-se)

caracterstica de cada clone de linfcito.


Classes de imunoglobulinas
Existem cinco classes de imunoglobulinas (IgM, IgG, IgA, IgE e IgD),
que diferem entre si em sua estrutura (sobretudo na cadeia pesada,
regio

Fc).

As diferenas

na

estrutura

refletem-se em

diferentes

35

propriedades biolgicas e funes.


Imunoglobulina M (IgM): Possuem estrutura pentamrica, com cinco monmeros ligados
entre si por uma cadeia. Devido ao seu tamanho, as IgM so predominantemente
intravasculares: permanecem nos vasos sanguneos e no penetram nos tecidos, placenta ou
colostro. So encontradas na segunda maior concentrao no soro (inferior IgG). As IgM
so os primeiras Igs que aparecem em resposta a uma exposio primria a um antgeno (IgM
alta = sinnimo de infeco aguda). Os nveis de IgM aumentam rapidamente na resposta
primria, atingem picos entre os 15 e 20 dias e declinam tambm rapidamente, atingindo nveis
muito baixos algumas semanas aps. Na resposta secundria (que a resposta montada frente
a uma re-exposio ao antgeno), os nveis de IgM so muito pouco (ou nada) alterados. Ou
seja, a IgM uma imunoglobulina predominantemente da infeco primria. Embora estando

presente em concentraes menores que a IgG, a IgM mais eficiente na ativao do


complemento. Tambm possui atividade na opsonizao, neutralizao de vrus, aglutinao de
agentes patognicos. Aps ligao parede bacteriana, pode desencadear a destruio da
bactria, diretamente ou com auxlio do complemento. Monmeros de IgM tambm so
encontrados inseridos na membrana dos linfcitos B, onde desempenham o papel de receptores
(BCRs, juntamente com a IgD).
Imunoglobulinas G (IgG): so as Igs mais numerosas, representando at 80% dos anticorpos
presentes no sangue. Pelo seu tamanho e por existirem mecanismos especficos de
transferncia, as IgGs tambm esto presentes na maioria dos fludos corpreos e
ocasionalmente em secrees. a menor das imunoglobulinas e, por isso, pode sair facilmente

36

dos vasos sangneos. Podem atravessar a placenta de algumas espcies e tambm esto
presentes no colostro (primeiro leite),

propiciando uma imunidade temporria ao recm

nascido. Na inflamao, h um aumento da permeabilidade vascular que permite que as IgG


participem da defesa nos fluidos teciduais e superfcies corpreas. Possuem a estrutura de um
monmero (um nico Y). A ligao de IgG na superfcie microbiana pode provocar

aglutinao e tambm levar opsonizao. Os anticorpos da classe IgG protegem contra


bactrias e vrus circulantes (lise mediada por anticorpos e complemento, neutralizao,
aglutinao), neutralizam toxinas bacterianas, ativam o complemento e melhoram a eficcia da
fagocitose (opsonizao). Tambm promovem a lise de clulas infectadas por vrus, facilitando
o contato de clulas NK com a superfcie das clulas infectadas (ADCC). Aparecem
tardiamente (aps a IgM) na resposta primria, mas atingem nveis mais altos e duradouros.
Constituem-se na principal Ig na resposta secundria, aparecendo mais rapidamente e atingindo
nveis altos e duradouros. Em algumas espcies (humano, camundongo), as IgGs dividem-se
em subclasses (IgG1, IgG2, IgG1a, IgG2b, etc...). A diviso em subclasses deve-se pequenas
diferenas na regio constante das cadeias pesadas da poro Fc.
Imunoglobulinas A (IgA): representam apenas 10-15% dos anticorpos do sangue. No entanto,
constituem-se nos anticorpos mais numerosos e importantes nas mucosas e secrees
corpreas, como o muco, saliva, lgrimas, colostro e leite.Existam duas formas estruturais
diferentes de IgA: a IgA srica circula no sangue como um monmero. Entretanto, a forma
mais eficaz a IgA secretora, que tem a forma dimerica (dois monmeros conectados entre si
por uma cadeia proteca). A IgA secretora produzida por plasmcitos localizados nos
acmulos linfides das submucosas. Cada molcula adquire um componente secretor, que a
protege das enzimas proteolticas. A principal funo da IgA secretora evitar a ligao de
agentes patognicos superfcie das clulas epiteliais que revestem as mucosas respiratria,
digestiva e urogenital. Portanto, as IgA constituem-se nos principais componentes da
imunidade de mucosas ou imunidade local.

37

A IgA no ativa o complemento e no funciona como opsonina. Pode aglutinar


antgenos particulados e neutralizar vrus. O principal mecanismo de ao das IgA impedir a
aderncia dos microorganismos s superfcies mucosas do organismo.
Imunoglobulinas E (IgE): desempenham um papel importante nas alergias e infeces
parasitrias. Os anticorpos da classe IgE podem ligar-se em parasitas
multicelulares

(fungos,

helmintos).

Basfilos

eosinfilos

contm

receptores que reconhecem a regio Fc da IgE. Com isso, essas clulas


ligam-se nos parasitas atravs da IgE e liberam substncias que lesionam
a membrana do parasita e causam inflamao. As IgE geralmente esto
com os nveis aumentados em processos alrgicos. Possuem a estrutura
de um monmero simples (trs regies nas cadeias
pesadas na regio Fc), podendo ser encontradas em secrees

como a saliva,

fludo

intestinal, leite, colostro, urina e secrees do sistema urogenital. Possuem a meia vida mais
curta de todas as imunoglobulinas e esto presentes em concentraes baixas no soro.
Imunoglobulinas D (IgD): so encontradas inseridas na superfcie das clulas B, onde
desempenham a funo de receptores (BCRs), juntamente com imunoglobulinas da classe IgM.
Possuem a estrutura de um monmero e podem tambm ser encontrados no sangue e no tecido
linftico. As funes do IgD no so bem conhecidas, mas parecem estar envolvidas em
desencadear uma resposta inicial a antgenos.
Distribuio das imunoglobulinas
Embora os anticorpos sejam encontrados principalmente na poro fluda do sangue,
eles podem ser encontrados em vrios outros compartimentos: 1. Em compartimentos
citoplasmticos (Golgi, RE) e na superficie de linfcitos B (IgD, IgM);

2. No plasma

sanguneo: IgG (70-75%), IgA (15-20%), IgM (10%), IgE (0,004%), IgD (0,2%); 3. No
lquido intersticial dos tecidos onde os plasmcitos acumulam-se; 4. Na superfcie de algumas
clulas efetoras, que possuem receptores para a poro Fc (NK, mastcitos); 5. Em secrees
como o leite, muco (principalmente IgA).
Funes dos anticorpos
As imunoglobulinas so produzidas em resposta a um antgeno e
desempenham vrias funes especificamente contra esse antgeno. O

38

mecanismo de ao dos anticorpos varia, mas os diferentes mecanismos


dependem fundamentalmente da ligao especfica do anticorpo (atravs
da regio varivel) com o antgeno. Abaixo so listadas as principais
funes dos anticorpos:
1. Receptores de linfcitos B. Monmeros de IgM e IgD encontram-se
inseridos na

membrana

plasmtica de linfcitos

B e servem de

receptores, atravs dos quais essas clulas reconhecem antgenos. O


contato entre os linfcitos B e os antgenos, ento, ocorre atravs das
imunoglobulinas de superfcie. Essas imunoglobulinas ligam-se nos
antgenos atravs da regio varivel (stio conjugador de antgeno). O
contato com o antgeno produz sinais qumicos que so enviados pela
poro transmembrana das imunoglobulinas para o interior do linfcito.
Esses sinais que determinam a ativao, proliferao e diferenciao
dos linfcitos B em plasmcitos.
2. Inativao de toxinas Toxinas bacterianas ou de outra origem podem
ser inativadas pela ligao especfica com anticorpos. Essa inativao
pode ocorrer pela ligao propriamente dita, ou indiretamente atravs do
estmulo

de

outros

mecanismos

efetores

do

sistema

imunolgico

(complemento, clulas). A ligao de anticorpos em toxinas pode facilitar


a fagocitose e remoo das toxinas por clulas fagocticas que possuam
receptores para a poro Fc.
3. Neutralizao de vrus A ligao de anticorpos em protenas da
superfcie dos vrions (capsdeo ou envelope) pode impedir que o vrion se
ligue no receptor celular e consiga penetrar na clula para iniciar a
infeco. Esse um dos principais mecanismos de neutralizao viral por
anticorpos. A neutralizao de vrus complexos (herpesvrus, poxvrus)
geralmente requer um grande nmero de molculas de anticorpo por
vrion; nmero que pode ser bem pequeno para vrus simples no
envelopados (parvovrus, poliovrus, vrus da Febre Aftosa). A ligao de
anticorpos na superfcie de vrus envelopados tambm pode ativar o
complemento,

resultando na lise ou inativao da infectividade da

partcula viral pelo complemento. Aglutinao de partculas virais

39

principalmente por IgM tambm pode ocorrer. Embora se considere no


interior da clula alvo os vrus so inacessveis a anticorpos, tem sido
demonstrado para alguns vrus (cinomose, sarampo) que mesmo aps a
entrada do vrus na clula, os anticorpos podem interferir na replicao
viral. O mecanismo responsvel ainda no foi determinado.
4. Lise de bactrias - A IgM tem a capacidade de lisar diretamente
algumas bactrias. Lise bacteriana tambm pode ocorrer atravs da
ligao

do

anticorpo

ativao

do

complemento

na

membrana

bacteriana. Com isso, ocorre a formao do MAC (complexo de ataque


membrana) pelos componentes do complemento, levando lise osmtica.
5. Opsonizao Bactrias e outros antgenos particulados so mais
eficientemente fagocitados por macrfagos e neutrfilos se forem
revestidos por substncias que facilitem o contato entre a membrana da
clula fagoctica e a superfcie da partcula. Substncias que exercem
esse papel so chamadas genericamente de opsoninas, e o processo
chamado de opsonizao. Dentre as opsoninas naturais, destacam-se o
fragmento C3b do complemento e imunoglobulinas (principalmente IgG).
Para que a opsonizao facilite a fagocitose necessrio que a clula
fagoctica possua receptores para as opsoninas (C3b ou IgG) na sua
membrana. Os principais fagcitos possuem esses receptores.
6. Citotoxicidade mediada por anticorpos (ADCC): a lise de clulas tumorais ou clulas
infectadas por vrus, pelos neutrfilos, macrfagos e principalmente clulas NK. Para isso, os
anticorpos (IgG) devem reconhecer e ligar-se em antgenos tumorais ou virais na superfcie da
clula afetada. Como as clulas mencionadas possuem receptores para a poro Fc da IgG
(chamados de receptores de Fc), ligam-se especificamente na clula atravs do anticorpo e
desencadeiam o processo de destruio celular (liberao de perforinas, apoptose, lise
osmtica).
Nesses casos, o reconhecimento (e a conseqente lise) das clulas afetadas depende da
interao entre a clula efetora (atravs do receptor de Fc) com a poro Fc da IgG localizada
na membrana. Por isso, o mecanismo denominado de Antibody Dependent Cellular
Citotoxicity (ADCC). A funo do anticorpo nesse mecanismo proporcionar o
reconhecimento e um maior contato entre a clula efetora e a clula alvo, facilitando o

40

processo de citotoxicidade. A ADCC um dos principais mecanismos de combate infeces


vricas. Os eosinfilos mediam uma forma especial de ADCC. Parasitas recobertos por IgE,
IgA ou IgG so reconhecidos (atravs de receptores de Fc) pelos eosinfilos, que ao ligaremse no parasita atravs da Ig liberam protenas bsicas existentes em seu grnulos. Essas
protenas tem a capacidade de danificar a membrana do parasita levando-o morte.
7. Citotoxicidade dependente de anticorpos mediada por complemento. A ligao de
anticorpos em antgenos na superfcie de clulas tumorais ou infectadas por vrus pode levar
lise dessas clulas por outro mecanismo, que no a lise mediada por clulas. A interao
antgeno-anticorpo na membrana das clulas ativa o complemento na superfcie da membrana,
levando formao do complexo MAC (C5-C9). Esse complexo forma poros na membrana,
levando sada de solutos e pequenas molculas e entrada de gua na clula afetada. Com isso,
essas clulas so destrudas por lise osmtica. Esse mecanismo funciona em clulas tumorais e
infectadas, assim como em bactrias.
8. Ativao do complemento. A interao anticorpo-antgeno, seja em soluo ou em
membranas, provoca a ativao da cascata do complemento, com a gerao de fragmentos
com diversas atividades biolgicas: opsonizao, quimiotaxia, atividade inflamatria (aumento
da permebilidade vascular, vasodilatao, etc...), ADCC e lise celular e bacteriana mediada por
complemento, entre outros. Nesses casos, os anticorpos agem recrutando as funes do
complemento que atuam no processo inflamatrio e no combate ao agente infeccioso.
9. Hipersensibilidade imediata. Mediada por IgE e basfilos/mastcitos. A introduo de
determinados antgenos no organismo causa associao/agregao de IgE. Com isso, os
basfilos/mastcitos, atravs de receptores de Fc para IgE, ligam-se nesses anticorpos e
liberam seu grnulos que contm substncias vasoativas (heparina, histamina, leukotrienes,
prostaglandinas) que provocam as reaes tpicas da hipersensibilidade (contrao da
musculatura lisa das vias areas e vasos, vasodilatao capilar, edema).
10. Imunidade de mucosas. As imunoglobulinas da classe IgA so muito importantes na
imunidade de mucosas (ou de superfcie). Essas IgAs so produzidas nos acmulos linfides da
submucosa e transportadas atravs do epitlio para a luz do rgo. No lmen dos rgos (tubo
digestivo,

respiratrio,

urogenital),

essas

imunoglobulinas

atuam

neutralizando

microorganismos.
11. Imunidade fetal. Em vrias espcies animais (humanos, primatas, carnvoros, roedores),
ocorre a transferncia de imunoglobulinas (sobretudo IgG) atravs da placenta para os fetos.
Essas Igs so importantes para conferir resistncia ao recm-nascido contra possveis infeces

41

peri-natais. A imunidade transmitida pela placenta aos fetos dita imunidade passiva. No
entanto, a estrutura
placentria de vrias espcies (eqideos, ruminantes, sunos) no permite a passagem de
imunoglobulinas aos fetos. Nessas espcies, o recm-nascido (antes de mamar o colostro)
virtualmente desprovido de imunidade passiva.
12. Imunidade neonatal pelo colostro. Recm-nascidos de mamferos que no transferem
anticorpos atravs da placenta nascem virtualmente desprovidos de imunidade especfica. Da
mesma forma, o seu sistema imunolgico ainda no est totalmente capaz de produzir uma
resposta imunolgica eficiente. Felizmente, anticorpos maternos so deslocados da circulao
materna para a glndula mamria no final da gestao e ficam altamente concentrados no
colostro. A ingesto de colostro, e a conseqente absoro das imunoglobulinas
(principalmente IgG) pelo sistema digestivo do recm nascido (nas primeiras 24-36h) confere a
estes animais imunidade nas primeiras semanas de vida. A imunidade passivamente adquirida
(anticorpos transmitidos atravs da placenta ou pelo colostro) temporria, durando de
semanas a meses. As imunoglobulinas so absorvidas e ficam no sangue por semanas a meses,
sendo responsveis pela imunidade humoral passiva nesses animais. Em sunos, alm das
imunoglobulinas absorvidas pela corrente sangunea, IgG e IgA ingeridas com o colostro
permanecem alguns dias no lmen intestinal e podem conferir imunidade local contra
microorganismos. Outras funes: retirada do excesso de antgeno dos lquidos corporais,
interao com outros componentes do sistema imunolgico, participao em reaes alrgicas
e auto-imunes.
Citocinas (ou interleucinas)
As clulas do sistema imunolgico secretam uma variedade de substncias proticas
que regulam a resposta imunolgica. Essas substncias, genericamente denominadas de
interleucinas (interleukinas, linfocinas ou citocinas), atuam atravs da modulao da atividade
biolgica de vrias clulas do sistema imunolgico. As citocinas secretadas pelos linfcitos so
tambm chamadas de linfocinas ou interleucinas. As citocinas so protenas solveis
circulantes, atravs das quais as clulas do sistema imunolgico podem se comunicar entre si.
So produzidas por diferentes clulas do sistema imunolgico, sendo geralmente nomeadas
pela sua atividade biolgica. A denominao original interleucina foi estabelecida porque elas
estabelecem comunicao entre leuccitos (inter=entre, leucinas=leuccitos).
As citocinas mediam uma rede complexa de interaes entre todos os tipos celulares do

42

sistema imunolgico. Tipos de citocinas:


Interleucinas: citocinas que regulam interaes entre os linfcitos e outros leuccitos.
Originalmente, as interleucinas foram identificadas como produto de secreo dos linfcitos
TCD4, cuja funo efetora justamente secretar essas interleucinas, que por sua vez regulam a
atividade de vrias clulas do sistema imunolgico. A interleucina 1 (produzida principalmente
por macrfagos) pode induzir febre; ela estimula clulas T CD4+ helper quando antgenos
esto presentes; atrai fagcitos para o local da inflamao. A interleucina 2 pode aumentar a
proliferao das clulas T CD4+ estimuladas por um antgeno; aumenta a proliferao e a
diferenciao de clulas B, ativa clula T CD8+ (clulas T citotxicas) e clulas NK (natural
killer). As interleucinas 4 e 5 estimulam a proliferao e diferenciao de linfcitos B em
plasmcitos e a conseqente produo de anticorpos. Mais de 20 interleucinas (secretadas por
linfcitos) j foram identificadas.
Interferons: so glicoprotenas sintetizadas em resposta infeco viral, a uma estimulao
imune ou a vrios estimuladores qumicos. Inibem a replicao viral por interferirem com o
RNA e a sntese das protenas virais. Reconhecem-se cinco tipos de interferons: interferon-alfa,
interferon-beta, interferon-gama, interferon-omega e interferon-tau.
Os interferons so protenas antivirais produzidas por clulas infectadas por um vrus.
Os interferons fazem as clulas sadias prximas tomar medidas para inibir replicao viral,
atravs da produo de protenas antivirais. Os interferons podem inibir a replicao viral em
concentraes muito baixas - to baixas que elas no ao txicas para as clulas sadias.
Fatores de necrose tumoral: so duas citocinas relacionadas sendo uma derivada dos
macrfagos e outra das clulas T. Tm a capacidade de provocar morte celular programada
(apoptose) em algumas clulas tumorais e aumentar a atividade de clulas fagocitrias.
Algumas citocinas podem agir como quimiocinas: famlia de protenas que tem importante
papel na inflamao. Outras agem como fatores de crescimento e estimulam muitas clulas a
crescer.
As citocinas agem em vrios alvos celulares. Podem se conjugar com receptores da clula que
as produziram efeito autcrino; podem se conjugar com receptores de clulas em
proximidade ntima das clulas que as produziram efeito parcrino e podem se espalhar por
todo o corpo efeito endcrino.
Propriedades gerais das citocinas:
-

so produzidas durante a fase efetora da imunidade especfica e natural e servem como

mediadoras e reguladoras da resposta imunolgica e inflamatria.

43

Muitas citocinas podem ser secretadas por diferentes tipos celulares.

Citocinas tambm estimulam a sntese de outras citocinas.

As aes das citocinas podem ser redundantes, isto , muitas funes atribudas a uma

citocina podem ser tambm caractersricas de outras citocinas.


-

Para que a citocina consiga estimular uma clula necessrio que ela se conjugue com

receptores especficos nas clulas alvo.


-

A expresso de receptores especficos reguladas por sinais especficos.

Muitas respostas celulares s citocinas so lentas, ocorrendo durante um perodo de horas

e requerem sntese de mRNA e protenas.


-

Para muitas clulas alvo, citocinas atuam como reguladoras da diviso celular, isto , como

fatores de crescimento.
Principais funes das citocinas:
-

mediadoras da resposta imune;

reguladoras da ativao, crescimento e diferenciao dos linfcitos;

ativadoras das clulas inflamatrias inespecficas;

estimuladoras do crescimento e diferenciao dos leuccitos imaturos.

IV- ANTGENO
A funo bsica do sistema imunolgico defender o organismo
contra microorganismos patognicos. Ento, essencial que esses
microorganismos sejam reconhecidos to logo penetrem no corpo do
animal. O organismo deve ser capaz de reconhecer que esses agentes
so estranhos (no prprios) e desencadear uma resposta especfica
contra os mesmos. O sistema imunolgico capaz de reconhecer
componentes

especficos

desses

agentes

patognicos,

chamados

antgenos.
Classicamente,
substncia

(ou

antgeno

molcula)

tem

sido

capaz de

definido

como

qualquer

ligar-se especificamente

em

componentes do sistema imunolgico (anticorpos, receptores de clulas


T). No entanto, tem sido demonstrado que pequenas molculas so
incapazes

de

estimular

resposta

imunolgica.

