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MICROBIOLOGA E Inmunologa A CARRERA: LIC. EN BIOL. MOLEC.

(AO: 2013)

ESTERILIZACIN Y DESINFECCIN

Introduccin
La esterilizacin es un proceso a travs del que se puede lograr la destruccin total de
los microorganismos viables presentes en un determinado material.
Este procedimiento es de gran utilidad dentro del campo farmacutico, ya que existen
muchos procesos que requieren la utilizacin de materiales estriles. Entre stos
podemos destacar:
La esterilizacin de equipos quirrgicos y otros materiales de uso mdico con el
propsito de reducir el riesgo de infecciones en pacientes.
El acondicionamiento del material (pipetas, tubos, placas de Petri, pinzas, etc) que
va a ser utilizado en el laboratorio de Microbiologa.
La preparacin de medios de cultivo que sern empleados con diferentes propsitos
(cultivo de microorganismos, control de ambiente, equipos o personal, anlisis
microbiolgico de alimentos, medicamentos, cosmticos, etc)
La descontaminacin del material utilizado.

Es importante definir los siguientes trminos fundamentales relacionados con el control

microbiano:
-

Esterilizacin: es un proceso por el que se eliminan todas las formas de vida

microbiana, incluso las esporas bacterianas, produciendo una condicin de
esterilidad. Se logra por mtodos fsicos y qumicos.

Estril: es la ausencia absoluta de toda forma viable de vida.

Desinfeccin: uso de agentes qumicos para eliminar la infectividad potencial

de un material (no implica la eliminacin de todas las formas microbianas).
Destruccin de las formas vegetativas de los patgenos.

Asepsia: conjunto de medidas destinadas a impedir toda contaminacin

microbiana.

Germicida (o biocida): sustancia capaz de matar las formas vegetativas de

los grmenes.

Bactericida: tiene igual significacin, pero referido especficamente a las

bacterias.

Bacteriosttico: sustancia que inhibe el crecimiento bacteriano.

Fungicida: sustancia que mata los hongos.

2
-

Fungisttico: sustancia que inhibe el crecimiento fngico.

Virucida: sustancia que detiene la replicacin y la actividad vrica.

Virusttico: sustancia que inhibe la replicacin vrica.

Los nombres de los tratamientos que producen la muerte directa de los

microorganismos llevan el sufijo cida, que significa muerte,

(ejs. virucida,

fungicida), mientras que los procedimientos que llevan el sufijo sttico significa
detener o inhibir el crecimiento y la multiplicacin de las

bacterias, como

bacteriosttico. Una vez eliminado el agente bacteriosttico podra reanudarse el

crecimiento.
Los trminos esterilizacin y estril son conceptos abstractos de estados negativos
y como tales no son factibles de demostrar prcticamente, es decir, la muerte o
remocin de las bacterias sigue una funcin de probabilidad, y siempre hay una
posibilidad finita de que queden algunos microorganismos vivos intactos en el
sistema. En la prctica, el concepto esterilizacin significa el proceso de alcanzar un
estado con el mnimo riesgo calculado de sobrevivientes, mientras que por estril se
entiende la ausencia de formas de vida demostrables. Para la mayora de los mtodos
de esterilizacin, este riesgo es normalmente de muy bajo orden. De all surge el
concepto de SAL (sterility assurance level) = 10-6 (probabilidad de sobrevida): la
probabilidad de

una unidad no estril es igual a 1 en una poblacin de 106

microorganismos. Podemos comprender que la esterilidad de un material, depender,

entre otros factores, de No (nmero

inicial de microorganismos viables

contaminantes) y de la velocidad de muerte de dichos microorganismos para ese

proceso de esterilizacin.

Tasa de muerte microbiana

Cuando las poblaciones bacterianas se calientan o se tratan con sustancias qumicas
por lo general mueren a una tasa constante. Por ejemplo, supngase que

una

poblacin de 1 milln de microorganismos ha sido tratada durante 1 minuto y que el

90% de los microorganismos de la poblacin, han muerto, es decir que quedan
100000 (105) microorganismos. Si la poblacin se vuelve a tratar durante otro minuto
muere el 90% de esos microorganismos y quedan 10000 (104) sobrevivientes. Es
decir, por cada minuto de tratamiento aplicado muere el 90% de los microorganismos
restantes de la poblacin.

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Cintica de muerte de los microorganismos
Para todos los microorganismos existe una temperatura mxima de crecimiento por
encima de la cual mueren. A temperaturas muy altas, casi todas las molculas pierden
su estructura y su funcin, por el proceso denominado desnaturalizacin.
Cuando una poblacin de microorganismos es sometida a un proceso de esterilizacin
(por ej. calor, radiacin, o compuestos qumicos), no todas las clulas mueren al
mismo tiempo. El nmero de sobrevivientes disminuye exponencialmente con el
tiempo de exposicin hasta que no pueden detectarse ms microorganismos viables.
Mientras esto se mantiene la curva de sobrevivencia, es decir, el grfico de logaritmo
del nmero de sobrevivientes (N/No) en funcin del tiempo (t) independiente del
nmero inicial de microorganismos, es lineal (Figs.1 y 9.1A).
Esta curva del tipo indicado (Figs.1 y 9.1A)

puede ser descripta por la expresin

matemtica:
- Kt

N/No = e

ln N/No = - K t

N/No: es la fraccin de microorganismos viables que sobreviven

el tratamiento de esterilizacin durante el tiempo t.

CINTICA DE MUERTE

donde: K es la constante de inactivacin o de velocidad de muerte, No es el nmero

de microorganismos viables presentes inicialmente, y N es el nmero de

log N sobrevivientes

Nt = No e -kt

microorganismos

al

final

del

proceso.

8
7
6
5
4
3
2
1
0

Fig.1:

20

40

60

Cintica

de

muerte

80

Tiempo (min)

La muerte de los microorganismos es una funcin exponencial (de primer orden) y

ocurre ms rpidamente cuanto mayor es la temperatura.

En el caso, de las esporas altamente resistentes, puede haber una fase inicial
logartmica en la muerte en funcin del tiempo antes que la curva de sobrevivientes
comience a decrecer exponencialmente. Esto produce un hombro o plateau en la
curva que luego puede ser lineal (Fig. 9-1B).
Con microorganismos altamente sensibles, la porcin inicial de la curva puede ser
muy aguda y no exponencial antes de convertirse en lineal, dando lugar a una curva
bifsica (Fig. 9-1 C). Estos casos son tpicamente demostrados con procesos de
esterilizacin por calor y radiacin.
En tratamientos qumicos, la curva de supervivientes puede iniciarse con
caractersticas de linealidad, pero luego de un tiempo muestra un retardo en la
velocidad de muerte dando lugar a una cola (Fig. 9-1D). A veces toda la curva es
sigmoidea, esto indica la presencia de sobrevivientes resistentes en la suspensin
original, an cuando se trate de bacterias del mismo tipo.
En todos los casos la pendiente de la curva en la porcin lineal vara con muchos
factores, como la severidad del tratamiento y la presencia de agentes protectivos.

