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v=FcoSi8pOA7o
METODO DE DUMAS.
Se lo incluye dentro de los mtodos volumtricos , la muestra se la coloca en un bloque que se calcina a
800- 1000 C , lo que se logra con esta calcinacin es una mineralizacin de la muestra , se produce el
calentamiento en presencia de un catalizador ( V2O5/CuO)
CO CO2 el H y O se combinan forman H2O se evapora
S SO2, SO3
N N2 ( nitrgeno Molecular)
Se colocan una serie de trampas , donde se retiene Co2 , H2O y SO2/SO3
El CO2 se puede atrapar con bicarbonato , el H2O con soluciones anidras , con H2O se atrapa el SO2/SO3
dando cidos , como el N2 esta en esta molecular ( gas) se mide el volumen recolectado , calculando el
numero de moles de Nitrgeno , se calcula la cantidad de nitrgeno presente en la muestra . En la
actualidad los avances tecnolgicos nos permiten determinar nitrgeno en menor tiempo , enviando el
nitrgeno a un cromatografo de gases .
El mtodo de DUMAS mide Nitrgeno total, exactamente igual que Kjeldahl, luego el nitrgeno total , se
debe desdoblar en Nitrgeno proteico y no proteico , obteniendo el porcentaje de protena bruta o pura..
Es un mtodo absoluto , tambin se lo reconoce como un mtodo universal ,mide cualquier muestra sin
importar su estado, es un mtodo preciso , exacto reproducible pero tiene 2 inconvenientes principales:
1- La muestra es una muestra pequea ( entre 10 y 50 mgrs) se presentndose problemas en la
homogeneidad, obtenindose errores por muestra.
2- Es un mtodo moderno y se obtiene resultados rpidos , pero es un equipo muy caro .
METODO COLORIMETRICO
BIURET es un mtodo basado en una reaccin qumica
Los iones Cu(+2) tienen interaccin con la cadena proteica, reacciona como mnimo con 2 uniones
peptdica, producindose una fijacin en la unin peptdica. Formndose una densidad electrnica,
donde en esa densidad electrnica se puede acomplejar los iones Cu (+2). Este complejo tiene un color
prpura, este color es proporcional a la cantidad de protenas presente en la muestra , el color es una
funcin dependiente de la concentracin de la protena .
C = f (conc. Prot.)
Para la determinacin de protena por este mtodo se prepara una solucin Biuret (especial) formada por
SO4Cu, NaOH y tartrato de Potasio (estandarizando los iones Cu(+2)
La solucin preparada tiene un tiempo de duracin de 3 meses, este reactivo se le agrega a un
determinado volumen de protena en solucin, y se lo mide en un espectrofotometro.
Pasos para le determinacin de protena con el mtodo de Biuret:
1- reaccin Cu(2+) / protena
2- Medida de la absorcin ( 550)
3- Calculo de la concentracin por curva de calibrado.
La curva se hace tomando distintas muestras haciendo Biuret y Kjeldahl , obtenindose una recta o curva
de calibrado
Caractersticas de este mtodo mide Nitrgeno proteico el Cu (+2) no se une a otro Nitrgeno que no sea
proteico dndonos como resultado protena verdadera.
La desventaja de este mtodo es que, es un mtodo relativo , y se necesitan curva de calibrado distintas
para distintas muestra, esto se debe a que el Cu (+2) se une de distintas formas con las distintas
protenas de los alimentos .El grado de interaccin Cu (+2) / protena es distinto.
No es mtodo universal: la protena la tengo que tener en solucin sino el Cu (+2) , no se une , es solo
aplicable este mtodo a protena en solucin. Ejemplo, no se puede determinar protena en la carne,
poroto, etc. Previamente antes de la determinacin se debe solubilizar la protena, pero as mismo no
determino el valor real de toda la protena.

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Publicado por JORGELINA GIMENEZen 19:32

2010 (37)
junio (37)
DETERMINACION DE PROTEINAS