Por

outro

lado,

macromolculas como protenas, carbohidratos, lipdeos, polissacardeos

44

e cidos nuclicos so capazes de estimular a resposta imunolgica,


atravs da interao com os componentes do sistema imunolgico. Esse
tipo de molcula chamada de imungeno. Para simplificar, denominarse- antgeno

qualquer molcula de interagir com os componentes do

sistema imunolgico e induzir uma resposta imunolgica. Dentre estes,


necessrio distinguir-se os antgenos prprios dos no-prprios.
Os agentes patognicos (vrus, bactrias, fungos, protozorios), por
mais simples que sejam, so compostos por vrios antgenos. Os vrus
mais simples, por exemplo, possuem de 4 a 5 protenas no capsdeo. Cada
uma dessas protenas constitui-se em um antgeno. Os vrus mais
complexos possuem mais de 100 protenas diferentes, cada uma
constituindo-se em um antgeno. Bactrias so compostas centenas ou
milhares de protenas, lipopolissacardeos e outras macromolculas. Cada
uma dessas macromolculas representa um antgeno. Ou seja, os
microorganismos possuem, dependendo de sua complexidade, de alguns
a milhares de macromolculas que individualmente so capazes de
estimular a resposta imunolgica e por isso so denominados de
antgenos. Dentre os antgenos de um microorganismo, alguns so
altamente

imunognicos

(tambm

chamados

de

antgenos

imunodominantes), enquanto outros podem ser moderada ou fracamente


imunognicos. Ou seja, a capacidade de estimular a resposta imunolgica
varia entre os antgenos de um determinado microorganismo. Geralmente
os antgenos (protenas, polissacardeos) localizados na superfcie do
agente (capsdeo, envelope viral; parede ou cpsula bacteriana) so os
mais imunognicos.
Aspectos estruturais
As clulas do sistema imunolgico, atravs de seus receptores de
superficie (TCR, BCR), reconhecem locais ou stios especficos de cada
antgeno e no o antgeno inteiro. Isso deve-se ao fato dos stios de
reconhecimento do antgeno pelos TCR e BCR serem pequenos e s
estabelecerem contato com uma pequena regio do antgeno. Os stios

45

conjugadores de antgeno (regio varivel das Igs), por exemplo, s


estabelecem contato com uma seqncia de 6 a 8 aminocidos de um
antgeno protico. Esses stios de reconhecimento e ligao so chamados
de epitopos ou determinantes antignicos.

Cada antgeno pode conter

um ou vrios epitopos, dependendo do seu tamanho. Molculas grandes


de protena geralmente possuem dezenas de epitopos. Em um mesmo
antgeno, alguns epitopos so mais efetivos do que outros na induo de
resposta imunolgica. Esses epitopos

so chamados imunodominantes.

Os epitopos imunodominantes esto geralmente localizados na superficie


dos antgenos e so hidrofilicos.
molcula

hidrofbicas

tm

Pores localizadas internamente na


pouca

chance

de

ser

um

epitopo

imunognico.

Os epitopos podem ser constitudos de aminocidos ou resduos de


acar dispostos linearmente ou fazendo parte de uma estrutura
tridimensional.

Epitopos com estrutura tridimensional podem ser

denaturados por ao do calor ou determinados qumicos.

Quando o

epitopo formado pela sequncia linear de aminocidos, chamado de


epitopo linear, contnuo ou sequencial. Esse tipo de epitopo geralmente
reconhecido por linfcitos T. Linfcitos TCD8 reconhecem epitopos lineares
de 8 a 12 (mdia 9) aminocidos; linfcitos TCD4 reconhecem epitopos

46

lineares de 16-20 aminocidos.

Quando a estrutura que reconhecida

pelo sistema imunolgico uma estrutura tridimensional, com um certo


formato, denominado de epitopo conformacional.

Esses tipos de

epitopos so reconhecidos por linfcitos B, atravs de seus receptores


(anticorpos) de superfcie. Nesses casos, o que reconhecido a forma
(conformao),

no

sequncia

de

aminocidos.

Linfcitos

reconhecem epitopos formados por 6 a 8 aminocidos.


Denomina-se imunogenicidade a capacidade de um determinado antgeno
de induzir uma

resposta imunolgica. A imunogenicidade de um

determinado antgeno varia com vrios fatores:


1.Composio qumica
As protenas geralmente so os melhores imungenos. Estimulam a
resposta humoral (atravs da estimulao direta de linfcitos B) e celular
(linfcitos

TCD4).

Protenas

grandes

geralmente

so

melhores

imungenos do que protenas pequenas. Polissacardeos raramente so


bons imungenos. Possuem alguma atividade antignica quando ligados
protenas (glicoprotenas).

Estimulam apenas linfcitos B (estimulao

direta pela ligao aos BCRs). No induzem resposta por linfcitos TCD4.
Lipdios no so bons imungenos quando no esto ligados protenas.
So muito comuns no organismo e so facilmente degradveis. cidos
nuclicos (RNA, DNA) tm alouma atividade antignica, sobretudo quando
conjugados protenas.

Em algumas doenas autoimunes ocorre

formao de anticorpos anti-DNA.


2. Tamanho da molcula
Teoricamente, quanto maior a molcula do antgeno, maior ser o nmero epitopos e
conseqentemente maior ser a sua imunogenicidade. Molculas maiores tambm so mais
facilmente fagocitadas por macrfagos, facilitando o seu reconhecimento e apresentao. Os
imungenos mais potentes so geralmente protenas com peso molecular superior a 100 kDa.
Molculas pequenas e solveis no so facilmente fagocitadas, o que prejudica o seu
processamento e reconhecimento pelo sistema imunolgico.
3. Dose do antgeno
A intensidade da resposta imunolgica aumenta em resposta a um aumento da dose de

47

antgeno, at um certo limite. Quando esse limiar ultrapassado, no h aumento da resposta


e pode haver o estabelecimento de um estado de no-resposta chamado genericamente de
tolerncia. Doses macias de antgeno podem levar imunotolerncia.
4. Complexidade qumica e estabilidade
Quanto mais complexa for a estrutura molecular do antgeno, maior ser a sua capacidade de
induzir uma resposta imunolgica eficiente. Molculas de polissacardeos e protenas
complexas so bons imungenos. Da mesma forma, quando mais estvel for um antgeno, mais
intensa ser a resposta imunolgica produzida contra ele. Antgenos que so facilmente e
rapidamente metabolisados no constituem-se em bons imungenos pois no permanecem
longo tempo estimulando o sistema imunolgico. O uso de adjuvantes pode aumentar a
resposta imunolgica a esses tipo de antgeno.
Antgenos T dependentes e independentes
Antgenos T dependentes: So antgenos que dependem das clulas T
(linfcitos TCD4) para estimular a resposta imunolgica. Antgenos
proticos no induzem a formao de anticorpos sem a participao de
TCD4. A proliferao de linfcitos B para originar plasmcitos secretores
de anticorpos para um antgeno protico depende de dois sinais: 1. Um
sinal resultante da ligao direta do BCR com o antgeno protico; 2.
Outro sinal (interleucinas 4, 5, 10) enviado pelos linfcitos TCD4 ao
reconhecerem

mesmo

antgeno.

Ou

seja,

linfcitos

TCD4

reconhecem simultaneamente o antgeno e respondem: o linfcito B


prolifera auxiliado pelas interleucinas produzidas pelo linfcito TCD4. O
resultado a produo de plasmcitos secretores dos anticorpos
especficos para oantgeno em questo. A capacidade de induzir resposta
imune celular mediada por linfcitos T caracterstica dos antgenos T
dependentes. As protenas so linfcitos T dependentes.
Antgenos T independentes:

So antgenos que podem estimular a

resposta imune sem estimular os linfcitos TCD4. Esses antgenos so


reconhecidos

diretamente

pelos

BCR/anticorpos

na

superficie

dos

linfcitos B, desencadeando sua proliferao e produo de anticorpos


especficos. So capazes de estimular diretamente os linfcitos B, atuando

48

como mitgenos.

So molculas grandes, polimricas com unidades

repetidas em sua superfcie. So geralmente polissacardeos bacterianos,


mas tambm algumas protenas polimricas de platelmintos. Estimulam
somente a resposta humoral, pois no estimulam os linfcitos T (T
independentes).
Reconhecimento de antgeno
A distino entre o que prprio e o que estranho (no-prprio) ao
organismo

constitui-se

no

ponto

chave

da

resposta

imunolgica.

Antgenos prprios devem ser reconhecidos como tal e no devem induzir


resposta imunolgica, sob risco de desenvolver-se enfermidades autoimunes. Por outro lado, antgenos estranhos (no-prprios) devem induzir
uma resposta imunolgica capaz de elimin-los do organismo. Por isso, o
reconhecimento de antgenos no-prprios (distinguindo-os dos prprios)

evento

central

da

resposta

imunolgica.

atravs

desse

reconhecimento que clulas B e T so estimuladas e proliferam,


originando

clulas

efetoras

(plasmcitos,

Th,

CTL)

que

iro

agir

especificamente contra o antgeno que as estimulou. O reconhecimento


de antgeno a etapa inicial da resposta imunolgica e geralmente ocorre
no local de contato entre o antgeno e as clulas linfides, ou seja, nos
linfonodos, acmulos linfides (MALT, Placas de Peyer) e bao.

Os

linfcitos B, TCD4 (auxiliares) e TCD8 (citotxicos) reconhecem antgenos


de formas diferentes. Em todos os casos, o reconhecimento feito por
receptores especficos localizados na superfcie das clulas. Nos linfcitos
B, os receptores para antgeno (BCRs) so as molculas de anticorpos
(IgM e IgD) localizadas na membrana desses linfcitos. Os receptores dos
linfcitos T so os " T cell receptors" (TCR), que so molculas
semelhantes s imunoglobulinas, localizadas na membrana dessas
clulas. a interao entre o antgeno e os receptores (BCRs e TCRs) que
gera o estmulo qumico intracelular para a proliferao e diferenciao
dos linfcitos. A proliferao e diferenciao, por sua vez, gera os
mecanismos efetores da resposta imunolgica (plasmcitos, anticorpos;

49

CTLs, interleucinas). Ligaes pouco especficas, ou "frouxas" no geram


estmulo suficiente e conseqentemente no desencadeiam o processo de
proliferao e diferenciao celular. Como ser visto a seguir, as formas
de reconhecimento de antgeno por linfcitos B e T so diferentes, mas
complementares.
Reconhecimento de antgenos por linfcitos B:

Linfcitos B

reconhecem antgenos em soluo, na sua conformao natural ou nativa.


Esse mecanismo importante para o reconhecimento de patgenos
extracelulares, como bactrias e vrus livres, alm de protenas e outros
antgenos no proticos. O simples contato entre o antgeno com os BCRs
pode desencadear o estmulo para o linfcito B proliferar. Para isso
necessrio que esse linfcito possua BCRs que reconheam e liguem-se
especificamente no antgeno, atravs de suas regies variveis (stio
conjugador de antgeno). A unio do anticorpo com o antgeno mais do
tipo mo-luva do que do tipo chave-fechadura. Ou seja, um dos
componentes pode alterar um pouco a sua conformao para ajustar-se
conformao do outro. Dessa fonna, os anticorpos produzidos contra um
antgeno

viral

ou

bacteriano

podem

posteriormente

reconhecer

antgeno na superfcie do agente e neutraliz-lo diretamente, por


aglutinao, ou com a participao do complemento pode diretamente
lisar vrions e bactrias. Em resumo: os linfcitos B so capazes de
reconhecer e reagir a antgenos proticos e no-proticos, que so
reconhecidos sem processamento prvio, em sua forma nativa, pela
regio varivel de seus receptores. A ligao especfica BCR-antgeno gera
sinais

intracelulares

que

levam

proliferao

dos

linfcitos

eventualmente a gerao de plasmcitos produtores de anticorpos


especficos para o antgeno que os estimulou.

50

Reconhecimento de antgeno por linfcitos T. Ao contrrio dos linfcitos B,


os linfcitos T no so capazes de reconhecer antgenos em sua forma
natural, sem prvio processamento e apresentao. Esses linfcitos
reconhecem e reagem apenas contra antgenos proticos e somente aps
processamento.

Antgenos extracelulares (protenas solveis, vrus,

bactrias) so inicialmente fagocitados por clulas especializadas (APCs),


processados em pequenos peptdeos e apresentados aos linfcitos TCD4+

combinados com molculas do MHC-II. Os linfcitos TCD4 reconhecem os


peptdeos+MHC-II atravs de seu TCR+CD4. Antgenos produzidos dentro
das clulas (protenas virais, por exemplo) so degradados em pequenos
peptdeos e apresentados aos linfcitos TCD8 combinados com molculas
do MHC-I. Linfcitos TCD8 reconhecem

os peptdeos+MHC-I atravs de

seu

protenas

TCR+CD8.

Dessa

forma,

tanto

extracelulares

como

intracelulares so capazes de induzir uma resposta imunolgica por


linfcitos T. Lembrando que apenas antgenos proticos so capazes de
induzir resposta mediada por linfcitos T.

51

Reconhecimento de antgenos por linfcitos TCD8.

Esses

linfcitos

reconhecem protenas de microorganismos produzidas dentro das clulas

do organismo. Protenas estranhas produzidas


dentro das clulas durante a replicaro de vrus e algumas bactrias
intracelulares

so

inicialmente

processadas,

originando

peptdeos

(fragmentos proticos) de 8 a 10 aminocidos. Esses peptdeos associamse a molculas de MHC-I em determinados compartimentos celulares e
posteriormente os complexos MHC-I+peptdeos so enviados at a

superfcie da clula, onde ficam expostos. Os linfcitos TCD8 reconhecem


esses complexos (MHC-I+peptdeo) atravs de seu TCR+CD8. O

52

estmulo gerado por essa ligao enviado para o interior do linfcito,


sendo responsvel por sua ativao e proliferao. Linfcitos TCD8
ativados tornam-se citotxicos e destroem as clulas infectadas. Todas as
clulas do organismo (possvel exceo: neurnios) possuem MHC-I.
Portanto, qualquer clula infectada por um vrus ou bactria intracelular
pode apresentar os antgenos do proticos do agente e ser destrudo por
CTLs. Esse um dos principais mecanismos de defesa contra infeces
virais. Mesmo aps a penetrao nas clulas, e mesmo sem expressar
seus antigenos na superfcie da clula infectada, os vrus podem ser
combatidos pelos linfcitos T citotxicos. Em resumo: linfcitos TCD8
reconhecem antgenos proticos produzidos dentro de clulas infectadas
por vrus (ou bactrias), aps processamento e

apresentao em

associao com molculas do MHC-I. O reconhecimento ocorre atravs do


TCR+CD8 e resulta na ativao do CD8, levando atividade citotxica.

53

Reconhecimento

de

antgeno

por

linfcitos

TCD4.

Esses

linfcitos

reconhecem antgenos proticos (protenas solveis, protenas de vrus,


bactrias, etc.) que so inicialmente fagocitados e processados por
clulas chamadas de clulas apresentadoras de antgeno (APCs). Aps a
fagocitose, as protenas do agente so processadas no interior do
fagcito, dando origem a peptdeos de 12 a 16 aminocidos. No interior
de

determinados

compartimentos

intracelulares,

esses

peptdeos

associam-se a molculas do MHC-II. Os complexos MHC-II+peptdeo so


transportados superfcie da clula, onde

so reconhecidos pelos

linfcitos TCD4 atravs do TCR+CD4. Essa ligao gera um estmulo para


a proliferao dos linfcitos TCD4. A apresentao de antgenos proticos
aos linfcitos TCD4 uma tarefa de um grupo especializado de clulas,
chamadas genericamente de clulas apresentadoras de antgeno (APCs).
Alm de possuir atividade fagoctica (ou de internalizao de antgenos),
uma clula deve expressar molculas de MHC-II para ser um APC. No
organismo, apenas um grupo seleto de clulas expressa MHC-II e funciona
como APC para linfcitos TCD4. Essa clulas incluem os macrfagos,
clulas foliculares dentrticas, Langerhans, interdigitantes e linfcitos B.
As APCs esto distribuidas por todo o organismo, principalmente nos
acmulos linfides e rgos linfides secundrios. Os linfcitos B so
considerados os APCs mais eficientes. Ligam-se no antgeno atravs dos

54

BCRs/Igs, internalizam, processam e apresentam os peptdeos+MHC-II aos


linfcitos TCD4, recebendo destes as interleucinas responsveis pela sua
ativao e diferenciao em plasmcitos. Em resumo: os linfcitos TCD4
reconhecem protenas exgenas (de microorganismos inclusive) aps
serem fagocitadas, processadas e apresentadas em forma de peptdeos
associados

com

molculas

de

MHC-II

na

superfcie

de

clulas

apresentadoras de antgeno. O reconhecimento se d atravs do


TCR+CD4 e resulta na ativao e proliferao dos linfcitos, com a
conseqente produo de interleucinas que iro coordenar a ao de
vrias clulas na resposta imunolgica.
Tipos de resposta induzida por diferentes antgenos (resumo):
Vrus vivo: 1. Reconhecido por linfcitos B: induz formao de anticorpos.
2. Protenas virais fagocitadas por APCs: antgenos so processados e
apresentados associados ao MHC-II aos linfcitos TCD4+: produz citoquinas que aumentam
resposta humoral e celular.
3. Produz antgenos intracelulares: so degradados e os peptdeos
associados ao MHC-I so apresentados aos linfcitos TCD8 citotxicos que
destroem a clula infectada.
Vrus inativado: Apenas 1 e 2 (anticorpos e linfcitos T CD4+)
3. No infecta a clula, no gerando resposta de linfcitos T citotxicos.
Bactrias: Apenas 1 e 2. No induz resposta de linfcitos T citotxicos.
Protenas (antigenos proticos): Apenas 1 e 2.

55

Outros (lipdios, carbohidratos, DNA). Apenas induzem a formao de


anticorpos, pela interao direta com os linfcitos B [sem auxlio de
TCD4).
Fases da resposta imunolgica
A resposta imunolgica a um determinado antgeno ocorre em
vrias etapas, que iniciam com o processo de reconhecimento do
antgeno, passam pela ativao, proliferao e diferenciao das clulas
efetoras (linfcitos B, T, CTLs) e culminam com os mecanimos efetores
que objetivam eliminar o agente. Dependendo dos mecanismos envlvidos,
pode-se dividir essa resposta em trs fases ou etapas: 1. Fase cognitiva;
2. Fase de ativao; 3. Fase efetora.
1. Fase cognitiva: a fase inicial da resposta imunolgica e envolve os
processos de reconhecimento do antgeno pelos linfcitos T e B. Nessa
fase os antgenos so reconhecidos pelos linfcitos B, e so processados e
apresentados aos linfcitos T. O reconhecimento de antgenos por essas
clulas produz estmulos para que se tornem ativada e proliferem em
resposta ao antgeno. Essa fase dura horas a poucos dias.
2. Fase de ativao; Em resposta ao estmulo gerado pelo contato com o
antgeno,

os

linfcitos

sofrem

alteraes

metablicas

importantes,

preparando-os para a proliferao (multiplicao) e posteriormente


diferenciao. Essa fase pode ser dividida em 2.1. Ativao propriamente
dita: Caracterizada pelos eventos bioqumicos iniciais que modificam o
metabolismo das clulas, preparando-as para os eventos subseqentes.
Essa ativao resultado do contato com o antgeno. 2.2.Proliferao
(multiplicao): Nessa fase os linfcitos se multiplicam intensamente,
produzindo milhares de linfcitos com especificidade idntica (mesmos
BCRs da clula parental). Esse processo de multiplicao celular em
resposta ao antgeno chamado de expanso clonal. O resultado que o
nmero

de

linfcitos

especficos

para

um

determinado

antgeno

multiplica-se milhares de vezes. 2.3. Diferenciao: Aps a multiplicao,


os linfcitos resultantes sofrem um processo de diferenciao, que os

56

torna

preparados

para

sua

atividade

efetora.

Os

linfcitos

diferenciam-se em plasmcitos, que so clulas com grande capacidade


de secretar anticorpos. Os linfcitos TCD4 produzidos pela expanso
clonal passam a produzir mais interleucinas, que coordenam a atividade
de vrias clulas. Os linfcitos TCD8 tornam-se capazes de destruir
clulas

infectadas

(tornam-se

CTLs).

Cabe

ressaltar,

que

aps

multiplicao, uma parcela dos linfcitos resultantes dessa multiplicao


no se diferencia em clulas efetoras, e permanece como clula de
memria. So essas clulas de memria que daro incio resposta
imunolgica em exposies subseqentes ao antgeno.
3. Fase efetora: a fase em que os mecanismos efetores da resposta
imunolgica atuam para eliminar o agente. Os anticorpos so secretados
pelos plasmcitos e exercem suas variadas funes (ver: funes dos
anticorpos). Os linfcitos TCD4 secretam interleucinas e estas exercem
suas funes. Linfcitos TCD8 destroem as clulas infectadas. Nessa fase,
todos os mecanismos efetores (especficos e no-especficos) auxiliam a
combater o agente (clulas, complemento, etc...).
Resposta primria e secundria
Existem diferenas qualitativas e quantitativas entre a resposta imunolgica
montada frente uma primeira exposio ao antgeno (resposta primria) e exposies
subseqentes (resposta secundria). Na primeira vez que um antgeno penetra no organismo e
entra em contato com os linfcitos B, existem poucos linfcitos com receptores (BCRs/Igs)

57

especficos para aquele determinado antgeno. Os linfcitos que possuem BCRs especficos
para
aquele antgeno ento reconhecem o antgeno (atravs dos BCRs), ficam ativados e proliferam,
originando milhares de linfcitos com a mesma especificidade (mesmos BCRs). A maioria
desses linfcitos diferencia-se em plasmcitos, que so clulas secretoras de anticorpos. Esses
plasmcitos por sua vez, iniciam a produo de anticorpos, que so especficos para o antgeno
que inicialmente induziu a sua ativao e proliferao. Alguns linfcitos especficos para o
antgeno no diferenciam-se em plasmcito e permanecem como clulas de memria, que
possuem vida longa. Cabe ressaltar que o processo de ativao, proliferao e diferenciao
dos linfcitos B em plasmcitos necessita dois sinais: o primeiro produzido pelo prprio
mecanismos de reconhecimento do antgeno pelo linfcito; o segundo sinal enviado pelos
linfcitos TCD4 (auxiliares), que ao entrarem em contato e reconhecerem o mesmo antgeno,
produzem interleucinas que auxiliam o processo de ativao/proliferao/diferenciao dos
linfcitos B. As principais interleucinas envolvidas nesse processo so a IL-4, IL-5 e IL-10.
Ento, alm do contato com o antgeno, os linfcitos B necessitam sinais qumicos dos TCD4
para o processo final de produo de anticorpos. O processo de reconhecimento, ativao,
proliferao, diferenciao e produo de anticorpos leva algum tempo. Dessa forma, os
anticorpos especficos para o agente comeam a aparecer aos poucos, a partir de um certo
perodo aps a infeco, at atingir um certo plat. Em infeces vricas, anticorpos
especficos para o agente comeam a ser detectados 7 a 8 dias aps a infeco. Inicialmente
so detectadas imunglobulinas da classe IgM. As IgG aparecem mais tardiamente. Os nveis
aumentam gradativamente at atingir um plat, ao redor dos dias 14 a 20. Esse plat dura
poucos dias, a partir do qual os nveis de anticorpos comeam a reduzir-se gradativamente.