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El valor D o tiempo de reduccin decimal: es el tiempo en minutos requerido para reducir un
90% el nmero de microorganismos viables, es decir, al 10% del recuento inicial, lo cual
corresponde a una disminucin de un ciclo logartmico en la curva de sobrevivencia a una
temperatura determinada (Fig. cintica de termodestruccin).

Todos los factores: temperatura o dosis de radiacin, composicin, pH del medio deben ser
especificados. Si todos estos factores son bien conocidos, el valor D puede ser determinado
con bastante precisin para muchos microorganismos. Este valor D es til en la industria de la
alimentacin. Se usa para calcular la eficiencia de un proceso de esterilizacin para destruir un
microorganismo especfico.
Factores que afectan la eficiencia de los procesos de esterilizacin
-

La presencia de humedad y oxgeno: incrementa la eficiencia de todos los procesos

de esterilizacin. Entonces, el calor hmedo requiere temperaturas y tiempos de
exposicin bastantes menores para esterilizar, que el calor seco.

La presencia de sustancias qumicas bactericidas: aumenta el efecto del calor y

permite el uso de temperaturas ms bajas para producir el mismo efecto..

La mayora de los microorganismos esporulados son ms resistentes cuando se

forman en su hbitat natural (ej. suelo) que cuando desarrollan en medios de cultivo
artificiales.

Los aceites, cidos grasos y grasas, y las protenas (sangre): tienen un

efecto protector sobre las bacterias, particularmente contra la accin del calor.

Las soluciones azucaradas con glucosa en alta concentracin: protegen,

probablemente por reduccin de la actividad acuosa (aw ) dentro del sistema y
generalmente aumentan la resistencia de los microorganismos al calor.

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Condiciones previas que debe cumplir el material para una eficaz esterilizacin
-

Lavado

Secado

Envoltura

Lavado: se realiza con agua y detergentes

-

Reduce la tensin superficial del agua, colaborando en la solubilizacin de

albmina, emulsin de grasas y suspensin de partculas.

El empleo de detergentes enzimticos es de mayor eficiencia.

Para qu realizamos el lavado?

-

Para remover toda materia extraa en la superficie de los materiales

Para eliminar materia orgnica que interfiere en los mtodos de esterilizacin.

Secado: es importante para evitar la recontaminacin y deterioro del material.

Envoltura
Para qu envolvemos?
-

Para evitar la recontaminacin microbiana en el momento de la salida de la

cmara de esterilizacin, transporte y almacenamiento hasta su utilizacin.

Cmo debe ser la envoltura?

-

La naturaleza del material de envoltura depender del procedimiento de

esterilizacin empleado y del material a esterilizar

Permeable al agente esterilizante

Resistente a la penetracin de microorganismos

Resistente a roturas y humedad

No debe ser txico. Libre de prdida de fibras u otro tipo de sustancias.

MTODOS DE ESTERILIZACIN
Los mtodos de esterilizacin se pueden clasificar en:
MTODOS FSICOS
- Calor seco: llama directa, incineracin, aire caliente (estufa)
- Calor hmedo: a presin (autoclave), a vapor fluente (tyndalizacin)

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- Filtracin: filtros de profundidad, filtros de membrana, filtros de nucleacin
- Radiaciones: ionizantes, ultravioletas
MTODOS QUMICOS
- xido de etileno
- Formaldehdo
- Glutaraldehdo
- Gas plasma

MTODOS FSICOS
Calor: es el mtodo preferido para esterilizar todos los materiales, excepto aquellos
que sufren dao por su termosensibilidad. El proceso es rpido, todos los
microorganismos son sensibles, y el calor llega a lugares que podran estar protegidos
para los agentes qumicos.
Los mecanismos de esterilizacin por calor hmedo se basan en la
desnaturalizacin de protenas, aunque es posible que tambin tenga alguna
importancia la fusin de los lpidos de la membrana como as tambin el dao de
los cidos nucleicos. Los lmites de temperatura a que se lleva a cabo este proceso
corresponden a los que se desnaturalizan la mayora de las protenas.

Estos

procesos requieren una temperatura ms alta cuando el material est totalmente

desecado o la actividad del agua del medio se reduce por una alta concentracin de
una sustancia neutra como por ej. glicerol o glucosa.
Microorganismos como los hongos, la mayora de los virus y las clulas vegetativas de
bacterias, pueden ser destruidos luego de varios minutos a 50 70 C, mientras que
las esporas de diversos microorganismos requieren temperaturas de 121 C durante
15 a 20 min para lograr su destruccin.

Calor seco
Es de aplicacin limitada, porque se requieren temperaturas elevadas y adems
porque pocos materiales resisten la accin oxidante del calor a esa temperatura en
presencia de aire.
El calor seco se puede llevar a cabo mediante accin directa a la llama: el material
se lleva al rojo durante 5 10 segundos (ansas), o pasando el material por la llama

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repetidas veces 2 3 minutos; o bien colocando el material en un recipiente adecuado
cubrindolo de alcohol y encendindolo, de modo que la llama pase por todo el
material durante 2 3 minutos. As se pueden esterilizar tijeras, agujas,
portaobjetos. Tambin, la incineracin es el mtodo ms comn de tratamiento de
los desechos infecciosos. El material se quema a cenizas, a temperaturas de 870 980 C.
Con ms frecuencia, se utiliza el aire caliente o sea calor seco calentando el aire
en el interior de una estufa diseada especialmente que asegure una distribucin
homognea de la temperatura. Se debe aprovechar la transmisin del calor por
convencin natural y en equipos de mayor magnitud se debe instalar una convencin
forzada para la circulacin del aire; de esta forma no slo se logra una temperatura
uniforme en todos los puntos,

sino tambin se puede acortar el tiempo

correspondiente de esterilizacin.
El calor seco requiere un perodo de exposicin ms prolongado: una hora y
media a 160 C o una hora a 180 C.
Es importante tomar el tiempo desde que la estufa y el material alcanzan la
temperatura deseada, es conveniente cargar la estufa cuando est a la temperatura
ambiente, porque la naturaleza del material a esterilizar, cantidad y tamao influyen
sobre el perodo de calentamiento.
Aplicaciones. Se utilizan para esterilizar elementos como material de vidrio, de
metal, aceites, vaselina, soluciones oleosas, sobre todo si estn envasadas en
recipientes hermticos, tambin en la esterilizacin de polvos cuya mala
conductividad hace muy prolongado el tiempo de calentamiento. Por ejemplo, el
talco, se puede distribuir en recipientes de poca profundidad (cajas de Petri).
Para que un material se pueda esterilizar por calor seco, debe tolerar
temperaturas de 160 180 C sin sufrir alteraciones, y si se trata de un lquido,
debe tener punto de ebullicin por encima de esa temperatura, es decir no debe
entrar en ebullicin durante la esterilizacin. No toleran estas temperaturas,
materiales como guantes, sondas, textiles, etc. No se pueden esterilizar medios
de cultivo porque se deshidrataran.
Las estufas (u hornos) de esterilizacin son de construccin simple: constan de una
caja metlica con una puerta frontal y estanteras regulables, con ingreso de aire
caliente, y con una salida regulable de aire en la parte superior. Actualmente la fuente
de calor es por calefactores elctricos, y es regulable la temperatura por un