58

Estes eventos que ocorrem aps a exposio inicial ao antigeno so chamados de resposta
humoral primria. esse tipo de resposta que ocorre aps a vacinao com um determinado
antgeno. A resposta humoral primria caracterizada por um aumento gradativo e lento, noimediato, de magnitude e durao moderadas nos nveis de anticorpos sricos especficos. O
tempo que demora para o aparecimento dos anticorpos devido aos processos de
reconhecimento, ativao, proliferao e diferenciao e sntese de anticorpos que leva algum
tempo.
Em exposies subseqentes ao mesmo antgeno, a resposta
imunolgica difere qualitativamente, quantitativamente e em relao ao
tempo necessrio para ser detectada. Na segunda vez que o antgeno
entra em contato com o organismo, o nmero de linfcitos B com
receptores especficos para esse antgeno muito maior do que na
resposta primria. O que ocorreu na resposta primria, em realidade, foi
uma expanso na populao de linfcitos especficos para aquele
antgeno (expanso clonal). A maioria dos linfcitos resultantes da
expanso

clonal

diferenciou-se

em

plasmcitos,

mas

um

nmero

significativo permaneceu como clula de memria (especficas para o


antgeno). Com isso, em uma segunda exposio ao agente, o processo
de reconhecimento do antgeno, ativao e proliferao de linfcitos B,
que j ocorreu anteriormente,

bastante abreviado.

O nmero de

linfcitos sensibilizados muito maior, resultando em uma resposta


proliferativa rpida, de grande magnitude, com um aumento rpido e
intenso nos nveis de anticorpos.

A resposta imunolgica a uma re-

exposio ao antgeno denominada de resposta secundria. A resposta


secundria caracteriza-se por um aumento rpido, de grande magnitude
e de longa durao dos nveis de anticorpos. Na resposta secundria, as

59

imunoglobulinas predominantes so as IgGs. esse tipo de resposta que


ocorre quando um animal vacinado posteriormente exposto ao agente
infeccioso. Muitas vezes, a resposta secundria suficientemente rpida
e intensa para impedir que o agente replique e dissemine-se no
organismo causando doena.
Tipos de imunizao
A induo de imunidade a um determinado agente infeccioso pode
ser feita de duas
maneiras: 1. Imunizao ativa; 2. Imunizao passiva. Imunizao ativa
pode ser obtida pela exposio do animal ao agente infeccioso (ou
antgeno), seja pela administrao do agente deliberadamente (infeco
experimental ou vacinao) ou pela exposio do animal a outros animais
infectados. Esse tipo de imunizao chamada de imunizao ativa, pois
provoca a resposta do sistema imunolgico em resposta ao agente.
Quando se imuniza com o agente vivo, a forma de imunizao mais
efetiva, pois a que mais se assemelha infeco natural. Dependendo
do tipo de antgeno e do agente infeccioso utilizado, a imunidade induzida
pode ser humoral, celular ou ambas. Alm da vacinao tradicional com
vacinas vivas ou inativadas, outras prticas de imunizao ativa, atravs
de exposio ao agente ou a indivduos infectados tm sido utilizadas ao
longo dos anos, com algum sucesso. Por exemplo, leitoas antes de serem
cobertas so colocadas em baias ou em contato com porcas mais velhas
para entrarem em contato com o parvovrus suno. A infeco das leitoas
com o vrus no traz conseqncias para a sua sade, mas confere
proteo contra uma infeco subseqente quando estiverem prenhes.
Infeces de fmeas soronegativas prenhes com o parvovrus suno
freqentemente

levam

perdas

embrionrias

ou

fetais.

Prtica

semelhante tem sido utilizada para imunizar fmeas bovinas com o vrus

60

da Diarria Viral Bovina (BVDV), as quais so colocadas em contato com


animais infectados antes da temporada de monta.
A transferncia de anticorpos pr-formados atravs da placenta,
colostro ou por administrao de soro hiperimune confere proteo
temporria. Nesses casos, o animal (ou feto) recebe anticorpos formados
em outro animal imune. Como a imunidade independe da resposta
imunolgica do animal, esse tipo de imunizao chama-se imunizao
passiva. Como regra, a imunidade passiva humoral. H trs tipos
possveis de imunizao passiva: transplacentria, colostral e pela
administrao de soro imune especfico.
Imunidade transferida atravs da placenta: Vrias espcies animais,
incluindo

humanos,

primatas,

roedores

carnvoros

transferem

imunoglobulinas (principalmente IgG) atravs da placenta, para o feto. O


objetivo prover o recm-nascido de imunidade contra microorganismos
nas primeiras semanas de vida. Os recm-nascidos dessas espcies so
menos dependentes da imunidade conferida pelo colostro. Em espcies
como eqdeos, sudeos e ruminantes, no ocorre passagem significativa
de anticorpos pela placenta. Em conseqncia, os recm-nascidos dessas
espcies

so

desprovidos

de

imunidade

ao

nascer

so

muito

dependentes da imunidade conferida pelo colostro para sobreviverem. A


capacidade de transferncia de anticorpos pela placenta depende do tipo
de placenta de cada espcie. Placentas do tipo endotlio-corial (humanos,
primatas e carnvoros) e hemocorial (roedores) so altamente permeveis
a imunoglobulinas e permitem a passagem de anticorpos da me para os
fetos. Por outro lado, placentas do tipo epitlio-corial (eqdeos) e
sindesmo-corial (ruminantes, sudeos) so virtualmente impermeveis
passagem de imunoglobulinas.
Imunidade colostral: Em virtualmente todas as espcies de mamferos, no
final da gestao ocorre uma passagem significativa de imunoglobulinas
(principalmente IgG e IgA) do soro para a glndula mamria. Com isso,
ocorre uma concentrao muito grande de anticorpos no colostro. O
objetivo dessa concentrao de anticorpos no colostro a de conferir

61

imunidade ao recm-nascido. Estes, ao ingerirem o colostro, ingerem e


absorvem imunoglobulinas especficas para vrios agentes infeciosos
para os quais a me possui anticorpos. Grande parte das imunoglobulinas
(IgG, principalmente) so absorvidas no trato gastrointestinal do recmnascido (primeiras 24-36h) indo para o sangue. Uma parte (IgA) pode
permanecer no lmen intestinal onde confere proteo contra agentes
infecciosos nesse local. Tanto a imunidade adquirida pela placenta como a
colostral so passageiras: duram de semanas a alguns meses, que o
tempo de durao dos anticorpos recebidos. Em relao a imunidade
colostral, os fatores que determinam a sua durao no recm-nascido
incluem: 1. Nveis de anticorpos maternos; 2. Nveis de anticorpos no
colostro;

3.

Quantidade

de

colostro

ingerida;

4.

Quantidade

de

imunoglobulinas absorvida e 5. Taxa de crescimento corporal do recmnascido. Em certas criaes de eqinos e bovinos leiteiros, tem sido
recomendada a utilizao de "bancos de colostro", ou seja, armazenagem
de colostro de vrias fmeas para posterior administrao recmnascidos como forma de aumentar os seus nveis de imunoglobulinas.
A imunizao passiva pode tambm ser feita artificialmente, pela
administrao

de

soro

especfico

(antitetnico,

antiofdico,

soro

hiperimune especifico para vrus, etc.. ). A exemplo da imunidade


transplacentria e colostral, esse tipo de imunidade essencialmente
humoral e tem durao limitada. Exemplos:

soro

contra

Clostridium

tetani e Clostridium perfringens produzido em equinos; soro antitetnico;


soro anti-ofidico. Esse soro rico em anticorpos (hiperimune) produzido
atravs da administrao repetida de doses crescentes de antgeno no
animal.

Os nveis de anticorpos so monitorados, e quando atingem

determinados valores o sangue coletado para a obteno do soro. Uma


das mais importantes aplicaes da imunizao passiva quando h a
necessidade de uma resposta rpida contra determinado antgeno ou
toxina. A administrao do soro hiperimune confere imunidade imediata,
pois o mesmo geralmente possui altas concentraes de anticorpos.

administrao

repetida

de

soro

hiperimune,

por

outro

lado,

62

desaconselhvel, pois pode provocar reaes anafilticas.


Expectativas imunolgicas de uma vacina
1. Gerao de grande nmero de clulas T e B de memria. So essas
clulas que iro responder quando de uma re-exposio ao agente e
desencadear uma resposta imunolgica protetora.
2. Resposta suficiente de clulas T e B na maioria da populao (>90%).
Essa proteo, chamada "imunidade de populao" conferir proteo ao
restante da populao.
3. Persistncia do antgeno nos locais onde as clulas B de memria so recrutadas para
originar os plasmcitos. Desta maneira a produo de anticorpos prossegue mesmo por longo
tempo aps a imunizao.
Objetivos da vacinao
1. Prevenir (evitar) a infeco- O ideal de uma vacina que a sua
administrao induzisse uma resposta imunolgica capaz de evitar
totalmente a penetrao e replicaro do agente quando de uma
exposio posterior.

Esse tipo de imunidade "absoluta" chamada de

imunidade esterilizante. No entanto, esse objetivo extremamente difcil


de se obter.

Virtualmente nenhuma vacina atual confere esse grau de

imunidade.

Mesmo em indivduos com slida imunidade, o agente

consegue penetrar e iniciar a sua replicaro. nessa fase ento que o


sistema

imunolgico

bloqueia

progresso

disseminao da infeco pelo organismo.

da

replicaro

Vacinas que visem esse

objetivo devem induzir uma resposta local (de mucosas) muito eficiente,
para reduzir ou mesmo abolir a penetrao do agente nas clulas
localizadas na porta de entrada da infeco.
2. Prevenir (atenuar) a doena clnica- Visto que impedir a infeco um
objetivo virtualmente impossvel de obter-se pela vacinao, a preveno
ou atenuao da doena clnicas ou de seus efeitos passa a ser o objetivo
maior da vacinao. Esse objetivo alcanado pela restrio da extenso
e magnitude da infeco, de modo que a replicao do agente seja a tal

63

ponto limitada que no ocorram leses ou patologias celulares, teciduais


e orgnicas. Ou seja, no ocorre doena clnica, ou se ocorrer, esta ser
branda.

Muitas vezes a replicaro do agente fica restrita ao local de

entrada, sem disseminao sistmica pelo organismo. Nesses casos, os


efeitos da infeco so minorados. Sem doena clnica, os animais no
deixam de alimentar-se, de ganhar peso, produzir leite, crescer. Da
mesma forma, sem estar doentes, as pessoas no deixam de trabalhar, ir
escola, produzir. Nesses casos, os objetivos prticos da vacinao so
alcanados.
No entanto, nem sempre esses objetivos so alcanados. Muitas
vezes, a vacinao apenas diminui a intensidade da enfermidade clnica.
Em bovinos vacinados e posteriormente desafiados com o herpesvrus
bovino tipo 1 (BHV-I), por exemplo, pode haver manifestaes clnicas de
rinotraquete. Essas manifestaes, no entanto, so geralmente suaves e
de curta durao, se comparadas s manifestaes em animais no
vacinados.

Em crianas vacinadas contra a coqueluche, em ces

vacinados contra a cinomose, pode ocorrer o mesmo, entre outras. Em


resumo, a vacinao nem sempre e sinnimo de proteo total contra a
doena.

Mesmo assim, se a intensidade e a durao da doena forem

reduzidos significativamente, o saldo ser positivo.


3.

Proteger

conseqncias

fetomaiores

Em

algumas

enfermidades

da

infeco

ocorrem

sobre

infecciosas,
o

feto,

as
com

mortalidade fetal, abortos, malformaes, natimortalidade. Nesses casos,


um dos objetivos maiores da vacinao deve ser a proteo fetal. So
exemplos disso a brucelose, infeco pelo BVDV, parvovirose suna,
rubola em humanos, entre outras.
4.Proteger o recm-nascido - Em algumas infeces, o perodo peri-natal
ou as primeiras semanas de vida so crticos para sobrevivncia da prole.
Nesses casos, a imunizao das mes, antes ou mesmo durante a
prenhez, visa produzir imunidade que seja transferida atravs da placenta
ou pelo colostro, conferindo imunidade nos primeiros dias (meses) de
vida.

64

5. Prevenir a latncia viral - Para os alfaherpesvrus (herpes simplex de


humanos, BHV-1 de bovinos, doena de Aujeszky de sunos), a infeco
latente um ponto fundamental na sua perpetuao na populao. Por
isso, alm de proteger da doena clnica, as vacinas contra esses vrus
tambm tm como objetivo a reduo ou at mesmo a preveno do
estabelecimento e reativao da latncia.

Infelizmente, ainda no h

vacinas que impeam totalmente o estabelecimento de latncia por esses


vrus.
6. Auxiliar na convalescena - Em certos casos, a vacinao pode ser
utilizada como alternativa para auxiliar para auxiliar na recuperao da
enfermidade clnica. Nesse casos, as vacinas teriam papel teraputico e
no preventivo. So exemplos as imunoterapias contra a papilomatose
bovina, equina e canina e imunoterapia contra a Pitiose eqina. H
tambm relatos de uso de vacinas contra o vrus da Influenza para
auxiliar na recuperao clnica de pacientes idosos.
7. Reduzir a eliminao do agente - Um dos componentes obrigatrios de
qualquer vacina contra vrus ou bactrias a capacidade de reduzir a
eliminao do agente pelos indivduos infectados. Dessa forma, reduz-se
a quantidade do agente circulante na populao e conseqentemente o
nmero de animais infectados.

Vacinas efetivas devem reduzir a

quantidade de vrus eliminado e tambm o tempo de eliminao viral.


8.Excluir o agente da populao- Muitas vezes, a vacinao macia da
populao utilizada como mtodo de controle ou erradicao de
enfermidades infecciosas.

Pela reduo ou mesmo eliminao dos

susceptveis (todos imunes), a possibilidade da manuteno do agente na


populao reduzida.

Mesmo aps a erradicao do agente de uma

determinada rea geogrfica, a manuteno de uma grande parcela dos


animais imunizada dificulta a reintroduo do agente. No caso da Febre
Aftosa no sul do Brasil, a manuteno da vacinao nos primeiros anos
aps a eradicao era critica, pois poderia impedir ou dificultar a
reintroduo do agente a partir de reas vizinhas. Nos casos de viroses
humanas como a poliomielite e sarampo, a vacinao macia continuada

65

visa reduzir ao mximo o nmero de susceptveis, tornando a populao


um ambiente pouco favorvel manuteno do agente.

Imunidade contra vrus


A resposta imunolgica contra infeces vricas pode ser dividida
em duas categorias: 1. Resposta inata ou inespecfica e 2. Resposta
adquirida ou especfica. Essas duas respostas desempenham papis
importantes em tempos distintos, com o objetivo de controlar a infeco.
A resposta inespecfica inicia quase imediatamente aps a infeco, com
a induo de interferons do tipo I (IFN alfa, beta) e nveis aumentados de
atividade de clulas NK. Alm disso, outros componentes da resposta
inespecfica

participam,

como

clulas

(neutrfilos,

macrfagos),

complemento e inflamao. Essa resposta precoce no especfica crtica


para controlar a replicao viral e disseminao da infeco. Alm de
controlar a infeco nos estgios iniciais, enquanto a resposta especfica
ainda no est formada, alguns componentes da resposta inespecfica
preparam/auxiliam
fagocticas

na

(macrfagos

formao

da

resposta

principalmente)

especfica.

fagocitam

antgenos aos linfcitos TCD4, por exemplo.

Clulas

apresentam

A resposta imunolgica

inespecfica no consegue eliminar o vrus, mas fornece uma linha inicial


de defesa, especialmente na infeco de animais soronegativos. A
resposta especfica essencial para a eliminao completa da infeco,
mas demora pelo menos uma semana para desenvolver-se. Em geral, a
atividade de clulas efetoras do tipo linfcitos TCD4 e CD8 inicia a partir
do 4 5

e reduz-se aps alguns dias. Os anticorpos produzidos em

resposta ao agente, no entanto, duram por vrioas meses ou anos.


Resposta inespecfica
Citocinas:
Vrias citocinas desempenham importantes papis no combate
infeces vricas. Vrias delas so produzidas precocemente na infeco e
participam da resposta inespecfica.

66

Interferons e (tambm chamados de IFNs tipo I): Esses IFNs so


produzidos por clulas infectadas por vrus e diretamente induzem um
estado de resistncia anti-viral nas clulas vizinhas. Os mecanismos de
resistncia so complexos e envolvem dois caminhos principais: 1.
Degradao de mRNA: com isso o vrus no pode expressar suas
protenas e completar o ciclo replicativo; 2. Inibio da sntese protica:
mesmo efeito.
Alm desses efeitos anti-virais os IFNs e possuem efeitos modulatrios na resposta
imunolgica: alteram a distribuio e ativam clulas NK, induzem expresso de MHC-I,
regulao da produo de citocinas e seus receptores. Os IFNs e cosntituem-se num dos
principais

mecanismos de defesa inespecfica contra infeces vricas, sobretudo nos estgios iniciais da
infeco.
Fator de necrose tumoral (TNF) e interferon : So produzidas
precocemente pelas clulas NK em algumas infeces. Os efeitos dessas
citocinas so semelhantes aos dos IFNs do tipo I. Alm disso, o IFN um
potente ativador dos mecanismos antivirais intracelulares desencadeados

67

por macrfagos.
Clulas:
Clulas NK: As clulas NK foram descobertas por sua atividade de
matar espontaneamente certas clulas tumorais. Posteriormente foi
demonstrado que possuem a mesma atividade contra clulas infectadas
por vrus. A sua atividade citoltica ativada pelos IFNs e e ocorre
aps infeco com uma grande variedade de vrus. Os mecanismos de lise
celular mediada pelas NK no esto bem esclarecidos, mas parecem ser
similares

aos

desencadeados

pelos

linfcitos

TCD8

(perforinas,

granzimas, apoptose)., com a diferena que as NK reconhecem a clula


infectada de modo inespecfico, no ligado ao MHC-I. Alm de destruir
clulas infectadas de modo inespecfico, as clulas NK podem tambm
participar da resposta especfica. Essas clulas possuem receptores de Fc
e podem destruir clulas infectadas recobertas por anticorpos (ADCC).
Como requer a participao de anticorpos especficos, esse mecanismo s
ocorre tardiamente na infeco primria ou em re-infeces.
Alm de mediar a destruio de clulas infectadas, as NK secretam
vrias citocinas, como IFN , TNF e GM-CSF (estimulante de diferenciao
de macrfagos e granulcitos).
Macrfagos:
resposta

contra

Parecem
vrus.

No

desempenhar
entanto,

um

tambm

importante
contribuem

papel
para

na
a

disseminao de certos vrus no organismo, possibilitando a infeco de


determinados locais, como o crebro. Os mecanismos de ao dos
macrfagos no combate aos vrus so controversos. Podem secretar IFN
alfa, fagocitar e destruir partculas vricas e restos celulares. Possuem
mecanismos de produo de cido nitroso (NO) com atividade anti-viral
demonstrada contra vrios vrus.
Em adio atividade anti-viral, os macrfagos podem modular
importantes mecanismos de defesa, atravs da produo de vrias
citocinas (IL-1, IL-12, TNF). Alm disso participam decisivamente no
processamento e apresentao de antgeno aos linfcitos TCD4, como

68

parte da resposta especfica.


Complemento: Os componentes da cascata do complemento, ativada
diretamente pelo contato com as partculas vricas (via alternativa) ou
pela ligao antgeno-anticorpo (via clssica) possuem importantes
funes na resposta inespecfica contra infeces vricas. Dentre as
funes destacam-se a opsonizao e estmulo a fagocitose, lise de vrus
envelopados, estimulao da inflamao, quimiotaxia para macrfagos e
neutrfilos. Juntamente com as clulas NK e interferons, desempenham
importante papel na resposta precoce s infeces vricas. Tambm
possuem papel como efetores da resposta especfica que aparece
tardiamente na infeco primria e tambm em re-infeces.
Resposta aquirida ou especfica
Os linfcitos TCD4 e CD8 e anticorpos so os responsveis pelos principais
mecanismos efetores da resposta especfica. Como mencionado anteriormente, quando um
organismo infectado pela primeira vez com um agente, esses mecanismos levam alguns dias
para desenvolver-se e tornarem-se ativos. Linfcitos TCD4 e CD8 especficos comeam a
aparecer 4 a 5 dias aps a infeco viral; anticorpos da classe IgM iniciam a ser detectados aos
dias 7 8. Por desenvolver-se tardiamente, a resposta especfica tem papel importante na fase
final da infeco primria e na preveno reinfeco, em exposies subseqentes.
Anticorpos: Os anticorpos mediam uma srie de mecanismos destinados
combater o agente infeccioso. Em geral, os anticorpos atuam em
partculas vricas enquanto elas esto no meio extracelular, no sangue ou
em fludos teciduais. A ao dos anticorpos neutraliza partculas vricas
limitando a sua disseminao e prevenindo a infeco de tecidos vizinhos
ou distncia. Dentre as funes dos anticorpos contra infeces vricas
destacam-se: opsonizao, lise mediada por anticorpos e complemento,
ativao do complemento, ADCC (lise mediada por anticorpos e clulas
NK, neutrfilos), neutralizao e aglutinao viral.