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termostato. La pared metlica puede ser doble con una cmara de aire entre ellas. La
pared externa puede estar recubierta con un material aislante.
Pueden estar provistas de un circulador de aire que oriente la convencin forzada, de
esta manera aumenta la homogeneidad y la velocidad de calentamiento.
Se han establecido otros mtodos de calor seco para aumentar la eficiencia, como la
estufa de calentamiento de infrarrojo de gran velocidad que opera con vaco,
diseada para esterilizacin de instrumental quirrgico. La misma funciona a 280 C
en alto vaco, y el corte del vaco se realiza con nitrgeno estril para evitar la
oxidacin de los bordes. El tiempo del ciclo total dura aproximadamente 15 minutos.

Calor hmedo
El

mtodo estndar para esterilizar por calor hmedo es autoclave a 121 C durante

15 20 minutos. Esa temperatura de 121 C se logra con vapor de agua a 1 atmsfera

de presin sobre la presin atmosfrica. Los objetos fros son rpidamente calentados
por la condensacin sobre su superficie matando los microorganismos por
desnaturalizacin de las protenas y disolucin de los lpidos de las estructuras
esenciales de los mismos.
Existen distintos tipos de autoclaves, hay autoclaves a vapor, con control digital,
elctricas, tambin hay manuales y automticos, de una cmara o de dos cmaras,
verticales u horizontales, pero todos se fundamentan en el mismo principio: al
aumentar la presin interna del autoclave aumenta el punto de ebullicin del
agua.
Fundamentalmente hay 3 tipos de autoclave de uso comn:
a) Autoclave de laboratorio (Chamberland): consiste en una cmara de
esterilizacin que genera su propio vapor a partir de agua contenida en el
fondo de la cmara, por medio de calentamiento interno (elctrico) o externo
(gas). Posee un manmetro que registra la presin interna de la cmara, una
vlvula de seguridad

y puede contener un termmetro. El aire es retirado

desde la cmara a travs de la espita durante el perodo de calentamiento y

ebullicin inicial.
Debido a la eyeccin de gotas de agua desde la superficie del agua hirviendo,
ste autoclave es adecuado para recipientes con

lquido. Otros artculos,

como, ropa o aparatos, incluyendo sus envolturas, se humedecern con agua

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durante la esterilizacin, lo cual puede producir su recontaminacin al ser
introducidos en una atmsfera no estril.
b) Autoclave de alto vaco: est diseada para la esterilizacin rpida de
artculos secos como ropa, artculos de goma, etc. Consiste en una cmara
revestida que puede ser evacuada a baja presin. El ciclo total puede demorar
solamente 25 a 30 minutos.
c) Autoclave de desplazamiento inferior de vapor: es una cmara alimentada
con una fuente externa de vapor. Como el vapor que penetra es menos denso
que el aire a la misma temperatura, este ltimo es desplazado y ventilado a
travs de una apertura en el punto ms bajo de la cmara. Completado el
ciclo este tipo de autoclave permite un secado final de la carga por pasaje de
aire caliente esterilizado por filtracin.
Con

respecto

los

tiempos

de

exposicin,

hay

diversos

ciclos

de

temperatura/tiempo recomendados para la esterilizacin por autoclave. Por ej. la

Farmacopea de Estados Unidos recomienda el calentamiento a 121 C por 15
minutos como mnimo. Se pueden emplear otras combinaciones de tiempo y
temperatura siempre que resulten efectivas.
El autoclave de laboratorio tipo Chamberland, es un aparato cilndrico de paredes
dobles y doble fondo donde se coloca el agua, calefaccionada en la parte inferior, se
cierra hermticamente con una tapa que tiene charnelas (o mariposas), en la parte
superior de la tapa tiene una espita para escape de vapor, un manmetro para medir
la presin y una vlvula de seguridad.

Autoclave tipo Chamberland: instrucciones en el manejo y precauciones

con respecto al material a esterilizar
-

Controlar que el fondo del autoclave tenga agua suficiente para todo el proceso
(debe llegar hasta la rejilla).

Colocar el material que no debe estar hermticamente cerrado, se puede tapar

con tapones de algodn o gasa, tapas de plstico, si se usan tapones de goma
o de vidrio esmerilado se coloca una piola para impedir el cierre hermtico, al
sacarlo del autoclave se retira la piola y se ajusta el tapn. Si se usan tapas a
rosca, se esteriliza con la tapa floja y cuando se saca del autoclave se ajusta.

11
-

El material debe estar envuelto en papel poroso para preservar su posterior

esterilidad.

El volumen de los recipientes no debe ser ms de la mitad o de las 2/3 partes

del volumen del recipiente para evitar proyecciones y permitir que el lquido
entre en ebullicin libremente sin mojar los tapones.

Una vez acondicionado el material se cierra la tapa ajustando las charnelas o

mariposas en forma enfrentada para asegurar el cierre hermtico.

Encendidos los mecheros se abre la espita hasta que salga todo el aire
contenido en el interior del autoclave, lo que se determina cuando sale flujo
continuo de vapor de agua por la espita. Esta operacin es muy importante
porque si queda una mezcla de aire y vapor en el interior del autoclave, por
ser el

aire menor conductor del calor se logran temperaturas insuficientes

para una correcta esterilizacin (la presin resultante ser tanto menor cuando
mayor sea la cantidad de aire que contenga el autoclave).
-

Luego se cierra la espita, el manmetro comienza a marcar el aumento de

presin hasta una atmsfera que corresponde a 121 C. La presin absoluta
en el interior del autoclave es de 2 atmsferas considerando que la presin
atmosfrica en ese momento sea de 1 atmsfera, se deja 15 20 min, aunque
el tiempo de esterilizacin depende del volumen y de la masa del material a
esterilizar. Si se trata de material de laboratorio contaminado se deja 30 min
para permitir la penetracin del vapor a travs de los desechos y el
desplazamiento del aire atrapado dentro del autoclave.