69

Linfcitos T CD8 (citotxicos): Os linfcitos TCD8, aps reconhecimento de


peptdeos estranhos apresentados por molculas de MHC-I na superfcie
de clulas infectadas, desencadeia o processo de citotoxicidade, levando
morte da clula infectada. Os mecanismos de lise envolvem a ao de
perforinas, granzimas e levam morte celular por lise osmtica e/ou
apoptose. Como virtualmente todas as clulas do organismo (exceo:
neurnios) expressam MHC-I, podem ser alvo dos CTLs quando infectadas.
A lise de clulas infectadas pelos CTL representa um dos mais
importantes mecanismos de combate s infeces vricas. Desempenha
papel importante na fase final da infeco primria e tambm em reinfeces.
Linfcitos TCD4: Os linfcitos auxiliares (ou helper) possuem papel
fundamental na resposta especfica contra vrus. A sua funo secretar
interleucinas (citocinas) que agem estimulando outras clulas do sistema
imunolgico a combaterem o agente infeccioso. Linfcitos Th1 secretam
principalmente interleucinas que ativam linfcitos TCD4, TCD8 (CTLs),
macrfagos e clulas NK. Linfcitos Th2 secretam interleucinas voltadas a

imunidade humoral, pois estimulam a proliferao e diferenciao dos


linfcitos B e produo de anticorpos.

70

Memria imunolgica Linfcitos B e T


Aps a estimulao de linfcitos maduras por um determinado antgeno, ocorre a
proliferao e diferenciao dessas clulas em clulas efetoras (linfcitos B secretam
anticorpos; linfcitos auxiliares secretam interleucinas; CTLs destroem clulas infectadas). No
entanto, uma pequena parcela dessas clulas que proliferou no se torna efetora e permanece
como clula de memria, as quais possuem vida longa (meses a anos). Em contatos
subseqentes com o mesmo antgeno, as clulas de memria especficas proliferam e
respondem rapidamente, tornando-se efetoras. A resposta mais rpida pois no precisam
passar pelo processo de diferenciao. Alm disso, o nmero de clulas especficas para um

determinado agente aumentam muito em exposies subseqentes. As clulas de memria


sobrevivem por um longo tempo no organismo, mesmo na ausncia do antgeno que as
estimulou. Foi demonstrado recentemente que as clulas de memria so capazes de dividir-se,
embora lentamente, o que pode explicar a sua longevidade.
Mecanismos de escape
Ao longo de sua evoluo, os vrus desenvolveram estratgias para
evadir-se (escapar) de alguns mecanismos de defesa do animal. Isso
permite que esses vrus consigam perpetuar-se no organismo e/ou na
populao.
1. Latncia: Aps a infeco primria, quando replicam prximo ao local

71

de

penetrao,

os

herpesvrus

penetram

no

sistema

nervoso

estabelecem infeco latente nos gnglios sensoriais e autonmicos.


Durante a infeco latente, no h replicao viral ou produo de
antgenos virais. Com isso, o vrus permanece fora do alcance do sistema
imunolgico. A infeco latente dura a vida toda do animal. A intervalos
mais ou menos freqentes, o vrus reativado, volta a replicar e
excretado e pode infectar novos animais susceptveis. A capacidade de
estabelecer e periodicamente reativar a infeco latente crucial para a
perpetuao dos herpesvrus na natureza.
2.Variabilidade antignica: A induo de anticorpos com atividade
neutralizante por parte do hospedeiro crtica para a sobrevivncia do
vrus na populao. No entanto, alguns vrus possuem a capacidade de
mutar as protenas de superfcie (capsdeo ou envelope), de modo a no
serem mais reconhecidos pelos anticorpos. Com isso, escapam da
neutralizao e conseguem estabelecer infeco nesses animais. A cada
nova infeco, novos anticorpos especficos para as protenas mutadas
so formados, neutralizando o vrus. No entanto, a cada ciclo de
replicao,

novos

mutantes

que

escapam

da

neutralizao

so

novamente formados. Dentre os vrus com maior variabilidade antignica


destacam-se

o vrus da influenza, HIV, rinovrus, BVDV, vrus da Febre

Aftosa.
3. Infeco de stios de privilgio. Stios de privilgio so locais do
organismo onde os mecanismos efetores do sistema imunolgico (clulas,
principalmente) tm acesso restrito. Por isso, vrus que infectam esses
stios permanecem relativamente protegidos da resposta imunolgica. Os
hespervrus infectam o sistema nervoso central, local de difcil acesso s
clulas efetoras da resposta imunolgica. Por outro lado, os neurnios
infectados no expressam MHC-I, no podendo ser lisados por CTLs.
Vrios vrus infectam o feto, que tambm considerado um stio de
privilgio

(BVDV;

rubola,

camadas

profundas

da

parvovrus).

pele,

de

Os

difcil

papilomavrus

acesso

aos

infectam

mecanismos

imunolgicos. Os epitlios em geral, e principalmente o renal, constituem-

72

se tambm em stios de privilgio e permitem uma replicao viral


relativamente pouco monitorada pelo sistema imunolgico.
4. Imunossupresso e/ou interferncia com a resposta imunolgica :
Alguns vrus afetam diretamente o sistema imunolgico, pois infectam e
alteram a funo de clulas importantes na resposta imune. O exemplo
mais clssico o HIV, que infecta e destri grandes quantidades de
linfcitos TCD4. Como os CD4 esto entre as clulas mais importantes do
sistema imune, a resposta imunolgica dos indivduos infectados pelo HIV
fica extremamente prejudicada. Vrios outros vrus (BVDV, Dengue, Febre
Amarela), infectam moncitos/macrfagos, podendo tambm interferir na
resposta imunolgica. Os adenovrus interferem de maneira diferente:
inibem a expresso de molculas de MHC-I pelas clulas infectadas. Com
isso, as clulas infectadas no so reconhecidas pelos CTLs e o vrus pode
replicar produtivamente. Os poxvrus codificam substncias

que so

secretadas pelas clulas pelas clulas infectadas e interferem/bloqueiam


a ao de IFNs, IL-1 e TNF.
5. Induo de tolerncia: O termo tolerncia refere-se falta de resposta
(ou resposta insuficiente) a determinados antgenos. O vrus da Diarria
Viral Bovina (BVDV), quando infecta fmeas prenhes entre os dias 40 e
120 dias de gestao induz um estado de tolerncia no feto. Esse feto
desenvolve-se e nasce clinicamente sadio, porm abriga o vrus que
replica

persistentemente

imunolgico

(esses

no

animais

organismo
so

sem

resposta

soronegativos=

no

do

sistema

apresentam

anticorpos contra o BVDV). O mecanismo de induo de tolerncia ainda


no perfeitamente conhecido. No entanto, acredita-se que no momento
da

infeco,

sistema

imunolgico

do

feto

esteja

na

fase

de

aprendizado, ou seja, na fase de reconhecer e distinguir os antgenos


prprios dos no-prprios. Nessa fase, no entanto, o vrus est presente
no organismo fetal que ento considera os antgenos virais como prprios
e no responde imunologicamente a eles.

73

Imunidade contra bactrias:


O meio ambiente rico em microorganismos patognicos, aos quais
os animais esto constantemente expostos. A principal funo do sistema
imunolgico proteger o hospedeiro contra esses microorganismos,
evitando a infeco e a doena. Os primeiros e mais importantes
mecanismos de defesa de nosso organismo consistem nas barreiras
compostas pela pele ntegra, a camada de muco de alguns epitlios, tosse
e peristaltismo intestinal, movimentos dos clios da traquia, renovao
de clulas epiteliais, cidos e enzimas produzidos pelas clulas do
organismo, pH vaginal e flora microbiana normal.
A resposta imunolgica contra infeces bacterianas pode ser
dividida em duas categorias: 1. Resposta inata ou inespecfica e 2.
Resposta adquirida ou especfica. Essas duas respostas desempenham
papis importantes em tempos distintos, com o objetivo de controlar a
infeco.
A resposta inespecfica a primeira a agir e pode ser considerada a
mais efetiva em impedir a penetrao do patgeno no organismo. Inicia
quase imediatamente aps a infeco. Entre os mecanismos de defesa
naturais

esto

os

fatores

genticos,

as

barreiras

fsico-qumicas

(anteriormente citadas), o sistema complemento e as clulas fagocticas.


Os

fatores

genticos

esto

relacionados

resistncia

inata

de

determinados indivduos ou espcies. A ativao do sistema complemento


pela via inespecfica

se d atravs da ativao da via alternativa do

complemento. O componente C3B liga-se superfcie da clula bacteriana


e ancora o complexo de ataque membrana (MAC) levando lise
bacteriana e, alm disso, facilita a fagocitose pelas clulas que
apresentam receptores do complemento. As clulas encarregadas de
eliminao das bactrias pelas clulas fagocticas so os macrfagos
(tecidos) e os neutrfilos (sangue). Tanto os macrfagos quanto os
neutrfilos reconhecem as bactrias atravs de receptores para o
complemento e de receptores para carbohidratos constituintes comuns da

74

superfcie bacteriana, mas ausentes nas clulas do organismo. Aps a


ligao dessas clulas com as bactrias, as bactrias so fagocitadas e
posteriormente

digeridas

pelas

enzimas

lisossomais.

intracelulares facultativas so capazes de sobreviver

Bactrias

dentro da clula

fagoctica uma vez que conseguem escapar do fagossoma inibindo a


formao do fagolisossoma ou resistindo ao das enzimas proteolticas
aps

formao

do

fagolisossoma.

Durante

processo

de

reconhecimento e fagocitose das bactrias, os macrfagos iniciam a


sntese de citocinas

que apresentam uma funo importante na

estimulao da resposta imune especfica. As bactrias GRAM negativas


apresentam

lipopolissacardeo

(LPS)

que

capaz

de

estimular

diretamente os macrfagos sintetizar diversas citoquinas, como o fator


de necrose tumoral (TNF) e diversas interleucinas. Os macrfagos aps
fagocitarem,

desempenham

uma

funo

importante

para

desenvolvimento de uma resposta especfica, que a apresentao de


fragmentos da bactria fagocitada associados ao MHC-II aos linfcitos
TCD4 (auxiliares).

Os neutrfilos apresentam capacidade fagoctica

limitada, uma vez que os grnulos se esgotam, essas clulas morrem,


ocorrendo a formao de pus. Alm disso, o processo de destruio dos
neutrfilos gera metablitos que contribuem para o processo inflamatrio.
A resposta especfica

gerada atravs do primeiro contato do

agente com o sistema imune especfico, resultando em uma resposta


imunolgica primria (produo de anticorpos) e o desenvolvimento de
clulas de memria especficas, que podero ser estimuladas em um
contato posterior com o antgeno, determinado a resposta imune
secundria. A resposta humoral muito importante na defesa contra
infeces bacterianas, principalmente aquelas causadas por patgenos
extracelulares e assim, os anticorpos secretados pelos linfcitos B formam
a

resposta

mais

importante

contra

bactrias.

Dentre

as

funes

desempenhadas pelos anticorpos em infeces bacterianas esto:


-

Proteo das mucosas: a IgA previne a aderncia de bactrias a


mucosas e tambm neutraliza toxinas. A IgA participa da proteo

75

efetiva

do

trato

respiratrio,

gastrointestinal

genito-urinrio,

impedindo a aderncia e colonizao bacteriana desde que o indivduo


tenha tido um contato prvio com o antgeno.
-

Opsonizao: as IgG ao se ligarem s bactrias facilitam o processo de


fagocitose pelos macrfagos e neutrfilos sricos e teciduais que
apresentam receptores para a poro Fc das imunoglobulinas.

Ativao do complemento: a IgM e IgG, ao se ligarem superfcie da


clula bacteriana desencadeiam a via clssica do complemento,
atravs da ligao do componente C1 poro Fc da Ig.

Neutralizao de enzimas e toxinas: a IgG a principal imunoglobulina


responsvel pela neutralizao de toxinas, protegendo as clulas
contra toxinas e enzimas bacterianas.

Citotoxicidade celular dependente de anticorpo: a IgG pode se ligar as


clulas

que

apresentem

antgenos

bacterianos

na

superfcie

estimular a destruio dessas atravs de macrfagos, neutrfilos,


linfcitos T e clulas NK por meio de receptores para a poro Fc.
A imunidade celular desenvolvida atravs da apresentao de antgenos + MHC-II
pelos macrofgos s clulas TCD4 que por sua vez secretam citocinas que estimulam a
coordenam a resposta imune. As citocinas produzidas pelo linfcitos Th1 estimulam a
produo de linfcitos B e aumentam o poder ltico de macrfagos, neutrfilos e NK.
A resposta s bactrias intracelulares um pouco diferente. As
bactrias intracelulares uma vez estando dentro de uma clula, tornamse inacessveis aos anticorpos circulantes e sua eliminao requer que o
organismo lance mo de outra estratgia. A prpria resposta imune inata
contra essas bactria menos eficiente, uma vez que a maioria delas
resiste fagocitose. As bactrias intracelulares ativam
produzem IFN-alfa que ativa macrfagos.

culas NK que

O principal e mais eficiente

mecanismo de defesa contra bactrias intracelulares a imunidade


celular atravs de dois mecanismos principais:
-

Ativao dos macrfagos pelas citocinas secretadas pelos linfcitos


Th1;

Lise das clulas infectadas pelos linfcitos TCD8 (CTL) previamente

76

estimulados pela apresentao dos fragamentos bacterianos + MHCI


pelos macrfagos aos linfcitos TCD8.
Mecanismos de escape
- Presena de cpsula antifagoctica: a cpsula inibe o processo de
fagocitose

e interfere com a opsonizao pelo complemento.

Similarmente a camada de protenas S do Campylobacter fetus


tambm impede a fagocitose;
-

Evaso

dos

componentes

do

complemento:

protena

do

Streptococcus equi liga-se ao fibrinognio escondendo os stios de


ligao do C3B. Simultaneamente, a protena M liga-se ao fator H
ativando o fator I que inibe o C3B que tenha se ligado superfcie
bacteriana. Salmonella typhimurium inibe a insero do complexo de
ataque membrana na sua superfcie;
-

Produo de protenas e leucotoxinas: vrias bactrias secretam


substncias

antifagocticas.

Mycobacterium

tuberculosis,

coli,

Haemophilus pleuropneumoniae, P multocida, Moraxella bovis, P


aeruginosa entre outras secretam substncias chamadas leucotoxinas
que destroem as clulas fagocticas
adquirida. Staphylococcus aureus

tanto da resposta inata como

produz a protena A que se liga

poro Fc da IgG, impedindo a ligao da IgG com as clulas


fagocticas. Alm disso, produz protenas de ligao com o colgeno
que auxiliam na evaso do sistema complemento. Haemophilus
influenzae e S. pneumoniae produzem enzimas que digerem a IgA;
-

Variao antignica: algumas bactrias substituem componentes de


superfcie de tal forma que conseguem escapar dos anticorpos
presentes;

Sobrevivncia intracelular: S. aureus sobrevive exploso respiratria


da clula fagoctica pela presena de carotenides. Brucella abortus e
Mycobacterium bovis por diferentes mecanismos inibem a fuso do
fagossoma

com

lisossomo,

resistindo

ao

das

enzimas

lisossomais. Listeria monocytogenes escapa do fagossoma invadinco o

77

citoplasma celular. Corynebacterium pseudotuberculosis sobrevive no


fagolisossoma;
-

Imunossupresso: a enterotoxina

do S. aureus atua como um

superantgeno ligando-se s molculas do MHCII e induzindo a


secreo de citocinas determinado um quadro de exausto do sistema
imunolgico e conseqente imunossupresso.
VACINAS VRICAS
Vrios tipos de vacinas tm sido formuladas para proteger animais e
pessoas de enfermidades vricas. Em comparao com enfermidades
bacterianas, o impacto das vacinas vricas sobre a histria natural dessas
enfermidades tem sido muito maior. Enfermidades como a varola j
foram erradicadas do mundo pela vacinao. Outras, como o sarampo e
poliomielite tiveram sua incidncia drasticamente reduzida e espera-se
sua erradicao nos prximos anos. Viroses animais como a Febre Aftosa,
Peste Suna Clssica, Doena de Aujeszky, entre outras, tem sido
controladas e eventualmente erradicadas de continentes inteiros pelo uso
da vacinao. As vacinas vricas dividem-se em vivas (replicativas) e novivas (no-replicativas), com diversas variaes descritas a seguir.
Vacinas replicativas (vrus vivo)
Vacinas

que

contm

vrus

vivel

replicam

no

organismo,

resultando em amplificao da quantidade de antgeno apresentado ao


sistema imunolgico. Essas vacinas so denominadas genericamente de
vacinas vivas, vacinas com vrus vivo modificado (VVM) ou ainda vacinas
atenuadas. Em geral, a vacinas com vrus vivo so as mais eficazes para a
induo de proteo, pois a replicao do vrus vacinal mimetiza o que
ocorre na infeco natural. Por isso, a resposta imunolgica a essas
vacinas muito semelhante resposta produzida em resposta infeco
natural, e resulta em imunidade humoral (linfcitos B, anticorpos) e
celular (linfcitos TCD4+ e CTLs). A maioria das vacinas replicativas
administrada pelas vias subcutnea ou intramuscular. No entanto, vacinas

78

de administrao oral (diretamente ou na gua ou alimentos) e intranasal


(diretamente ou atravs de aerossis) tambm tm sido utilizadas na
veterinria.

O sucesso

das

vacinas

atenuadas

baseia-se em trs

caractersticas principais: 1. O vrus vacinal replica com uma certa


eficincia no hospedeiro; 2. Possui capacidade reduzida de disseminar-se
a partir do local de inoculao e 3. Possui capacidade reduzida de produzir
sintomatologia clnica. Essas vacinas geralmente induzem resposta slida
e duradoura e poucas vezes requerem revacinaes freqentes. De
maneira ideal, a replicao do vrus vacinal deveria mimetizar uma
infeco natural subclnica. Embora sejam consideradas geralmente as
mais eficazes, as vacinas com vrus vivo podem apresentar problemas, o
que restringe o seu uso em algumas situaes. A maior restrio ao seu
uso refere-se possibilidade de reverso ao fentipo virulento e produo
de doena clnica nos animais vacinados.
Para serem utilizados como vacina, os diversos agentes virais devem ser apatognicos
ou pouco patognicos (atenuados) para a espcie animal em questo. Embora variantes virais
pouco patognicos possam ocorrer na natureza e j tenham sido identificadas para vrios vrus,
mutantes atenuados para a produo de vacinas so geralmente obtidos por manipulao e/ou
seleo em laboratrio. Em geral, os vrus atenuados utilizados em vacinas podem ter origem
em: 1. variantes (mutantes) naturalmente atenuados; 2. atenuao por passagens mltiplas em
cultivo celular; 3. Atenuao por passagens em ovos embrionados ou em animais; 4. Seleo
de variantes cold-adapted ou temperatura-sensveis; 5. Atenuao por manipulao gentica.
Esses ltimos sero abordados em outra seco.
1. Mutantes naturalmente atenuados. Para vrios vrus humanos e animais, j foi possvel se
identificar variantes naturais que so apatognicos ou pouco patognicos para a espcie
hospedeira. Em tese, a identificao destes variantes dependeria apenas de triagem de um
nmero grande de amostras de vrus de campo. Em alguns casos, se utiliza um vrus de uma
determinada espcie animal para imunizar outra espcie contra um vrus relacionado que
acomete essa ltima. O primeiro uso desse tipo de vacina foi feito por Jenner, h mais de dois
sculos. A primeira vacina contra a varola humana foi produzida com o vrus da varola
bovina, que era pouco patognico para humanos. No entanto, a replicao desse vrus em
pessoas conferia proteo contra o vrus da varola humana, que muito parecido com o vrus

79

de bovinos. Da mesma forma, uma vacina contra a Doena de Marek de galinhas foi produzida
com um herpesvrus semelhante, de perus. Proteo contra a rotavirose suna foi obtida
atravs de vacinao com um rotavrus de bovinos. Proteo contra o vrus da parainfluenza 3
(hPI-3) humana foi obtida em crianas imunizadas com um PI-3 bovino. Na Europa, uma das
vacinas utilizadas em programas de erradicao da Doena de Aujeszky foi produzida a partir
de um mutante atenuado do herpesvrus suno causador da doena. Esse mutante natural
possui uma deleo no gene que codifica uma glicoprotena do envelope (gE), o que o torna
pouco patognico. A identificao de mutantes naturais atenuados tambm foi a base para a
produo das vacinas atuais contra a Febre Amarela (cepa 17D) e poliovrus (Sabin, poliovrus
tipo 2). Nesses casos, os mutantes naturalmente atenuados foram posteriormente mais
atenuados por passagens em ovo embrionado e animais. Embora mutantes naturais atenuados
provavelmente existam para grande parte dos vrus, na maioria das vezes a atenuao
realizada em laboratrio, a partir de cepas virulentas.
2. Atenuao por passagens em cultivo celular. o mtodo mais utilizado para atenuao de
vrus destinados produo de vacinas. A maioria das vacinas com vrus vivo de uso humano
e animal foram produzidas por esse mtodo. Geralmente utiliza-se clulas heterlogas (de
outra espcie animal) ou ocasionalmente clulas da mesma espcie, porm de outro tecido
(exemplo: para vrus respiratrio utiliza-se clulas renais, etc...). Esse mtodo baseia-se na
observao emprica de que a replicao repetida de vrus em clulas de cultivo
freqentemente acompanhada da perda progressiva de funes necessrias para a sua
patogenicidade/virulncia no hospedeiro de origem. Embora os mecanismos responsveis pela
atenuao geralmente sejam difceis de se determinar, acredita-se que as replicaes sucessivas
resultam na acumulao de mutaes e na seleo de variantes mais adaptados aos cultivos. A
adaptao gradativa aos cultivos, em contrapartida, resulta na perda progressiva da
capacidade de causar infeco clnica (doena) na espcie hospedeira natural. O nmero de
passagens necessrias para uma atenuao satisfatria depende do vrus e varia amplamente.
Alguns vrus, mesmo aps centenas de passagens, conservam a patogenicidade e virulncia
para a espcie hospedeira. Portanto, esse mtodo no efetivo para atenuao de todos os
vrus. Por outro lado, alguns vrus no replicam bem em cultivos celulares (vrus da hepatite B
e C, papilomavrus animais e humanos, vrus da Lngua Azul), o que impossibilita a utilizao
desse mtodo. Da mesma forma, a realizao de um nmero muito grande de passagens pode
resultar em uma atenuao excessiva do agente, com a perda da capacidade de replicar
eficientemente no hospedeiro natural. Nesse caso, a replicao deficiente poderia resultar em

80

estmulo insuficiente do sistema imunolgico. O nvel de atenuao desejado pode ser


monitorado periodicamente,

testando-se os vrus de diferentes passagens (exemplos:

passagem 20, 40, 80) em relao a sua patogenicidade/virulncia. Para isso, inocula-se esses
vrus em animais de laboratrio ou no hospedeiro natural e monitora-se a replicao e a
possvel produo de sinais clnicos. Aps atingir-se a atenuao desejada, esse vrus poder
ser considerado um candidato a vrus vacinal.
3. Atenuao por passagens em ovos embrionados ou em animais O
procedimento similar ao descrito acima, com a diferena que multiplica-se o vrus sucessivas
vezes em ovos embrionados (o vrus replica no embrio) ou em animais de laboratrio. Para a
replicao em animais de laboratro, muitas vezes necessrio adaptar-se o vrus nessa espcie
animal. Geralmente so utilizados coelhos, cobaios, camundongos. Para alguns vrus, incluindo
vrus de mamferos que replicam em ovos embrionados (influenza, por exemplo), nveis
satisfatrios de atenuao podem ser obtidos com essa estratgia.

81

4.Seleo de variantes cold-adapted ou temperatura-sensveis - A replicao de vrus em


cultivo celular (ou no prprio hospedeiro) ocasionalmente resulta na produo de
variantes que no so capazes de replicar temperaturas prximas temperatura
corporal (380C). No entanto, esses vrus so capazes de replicar eficientemente
temperaturas mais baixas (33-340C). Esses variantes so chamados de temperaturasensveis (TS). Variantes TS so teis para vacinao intranasal ou intravaginal, para
vrus cujas conseqncias de disseminao e replicao sistmica sejam graves. Nesse
caso, o vrus vacinal TS s vai replicar prximo superficie corporal (onde a
temperatura baixa) e no vai ser capaz de replicar internamente no organismo. Esses
tipos de vacinas tm uso potencial importante no caso da influenza (gripe) em humanos e
para alguns vrus animais (por exemplo: BHV-1, cuja vacinao com vrus atenuado
convencional pode causar abortos). No entanto, tm sido demonstrado que as mutaes
que conferem o fentipo TS podem reverter facilmente, resultando na reverso
capacidade de replicar temperatura corporal e causar doena. Recentemente, uma
variao nessa estratgia foi adotada para a produo de vacinas contra a gripe
(influenza). O vrus adaptado a replicar somente sob baixas temperaturas (25-30 0C) e
ento utilizado como vacina. Esses vrus, chamados de cold adapted geralmente
possuem vrias mutaes no genoma e a reverso a virulncia (derivada da capacidade
de replicar temperatura corporal) pouco provvel. Vacinas cold adapted para a
influenza, de administrao nasal, esto em fase final de testes e devem ser licenciadas
nos prximos anos nos EUA. Outra vantagem dessas vacinas para uso humano a
facilidade de administrao.
As maiores vantagens das vacinas com vrus vivo modificado referem-se magnitude e
durao da resposta imunolgica induzida. Isso deve-se capacidade replicativa do agente,
que resulta em amplificao do antgeno e estimulao dos diferentes mecanismos efetores da
resposta imunolgica. As maiores restries ao seu uso referem-se ao risco potencial de
reverso ao fentipo virulento e a conseqente produo de doena clnica pelo vrus vacinal.
Em vrus atenuados por mtodos tradicionais, como os descritos acima, as bases genticas da
atenuao so desconhecidas. Se as mutaes responsveis pela atenuao forem em nmero
pequeno, possvel que ocorram reverses durante a replicao do agente no organismo do
animal vacinado. O risco de transmisso do vrus vacinal a outros indivduos tambm est entre
as desvantagens desse tipo de vacina.

82

Por outro lado, muitas vezes no se consegue obter uma atenuao completa do agente.
Ou seja, a replicao do vrus vacinal pode produzir sinais clnicos, geralmente brandos, da
infeco. Por isso freqente que animais ou crianas vacinadas com esse tipo de vacina
apresentem temperatura elevada, irritabilidade, apatia, aps a administrao da vacina. Esses
sinais podem ser mais acentuados em indivduos imunocomprometidos, idosos ou subnutridos.
Para alguns vrus, mesmo cepas vacinais bem atenuadas podem produzir conseqncias
indesejveis. Vacinas com vrus atenuado contra o vrus da Diarria Viral Bovina (BVDV) e
herpesvrus bovino tipo 1 (BHV-1), por exemplo, se administradas a vacas prenhes podem
infectar o feto e causar abortos, alm de outras perdas reprodutivas. Uma comparao entre as
principais propriedades das vacinas replicativas (vivas) e no-replicativas est apresentada na
Tabela 1.
Alm das vacinas com vrus atenuados por mtodos tradicionais, outras vacinas que
utilizam o vrus vivo podem ser obtidas por manipulao gentica. Essas vacinas so
apresentadas a seguir, na seo vacinas geneticamente manipuladas.

Vacinas vivas recombinantes: vetores virais e bacterianos


A manipulao gentica de microorganismos tem muito sido utilizada nos ltimos anos
com o objetivo de obter-se vacinas mais seguras e eficazes. A manipulao gentica de
microorganismos permite: 1. Deleo de genes responsveis pela patogenicidade, tornando a
cepa vacinal adequadamente atenuada; 2. Deleo de genes que codificam protenas de
superfcie, para diferenciar animais vacinados dos infectados naturalmente (vacinas com
marcadores antignicos); 3. Construo de vrus recombinantes (vetores) que carregam
(codificam) genes de protenas de outros vrus; 4. Construo de vrus recombinantes que
codificam genes de interleucinas, que estimulam diferentes mecanismos da resposta
imunolgica; 5. Construo de bactrias recombinantes, que podem codificar protenas
(antgenos) de vrus de interesse. Alm da construo de vrus recombinantes e de vrus e
bactrias vetores para serem usadas como vacinas vivas, essas tcnicas tambm permitem a
produo de protenas (antgenos virais ou bacterianos) recombinantes em sistemas
heterlogos

(E.coli, levedura, baculovrus e clulas eucariotas) para serem usadas como

imungenos no-vivos. Essa ltima aplicao ser abordada em outra seco. No presente
captulo sero apresentadas as vacinas recombinantes (vricas, bacterianas) a serem utilizadas
como vacinas com vrus vivo.

83

1. Vacinas atenuadas por deleo (vacinas deletadas).


Para os vrus cujas bases genticas da patogenicidade e virulncia
so conhecidas, possvel inativar ou deletar os genes responsveis por
essas propriedades. Com isso, o agente torna-se apatognico/pouco
patognico (atenuado). O agente atenuado pela deleo/inativao do
gene ento utilizado como vacina. Na manipulao gentica, preservase os genes necessrios para as funes essenciais do agente, para
permitir que ele seja capaz de infectar, replicar no organismo do animal e
induza uma boa resposta imunolgica. Da mesma forma, os genes que
codificam as protenas responsveis pela induo da resposta imunolgica
(protenas de superfcie) so preservados. Como resultado, o vrus vacinal
capaz de infectar, replicar e induzir uma resposta imunolgica por parte
do hospedeiro sem produzir enfermidade clnica. O agente vacinal
comporta-se exatamente como uma vacina com vrus atenuado (vivo),
porm com poucos riscos relativos possvel produo de doena. A
grande vantagem desse tipo de vacina a boa atenuao e segurana
(baixo risco de reverso ao fentipo virulento). Geralmente so removidos
grandes segmentos genmicos ou mesmo genes inteiros. Dessa forma, a
possibilidade do agente manipulado readquirir a virulncia so muito
pequenas. Ao contrrio das vacinas atenuadas por mtodos tradicionais
(passagens em cultivo, por exemplo), as bases genticas da atenuao
desses vrus bem conhecida e o seu gentipo conseqentemente
estvel. Por isso, essas vacinas so seguras e representam uma
alternativa

promissora

para

as

vacinas

atenuadas

por

mtodos

tradicionais.
O

nmero

de

agentes

virais

que

tem

sido

manipulado

geneticamente por deleo gentica para a produo de vacinas tem


aumentado muito nos ltimos anos. Os exemplos mais clssicos so os
herpesvrus e os poxvrus.
Nos

herpesvrus,

so

vrias

as

protenas

que

determinam

patogenicidade/virulncia, entre as quais as glicoprotenas do envelope,


enzimas codificadas pelos vrus (timidina kinase [TK], ribonucleotdeo

84

redutase[RR], dUTPase, etc...) e protenas do capsdeo.


Para o vrus da pseudoraiva (PRV; Doena de Aujeszky de sunos) e vrus da
rinotraquete infecciosa bovina (IBRV ou BHV-1), a enzima timidina kinase (TK) um dos
principais fatores de virulncia. A funo da TK est associada capacidade dos herpesvrus
replicar em neurnios no sistema nervoso central. Quando o gene que codifica a TK
inativado, o vrus mutante retm a sua capacidade de replicar nas clulas do epitlio nasal e
genital do animal, mas replica muito ineficientemente (muito pouco) em neurnios. Com isso, a
neurovirulncia e neuropatogenicidade do agente fica muito reduzida. Cepas TK negativas
(TK-) demonstraram ser seguras e eficazes na induo da proteo. Mutantes nos genes que
codificam a RR, dUTPase e algumas glicoprotenas do envelope (gC, gE) tambm so
atenuados e poderiam ser usados como vacinas. Mutantes TK- de poxvrus tambm
apresentam fentipo atenuado.
A produo de vrus mutantes atenuados por deleo/inativao de genes depende
inicialmente da identificao do (s) gene (s) responsveis pela patogenicidade e virulncia. Para
muitos vrus, a patogenicidade e virulncia so multifatoriais, ou seja, so dependentes de
vrios genes, o que impossibilita a sua deleo. No caso da patogenicidade/virulncia serem
determinadas por apenas um (ou poucos genes), a deleo s pode ser feita se esse (s) gene (s)
no essencial para a replicao do agente. Do contrrio, a sua deleo implicaria na
inativao do agente. Para vrios vrus (herpes em geral, poxvrus, adenovrus) genes
importantes para o fentipo virulento e que no so essenciais para o vrus (podem ser
deletados) j foram identificados e vacinas produzidas por essa metodologia j encontram-se
no comrcio. Em tese, vacinas vricas atenuadas por deleo/inativao podem ser obtidas para
qualquer vrus em que seja possvel identificar produtos gnicos responsveis pela
patogenicidade e que esses produtos (e a manipulao realizada para inativ-los) no forem
essenciais para a replicao viral. Por isso, a lista de possveis candidatos para esse tipo de
vacina longa.
2. Vacinas com marcadores antignicos (vacinas diferenciais).
Para a grande maioria das vacinas de uso humano e animal no
possvel distinguir-se a resposta sorolgica induzida pela vacinao da
resposta produzida em resposta infeco natural. Ou seja, quando o
teste sorolgico positivo, os anticorpos presentes no soro podem ter
sido induzidos tanto por vacinao prvia como por infeco natural. A

85

impossibilidade

de

distinguir-se

anticorpos

vacinais

dos

anticorpos

induzidos pela infeco natural particularmente crtica para vrus que


estabelecem infeco latente ou persistente. Nesses casos, a deteco de
anticorpos indica que o animal um potencial portador. Procedimentos de
comrcio,

importao/exportao

de

reprodutores

programas

de

erradicao de vrias enfermidades animais tm sido afetados por esse


problema. Os principais vrus envolvidos so os herpesvrus suino (vrus
da Doena de Aujeszky) e bovino (BHV-1, BHV-5). Programas de
erradicao da Peste Suna Clssica da Europa tambm tem demonstrado
a necessidade e utilidade de vacinas com marcadores antignicos. No
caso da vacina inativada oleosa para a Febre Aftosa, possvel
diferenciar-se a resposta natural da resposta vacinal, atravs de um teste
sorolgico (VIA). Esse teste detecta anticorpos formados contra uma
protena no-estrutural do vrus (uma enzima envolvida na replicao do
agente), que s produzida na infeco natural. Ento, resultado positivo
no teste indica que os animais reagentes foram infectados pelo vrus de
campo. No entanto, para a maioria das vacinas, no possvel fazer essa
distino.
Por isso, h muitos anos tem se investido no desenvolvimento de
vacinas que permitam distinguir animais vacinados dos infectados
naturalmente. Os alvos principais so os herpesvrus citados acima. As
primeiras vacinas com marcadores antignicos para o PRV foram
desenvolvidas no final dos anos 70. Atualmente, existem vacinas
diferenciais para o BHV-1 e PRV no comrcio dos EUA, Canad, alguns
pases europeus e Japo. Programas de erradicao do PRV nos EUA e
pases europeus so baseados no uso de vacinas diferenciais. O mesmo
aplica-se erradicao do BHV-1 de alguns pases europeus. No Brasil,
uma vacina diferencial para o BHV-1 foi recentemente produzida e est
atualmente

em

fase

de

testes

em

animais.

EMBRAPA/CNPSA

Concrdia/SC est desenvolvendo uma vacina diferencial para o PRV, com


o objetivo de us-la em um programa de erradicao da doena do
Estado.

86

A estratgia para a produo de vacinas diferenciais consiste na


inativao ou deleo de um gene que codifica uma glicoprotena (ou
protena) do envelope viral e o uso do vrus deletado como vacina. A
diferenciao da resposta sorolgica feita pelo uso de um teste
sorolgico (ELISA) que detecta anticorpos contra a protena deletada. No
entanto, no qualquer protena do vrus que pode ser deletada, pois
muitas so essenciais para a replicao viral. Ento, a protena-candidata
a ser deletada e constituir-se no marcador antignico deve preencher
alguns requisitos: 1. No ser essencial para o vrus; 2. Ser imunognica; 3.
No ser necessria para a induo de proteo; 4. A deleo deve
contribuir para a atenuao; 5. Deve ser conservada entre amostras de
campo. Para o PRV e BHV-1, as protenas mais utilizadas como marcadores
so as glicoprotenas C (gC) e E (gE). Essa ltima parece ser a mais
adequada, pois alm de um bom marcador antignico, a sua deleo
contribui para a atenuao do vrus. Atualmente, a maioria das vacinas
diferenciais para o PRV e BHV-1 so gE negativas (gE - ).
A figura abaixo ilustra o princpio das vacinas diferenciais. Em resumo: 1. Deleta-se ou
inativa-se o gene de uma glicoprotena viral no-essencial (exemplo gE); 2. Usa-se o vrus
deletado (gE - ) como vacina; 3. Os animais vacinados iro desenvolver anticorpos contra
todas as protenas virais, com exceo da gE; 4. Utiliza-se um teste sorolgico que detecta
anticorpos contra a protena deletada (ELISA anti-gE); 5. Os animais que reagirem
positivamente nesse teste apresentam anticorpos contra a gE. Ou seja, foram infectados com o
vrus de campo ou vacinados com vacinas tradicionais. Os animais que no reagirem nesse
teste no foram infectados com o vrus de campo. Animais vacinados com a vacina gE tambm so negativos.
As glicoprotenas do herpesvrus mais sujeitas a deleo total ou parcial so: gC, gE, ou
gI. As que so essenciais para a replicao e, que no podem ser deletadas so: gB, gD, gH e
gL. No PRV, as glicoprotenas que podem ser deletadas para a formulao de um vacina
diferencial so: gC, gX ou gE.
As vacinas diferenciais com vrus vivo (atenuado por manipulao gentica) possuem as
mesmas vantagens gerais das vacinas vricas vivas, como duas vantagens principais: 1.
Permitem a diferenciao entre vacinados e infectados; 2. A deleo torna essas cepas mais

87

estveis geneticamente e portanto mais seguras que as vacinas atenuadas por mtodos
tradicionais.
Embora a maioria das vacinas diferenciais em uso ou em testes sejam para uso como
vacinas vivas, possvel tambm utilizar esses vrus delatados para a produo de vacinas
diferenciais inativadas. Da mesma forma, a maioria das vacinas diferenciais tem sido
produzidas atravs de manipulao gentica. No entanto, mtodos tradicionais de selao de
mutantes naturais defectivos em alguma glicoprotena no-essencial j foram usados. Uma das
vacinas diferenciais para o BHV-1 (gE -) utilizada na Europa foi obtida de um mutante natural
gE - e no por manipulao gentica.
3. Vacinas de vetores virais
Para alguns vrus, a resposta imunolgica que confere proteo induzida por apenas
uma ou poucas protenas virais. Nesses casos, possvel obter-se nveis adequados de proteo
utilizando-se apenas essa (s) protena (s) imunognicas como vacina. Essa (s) protena (s)
(so) purificadas dos vrions (vacinas de subunidades) ou produzidas como protenas
recombinantes. No entanto, o uso dessas protenas como imungeno vacinal possui as
limitaes das vacinas no-vivas, em termos de proteo. Principalmente, a incapacidade de
induzir resposta especfica por linfcitos CD8+ citotxicos (CTLs), to importante para a
proteo contra vrios agentes virais, constitui-se em uma limitao importante dessas vacinas.
Estratgias para contornar esse problema incluem o uso de adjuvantes ou carreadores
especiais. No entanto, a estratgia mais eficiente para apresentao (e entrega) de antgenos
virais para o organismo de modo a induzir uma imunidade slida e protetora a introduo do
gene dessa protena no genoma de outro vrus (chamado de vetor), e o uso do vrus vetor
(vivo) como vacina. O vrus vetor vacinal, ao ser administrado ao animal, ir replicar, produzir
as suas protenas e a protena do outro vrus cujo gene foi introduzido no seu genoma
induzindo uma resposta imunolgica de magnitude e espectro caracterstica de vacinas vivas
(CD4+, anticorpos, CTLs). As protenas do vrus patognico so apresentadas para o sistema
imune em uma infeco no patognica promovida pelo vrus vetor. Infelizmente, esse tipo de
estratgia s tem sucesso para os vrus em que os antgenos que induzem resposta imunolgica
protetora esto concentrados em poucas protenas que podem ser identificadas. Assim, os
genes de interesse, ou seja, aqueles que codificam esta protena, so clonados no genoma de
outro vrus que utilizado como vacina.
A

grande

vantagem

das

vacinas

de

vetores

virais

que

imunologicamente elas funcionam como uma vacina de vrus vivo. Ou

88

seja, o vrus vetor mantm a capacidade de replicar. Com isso, a resposta


imunolgica induzida inclui a formao de anticorpos e a ativao de
linfcitos TCD4+ e TCD8+ citotxicos. A capacidade de multiplicao do
agente, com a conseqente

amplificao do antgeno, resulta em uma

resposta imunolgica de grande magnitude. Outra vantagem a de que


pode-se eventualmente introduzir genes de vrios vrus de interesse no
genoma de um s vrus vetor. Assim, uma vacinao nica com um nico
vetor poderia conferir imunidade contra vrios agentes
Por outro lado, podem existir problemas inerentes s vacinas vivas,
como reverso da virulncia, recombinao com vrus de campo,
transmisso para o meio ambiente, e instabilidade gentica. No entanto,
o maior problema com essas vacinas a interferncia com imunidade prexistente contra o vrus vetor. Se o vrus vetor um vrus disseminado na
populao em questo, possvel que grande parte dos animais j tenha
sido exposto e apresente imunidade contra o vrus. Com isso, a imunidade
pr-existente

pode

restringir

replicao

do

vrus

vacinal

conseqentemente reduzir a resposta imunolgica. Da mesma forma, se o


vrus vetor for utilizado em revacinaes, a imunidade produzida em
resposta

primeira

imunizao

pode

restringir

resposta

revacinaes.
Dois problemas em especial, devem ser considerados quando
vetores virais vivos so utilizados como vacina. Primeiro: na grande parte
dos casos, o hospedeiro monta uma resposta imunolgica contra o
antgeno de interesse bem como contra o vetor viral.. Como resultado, a
utilizao posterior desse mesmo vetor pode

resultar em resposta

inadequada ou ineficiente. Segundo: a introduo de vetores virais vivos,


embora

atenuados,

pode

determinar

conseqncias

adversas,

principalmente em indivduos imunocomprometidos. Deve-se considerar


que alguns vetores podem produzir efeitos patolgicos especialmente em
indivduos recm-nascidos, idosos e imunocomprometidos.
Os vrus a serem utilizados como vetores devem possuir algumas
caractersticas, como: 1. Serem apatognicos para a espcie hospedeira

89

ou de fcil atenuao; 2. Possuirem genoma

grande e de fcil

manipulao; 3. Serem facilmente manipulveis em laboratrio; 4. No


serem disseminados na populao a ser vacinada. 5. Replicar (e induzir
resposta imunolgica) em locais do organismo equivalentes aos do vrus
cuja protena foi inserida no seu genoma. Essa estratgia tem utilizado
principalmente com vrus que possuem DNA como genoma (poxvrus,
adenovrus e herpesvrus), mas tambm recentemente para vrus RNA
(Sindbis, vrus da Febre Amarela).
Os poxvrus so os vrus mais utilizados como vetor por apresentarem um genoma
grande. Alm disso, so facilmente manipulveis, apatognicos e de fcil administrao. Um
dos grandes problemas em se utilizar o vrus vaccinia como vetor que a grande maioria das
pessoas e muitas espcies animais tm anticorpos contra o vrus e, com isso, o vetor quando
inoculado pode ser eliminado muito rapidamente pelo sistema imune, resultando em uma
replicao viral mnima e resposta imunolgica insuficiente.
Exemplos de vacinas utilizando vetores virais: 1. Poxvrus como
vetor: poxvrus expressando a glicoprotena G do vrus da raiva. Utilizada
no controle da raiva silvestre em carnvoros na Europa. A vacina, de
administrao oral, era misturada em pedaos de carne

lanados na

floresta por helicpteros. Os carnvoros, ao ingerirem a carne com o vetor,


suportaram a replicao do agente e a expresso da protena G, a qual
induzia

resposta imunolgica contra ela e conseqentemente contra o

vrus da Raiva. 2. Existe atualmente no comrcio uma vacina contra a


cinomose, na qual o vetor utilizado o poxvrus de canrio expressando
as glicoprotenas HA e F do vrus da cinomose (Figura).
3. Herpesvrus bovino tipo 1 (BHV-1) expressando eptopo da protena do
capsdeo (VP1) do vrus da Febre Aftosa fusionado com a gC do BHV-1.
Nesse caso, a imunizao tanto contra o BHV-1 como contra o vrus da
febre aftosa. 4. Vrus da febre amarela naturalmente atenuado 17D (cepa
vacinal) como vetor para vrus heterlogos: YF17D tem sido utilizado
como vetor para genes que codificam antgenos protetivos do vrus da
Encefalite Japonesa e vrus da Dengue. 5. Adenovrus suno expressando a
protena VP1 do vrus da Febre Aftosa. Essa vacina experimental foi

90

desenvolvida nos EUA com o objetivo de ser utilizada em situaes de


emergncia, no caso de aparecimento de focos de Febre Aftosa em pases
livres da doena. Nesse caso, a administrao perifocal da vacina
produziria uma resposta rpida (como com vrus vivo o adenovrus)
nos

animais

das

propriedades

vizinhas

ao

foco,

limitando

eventualmente impedindo a disseminao do agente a partir do foco. 6.