Si el objeto que se esta esterilizando es muy voluminoso, la transferencia de

calor a su interior tarda ms tiempo, y se debe aumentar el tiempo total de
calentamiento para garantizar que el objeto entero est sometido a una
temperatura de 121 C durante 10 15 min. Tambin se requieren mayores
tiempos cuando se autoclavan grandes volmenes de lquidos, dado que los
volmenes grandes

tardan ms tiempo en alcanzar la temperatura de

esterilizacin.
-

Transcurrido el tiempo necesario se apagan los mecheros.

Se abre la espita lentamente para evitar que por diferencia de presin salten
los tapones.

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-

Abrir el autoclave.
Si el material es de vidrio o metal se lleva a estufa para el secado total.

Si son medios de cultivo se realiza el control de esterilidad y se guardan en

heladera.

Las autoclaves automticas poseen una vlvula automtica de purga que est
controlada por un mecanismo termosttico y se cierra al entrar en contacto con el
vapor puro cuando sale el aire.
Tyndalizacin
Se puede realizar:

A vapor fluente (olla presin o autoclave con espita abierta)

Bao Mara a ebullicin

La tyndalizacin es un mtodo de esterilizacin por calor hmedo en ms de un

proceso. Consiste en calentar a 100 C durante 20 minutos 3 veces a intervalos de 24
horas: el primer calentamiento destruye todas las formas vegetativas de los grmenes
que pudieran estar presentes, luego se incuba 24 h a 37 C o a temperatura ambiente
y si el medio es adecuado (suficientemente rico para permitir la germinacin de las
esporas) las esporas que pudieran estar presentes germinarn (shock trmico) y
pasarn a la forma vegetativa, al aplicar el segundo calentamiento sern muertas
estas formas vegetativas provenientes de las esporas, se vuelve a incubar 24 h en las
mismas condiciones anteriores,

si alguna espora no germin durante la primera

incubacin lo hace ahora y al calentar por tercera vez se destruirn. Este proceso en la
industria suele repetirse 5 veces o ms.
Se pueden tyndalizar: leche, gelatina, hidratos de carbono, es decir sustancias
que no resisten altas temperaturas y a su vez tienen una composicin qumica
tal que permiten la germinacin de las esporas.
No se pueden tyndalizar: solucin de electrolitos, agua destilada, solucin
fisiolgica, buffers, solucin de bicarbonato.
Ventajas del calor hmedo con respecto al calor seco

Menor tiempo de esterilizacin

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Menor temperatura

El calor hmedo es ms penetrante que el calor seco

Se pueden esterilizar medios de cultivo y otros lquidos como solucin

fisiolgica (SF), agua destilada (AD).

Pasteurizacin
La pasteurizacin es un proceso que reduce la poblacin microbiana en leche y otros
alimentos sensibles al calor. Pasteurizacin no es sinnimo de esterilizacin
porque en ella no se destruyen todos los microorganismos. Inicialmente se utiliz la
pasteurizacin para destruir

bacterias patgenas, especialmente los organismos

causantes de tuberculosis, brucelosis y fiebre tifoidea. Impide la transmisin de

patgenos

que actualmente

s son habituales como Listeria monocytogenes, y

algunas especies de Campylobacter, Salmonella y

Escherichia coli O157:H7.La

pasteurizacin tambin retrasa el crecimiento de organismos alterantes e incrementa

la vida til de los lquidos perecederos. Muchas bacterias relativamente resistentes al
calor (termodricas) sobreviven a la pasteurizacin pero es poco probable que causen
enfermedad o el deterioro de la leche refrigerada.
Procesos de pasteurizacin:

Pasteurizacin alta (o tambin denominada de corta duracin a alta

temperatura: high-temperature short-time; HTST): la leche se
bombea a travs de un tubo que est en contacto con una fuente de
calor. Este procedimiento emplea temperaturas de 71 - 72 C durante
15 segundos. Luego la leche se enfra rpidamente.

Pasteurizacin baja: la leche se calienta en grandes depsitos a 63 66 C durante 30 minutos. Este procedimiento es menos satisfactorio
porque la leche se calienta y se enfra lentamente y debe mantenerse a
temperaturas altas por perodos de tiempo ms largos.

Temperaturas

ultra

elevadas

(ultra-high-temperature,

UHT):

temperaturas alcanzadas 140 150 C durante escasos segundos

(menos de 3 seg), es un proceso continuo, se requiere envasado
asptico y se logra esterilidad comercial.

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Filtracin
Este procedimiento es aplicable a la esterilizacin de lquidos y gases y los
microorganismos son removidos y no destruidos. El mtodo es rpido y puede
llevarse a cabo a cualquier temperatura. Cuando el lquido a filtrar es termosensible se
aplica la tcnica de filtracin.
El lquido o el gas pasa por un filtro, que es un dispositivo con poros demasiados
pequeos para que pasen los microorganismos, pero lo suficientemente grandes para
permitir el paso de un lquido o un gas. El tipo de filtro de esterilizacin seleccionado
depender del tamao de las sustancias contaminantes que se quieran excluir.
Algunas clulas microbianas pueden medir ms de 10 m de dimetro, mientras que
las bacterias ms pequeas tienen un dimetro inferior a 0,3 m.
La filtracin se utiliza para esterilizar soluciones termolbiles. Se usa para
esterilizar

aceites,

soluciones

oftlmicas,

soluciones

intravenosas,

radioistopos, vacunas, hidratos de carbono, medios para cultivos celulares, y

soluciones de antibiticos y vitaminas.
Existen tres tipos de filtros:
a) Filtros de profundidad:
Un filtro de profundidad es una lmina fibrosa compuesto de matrices dispuestas al
azar de fibras de papel, asbesto o vidrio que se solapan. En este tipo de filtros las
partculas quedan atrapadas en las tortuosas vas creadas a travs de la profundidad
de la estructura. Dado que el material de filtracin est dispuesto al azar en una
lmina gruesa, los filtros de profundidad se emplean a menudo como prefiltros para
eliminar las partculas ms grandes de las suspensiones lquidas y evitar la
obstruccin del filtro final del proceso de esterilizacin. Los filtros de profundidad
tambin se utilizan para esterilizar por filtracin el aire en los procesos industriales. En
el mbito domstico, el filtro que se utiliza en los sistemas de aire acondicionado es
para atrapar partculas de polvo, esporas y alrgenos.
Los filtros de profundidad son importantes para las aplicaciones de bioseguridad. Por
ej. en las manipulaciones de cultivos celulares, cultivos microbianos, etc. Estas
operaciones se pueden realizar en una cabina de seguridad biolgica con flujo de aire,
dirigido a travs de un filtro de profundidad llamado filtro de aire particulado de alta
eficacia (HEPA). Un filtro HEPA tpico consiste en una lmina de fibras de vidrio de
borosilicato que se ha tratado con un aglutinante y se ha plegado para aumentar el