Adenovrus bovino 3 recombinante expressando a glicoprotena E2 do
vrus da Diarria Viral Bovina (BVDV). 7. Vrus Sindbis, que um vrus
humano virtualmente apatognico, expressando antgenos (gp120) do
HIV. Essa vacina est atualmente (2001-2002) em fase de testes em
alguns pases africanos
4.

Vrus

recombinantes

expressando

genes

de

interleucinas.

manipulao gentica de vrus tem permitido no apenas a introduo de


genes de outros vrus no seu genoma (vetores virais), como tambm a
introduo de outros genes de interesse. Entre estes, esto genes de
substncias moduladoras da resposta imunolgica, como as interleucinas.
Nesse sistema, genes que codificam interleucinas de interesse (IFNs , e
, TNF, IL-2, IL-4 e IL-4) so introduzidos no genoma do vrus vetor. Ao ser
inoculado no hospedeiro como vacina, o vrus vetor ir expressar as suas
protenas (antgenos, que iro estimular a resposta imunolgica), alm da
protena de interesse (interleucinas citadas acima, como exemplo). A
expresso da IL-2 em tecidos do animal, por exemplo, ir estimular uma
resposta mais forte de linfcitos T helper (CD4+). A expresso de IFNs ,
ir

estimular

resposta

imunolgica

inespecfica

(neutrfilos,

macrfagos), aumentando a resposta ao antgeno vacinal. Ou seja, alm


dos antgenos de interesse, o vrus vetor leva consigo genes que
expressam

interleucinas

estimulantes

da

resposta

imunolgica.

Recentemente, um adenovrus, que expressa a VP1 do vrus da Febre


Aftosa, alm do IFN , foi testado com sucesso em sunos. A funo do
IFN produzido pelo vetor aps

a vacinao conferir proteo

inespecfica nas primeiras horas (e dias), at o aparecimento da resposta

91

especfica, mediada por linfcitos CD4+ e CD8+ e anticorpos especficos


para o vrus da Aftosa. Ou seja, o IFN conferiria resposta imediata at o
aparecimento da

resposta especfica. Essa estratgia uma das mais

promissoras em termos de vacinas de vetores.


5. Vetores bacterianos expressando antgenos virais.
Bactrias tambm podem ser utilizadas como vetores, como
estratgia de entregar (apresentar) antgenos virais para o sistema
imunolgico. O uso de bactrias como vetores particularmente til
quando se deseja a induo de resposta imunolgica em locais especficos
como mucosas. O gene de interesse inserido no genoma da bactria,
que ento administrada como vacina, geralmente por via oral. A
replicao da bactria (com a conseqente produo do antgeno de
interesse) no trato gastro-intestinal estimula resposta local e sistmica.
Custo reduzido de produo, facilidade de administrao, poucos efeitos
colaterais e estabilidade de armazenamento esto entre as vantagens dos
vetores bacterianos. A maior vantagem, no entanto, refere-se induo
de imunidade local, geralmente na mucosa gastro-intestinal. As bactrias
a serem utilizadas devem ser comensais ou atenuadas. As mais utilizadas
em experimentos so a Salmonella sp., Listeria monocytogenes, Vibrio
cholerae, Shigella sp., alm de lactobacillus.
Vacinas experimentais contra o vrus da influenza, utilizando a
Salmonella como vetor j foram desenvolvidas. Nesta vacina, genes de
duas protenas virais (HA e NP) foram inseridos no genoma da bactria. A
administrao oral dessa bactria a camundongos gerou resposta
humoral (anticorpos) e celular (CD4+, CTLs) contra o vrus da influenza.
Uma vacina experimental contra o vrus da Sndrome Respiratria e
Reprodutiva dos sunos (PRRSv) foi produzida utilizando-se Mycobacterium
bovis

(expressando

uma

glicoprotena

do

vrus)

como

vetor.

Camundongos e leites imunizados por via parenteral desenvolveram


anticorpos especficos contra o vrus. Vacinas experimentais contra o HIV
e o papilomavrus humano, utilizando-se Lactobacillus como vetor, foram
recentemente descritas na literatura. Alm de antgenos virais, os vetores

92

bacterianos podem tambm ser utilizados para entrega de outros


antgenos de interesse.

93

Vacinas com vrus inativado


So vacinas

formuladas a partir

do vrus original, geralmente

multiplicado em grandes quantidades em cultivo celular. Aps a obteno


de um ttulo viral alto, a infectividade do agente destruda por mtodos
qumicos ou fsicos. O vrus inativado perde a sua viabilidade e
infectividade, sendo incapaz de replicar no hospedeiro (vrus morto)
porm as partculas vricas conservam a sua antigenicidade. Ou seja, o
antgeno vacinal constitui-se de uma quantidade grande de partculas
vricas inviveis. Essas vacinas so seguras. Porm, grandes quantidades
de antgeno so necessrias para obter-se uma resposta imunolgica
satisfatria.

Geralmente,

compreende

duas

ou

trs

vacinao
doses,

primria

(primovacinao)

revacinaes

(reforos)

so

necessrios a determinados intervalos para manter o nvel de imunidade.


Essas vacinas so tambm chamadas de vacinas inativadas, vacinas com
vrus morto ou simplesmente vacinas mortas e esto entre as mais
utilizadas em medicina humana e veterinria
No processo de inativao importante que as caratersticas antignicas das protenas
estruturais (aquelas que compe a partcula viral) do vrus sejam preservadas. Alguns mtodos
de inativao, no entanto, podem alterar a estrutura de algumas protenas. Com isso, o
organismo monta uma resposta imunolgica contra as protenas alteradas, resultando em
anticorpos que podem falhar em reconhecer o agente quando de uma exposio posterior..
Os agentes qumicos mais utilizados para inativao de vrus so: 1.
Formaldedo - age em protenas e no cido nuclico formando ligaes
qumicas cruzadas (cross-linking) e inflexveis; 2. Acetona ou etanol denaturam suavemente as protenas; 3. Agentes alkilantes (Betapropiolactona [vacina da raiva], etilamina (vacina da Febre Aftosa);
(etilenemina, acetiletilenemina,
etilenemina binria) - promovem ligaes qumicas cruzadas no cido
nuclico,

inativando

agente

sem (ou

com

mnimas)

mudanas

conformacionais nas protenas, interferindo pouco na imunogenicidade; 4.


Formalina. Os agentes fsicos mais utilizados na inativao de vrus para
produo de vacinas foram o calor, raios UV e raios gama. Atualmente os

94

mtodos fsicos esto em desuso.


necessrio que a inativao seja completa e eficaz, eliminando a viabilidade da
totalidade das partculas vricas presentes na preparao. A inativao completa a base da
segurana dessas vacinas, que podem ser utilizadas em crianas, idosos, imunodeprimidos e
animais gestantes. Acidentes vacinais devidos inativao incompleta do poliovrus (vacina
inativada Salk) j foram descritos nos Estados Unidos. Alguns surtos de Febre Aftosa
ocorridos no passado tambm foram atribuidos infectividade residual de vacinas inativadas.
Mesmo assim, as vacinas inativadas so amplamente utilizadas e so consideradas seguras por
no reverter a virulncia.
A imunizao com vacinas inativadas no resulta em replicao do vrus vacinal no
hospedeiro. Dessa forma, no h amplificao do antgeno. Protenas virais no so expressas
na superfcie celular ou produzidas dentro das clulas; e no ocorre apresentao dos
antgenos aos linfcitos T CD8+ (CTLs). A resposta imunolgica induzida pelas vacinas
inativadas predominantemente humoral, mediada por anticorpos (principalmente da classe
IgG). Resposta mediada por linfcitos T CD4+ (auxiliares) tambm ocorre, pois os antgenos
proticos so fagocitados por APCs e apresentados junto com o MHC-II aos linfcitos CD4+.
Vacinas inativadas no induzem satisfatoriamente a produo de IgA,
fator indispensvel para proteo de mucosas e que constitui-se em
importante

barreira

contra

entrada

de

agentes

infecciosos

no

organismo. Para vrus cuja resposta imunolgica que confere proteo


baseada em anticorpos, esse tipo de vacina pode ser utilizada com
sucesso.
Principais desvantagens e desvantagens das vacinas inativadas:
Desvantagens: 1. Geralmente induzem resposta imunolgica de
magnitude moderada e de curta durao; 2. Requerem revacinaes; 3.
Exigem o uso de adjuvantes; 4. No induzem linfcitos T citotxicos e
fraca (ou ausente) imunidade de mucosas; 5. Possuem custo alto de
produo, em comparao com as vacinas com vrus vivo; 6. A vacinao
no raramente resulta em efeitos colaterais; 7. Exigem administrao
parenteral. 8. Eficincia muito afetada pela imunidade passiva. As
principais vantagens referem-se a segurana (sem risco de causar doena
ou ser transmitida a outros indivduos), estabilidade e ausncia de risco

95

de agentes contaminantes na vacina. Em comparao com as vacinas de


subunidades ou protenas recombinantes, possuem a vantagem de serem
compostas pelos vrions integros, com todas as protenas estruturais.
Grande parte das vacinas de uso humano e veterinrio em todo o mundo
so formuladas com vrus inativado
Principais vacinas inativadas para animais: - Bovinos: Febre
Aftosa, IBR (rinotraquete infecciosa bovina), Rotavrus, Coronavrus,
Parainfluenza, Raiva.
- Ces e gatos: Raiva, Parvovirose, Coronavirose, Parainfluenza.
- Humanos: Influenza, Hepatite A, poliomielite (Salk),
Raiva.
Vacinas de subunidade
As vacinas de subunidade consistem em uma ou algumas protenas (geralmente as mais
imunognicas) purificadas de vrions. Para isso, o vrus multiplicado em cultivo celular ou
ovo embrionado e posteriormente submetido ao processo de purificao ou extrao das
protenas de interesse. No caso da vacina contra o vrus da hepatite B (HBV), as partculas no
infecciosas (compostas apenas do antgeno de superfcie do vrus) so purificadas do sangue de
pessoas portadoras da infeco crnica. Essas vacinas podem ser eficazes para vrus cuja
imunidade concentra-se na resposta imunolgica (geralmente anticorpos) direcionados contra
poucas protenas do vrus. As protenas utilizadas nesse sistema so geralmente glicoprotenas
de envelope e/ou protenas do capsdeo.
O processo de purificao das protenas envolve solventes lipdicos para a solubilizao
dos vrions e liberao das protenas do capsdeo/envelope. As glicoprotenas HA e NA, semipurificadas de vrions, j foram utilizadas como vacina contra a gripe. Essa vacina foi menos
txica e melhor tolerada que as vacinas inativadas. No entanto, foi menos imunognica que as
vacinas formuladas com o vrus ntegro inativado. Essas vacinas so tambm chamadas de split
vaccines, pois so obtidas pela separao/fracionamento de pores imunognicas dos vrions.
Vacinas desse tipo j foram testadas e usadas contra herpesvrus animais e humanos, influenza
e coronavrus.
A vacina de subunidade mais importante a vacina tradicional contra o HBV, utilizada
por muitos anos no controle da hepatite B humana. Essa vacina preparada a partir de subpartculas virais no-infecciosas que ocorrem no sangue de portadores crnicos do HBV. Essas

96

partculas, compostas do antgeno de superfcie (HbsAg) so altamente purificadas a partir do


plasma e ento utilizadas como imungeno. Apesar da boa eficcia demonstrada ao longo de
dcadas, a maior restrio a essa vacina refere-se ao custo de produo (mtodos de
purificao) e a capacidade limitada de doses obtidas. Por isso, recentemente est sendo
substituda por uma vacina recombinante, na qual o prprio HbsAg produzido em grandes
quantidades em levedura e utilizado como imungeno. A resposta imune conferida por essas
vacinas geralmente inferior produzida por vacinas com vrus inativado, pois apenas uma
poro antignica utilizada. Outra desvantagem a produo limitada de doses. Esse
problema, felizmente pode ser solucionado pela produo dessas protenas como
recombinantes. Custos e complexidade para purificao dos antgenos, necessidade de grande
quantidade de antgeno para boa imunizao, doses repetidas e uso de adjuvantes esto entre
as limitaes dessas vacinas. Como as vacinas no-replicativas, essas vacinas induzem resposta
mediada por linfcitos TCD4+ (auxiliares) e anticorpos. A falha em induzir a produo de
linfcitos TCD8+ (CTLs), a exemplo de outras vacinas no-replicativas, limita o grau de
proteo conferido por essas vacinas.
Vacinas de protenas recombinantes:
So vacinas confeccionadas com protenas imunognicas do agente
produzidas em sistemas heterlogos. Geralmente so utilizadas protenas
do envelope ou do capsdeo, capazes de induzir resposta imunolgica
(mediada principalmente por anticorpos) capaz de proteger o individuo
frente exposio subseqente ao agente. Esse tipo de vacina tem maior
potencial para os vrus cuja resposta imunolgica protetora seja
direcionada contra uma (ou poucas) protenas do vrion. Os sistemas
heterlogos mais utilizados para a produo das protenas recombinantes
so Escherichia coli, levedura, clulas eucariotas e baculovrus.
A primeira etapa na confeco da vacina consiste na identificao
da (s) protena (s) imunodominante (s) do agente e o gene que a codifica.
Esse gene ento clonado (inserido) em uma molcula circular de DNA
(plasmdeo), sob controle de um promotor de procariotas (no caso de
expresso em E.coli) ou eucariotas (para expresso em levedura, clulas
eucariotas, baculovrus). O plasmdeo contendo o gene de interesse

97

introduzido nas clulas hospedeiras (coli, levedura). Dentro das clulas, o


DNA do gene vai ser transcrito (sntese de mRNA) e o RNA mensageiro vai
traduzido, resultando na produo da protena viral de interesse. Essa
protena ser ento purificada por mtodos bioqumicos e utilizada como
vacina. Esse mtodo muito til para a produo de grandes quantidades
de antgeno. Recentemente, tem sido demonstrado que possvel
produzir-se antgenos virais mesmo em plantas, como o milho. Esse
sistema muito promissor em termos de produo de grandes
quantidades de antgeno.
Dentre os sistemas heterlogos utilizados, os mais promissores so
leveduras,

clulas de mamferos, e baculovrus. Nesses sistemas, a

estrutura tridimensional das protenas produzidas muito semelhante


estrutura nativa da protena na partcula vrica. Com isso, os anticorpos
induzidos pela vacinao sero capazes de reconhecer e ligar-se nas
protenas virais. Glicoprotenas virais produzidas em E.coli geralmente
no so glicosiladas como em mamferos. Com isso podem assumir
conformaes diferentes das protenas nativas. Anticorpos produzidos
contra essas protenas podem no reconhecer as protenas nativas do
agente e falhar em neutralizar o vrus.
As principais

vantagens

dessas vacinas

referem-se

grande

capacidade de produo (4 x 10 7 doses da vacina com VP1 do vrus da


Aftosa so produzidas a partir de 10 litros de cultivo de E.coli) e pureza do
antgeno. As desvantagens so basicamente as mesmas das vacinas
inativadas. Alm disso, as preparaes contm apenas uma ou poucas
protenas imunognicas na sua composio, o que pode conferir uma
proteo inadequada e incompleta
para alguns vrus. A exemplo das vacinas inativadas, para obter-se uma
boa resposta imunolgica necessrio uma grande quantidade de
antgeno, alm de adjuvantes e reforos peridicos. Em geral, a
imunidade conferida por essas vacinas muito inferior conferida por
vacinas inativadas, necessitando o uso de uma quantidade muito maior
de antgeno para obter-se nveis equivalentes de imunidade.

98

O exemplo mais atual de vacinas produzidas com protenas


recombinantes a vacina contra o vrus da hepatite B (HBV). A vacina
consiste do antgeno de superfcie do HBV (HbsAg) produzido em
levedura. Grande quantidade da protena produzida, purificada e
utilizada como imungeno, conjugada com um adjuvante. Essa vacina foi
a primeira vacina recombinante de uso humano e est sendo largamente
utilizada em todo o mundo, possuindo boa eficcia para conferir proteo
contra o HBV. Alm dessa, existe uma vacina contra o vrus da hepatite A
produzida em clulas eucariotas em testes na Europa. Uma vacina para o
vrus do herpes simplex humano (HSV) semelhante ao sistema do HBV
tambm est em testes na Europa. Uma vacina recombinante contra a
gripe (influenza), formulada com as glicoprotenas HA e NA produzidas
em levedura, tem sido postulada como alternativa para as vacinas
inativadas para pessoas alrgicas a proteinas do ovo, sistema no qual o
vrus amplificado para posterior inativao.
Exemplos

de

vacinas

utilizando

protenas

recombinantes

em

veterinria so: vacina para Febre Aftosa utilizando-se a Vp1, principal


protena do capsdeo, produzida em E.coli (Figura 1); vacina contra o vrus
da leucemia felina utilizando-se a Vp 70 do envelope produzida em E.coli;
e vacina contra o parvovrus canino utilizando a Vp2 expressa em
baculovrus.
Em

alguns

desses

sistemas

(HBV,

parvovrus,

calicivrus,

picornavrus, coronavrus), as protenas do capsdeo se associam e


formam partculas morfologicamente semelhantes s partculas vricas
normais. Essas partculas, chamadas de VLPs (virus-like particles) so
ocas, no contm o genoma e por isso no so infecciosas. A formao
dessas partculas pelas protenas recombinantes melhora a apresentao
do antgeno e conseqentemente a resposta imunolgica contra esses
antgenos.
Vacinas de Peptdeos sintticos
O conceito de que peptdeos podem induzir imunidade protetora contra doenas

99

infecciosas surgiu em 1963, a partir da observao de que fragmentos pequenos (peptdeos)


de uma protena do vrus do mosaico do tabaco induziu anticorpos neutralizantes em coelhos.
Os anticorpos reconhecem e ligam-se especificamente em pequenas
regies do antgeno que so necessrias para estimular uma resposta
imunolgica.

Essas

regies

so

conhecidas

como

epitopos

ou

determinantes antignicos. Se a estrutura desses epitopos conhecida,


torna-se

possvel

sintetiz-los

artificialmente.

Com

advento

da

biotecnologia nos anos 80, tornou-se possvel o desenvolvimento de


novas vacinas com a utilizao de tcnicas de biologia molecular. Tais
tcnicas permitem a localizao e identificao exata de epitopos
imunognicos, tanto para linfcitos T (citotxicos e auxiliares) como para
linfcitos B, de diversos organismos. Isso permite que para antgenos
proticos, seqncias de aminocidos (peptdeos) correspondentes a
esses epitopos sejam sintetizados em laboratrio. Ento, possvel
formular-se uma vacina na qual o antgeno, ao invs de um vrus inteiro
(vivo ou inativado) ou protena (subunidade ou recombinante), seja
constituda apenas dos epitopos relevantes dos antgenos de um
determinado agente.
Os epitopos so geralmente definidos como contnuos ou descontnuos. Epitopos
contnuos so formados por peptdeos que so especificamente reconhecidos em sua forma
linear de modo que a sequncia particular de aminocidos contm a informao necessria para
o reconhecimento pelo sistema imunolgico. Epitopos descontnuos so constitudos de
resduos que no so contguos na sequncia, mas apresentam-se na superfcie da protena por
dobramento da cadeia polipeptdica.
Estudos em protenas globulares tem demonstrado que existe, em mdia, um
determinante antignico por 5 KDa de protena (aproximadamente 40 aminocidos). Por esta
razo, macromolculas proticas so carreadoras de um grande nmero de epitopos, sendo
que alguns induzem resposta imunolgica protetora e outros no.
Apresentao ao sistema imunolgico
Uma vez que se tenha produzido um peptdeo sinttico, surge o problema de como
apresent-lo eficientemente ao sistema imunolgico, visto que o peptdeo por si s poderia ser

100

pequeno e solvel, sendo improvvel a induo de uma resposta imunolgica adequada. Um


estmulo antignico efetivo requer que a estrutura tridimensional do epitopo na molcula
natural de protena seja preservada na vacina. A maioria dos epitopos que induzem imunidade
humoral so conformacionais. Como peptdeos sintticos curtos perdem sua conformao
terciria ou quaternria, a maioria dos anticorpos induzidos contra eles so incapazes de se
ligar ao vrions, por reconhecerem a protena em sua conformao natural. Por essa razo,
essas vacinas geralmente induzem ttulos de anticorpos neutralizantes de magnitude inferior
queles induzidos por vacinas de vrus inativado ou por protenas intactas purificadas.
Por outro lado, os epitopos reconhecidos por linfcitos T so
peptdeos lineares curtos. Estes se ligam a molculas do MHC (complexo
maior de histocompatibilidade) para serem apresentados ao sistema
imunolgico (clulas T auxilares e citotxicas). Assim, pode-se sintetizar
heteropolmeros artificiais de epitopos de clulas T e B unidos a um
peptdeo, facilitando desta forma a fuso com a membrana celular e
conseqentemente melhorando o seu reconhecimento. Por esta razo,
evidente que peptdeos so imunognicos em sua forma livre contendo
stios capazes de induzir auxlio para a produo de anticorpos (epitopos
de clulas T auxiliares) e stios para o reconhecimento especfico de
anticorpos (epitopos de clulas B).
Os epitopos de clulas T devem ainda ser aptos a se ligar
molculas de MHC-II na superfcie de clulas apresentadoras de antgenos
(APC) do hospedeiro e subseqentemente interagir com receptores
celulares no sentido de induzir a proliferao de clulas B. Alm disso,
para um peptdeo induzir uma resposta imune satisfatria, ele deve
possuir um epitopo apropriado para a espcie receptora. Nesse sentido,
uma eficiente vacina sinttica provavelmente dever consistir de uma
mistura de peptdeos para superar o problema de hipervariabilidade de
seqncias e restries de MHC. Alm disso, dever conter epitopos de
clulas B e T e possivelmente uma regio indutora de linfcitos T
citotxicos.