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rea total de su superficie. Este filtro est montado sobre un marco rgido que lo
sostiene. El control de partculas areas mediante filtros HEPA permite la construccin
de habitaciones limpias y habitaciones de aislamiento para casos de cuarentena, as
como laboratorios de seguridad biolgica especializados. Los filtros HEPA suelen
eliminar partculas de 0,3 m con una eficacia del 99,97%.
b) Filtros de membrana:
Los filtros de membrana son los que se usan ms habitualmente en los laboratorios de
Microbiologa para esterilizar lquidos. Los filtros de membrana se componen de
polmeros con una elevada resistencia como acetato de celulosa, nitrato de
celulosa o polisulfona- diseados para presentar numerosos poros diminutos. En la
actualidad se usan filtros de membrana con poros de un tamao determinado, 0,45 m
y 0,22 m. El tamao de poro ms usado es de 0,22 m. Se dispone de filtros con
poros de 0,01 m, un tamao que puede retener los virus. Alrededor del 80 - 85% de
la superficie de la membrana est constituida por poros abiertos, obtenindose una
tasa de flujo de lquido alta.
Los filtros de membrana previamente esterilizados diseados para esterilizar
volmenes pequeos y medianos de lquidos, tales como los medios de cultivo se
utilizan en forma rutinaria en los laboratorios de investigacin. La filtracin se realiza
utilizando una jeringa, una bomba de vaco para hacer pasar el lquido a travs del
aparato de filtracin y recolectarlo en un recipiente esterilizado.
El mecanismo de accin de los filtros de membrana es por efecto tamiz
nicamente.
Adems de actuar como esterilizantes tienen otras utilidades en Microbiologa:
recuentos, concentracin, separacin de microorganismos, etc.
Ventajas:
- Filtran ms rpido
- Filtran nicamente por efecto tamiz
- No alteran las caractersticas organolpticas del lquido
- Filtran por presin negativa o positiva

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- No ensucian los lquidos esterilizados
- Se pueden esterilizar en autoclave y se desechan luego de su utilizacin.
c) Filtros de nucleacin (nucleopore):
Son pelculas muy delgadas de policarbonato que son perforadas por un tratamiento
conjunto con radiacin nuclear y sustancias qumicas. Son filtros con orificios muy
regulares que atraviesan la membrana verticalmente. Funcionan como tamices,
evitando el paso de toda partcula con un tamao mayor al del poro. Sin embargo por
la menor cantidad de poros, la velocidad de flujo a travs de estos filtros es ms baja
que a travs de los filtros de membrana y el atascamiento se presenta ms
rpidamente. Los filtros de nucleacin se usan en microscopia electrnica de barrido
para aislar especmenes. Los microorganismos se separan del lquido y se concentran
en un nico plano en la superficie del filtro, donde se pueden observar al microscopio.
Esterilizacin de gases

La filtracin de aire se logra mediante filtros de partculas de aire de gran eficiencia

(high efficiency particulate air, HEPA) diseados para eliminar microorganismos de
ms de 0,3 m de dimetro de habitaciones de aislamiento, quirfanos, salas de
prematuros, quemados, y cmaras de bioseguridad (CBS). Los filtros HEPA tienen
una eficiencia del 99,97%. El mecanismo de accin es por efecto tamiz.
Filtros ULPA: son filtros con caractersticas similares a los filtros HEPA, pero tienen
una eficiencia de 99,999% para partculas de un tamao entre 0,1 y 0,2 m.
Radiaciones

Las microondas, las radiaciones ultravioletas (UV), los rayos X, las radiaciones gamma
y los electrones son tipos de radiacin que pueden reducir el crecimiento microbiano
de forma eficaz si se aplican en la dosis y durante el perodo de tiempo adecuados.
Radiaciones ultravioletas (UV)
La radiacin UV entre 220 y 300 nm de longitud de onda tiene suficiente energa para
causar modificaciones o incluso roturas en el DNA, que provocan alteracin del DNA y
la muerte del organismo expuesto.

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Mecanismo de accin: las ondas UV tienen suficiente energa para producir
lesiones del DNA letales o modificaciones qumicas como uniones cruzadas
entre bases que interfieren en la subsiguiente replicacin.
Los dmeros de pirimidina son los fotoproductos ms importantes en las clulas
vegetativas bacterianas. El principal es el dmero de timina (T-T). Como se puede
observar, se trata de uniones entre dos pirimidinas adyacentes en la misma hebra de
ADN, mediante la creacin de un anillo de ciclobutano. Su efecto principal es la
distorsin local de la configuracin de la doble hlice, que interfiere en el normal
apareamiento de bases complementarias; ello, a su vez, provoca una interferencia en
los procesos de replicacin y transcripcin, y secundariamente en el crecimiento de la
clula.
Presenta la desventaja adicional de que la mayora de las bacterias tienen procesos
enzimticos activos que bajo condiciones favorables permiten la reparacin del dao
inducido por la luz UV, y de este modo resulta bastante frecuente la recuperacin de
clulas irradiadas.
Aplicaciones: la luz UV se utiliza para la desinfeccin de superficies, aire y otros
materiales como el agua que no absorben la radiacin UV. Por ejemplo las
cabinas de los laboratorios de biologa vienen equipadas con una lmpara
microbicida de luz UV (lmpara de vapor de mercurio) para descontaminar su
superficie despus de ser utilizadas. No obstante, la radiacin UV no penetra las
superficies slidas, opacas, los materiales empaquetados, el vidrio, plsticos,
lquidos turbios, resulta muy absorbida por estos materiales, y su utilidad se
limita a la desinfeccin de las superficies expuestas. La eficiencia de esta lmpara
se ve seriamente afectada por el polvo atmosfrico, la disminucin de la temperatura
ambiental y el envejecimiento de la lmpara.
Se usan ampliamente las lmparas de vapor de mercurio, que emiten 90% de su
radiacin a 254 nm para disminuir la infeccin del aire en salas de hospitales,
quirfanos, y habitaciones en que se alojan animales de experimentacin.
Tambin son tiles en zonas del laboratorio usadas para transferencias
bacterianas, para disminuir la contaminacin de cultivos y la infeccin de los
operarios.
Es importante proteger los ojos con gafas puesto que una exposicin excesiva de la
crnea a la luz UV produce una grave irritacin.

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Radiaciones ionizantes

Mecanismo de accin: se absorben dentro de la clula produciendo la ionizacin

de los contenidos celulares, formacin de radicales libres, y molculas excitadas
y esto lleva a la desorganizacin de enzimas y del DNA.
Son radiaciones electromagnticas de alta energa El grado del dao sobre el DNA
depende de la dosis recibida y puede llevar a la muerte celular. A diferencia del calor,
el efecto de la radiacin gama es acumulativo, es decir que dosis

divididas son

igualmente efectivas que una nica dosis de la misma magnitud total.

Es altamente penetrante y no induce radioactividad. Todos los microorganismos
incluidos los virus son afectados por la radiacin.
Actualmente se consideran suficientes, dosis de radiaciones de 2,5 Mrads, lo cual
brinda un factor de inactivacin de aproximadamente 107 para esporas de Bacillus
pumilus en condiciones de anoxia y de aproximadamente 109 para Streptococcus
faecium.
Aplicaciones:

productos

farmacuticos:

antibiticos

como

ampicilina

estreptomicina; vacunas, hormonas. Material mdico-quirrgico: guantes de

goma descartables, injertos seos y de tejidos, implantes (vlvula cardiaca),
catteres, suturas quirrgicas, jeringas desechables, agujas, bistures, etc.
Actualmente las radiaciones gamma se utilizan en la industria de alimentos.
Controles de esterilidad y esterilizacin
Concluido el proceso de esterilizacin se dispone de diversos elementos para
comprobar la eficiencia del mismo. Independientemente del mtodo empleado es
necesario realizar un control para asegurarse que el tratamiento ha sido
adecuado.
Hay dos tipos de controles:
A) Control de esterilizacin: es el que se realiza para comprobar si se cumplieron las
condiciones del procedimiento empleado.

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B) Control de esterilidad: es el que se realiza sobre las muestras o alcuotas del material
esterilizado con el objeto de comprobar la ausencia total de microorganismos en el
mismo.
Controles de esterilizacin

a) control biolgico: se utilizan como indicadores, esporas bacterianas,

que constituyen el material de eleccin por su gran resistencia. Para su
realizacin, las esporas son desecadas a partir de una suspensin
acuosa, y colocadas sobre pequeas tiras de un material de prueba
apropiado (pueden usarse diferentes soportes, adems del papel) para
el tipo de proceso y las cargas usados. El inculo usado es del orden de
105 106 esporas por pieza testigo. Para cada proceso de esterilizacin
colocar las tirillas con esporas (Bacillus stearothermophilus: para todos
los procesos por calor hmedo) en lugares estratgicos, donde el calor
o cualquier otro tratamiento empleado sea ms difcil de penetrar. En
este mtodo se somete el indicador al mismo tratamiento esterilizante
que el material a esterilizar.
Los indicadores biolgicos una vez cumplido el proceso de esterilizacin se
colocan en un caldo nutritivo adecuado, y se incuban a 37 C durante 24 h
(cualquier espora sobreviviente tendr oportunidad para desarrollar), si el
procedimiento estuvo bien realizado, el caldo nutritivo no muestra desarrollo
bacteriano. Estos indicadores tambin se presentan en ampollas con caldo de
cultivo incorporado.
:

Este mtodo a pesar de que no puede ser ledo inmediatamente (por el tiempo de
incubacin) es el ms confiable.
b) Control fsico: Termocupla

Es un mtodo directo

que registra la temperatura a la cual se desarrolla la

esterilizacin. Consiste en colocar sondas en puntos significativos en la carga a ser

esterilizada y registra la temperatura. Consiste en dos metales que estn en contacto y
por diferencia de temperatura generan una fuerza electromagntica que se detecta en
un instrumento que puede hacerse incidir en una aguja inscriptota sobre una cinta
que gira 360 en 12 24 h. Son termgrafos e indican la temperatura alcanzada y
durante cuanto tiempo se mantuvo la misma. De este modo queda un testigo de todas

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las operaciones realizadas ese da.

Este mtodo permite que el proceso de

esterilizacin sea controlado directamente y su eficiencia determinada sin demora.

c) Controles qumicos: sustancias qumicas de punto de fusin conocido y bien definido

Tubos testigos que contienen sustancias que funden a las temperaturas de

esterilizacin, pero no resultan muy satisfactorios, porque no dan informacin sobre la
relacin temperatura/tiempo como tampoco miden la penetracin del vapor. Estas
sustancias suelen utilizarse para esterilizadores por vapor. Para tratamientos a 121 C
se recomienda sustancias tales como anhdrido succnico (PF: 120 C) o cido
benzoico (PF: 121 C) y para tratamientos a 115 C es apropiado el azufre (PF: 115
C).

Estas sustancias estn mezcladas con un colorante y al fundir indican si se

alcanz la temperatura ptima de esterilizacin.

Otros seran los tubos de Browne (hay varios tipos), que contienen una mezcla de
reaccin en solucin e indicadores ajustados de forma tal que se necesita una
combinacin especfica de tiempo y temperatura para que ocurra la reaccin y se
produzca el viraje del indicador. Adems, existen cintas adhesivas sensibles al calor o
radiacin que modifican su color cuando se alcanza la temperatura o dosis deseada.
Tambin se dispone de tiras de papel impregnadas con derivados de 2,4dinitrofenilhidraciana que funde a la temperatura de esterilizacin.
Actualmente existen, los llamados integradores de esterilizacin que son una clase
superior de indicadores, que mediante un cambio cromtico progresivo integran todas
las variables crticas del proceso. Estos integradores para calor seco (cambian de
color del amarillo al marrn: ciclo correcto) y para vapor (cambian de color amarillo al
azul: ciclo correcto).
d) Otros indicadores qumicos: envases conteniendo una solucin de cloruro de

magnesio con indicador azul de bromofenol para el control del proceso de

esterilizacin con xido de etileno, el cual luego de una exposicin adecuada se
alcaliniza y cambia el color del indicador.
e) En la esterilizacin por filtracin es necesario controlar la integridad del filtro, el
cierre hermtico entre la membrana y el soporte, la membrana normalmente no deja

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pasar el aire, por lo tanto si no est rota, y el filtro se arm correctamente no debe
pasar el aire.
Controles de esterilidad
Consiste en tomar muestras representativas de los objetos o materiales esterilizados y
realizar controles con el fin de asegurar la no presencia de microorganismos.
Si se trata de un medio de cultivo rico fraccionado en tubos, se toma los de la zona
central de la cesta que los contiene, que es donde se supone que alcanza ms
difcilmente la temperatura y se incuban directamente.
Si se trata de una sustancia termolbil esterilizada por filtracin, se toma una alcuota y
se coloca aspticamente en un medio de cultivo adecuado. Segn la Farmacopea
Argentina se debe usar: medio de tioglicolato para bacterias anaerobias incubando
durante 7 das, agar nutritivo para bacterias aerobias e incubando durante 48 h, y en
medio de casena de soja para hongos incubando 10 das a 22 25 C.
Microorganismos esporulados usados en controles de esterilizacin:
-

Bacillus stearothermophilus: para esterilizadores de vapor

Bacillus subtilis vr. niger: para esterilizacin por oxido de etileno

Bacillus subtilis vr. nger o Clostridium tetani: para esterilizacin por calor seco

Bacillus pumilus o Streptococcus faccium: para esterilizacin por radiaciones

ionizantes
MTODOS QUMICOS

Oxido de etileno: destruye las bacterias en estado vegetativo, el bacilo de la

tuberculosis, las esporas y los virus. El mecanismo de accin: es por alquilacin,
modifica la estructura molecular de las protenas; los hidrgenos lbiles de las
protenas, como SH, -COOH u OH, son reemplazados por grupos alquilos, a
travs de reacciones irreversibles que alteran los procesos de reproduccin y
metablicos normales de las clulas.
Aplicaciones: se debe usar para esterilizar aquellos materiales que no pueden
ser esterilizados por vapor o calor seco, como:
-

Fibras artificiales

22
-

Aparatos termolbiles y pticos

Accesorios de mquinas de circulacin extracorprea

Accesorios de respiradores

Hilos de sutura

Ventajas:

Es bactericida, esporicida y virucida

Posee un coeficiente de difusin muy favorable

Necesita humedades relativas superiores al 60%

Puede usarse para material termosensible o muy delicado (cuero,

libros, etc.)