101

102

Carreadores e adjuvantes
Acredita-se que carreadores e adjuvantes sejam essenciais para a
adequada eficcia de uma vacina de peptdeos sintticos. Como
peptdeos sintticos geralmente possuem baixa imunogenicidade, podese lig-lo a uma protena carreadora ou a um hapteno atravs de
diferentes sistemas de ligaes qumicas. O principal problema com esse
sistema que a ligao a uma protena carreadora tende a ser casual no
levando em considerao a orientao do peptdeo. Assim, o stio
antignico do peptdeo pode no ser adequadamente apresentado ao
sistema imunolgico. Outra abordagem seria a fuso da sequncia do
peptdeo a uma protena carreadora atravs de engenharia gentica, isto
, colocar o peptdeo em uma regio imunodominante da protena de
fuso.
Carreadores

lipdicos

conhecidos

como

ISCOMs

(complexos

imunoestimulatrios) e outros sistemas como micelas e lipossomas


auxiliam a promover o reconhecimento por macrfagos ou clulas alvo
atravs do aumento da imunogenicidade. Freqentemente carreadores
por si s agem como adjuvantes.
Outro poderoso carreador a PPD (protena purificada derivada da
tuberculina), mas tem sido usada somente experimentalmente. O toxide
tetnico tem sido utilizado mais freqentemente em humanos. Estudos
tambm demonstram que protenas integrais da membrana (IMPs)
isoladas de E. Coli, quando covalentemente conjugadas com peptdeos,
melhoram significativamente a resposta imunolgica. Protenas de choque
trmico (HSP) tambm podem agir como molculas carreadoras quando
conjugadas a peptdeos sem requerer adjuvantes adicionais.
Vantagens

No possui microorganismos vivos ou inativados (segurana);

Seqncia curta de aminocidos representando epitopos protetores;

Segura, quimicamente definida, no txica e estvel;

103

Epitopos de clulas T podem ser facilmente includos na vacina, pois


so naturalmente apresentados na forma de peptdeos lineares;

Podem ser construdos para conter epitopos de clulas B e T ou vrios


epitopos de uma ou mais protenas;

Podem ser manipulados para remover-se domnios imunossupressores


presentes em protenas na sua forma original;

Pode-se incluir vrios epitopos em uma mesma formulao.

Desvantagens

O custo pode ser alto;

Pobremente imunognicas sendo necessrio o uso de adjuvantes,


lipossomas, ISCOM ou polimerizao;

A maioria dos epitopos de clulas B so no lineares (descontnuos) e


por isso no so reproduzidos por peptdeos;

Pode ser altamente especfica, no protegendo contra variantes


naturais;

Vacina com nico epitopo pode selecionar mutantes no campo;

Ausncia de resposta em animais que no possuem o MHC-II


apropriado;

Resposta por linfcitos T citotxicos (desejvel em vacinas vricas)


negligvel ou inexistente.

Aplicabilidade
Vrus:
Nos ltimos anos, tem se observado considervel progresso na
investigao e desenvolvimento de peptdeos sintticos indutores de
resposta imune antiviral.
J foram testadas vacinas para o vrus da Febre Aftosa (FMD)
utilizando-se peptdeos correspondentes a uma seqncia de aminocidos
da protena viral VP1, obtendo-se resultados satisfatrios. Foi descrito
ainda a proteo de

ces contra desafio com amostra virulenta de

parvovrus canino (CPV), utilizando-se stios antignicos da regio aminoterminal da protena VP2.

Alm disso, j foram testadas vacinas contra

104

outros diversos tipos de vrus, entre eles, o HIV, papilomavrus humano


(HPV), vrus sincicial respiratrio humano (HRSV), hepatite B, influenza,
vrus linfotrpico humano (HTLV-1).
Bactrias e parasitas:
J foram realizados testes utilizando-se antgenos de Listeria
monocytogenes, toxinas de E. coli e clera. Estudos mais recentes tem
identificado

importantes

epitopos

imunognicos

do

Mycobacterium

tuberculosis que podem ser candidatos a antgenos vacinais. Bons


resultados foram obtidos em um teste vacinal contra cisticercose em
sunos no Mxico. Tambm foram testadas com relativo sucesso vacinas
contra Malria. Para essa enfermidade, as vacinas de peptdeos sintticos
parecem ser uma das mais promissoras.
Outros:
Alm dos exemplos citados acima, esto sendo realizados estudos
utilizando

peptdeos

sintticos

como

candidatos

vacinais

ao

desenvolvimento de uma vacina contraceptiva em humanos, para o


tratamento de alergias mediadas por IgE, na preveno de Myasthenia
gravis e terapia contra o cncer de prstata, entre outros.
Vacinas de DNA
As vacinas de DNA so uma das mais recentes e promissoras formas
idealizadas para a apresentao de antgenos ao sistema imunolgico
com o objetivo de imunizao. Esse tipo de vacina apresenta uma grande
vantagem,

pois

fornece

ao

organismo

as

informaes

genticas

necessrias para que o mesmo produza o antgeno dentro de suas


prprias

clulas.

Esse

antgeno

possuir

todas

as

caractersticas

necessrias para a gerao de uma boa resposta imunolgica. Com isso,


efeitos colaterais que podem ocorrer pela imunizao com agentes
patognicos so evitados.
A primeira etapa na confeco de vacinas de DNA a identificao
de antgeno(s) do agente que induzam resposta imunolgica que esteja
relacionada com proteo. Uma vez identificada essa protena e o seu

105

gene (segmento do DNA do agente que codifica a protena), faz-se uma


clonagem do gene. O gene inserido em molculas circulares de DNA
chamadas

plasmdios.

extracromossmicas

que

Os

plasmidios

replicam

so

molculas

autonomamente

em

de

DNA

bactrias,

podendo ser amplificados em grande quantidade em E.coli. Esse


plasmdeo deve conter o gene da protena sob o controle de um promotor,
que uma seqncia de DNA que direciona a transcrio do gene e
posteriormente a produo da protena. O plasmdeo DNA ser ento
usado como vacina e ir direcionar a produo da protena antignica no
organismo do hospedeiro.
A forma mais usual de aplicao atravs da inoculao do
plasmdeo por injeo intramuscular. Outra forma o bombardeamento
intradmico com partculas de ouro recobertas com o plasmdeo. O
plasmdeo introduzido pelo bombardeamento de clulas da derme ou
camadas mais profundas.

106

reconhecimento leva a ativao dos linfcitos, que tornam-se citotxicos e


eventualmente destroem a clula-alvo. A lise das clulas produtoras do
antgeno viral leva ao extravasamento dessas protenas, que podem ser
fagocitadas por macrfagos, processadas e apresentada aos linfcitos
TCD4+ (helper). Essa protena no meio extracelular pode tambm ser
reconhecida por linfcitos B (atravs dos anticorpos de superfcie) e gerar
resposta por anticorpos. Com isso, a produo endgena da protena viral
capaz de gerar resposta celular (CD4+, CD8+) e humoral (clulas B,
anticorpos).As vacinas de DNA, alm da imunidade humoral (anticorpos) e
celular especfica (CD4 e CD8), oferecem vantagens adicionais em relao
s vacinas clssicas. Nelas, a sntese dos antgenos endgenos ocorrem
com caractersticas estruturais muito semelhantes molcula nativa
sintetizada

pelo

patgeno

quando

infecta

hospedeiro,

gerando

fragmentos proticos de conformao apropriada e necessrios para


induo de uma resposta imunolgica mais efetiva. A imunidade
adquirida persiste por longo perodo de tempo, devido constante
produo do antgeno dentro da clula hospedeira e capacidade destes
estimularem linfcitos de memria imunolgica. No plasmdeo contendo o
gene do agente infeccioso pode-se clonar outros genes de interesse.
Introduo de genes de interleucinas (IFN, IL-2) tem sido preconizada para
aumentar a resposta dos linfcitos T e outras clulas envolvidas na
resposta imunolgica.
Alm da facilidade de produo quando comparada com as vacinas
recombinantes, peptdeos sintticos e outras, o custo de produo
significativamente menor. Essa vacina pode ser obtida em um nico
processo de purificao e pode ser estocada como sedimento seco e
temperatura ambiente, sendo que no momento da administrao
necessrio somente a adio de pequena quantidade de gua. Estas
condies trazem vantagens econmicas para o estabelecimento de
amplos programas de imunizaes em regies de difcil acesso. Um risco
potencial associado ao uso dessas vacinas a possibilidade, embora
remota, do plasmidio recombinar-se com o DNA cromossmico da celula

107

hospedeira podendo levar eventualmente a processos neoplsicos. Uma


limitao a dificuldade de obter-se a introduo e captao do
plasmdeo por um nmero grande de clulas, de modo a permitir uma
resposta imunolgica de maior magnitude. Processos que resultem na
captao do plasmdeo em grande escala pelas clulas do hospedeiro so
atualmente objeto de pesquisa e podem contribuir para uma melhor
eficcia e uso dessas vacinas em um futuro prximo.
A figura abaixo uma representao esquemtica do processo de obteno e estimulao
da resposta imune da vacina de DNA.
Muitos trabalhos experimentais com vacinas de DNA tem sido
desenvolvidos. Algumas esto em fase de testes e outras esto na fase
de

licenciamento.

Exemplos:

Mycobacterium

tuberculosis,

vrus

da

hepatite B, vrus da hepatite C, Salmonella typhi, vrus da raiva,vrus


sincicial respiratrio, herpesvrus bovino, papillomavrus, Schistosoma
japonicum, herpes simplex vrus, vrus da influenza, HIV, etc...
Vacinas de RNA
A imunizao com vacinas de RNA ocorre de forma semelhante
vacinas de DNA. Ao invs da inoculao do plasmdeo DNA, inocula-se o
RNA mensageiro (RNAm) que produzido in vitro (em uma reao quimica
realizada no laboratrio). A partir desse mRNA a clula hospedeira produz
protena desejada. O tipo de resposta gerada por esse tipo de vacina
semelhante resposta induzida por vacinas de DNA.
Nesse tipo de vacina, no existe risco de mutagnese insercional
como nas vacinas de DNA, uma vez que no h a possibilidade de
integrao do RNA no DNA cromossomal. Entretando, a dificuldade e alto
custo de produo de RNA em grande escala em laboratrio e a relativa
instabilidade do RNA, dificultam a utilizao desse tipo de vacina. A figura
a seguir demonstra o esquema de imunizao e a resposta imunolgica
produzida.
Prof. Agueda Castagna de Vargas

108

Imunizao contra enfermidades bacterianas


Vacinas so substncias utilizadas para suscitar resposta imune para prevenir ou
minimizar doenas produzidas por agentes infecciosos.
As vacinas podem ser compostas de agentes infecciosos propriamente (vivos ou
mortos) e ou produtos destes. Os produtos contendo bactrias inativadas devem ser mais
apropriadamente chamados bacterinas. Produtos que possuem atividade txica so
chamados toxinas, e toxinas inativadas so denominadas de toxides.
Para ser efetiva uma vacina deve estimular uma resposta imune que interfira com o
ciclo de vida do agente infeccioso.
Toxides, bacterinas e vacinas bacterianas
Como nas vacinas vricas, as bases de um toxide, bacterina ou vacina bacteriana
efetiva est na habilidade de induzir uma resposta imune ou resposta capaz de estabelecer
proteo aos desafios de campo dos microrganismos patognicos.
O desenvolvimento de um produto eficaz depende do entendimento da patogenia da
doena bacteriana que deve ser prevenida.
Em temos gerais, as doenas produzidas pelas bactrias podem agrupar-se em trs
categorias:
1) Aquelas resultantes da ao de toxina bacteriana;
2) Aquelas resultantes de seqelas da multiplicao extracelular do agente bacteriano;
3) Aquelas resultantes de seqelas da multiplicao intracelular do agente bacteriano.
Toxides
As toxinas bacterianas so de duas classes: endo e exotoxinas.
Endotoxinas so estritamente definidas como pores lipopolissacardicas da parede
das clulas gram-negativas ( a poro do lipdeo A responsvel pelas manifestaes
txicas).
O dipeptdeo muramyl presente na parede das clulas gram positivas e, em menor
quantidade, nas gram negativas tambm apresenta propriedades txicas.
Tanto endotoxina como o dipeptdeo muramyl exercem sua atividade txica pela
induo de vrias citoquinas pelas clulas do hospedeiro.
As exotoxinas so protenas que interagem com as clulas do hospedeiro
(usualmente aps ligao a receptores especficos) resultando em desregulao da funo
das clulas do hospedeiro sem dano excessivo, interferncia com a fisiologia normal das

109

clulas do hospedeiro, ou morte das clulas deste.


Os anticorpos estimulados pr vrios eptopos das toxinas que resultam na
neutralizao das mesmas so denominados antitoxinas. Estes anticorpos podem bloquear a
interao entre toxina e seus receptores celulares ou alterao da configurao das toxinas
para ento estas no atuarem nas clulas do hospedeiro. Os anticorpos contra as exotoxinas
demonstram eficincia na preveno de doena. Os anticorpos contra as endotoxinas tem
demonstrado resultados controversos na preveno das doenas.
Os toxides so toxinas sem atividade txica que podem induzir uma resposta imune
(anticorpos). Os toxides podem ser produzidos por inativao qumica de uma toxina ativa
ou pr manipulao do gene que codifica a toxina para ento a toxina ser inativada (como
exemplo a toxina A-B onde a subunidade A responsvel pela atividade txica e a
subunidade B responsvel pela ligao da toxina ao hospedeiro, o gene que codifica a
subunidade A pode ser eliminado e o toxide produzido composto somente pela subunidade
B). Anticorpos contra lipopolissacardeos (endotoxina) so estimulados pela imunizao
com mutantes (chamados

mutantes rugosos) que produzem muito pouco unidades O

repetidas de lipopolissacardeos.
A principal vantagem dos toxides que eles so seguros. Os toxides
administrados parenteralmente estimulam anticorpos (IgM e IgG) que interferem com a
interao da toxina e clulas do hospedeiro que no esto na superfcie das mucosas. Por
outro lado a administrao de toxides nas superficies mucosas estimulam anticorpos
secretrios (sIgM e sIgA) que interferem com a interao da toxina e clulas do hospedeiro
na superfcie das mucosas. A principal desvantagem dos toxides utilizados para imunizao
pela via das superfcies mucosas sua meia vida extremamente curta.
Bacterinas
Bacterinas so bactrias patognicas mortas. Elas so usualmente produzidas pela
morte qumica dos agentes infecciosos, com o objetivo de preservar a estrutura bacteriana,
expressando eptopos importantes para estimular uma resposta imune efetiva. A resposta
imune quase sempre anticorpos.

110

interferiro com a interao do patgeno com as clulas do hospedeiro. A desvantagem


que sendo a principal resposta imune anticorpos, ento somente a proteo mediada por
anticorpos ocorrer. Portanto, as bacterinas administradas parenteralmente no so to
eficazes contra patgenos intracelulares. As bacterinas utilizadas para imunizao pela via
das superfcies mucosas possuem uma meia vida extremamente curta. Outra desvantagem
que o crescimento do patgeno realizado geralmente in vitro, e a expresso de eptopos
pode ser diferente dos que expressos in vivo, o que pode resultar em um produto que
estimule anticorpos com especificidade inapropriada.
Vacinas bacterianas
Vacinas bacterianas so compostas de verses atenuadas dos patgenos (eles so
vivos mas possuem virulncia reduzida).
A

atenuao pode ser obtida de vrias formas: seleo de

uma amostra em que

naturalmente ocorreu mutao; passagens repetidas em meios artificiais de cultura;


eliminao de caractersticas de virulncia por mutao do gene que as codifica.
A maior vantagem das vacinas bacterianas est diretamente ligadas ao fato de serem
vivas. As vacinas vivas no somente possuem uma longa meia vida (apesar da localizao),
mas expressaro eptopos que somente so expressos in vivo, portanto estimulando
anticorpos contra eptopos que o patgeno expressar durante a infeco. Outra vantagem
que as vacinas vivas estimularo anticorpos e hipersensibilidade celular. A maior
desvantagem que as vacinas vivas podem produzir doena, por exemplo, atravs da
reverso a um fentipo virulento. Tambm, se o hospedeiro vacinado apresentar baixa da
resistncia, ento a vacina estar mais apta a produzir doena.
Adjuvantes
Adjuvantes so substncias introduzidas na formulao de vacinas
para aumentar ou modificar as suas propriedades imuno-estimulantes,
sobretudo a resposta por macrfagos, linfcitos auxiliares e CTLs. Os
adjuvantes podem retardar a liberao de antgenos no organismo e
conseqentemente manter o estmulo antignico por mais tempo.

Ou

seja, antgenos que teriam a durao de alguns dias no organismo podem


resistir por semanas ou at meses estimulando a resposta imunolgica.

111

H dois tipos principais: adjuvantes de transporte (como lipossomas e


emulses) que contribuem para levar antgenos s clulas; e adjuvantes
estimulantes (como as citoquinas e componentes das paredes de
bactrias), que podem iniciar ou estimular a resposta imunolgica. No
caso da imunizao atravs das mucosas, surge uma situao especial,
pois so necessrios adjuvantes mucosos para induzir resposta eficiente
de IgA e linfcitos citotxicos.
Na Tabela abaixo podem ser observados os tipos de adjuvantes utilizados
em vacinas de uso veterinrio e o seu modo de ao.
Tabela : tipos de adjuvantes e modo de ao.
Tipo

Adjuvante

Fosfato de alumnio
Hidrxido de alumnio
Alumnio
Adjvante incompleto de
Emulso gua-leo
Freund
Corybacteria anaerbico
BCG
Fragmentos
Diptdeo muramyl
bacterianos
Bordetella pertussis
Lipopolissacardeos
Saponina
Agentes
ativo
de
Lisolectina
superfcie
Detergentes plurnicos
Complexos
de Sulfato dextrano
hidrocarbonos
Glicanos
Adjuvantes
Adjuvante completo de
misturados
Freud
Sais de alumnio

Modo de ao
Liberao
antgeno

lenta

do

Liberao
lenta
do
antgeno
Estimula macrfagos
Estimula macrfagos
Estimula macrfagos
Estimula linfcitos
Estimula macrfagos
Estimula
o
processamento
de
antgenos
Estimula macrfagos
Estimula macrfagos e
clulas T

A resposta imunolgica contra vacinas no-vivas (vacinas inativadas, protenas


recombinantes, subunidades, etc...) muito fraca quando no se utiliza adjuvantes. Por isso,
vacinas no vivas necessariamente devem ser formuladas com adjuvantes, de modo a
induzirem uma resposta imunolgica eficiente. No entanto, a maioria dos adjuvantes pode
induzir defeitos colaterais como: dor e inflamao locais, granulomas, ndulos, febre (devido
aos produtos bacterianos), artrite e em alguns casos resposta auto-imune. Os efeitos adversos
dos adjuvantes so os principais responsveis pelos efeitos indesejveis das vacinas no-vivas.

112

Lipossomas
Lipossomas so vesculas lipdicas, onde uma fase aquosa
totalmente envolvida por uma ou mais camadas de fosfolipdeos. So

importantes para o encapsulamento e liberao controlada de vrias


molculas biolgicas, incluindo agente antivirais, imunomoduladores,
toxinas e enzimas. Eles podem encapsular substncias hidroflicas em seu
interior aquoso e substncias hidrofbicas em suas bicamadas. Estes
sistemas

tm

sido

testados

como

transportadores

de

diversos

medicamentos, vacinas, material gentico e enzimas para o interior de


clulas.

Apresentam

baixa

toxicidade

imunogenicidade;

so

biodegradveis e capazes de proteger os compostos encapsulados da


diluio e degradao no sangue, de forma que, quando alcanam os
tecidos alvo, podem liberar doses concentradas de substncias.
Os lipossomas so normalmente preparados a partir de lecitinas extradas
de fontes naturais ou podem ser preparados geralmente a partir de
fosfolipdios

sintticos.

Em

alguns

casos,

so

propositadamente

adicionados outros lipdios, como colesterol, para aumentar a estabilidade


fsica ou modificar suas propriedades. Em particular, o colesterol no s
aumenta

estabilidade

mecnica

como

reduz

substncias que so incorporadas nas vesculas.

vazamento

de

113

Existem vrios tipos de lipossomas, classificados de acordo com o


tamanho e o nmero de bicamadas lipdicas que apresentam. As vesculas
formadas

por

diversas

bicamadas

sucessivamente

separadas

por

compartimentos fluidos so chamadas de multilamelares. As vesculas


que apresentam apenas uma bicamada e uma regio aquosa central so
denominadas unilamelares.
A figura abaixo mostra o esquema de um lipossoma unilamelar.