Desventajas:

Es potencialmente explosivo e inflamable

Tiene tendencia a polimerizarse

Accin lenta. Se requieren concentraciones de 500 mg/L por un tiempo

de aproximadamente 2 h con factores de inactivacin de 107 para
esporas de B. subtilis. Pueden emplearse tiempos de 3 4 h para
garantizar un amplio margen de seguridad,

Puede ser incompatible con algunos plsticos

Es txico. Puede producir toxicidad aguda o crnica en el operador.

Aguda: por inhalacin comparable con el amonaco puro, irritacin
ocular, irritacin respiratoria, vmitos y diarrea, cefalea, quemaduras,
reacciones de hipersensibilidad. Crnica: anemia, hepatotoxicidad,
disminucin del sentido del olfato, neurotoxicidad, aumento de
incidencia de cncer como leucemia y cncer de estomago, irritacin
respiratoria e infeccin secundaria.

Formaldehdo: Puede resultar tan efectivo como el xido de etileno siempre que se
alcancen y se mantengan las condiciones correctas y que los artculos a esterilizar las
soporten. Posee altos coeficientes de temperatura y de concentracin, es de muy bajo
poder penetrante, tiende a polimerizarse a una forma inactiva a bajas temperaturas, lo
cual reduce rpidamente la concentracin efectiva. Es afectado por materia orgnica
como suero, esputo, pus, lo cual puede requerir tiempos de exposicin prolongados.

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Los artculos esterilizados mediante formaldehdo deben estar perfectamente limpios,
libres de sustancias protectivas, en envases abiertos. La humedad relativa debe ser
mantenida entre el 80 y 90%, la temperatura por encima de 60 C, y la concentracin
al mayor nivel posible. El tiempo de exposicin debera ser lo ms prolongado posible
y no menor de 4 h.
Glutaraldehdo: soluciones alcalinas pueden resultar esporicidas y adecuadas para
la esterilizacin de superficies. Se necesitan concentraciones del 2% en solucin
acuosa a pH 7,5 y 8,5, el cual se logra con el agregado de 0,3% de bicarbonato de
sodio que acta como buffer, pero reduce la estabilidad de la solucin a 2 semanas
cuando se mantiene a 20 C, porque puede ocurrir una polimerizacin inactiva.
Aplicaciones y precauciones
Se pueden esterilizar por este mtodo todo tipo de instrumental que no pueda
esterilizarse por calor (inoxidables, lentes, sintticos flexibles, etc.) efectuando
inmersiones en cubas apropiadas.
El material que va a ser esterilizado o desinfectado por este mtodo debe lavarse
previamente con abundante agua para reducir la presencia de sustancias orgnicas
comunes (sangre, suero, pus, etc.). Deben utilizarse guantes de goma y antiparras
durante su empleo porque es irritante de mucosas, piel y membranas.
El material tratado debe enjuagarse muy bien con agua destilada estril y secar con
nitrgeno o se puede lograr un secado rpido con una mezcla de alcohol y agua
(50%). Se debe trabajar en lugares que se pueden airear ya que el glutaraldehdo es
muy irritante y voltil.
El mecanismo de accin del glutaraldehdo y formaldehdo es por alquilacin.
Gas plasma: es un sistema de esterilizacin a baja temperatura. Existen dos mtodos
de esterilizacin por produccin de gas plasma:
A) Perxido de hidrgeno-gas plasma: se vaporizan 1,8 ml de perxido de
hidrgeno al 58% en una cmara de esterilizacin, el vapor es convertido en
plasma cuando es expuesto a energa de frecuencia radial. El plasma consiste
en partculas altamente cargadas y radicales libres que esterilizan instrumentos

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en aproximadamente 1 hora y no produce residuos o emisiones txicas, dado
que los productos finales son vapores de agua y oxgeno.
B) Acido peractico-gas plasma: se provee una emisin continua de gas
peractico dentro de la cmara de esterilizacin, cuando este gas es sometido
a energa de frecuencia radial se convierte en estado de plasma.
Estos mtodos son tecnologas emergentes, que por el momento slo pueden ser
utilizadas en hospitales, y an no han sido desarrollados como para poder ser usados
a nivel industrial.
Mecanismo de accin: consiste en partculas altamente cargadas y radicales
libres esterilizantes.
Aplicaciones: se puede esterilizar material metlico y no metlico e instrumental
mdico sin los efectos degradantes del vapor de agua, que puede deteriorar el
instrumental de microciruga. Los artculos esterilizados pueden ser usados
inmediatamente o ser almacenados en empaques protectores hasta que sean
utilizados.
No se pueden esterilizar productos de celulosa, muselina, algodn, papel, agua,
materiales orgnicos.
ANTISEPTICOS - DESINFECTANTES

Es importante destacar que, los agentes qumicos que son usados para destruir
microorganismos sobre objetos inanimados se denominan desinfectantes, mientras
que antispticos son aquellos que matan o inhiben el crecimiento de los
microorganismos y pueden aplicarse sobre tejidos vivos.
Desinfectantes.
Clasificacin de acuerdo a su mecanismo de accin:
A) Agentes que daan la membrana celular
1) Detergentes : a) catinicos

b) aninicos c) no inicos

2) Compuestos fenlicos: a) fenol

b) cresoles

c) bisfenoles (triclosn)

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3) Alcoholes: a) etanol

b) isopropanol

B) Agentes desnaturalizantes de protenas

a) cidos y bases fuertes

b) cidos orgnicos no disociables

C) Agentes modificadores de grupos funcionales de protenas y cidos

nucleicos
1) Metales pesados
a) compuestos mercuriales

b) compuestos de plata

2) Agentes oxidantes
a) halgenos b) agua oxigenada

c) cido peractico

Agentes que daan la membrana celular

Agentes tensioactivos. Los compuestos tensioactivos incluyen los jabones y
detergentes. El jabn tiene escaso valor como antisptico pero desempea una
importante funcin en la eliminacin mecnica de los microorganismos. Los
agentes tensioactivos ms utilizados son los detergentes catinicos, en especial
los compuestos de amonio cuaternario. Estos compuestos presentan una fuerte
actividad bactericida contra las bacterias Gram positivas y menos contra bacterias
Gram negativas. Tambin son fungicidas y viricidas contra los virus envueltos. No
destruyen las endosporas ni las micobacterias.
Mecanismo de accin: afectan la membrana citoplasmtica, alteran la
permeabilidad de la clula y provocan la prdida de constituyentes
citoplasmticos esenciales, como el potasio. Uno de los compuestos de
amonio cuaternario ms utilizado es el cloruro de benzalconio, el cual presenta una
fuerte accin antimicrobiana.
Fenoles. Los derivados fenlicos ejercen su actividad al lesionar las membranas
citoplasmticas que contienen lpidos, lo que determina la prdida del contenido
celular. El fenol no se utiliza en la actualidad debido a los efectos irritantes sobre
piel.

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Alcoholes. Los alcoholes ejercen su accin mediante la desnaturalizacin de
las protenas y la disolucin de los lpidos. La accin desinfectante aumenta
con la longitud de la cadena aliftica de los alcoholes. Dos de los alcoholes ms
utilizados son:
Etanol: el etanol puro es menos eficaz que las soluciones acuosas porque la
desnaturalizacin requiere agua. La concentracin ptima recomendada de etanol
es del 70%. Disuelve los lpidos que protegen a los microorganismos de la piel.
Isopropanol: es menos voltil y ms potente que el etanol como antisptico y
desinfectante..
B) Agentes desnaturalizantes de protenas
cidos y bases fuertes: son activos bactericidas, debido a los grupos H+ y OHdisociados, respectivamente.
cidos orgnicos: Los cidos orgnicos simples o sales de cidos orgnicos se
utilizan como conservantes de alimentos. El cido srbico o su sal ms soluble sorbato
de potasio y el benzoato de sodio impiden el crecimiento de hongos filamentosos en
alimentos.
C) Agentes modificadores de grupos funcionales de protenas y cidos
nucleicos
Estos agentes se caracterizan porque alteran grupos que forman parte de los
centros activos de enzimas y otras protenas; alteran grupos funcionales de cidos
nucleicos, componentes de pared y membrana.
Metales pesados: Varios metales pesados, como la plata, el mercurio y el cobre,
pueden ser germicidas o antispticos. Cuando estos iones se combinan con los
grupos sulfhdrilo existentes en las protenas celulares se produce su
desnaturalizacin. La plata se utilizaba como antisptico en una solucin de
nitrato de plata al 1% para evitar la oftalma gonoccica neonatal, actualmente se
ha reeemplazado por antibiticos.

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Agentes oxidantes.
Halgenos: el yodo es uno de los antispticos ms antiguos y ms eficaces. Acta
contra toda clase de bacterias y contra endosporas, diversos hongos y algunos
virus. El yodo puede combinarse con ciertos aminocidos para inactivar
enzimas y otras protenas celulares.
Sus principales presentaciones son la tintura de yodo ( solucin acuosaalcohlica) y iodforos. Tintura de yodo: es una mezcla de I2 + IK en alcohol 70%,
es un antisptico de piel. Alcohol iodado: tintura de yodo al 10% en etanol de 96
C. Los iodforos (combinacin de yodo y una molcula orgnica, a partir de la cual
el yodo se libera lentamente) son antispticos. Tambin se emplean en la
desinfeccin de instalaciones en industrias alimentaras.
El cloro como gas o en combinacin con otras sustancias qumicas, se lo utiliza
como desinfectante. Su accin germicida est determinada por el cido
hipocloroso que se forma cuando el cloro se agrega al agua. El hipoclorito de sodio
se usa para desinfectar superficies, es de accin rpida, es menos satisfactorio
para materiales que contienen materia orgnica.
El perxido de hidrgeno es un antisptico que se encuentra en la mayora de
los botiquines caseros. No es un buen antisptico para las heridas abiertas,
porque el H2O2 es degrado a agua y oxgeno gaseoso por la catalasa tisular. Sin
embargo, es eficaz en la desinfeccin de objetos inanimados.
Factores que afectan la potencia de un desinfectante

Concentracin del agente y tiempo de accin

pH

Temperatura

Presencia de materiales extraos

Concentracin del agente y tiempo de accin. La concentracin para obtener un

determinado efecto, as como el rango de concentraciones en que se puede demostrar
un determinado efecto, depende del tipo qumico del desinfectante y del tipo de
microorganismos a eliminar. Existe una estrecha relacin entre la concentracin del
agente y el tiempo necesario para matar una determinada fraccin de la poblacin
bacteriana.

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pH. El pH afecta tanto a la carga superficial neta de la bacteria como al grado de
ionizacin del agente. En general, las formas ionizadas de los agentes disociables
pasan mejor a travs de las membranas biolgicas, y por lo tanto son ms efectivos.
Los agentes catinicos muestran ms eficacia a pH alcalinos, mientras que los
aninicos suelen ser ms efectivos a pH cidos.
Temperatura. Normalmente, al aumentar la temperatura aumenta la potencia de los
desinfectantes. Para muchos agentes el aumento de 10 C supone duplicar la tasa de
muerte.

Presencia de materiales extraos. La presencia de materia orgnica

en el material (ej. sangre, suero, pus) afecta negativamente a la
potencia de los desinfectantes de tipo oxidante (como los hipocloritos) y
de tipo desnaturalizante de protenas, hasta el punto que pueden llegar
a hacerlos inactivos.

Evaluacin de la potencia de un desinfectante

La determinacin de la actividad desinfectante de un determinado agente es necesaria
para conocer su posible eficacia. Durante muchos aos la prueba de referencia fue la
prueba del coeficiente fenlico, comparaba la actividad de un desinfectante dado
con la del fenol. Sin embargo, el estndar actual es el mtodo de difusin con disco.
Mtodo de difusin con disco. Este mtodo se utiliza mucho en los laboratorios
para evaluar la eficacia de un agente qumico. Un disco de papel de filtro se embebe
con la sustancia qumica y se coloca sobre una placa de agar previamente inoculada
con el microorganismo de prueba. Si la sustancia qumica es eficaz despus de la
incubacin se puede observar una zona clara que representa la inhibicin del
crecimiento alrededor del disco.
Bibliografa
-

Madigan M.T, Martinko J.M., Parker J. Brock Biologa de los Microorganismos.

2009. 12 ed. Editorial Prentice Hall. Espaa
Tortora, G.J., Funke, B.R., Case, C.L. Introduccin a la Microbiologa. 2007. 9 ed.
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