Vantagens
sistema de entrega pode ser controlado
So biodegradveis
Carreiam substancias aquosas e oleosas
Previnem a oxidao
Solubilizam protenas
Tm hidratao controlada
So estveis
As paredes dos lipossomas possuem fosfolpidios que podem se ligar
substncias oleosas, como adjuvantes
Desvantagens

A eficincia de transfeco varivel


Pode ser txico clula alvo

Usos e propriedades de vacinas vivas e no-vivas

114

Embora as vacinas com vrus vivo sejam consideradas, em


geral, mais efetivas do que as vacinas com agente no-vivo, existem
algumas restries ao seu uso. Da mesma forma, as vacinas no-vivas
possuem algumas vantagens em relao s vivas.

Em algumas

circunstncias, somente aconselhvel o uso de vacinas no-vivas, pois o


uso de vacinas vivas pode trazer consequncias indesejveis.

Alguns

exemplos em que somente vacinas no-vivas so recomendadas so:


1. Em fmeas bovinas prenhes, a vacinao com vacinas com
vrus vivo BVDV e BI-IV1 pode produzir infeco fetal e abortos. Nesses
casos, apenas vacinas no-vivas so recomendadas. Muitas vezes, pelo
risco potencial de se vacinar inadvertidamente fmeas que esto
prenhes, opta-se pelo uso rotineiro de vacinas no-vivas.
2. Em casos onde ainda no se conseguiu atenuao suficiente
do agente (HIV, HBV, entre outros). Ou simplesmente no se quer utilizar
um agente infeccioso vivel como vacina.
3. A vacinao de pessoas imunodeprimidas, velhas ou doentes
contra a influenza s realizada com vacinas no-vivas.
4. A vacinao de pessoas e animais com vrus vivo que
estabelecem latncia (herpes) bastante controvrsia.
5. Vrios pases (inclusive o Brasil, at pouco tempo) impe
restries ao uso de vacinas vivas para algumas espcies animais
(bovinos, sunos). Nesses casos, somente vacinas no-vivas podem ser
utilizadas.
6. Nos casos em que o agente foi erradicado de uma
populao, o uso de vacinas vivas traz o risco de reintroduo. Nesses
casos somente vacinas no-vivas so aceitas.
7. Alm desses casos, em muitas outras ocasies opta-se pelo uso de vacinas
no-vivas, mesmo sabendo que a sua eficcia geralmente inferior s vacinas vivas. Grande
parte das vacinas animais e humanas so elaboradas com o agente inativado.
Vacinas polivalentes ou mistas

115

Devido sua convenincia, tem se tomado comum o uso de vacinas contendo mais de
um agente infeccioso em sua formulao. Essas vacinas so chamadas de vacinas polivalentes,
multivalentes ou mistas, podendo conter uma mistura de virus, bactrias ou ambos. Em alguns
casos, as
vacinas so direcionadas a agentes que causam algum tipo especifico de
manifestao clnica. So exemplos as vacinas contra diarrias neonatais
em bovinos com rotavrus, coronavrus, E.coli e C.perfringes; ou contra
enfermidades respiratrias contendo o BVDV, BHV-1 5 PI-3 , BRSV e
Pasteurella sp. Outras vezes essas vacinas contm agentes que causam
diferentes sindromes clnicas.

116

Tabela 2 - Comparao entre as propriedades das vacinas vivas e novivas


-------------------------------------------------------------------------------------------------------------Vivas (atenuadas)
No-vivas (mortas,
peptdeos,
subunidades)
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------1. Induzem resposta humoral e celular (CD8+)
Somente
resposta humoral
2. Induzem imunidade rpida e duradoura
limitada e passageira
3. Aplicao nica (geralmente)
aplicaes
4. No necessitam adjuvante
adjuvante

Imunidade
Requer mltiplas
Necessitam

5. Quantidade pequena de antgeno


grande de antgeno

Quantidade

6. Administrao parenteral e nasal (algumas)


parenteral

Administrao

7. Custo baixo

Custo alto

8. Podem induzir imunidade de mucosas


imunidade de mucosas

No induzem

9. Raramente efeitos colaterais


frequentes

Efeitos colaterais

10. Risco de agentes contaminantes


contaminantes

Pouco risco de

11. Podem reverter virulncia


virulncia

No revertem

12. Geralmente instveis (armazenamento)


13. Pode ser transmitida ao feto/outros animais
transmisso

Estveis
Sem risco de

14. No deve ser administrada a indivduos com


administrada

Pode ser

117

Imunodeficincia
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------Algumas vacinas polivalentes para ces contm at oito agentes
diferentes (adenovrus canino tipo 1 e 2, virus da cinomose, parvovrus,
vrus da raiva, parainfluenza canina e leptospiras).

Vacina trplices de

humanos contm os agentes da difteria, ttano e coqueluche (DPT) ou


cachumba, sarampo e rubola (MMR).
O aspecto positivo dessas vacinas que produzem imunidade contra
vrios agentes com uma s aplicao, economizando tempo e facilitando
a imunizao de grandes populaes.

Isso torna-se relevante quando

grandes rebanhos devem ser manejados para a vacinao, ou em


campanhas de vacinao humana, em que populaes inteiras, s vezes
de difcil acesso, devem ser imunizadas.
Os aspectos negativos relacionam-se um possvel gasto desnecessrio,
visto que nem sempre h a necessidade de imunizao contra todos os
componentes da vacina, pois o mesmo pode no estar presente na
populao. Adicionalmente, as indicaes de vacinao (idade, via, etc ...
nem sempre so idnticas para diferentes microorganismos.

Outro

aspecto questionvel relaciona-se ao grau de proteo produzido com


essas

vacinas,

pois

quando

vrios

antgenos

so

simultaneamente, existe competio entre os antgenos.

administrados
Se h algum

antgeno dominante, possvel que a maior parte da resposta imune seja


direcionada a ele, em detrimento dos outros.

Alguns pesquisadores

questionam se o uso de vacinas muito complexas confere proteo


satisfatria e se reduz o fisco de reaes adversas. No entanto, estudos
de proteo no tem sido capazes de demonstrar falhas evidentes de
proteo pelo uso dessas vacinas.
Um importante aspecto a ser levado em conta a presena de agentes
imunossupressores viveis na formulao de vacinas polivalentes.

Pelo

menos dois vrus (BVDV e parvovrus canino) tm demonstrado atividade


imunossupressora, devendo-se questionar a sua incluso como agente

118

vivel (vivo) nessas vacinas, pois a resposta aos outros antgenos pode
ficar prejudicada.
As mesmas consideraes feitas acima aplicam-se ao uso de vacinas
monovalentes em combinao, o que tambm uma prtica comum em
medicina humana e veterinria.
Controle de qualidade
Antes de seu uso, as vacinas devem ser submetidas a testes de controle
de qualidade que garantam a sua segurana e eficcia. Em geral, esses
testes dividem-se em trs tipos: esterilidade, inocuidade e potncia (ou
eficcia).
1. Provas de esterilidade (ou de pureza) - Visam pesquisar a
presena

de

agentes

comercializao.

contaminantes

no

produto

pronto

para

Contaminantes comuns so mycoplasma, bactrias

anaerbicas ou aerbicas e fungos. Esses testes devem ser realizados em


todas as partidas ou lotes de vacina produzidos.
2. Provas de inocuidade - Visam demonstrar a segurana da
partida no que refere-se reaes locais ou mesmo sistmicas.

So

realizadas em animais de laboratrio ou mesmo na espcie alvo. Devem


ser realizadas em todas as partidas.
3. Provas de potncia - Tm como objetivo demonstrar a
capacidade imunognica da vacina.

Deveriam ser obrigatoriamente

realizadas em todas as partidas produzidas. No entanto, na maioria das


vacinas so realizadas apenas no incio da produo, para obter
licenciamento para comercializao.

Muitos informativos tcnicos e

folders de vacinas indicam a deteco de anticorpos como um indicativo


de proteo. Como j foi visto, a presena de anticorpos serve apenas de
indicativo da resposta imunolgica, no podendo ser considerado como
indicativo absoluto de proteo. A prova mais utilizada na avaliao de
eficcia de vacinas consiste na vacinao de animais (preferencialmente
da espcie alvo) e posterior desafio com o agente patognico. Um grupo

119

de animais permanece sem vacinao e serve de referncia (controle).


Para avaliao da eficcia de vacinas virais, geralmente utiliza-se trs
parmetros: mortalidade ( % de controles mortos - % de vacinados
mortos / % de controles mortos ), magnitude e durao da doena clnica
e magnitude e durao da eliminao viral. Para avaliao e comparao
da doena clnica em vacinados e controles, pode-se atribuir valores
numricos aos parmetros clnicos (ex: perda de apetite +, ++,+++, ++
++; depresso +,++,+++,++++ ).

A comparao entre a soma dos

valores mdios dirios (escore clnico) entre os grupos um mtodo


objetivo de avaliar-se o grau de proteo conferido pela vacinao.
Falhas vacinais
As vacinas so elaboradas para conferir uma proteo slida e
duradoura na maioria (seno na totalidade) dos indivduos vacinados. No
entanto, isso muitas vezes no ocorre. As falhas em conferir imunidade
atravs da vacinao podem ser devidas vrios fatores (Quadro). Em
geral, as falhas vacinais podem ser divididas em trs tipos principais, de
acordo com a sua origem:
Falhas da vacina
A vacina pode conter o microorganismo inadequado, ou a
cepa errada, ou uma variante antignica diferente da amostra circulante
na populao (EX. BVDV tipos 1 e 11, influenza, etc... Ou ento, o mtodo
de produo pode ter destrudo ou alterado os antgenos importantes
para a induo da resposta imune protetora (vacinas inativadas), ou a
vacina pode conter pouco antgeno.

Esses problemas podem ser

minimizados pela aquisio de vacinas de laboratrios idneos e pela


correta estocagem da vacina at o seu uso.
Falhas na administrao
Vacinas administradas por aerossis ou adicionadas na gua
de beber (aves) ou na rao podem no o ser uniformemente distribudas

120

e no imunizar de maneira uniforme a populao.

Problemas de

administrao parenteral de vacinas em grandes animais so tambm


comuns e podem geral falhas na proteo. A administrao intranasal de
vacinas frequentemente problemtica pela incerteza da inocularo (e
recebimento) da dose total. Armazenagem por tempo excessivo ou em
condies

inadequadas

(temperatura)

pode

inativar

ou

reduzir

viabilidade do agente infeccioso presente na vacina (no caso de vacinas


vivas). Essa inativao pode tambm ocorrer pela presena de qumicos
na vacina, ou na seringa utilizada para administrao, ou ainda pelo
excesso de antissptico utilizado por ocasio da administrao.

vacinao de animais que apresentem imunidade passiva pode interferir


com a imunizao e no conferir a proteo esperada.

Essa

provavelmente uma das principais causas de resultados insatisfatrios em


vacinao.

Da mesma forma, a vacinao de indivduos que j esto

infestados com o agente em questo (perodo de incubao) pode no


surtir o efeito desejado.
FALHAS VACINAIS
Administrao
Vacina viva
Animal j
Inadequada
invivel

Animal
responde
Muito tarde
(animal j
protetores
infectado)

Animais com
Administrao
imunidade
passiva
Correta
Incorreta

Animal no
responde

Cepa
Vacinal

Antgenos
no-

Errada

utilizados

Imunidade
Stress
Passiva
Subnutrio,

Animal

Variao

imunodeprimido

individual

Fatores do animal
Mesmo

considerando-se

uma

vacina

excelente,

bem

conservada e bem administrada, a resposta esperada em uma populao

121

varia de acordo com vrios fatores de forma que raramente obtm-se


proteo em 100% dos indivduos.

Tendo em conta que a resposta

imunolgica depende de vrios fatores genticos, de variabilidade


individual e ambientais, o espectro da resposta imunolgica em uma
populao assemelha-se a uma distribuio normal. Nessa distribuio, a
maioria dos indivduos apresenta uma resposta imunolgica satisfatria
ou mdia, com poucos respondendo com eficincia excelente e poucos
respondendo com eficincia menor. O grupo de indivduos que apresentou
resposta menor que a maioria pode no estar protegido contra a
enfermidade objeto da vacinao. Portanto, virtualmente impossvel
obter-se 100% de proteo em uma populao de indivduos atravs da
vacinao. O tamanho da parcela de indivduos que no responde pode
ser influenciado por vrios fatores. Variaes individuais (genticas e
relacionadas ao ambiente); fraqueza, stress, subnutrio, enfermidades
concomitantes e imunossupresso, alm da presena de anticorpos
adquiridos passivamente podem contribuir para o aumento da parcela de
indivduos que no respondem satisfatoriamente vacinao.
Efeitos adversos da vacinao
As vacinas so desenvolvidas para terem efeitos colaterais
mnimos. No entanto, muitas delas no esto livres de induzirem efeitos
indesejveis.
adjuvante,

Virulncia residual, toxicidade devido ao antgeno ou


enfermidade

em

indivduos

imunodeprimidos,

reaes

alrgicas, complicaes neurolgicas e efeitos deletrios sobre o feto so


os riscos mais comuns associados vacinao.

Alguns sinais suaves

como febre passageira, falta de apetite, dor no local da injeo so


esperados, mas efeitos mais graves devem ser evitados. Dependendo do
tipo de vacina (viva ou no-viva), do agente infeccioso, do adjuvante, do
animal vacinado, etc ... . os efeitos podem variar e amplamente (quadro).
Abaixo so mencionados alguns efeitos colaterais observados com
vacinas atualmente utilizadas em humanos e animais.

122

REAES VACINAIS

Erros
Resposta anormal

Toxicidade
Reaes
Neurolgicas
Produo
Administrao

Contaminao

Contaminao
Virulncia
Bacteriana ou
residual

Toxicidade
anormal

Encefalite

Febre,
Inflamao,
Neurite Dor

Hipersensibilidade
Tipos I, III, IV
Fibrossarcoma
Tipo IV

Imunossupresso,
Enfermidade,
Morte Fetal

Tipo I
Granuloma
Local
Sistmica

Edema e dor no local de aplicao


Geralmente aparecem no dia aps a vacinao e podem
persistir por at uma semana. Se no houver contaminao e formao
de abcesso, esses sinais regridem sem maiores complicaes. Vacinas
inativadas geralmente provocam um processo inflamatrio mais intenso
e duradouro devido reao ao adjuvante. Bactrias gram-negativas
podem provocar reao mais intensa devido presena de endotoxinas.
Algumas vezes ocorre perda de plos ao redor do local da injeo.

123

Febre e sintomas gerais de infeco


So comumente observados em crianas e tambm em
animais vacinados com uma grande variedade de vacinas.

Deve-se

presena e replicaro do agente vacinal (se vivas) ou reao contra


componentes da vacina (endotoxinas bacterianas, por exemplo).

replicaro do vrus vacinal multas vezes atinge nveis em que h a


manifestao

de

sinais

clnicos

discretos.

Em

animais

imunocomprometidos esses sinais podem mesmo ser mais intensos,


algumas vezes lembrando os sinais clnicos que acompanham a infeco
natural.
Abortos
So frequentes em vacas vacinadas com vrus vivo modificado
(atenuado) para BVDV e BHV-1 (IBR).

Vacinas temperatura-sensveis

aplicadas via intranasal podem ser uma alternativa.

Vacinas contendo

bactrias gram-negativas inativadas tambm podem causar abortos em


vrias espcies, devido presena de endotoxinas. Malformaes fetais
em ovinos tm sido associadas vacinao com o vrus da Lngua Azul.
Devido ao risco de abortos, a vacinao de fmeas prenhes deve ser
realizada com muito critrio.
Contaminao com vrus adventcios
A produo de vacinas virais em cultivos celulares traz o risco
inerente

de

contaminao

por

vrus

adventcios

ocasionalmente

presentes nesses cultivos. Na dcada de 50, milhes de pessoas foram


contaminadas com o vrus SV 40, um vrus de macacos que estava
presente em cultivos celulares utilizados para multiplicar o vrus da
poliomielite para ser utilizado como vacina.

A inativao do agente

infeccioso (vacinas inativadas) reduz esse risco.


O vrus da Diarria Viral Bovina (BVDV) um contaminante
comum de clulas de cultivo e de soro fetal utilizado como promotor de
crescimento para essas clulas.

Ento, a utilizao de vacinas vivas

contra outros vrus crescidos em clulas susceptveis ao BVDV pode


potencialmente conter o BVDV. As consequncias dessa contaminao

124

podem ser desastrosas. Abortos em vacas, porcas e ovelhas devido


presena de BVDV como contaminante em vacinas j foram relatados.
Da mesma forma, vacinas humanas, cujos vrus foram amplificados em
clulas de origem bovina j foram contaminadas com o BVDV.
Encefalite ps-vacinal
Tm sido descrita associada vacinao de ces com vacina
atenuada contra a cinomose.

Encefalite pelo BHV- 1 em terneiros

vacinados com vacina viva modificada tambm j foi descrita. Encefalite


por cepas vacinais de HSV uma das principais preocupaes relativas
ao uso de vacinas vivas contra o herpes humano. Da mesma forma,
poliomielite em crianas devido reverso virulncia ou inativao
incompleta do virus vacinal tem sido descrita na Europa e Estados
Unidos.
Imunossupresso
Vacinao com virus vivos que so imunossupressores pode
ocasionar uma imunossupresso passageira. Isso tem sido demonstrado
em vacinaes com algumas cepas de parvovrus canino e BVDV, entre
outros.
Reaes alrgicas e de hipersensibilidade
So frequentemente observadas em uma grande variedade de
vacinas. hipersensibilidade tipo 1 pode ocorrer em resposta ao antgeno
em si e tambm outros componentes da vacina como soro fetal,
protenas

das

clulas

de

cultivo,

etc...

Todas

as

formas

de

hipersensibilidade esto associadas mltiplas aplicaes da vacina e


por isso tendem a ser mais comuns com vacinas inativadas.

hipersensibilidade tipo 1 ocorre dentro de poucos minutos ou horas aps


a administrao do antgeno e mediada por imunoglobulinas do tipo
IgE. Reaes que ocorrem aps duas a trs horas geralmente no so
do tipo 1.
Os sinais clnicos associados reaes anafilticas so devidos
ao da histamina e de outros mediadores qumicos liberados pelos
mastcitos.

A gravidade da reao depende do nmero e localizao

125

dos mastcitos estimulados, do nvel de sensibilizaro do animal e da


quantidade e via de aplicao do antgeno. Broncoespasmo, edema de
glote, dificuldade respiratria, hipotenso arterial so sinais comuns
nesses casos.

Animais com sinais de anafilaxia grave devem ser

tratados como emergncias mdicas.

Administrao de adrenalina

associada fluidoterapia endovenosa geralmente constitui-se na terapia


inicial.
Granulomas no local da injeo, formados aps longo tempo da
injeo, so manifestaes de hipersensibilidade do tipo IV.

So

geralmente formados em resposta aos adjuvantes como hidrxido de


alumnio ou adjuvante oleoso. Constituem-se em abcessos estreis ou
granulomas no local da injeo. Se a pele est suja no local da injeo,
pode haver contaminao e formao de abcessos contaminados.
Esquemas de vacinao
Devido ao grande nmero de enfermidades infecto-contagiosas
de interesse veterinrio em que a vacinao utilizada, no possvel
estabelecer-se regras ou esquemas comuns para todas elas.

Cada

enfermidade tem suas peculiaridades, que devem servir de base para o


estabelecimento de esquemas especficos de vacinao.

No entanto,

algumas recomendaes gerais podem ser aplicveis maioria (seno


todas) das vacinas. Uma delas refere-se idade mnima para vacinao.
Quando as mes possuem anticorpos(por vacinao ou infeco natural),
os animais recm-nascidos so geralmente protegidos pela imunidade
passiva adquirida atravs da placenta ou colostro.

Nesses casos, a

vacinao no resulta nos efeitos esperados. Por um lado, a vacinao


seria desnecessria pois os animais j estariam protegidos, implicando
em gastos desnecessrios. Por outro lado, a imunidade passiva interfere
com a imunizao ativa, no resultando em um estimulo equivalente ao
que ocorreria na imunizao de animais desprovidos de imunidade
passiva.

Nesse sentido, as vacinas inativadas so geralmente mais

126

afetadas pela imunidade passiva do que as vacinas vivas.


Em casos em que uma imunidade slida necessria nas fases iniciais
de vida, a imunizao das fmeas antes ou mesmo durante a prenhez
pode ser recomendvel.

Incluem-se a as enfermidades vricas e

bacterianas neonatais.
O tempo de durao da imunidade passiva muito varivel,
dependendo da espcie, do agente infeccioso, dos nveis de anticorpos
da me na poca do parto, da ingesto do colostro, do desenvolvimento
corporal do animal jovem, entre outros.
animais,

imunizaes

realizadas

ao

Em geral, para pequenos

redor

da

15-16'

semana

encontram nveis negligveis de anticorpos passivos. Anticorpos contra o


parvovrus canino, no entanto, podem persistir alm da 20' semana.
Para grandes animais, esse perodo estende-se at o 6' ms de vida. No
entanto, pela impossibilidade de prever-se exatamente a poca do
desaparecimento desses anticorpos, ou mesmo por no saber-se se as
mes eram imunes, algumas vezes recomenda-se dupla vacinao, com
intervalo de alguns meses.
O intervalo entre vacinaes outro aspecto a ser considerado.
Vacinas inativadas ou no vivas podem requerer revacinaes mltiplas,
a intervalos inferiores a 6 meses.
geralmente

conferem

proteo

Vacinas vivas, por outro lado,

prolongada

quando

requerem

revacinaes, o intervalo raramente inferior a dois a trs anos.


intervalo

entre

doses tambm determinado

pela

enfermidade.

Enfermidade estacionais, como as transmitidas por insetos, geralmente


requerem revacinaes antes da temporada de maior incidncia dos
vetores.

Da mesma forma, enfermidades que afetam a reproduo

devem ser prevenidas pela vacinao de fmeas antes da temporada de


servio.

O transporte de animais para reas endmicas pode exigir

vacinaes
necessrias.

de

reforo,

mesmo

que

rotineiramente

no

fossem

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