CUANTIFICACION DE FLAVONOIDES

CUANTIFICACIN DE FLAVONOIDES, TANINOS Y ESTEROIDES EN PLANTAS MEDICINALES DE USO

TRADICIONAL EN TABASCO

1. INTRODUCCION
Dentro de las plantas empleadas en la medicina tradicional en Tabasco, se han elegido a tres
especies que destacan por su importancia y mbito de aplicacin: el saco (Sambucus mexicana), el
matal (Tradescantia zebrina) y el maguey morado (Tradescantia spathacea sw.). As, se ha conoce
tradicionalmente que el saco se utiliza para el tratamiento de los sntomas de la gripe, se
encuentran el saco (S. mexicana).1 Por otro lado T. zebrina (conocida tradicionalmente en
Tabasco como matal); por sus propiedades curativas como diurtico, disentera, mal de orn y
dolor de estmago. Mientras que en el caso del maguey morado (T. spathacea sw.) es reconocida
por sus diversas las aplicaciones medicinales, en Tabasco se emplea como principalmente como
desinfectante y desinflamatorio.
El amplio uso tradicional y las propiedades medicinales atribuidas a estas plantas, las hacen
atractivas para estudios tendientes a generar preparados herbolarios caracterizados y
estandarizados fisicoqumicamente.
Sin embargo, para ello es preciso contar con metodologas analticas que permitan cuantificar los
distintos grupos de metabolitos secundarios presentes en las mismas, los cuales pueden ser
considerados como sensores qumicos capaces de apoyar los estudios de caracterizacin y
estabilidad de los productos generados a partir de estos vegetales.
En este trabajo se reporta la aplicacin de mtodos espectrofotomtricos para la cuantificacin de
flavonoides, taninos y esteroides en material vegetal de las tres plantas de estudio, con la finalidad
de contar con procedimientos analticos cuantitativos que permitan su aplicacin en el control
fisicoqumico de productos herbolarios diseados a partir de plantas medicinales.

2. METODOLOGIA
Manejo de la muestra: Para el caso del saco, se utiliz la flor adquirida en el mercado municipal
de Cunduacn, Tabasco. En este mismo municipio, se recolect el maguey morado en un huerto
familiar; mientras que el matal se obtuvo a partir de un huerto familiar del poblado Mecoacn del
municipio de Jalpa de Mndez. Una vez seco el material vegetal, fue triturado y tamizado a travs
de malla 100 con el fin de obtener partculas de tamao uniforme. Todas las determinaciones se
realizaron por triplicado.
Determinacin de flavonoides: La determinacin de flavonoides se llev a cabo mediante una
modificacin a la tcnica reportada en la Farmacopea Herbolaria de los Estados Unidos Mexicanos,
empleando como referencia hesperidina.
Se utiliz 1.5 g de la materia vegetal pulverizada, para la obtencin de la solucin madre, mediante
2 reflujos de 1 h cada uno con etanol al 60% y aforando el extracto obtenido con etanol a 250 mL.
Se prepar una disolucin de la referencia, utilizando 10 mg de hesperidina que se disolvi en
metanol absoluto y se llev a un aforo de 100 ml.
Posteriormente se prepararon 4 disoluciones (aforando a volmenes finales de 25 mL), la
composicin de estas 4 disoluciones fue la siguiente:

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Disolucin 1: 2 mL de la disolucin madre, 2 mL de una disolucin de cloruro de aluminio al 2%, y se
afor con metanol. Disolucin 2: 2 mL de la solucin madre, aforando con metanol.
Disolucin 3: 2 mL de la disolucin de referencia, 2 mL de una solucin de cloruro de aluminio al
2% y aforando con metanol. Por ltimo, la disolucin 4, contena 2 mL de la disolucin de
referencia y se afor con metanol. Se midieron las absorbancias de las disoluciones 1 y 3,
empleando un espectrofotmetro Spectronic 20D+ modelo 333183, a una longitud de onda de
394 nm. Se emplearon como blanco las disoluciones 2 y 4, respectivamente.
La cantidad de flavonoides expresada en porcentaje se calcul de la siguiente manera:
% de flavonoides expresados como hesperidina= (A1xP2xV1x100) / (A2xP1xV2)
Donde:
A1: absorbancia disolucin 1.
A2: absorbancia disolucin 3.

P1: peso de la muestra.

P2: peso del estndar.

V1: aforo de la muestra.

V2: aforo de la referencia.

Determinacin de taninos: La determinacin de taninos se realiz mediante una modificacin a la

Norma ISO-1988. Norma internacional para la determinacin de taninos. Nmero 9648.
A 1 g de la muestra se le colocaron 20 mL de dimetilformamida y esta suspensin se agit durante
60 minutos. Despus se centrifug a 1000 x g por 10 minutos.
Del sobrenadante se prepararon dos disoluciones (A) y (B). La disolucin (A) contena 1 mL del
sobrenadante, 6 mL de agua y 1 mL de una solucin amoniacal (8/.98 mL/L); la solucin (B)
contena, 1 mL del sobrenadante, 5 mL de agua, 1 mL de citrato frrico (3.5 g/L) y 1 mL de la
solucin amoniacal. Se dejaron reposar por 10 minutos, para luego ser medidas sus absorbancias a
525 nm, utilizando un blanco de agua. El resultado es la diferencia de las absorbancias entre las
soluciones (A) y (B), y este valor se interpola en la curva estndar, la cual se prepara de la siguiente
manera:
Se prepararon 6 matraces volumtricos de 100 mL de en donde se aadieron respectivamente:
0, 1, 2, 3, 4 y 5 mL de una disolucin de cido tnico al 1% aforando con agua destilada.
Posteriormente se tom una alcuota de 1 mL de cada una de estas disoluciones y se aadi 5
mL de agua, 1 mL de citrato frrico y 1 mL de una solucin amoniacal. Se agitaron. 10 minutos y se
leyeron las absorbancias a 525 nm, contra un blanco de agua.
Determinacin de esteroides: Para la determinacin de esteroides se utiliz la tcnica de
Liebermann Buchard.
Inicialmente se obtuvo el extracto etreo a partir de 5 g de la muestra y mediante una extraccin
soxleth, empleando como disolvente 100 mL de ter etlico. El disolvente fue removido por
destilacin al vaco en rotavapor.
El extracto se reconstituy con cloroformo y se tom una alcuota de 0.050 mL a la que se le
aadieron 0.450 mL de cloroformo y 5 mL del reactivo de Liebermann (anhdrido actico/cido
sulfrico). La mezcla se coloc en un bao de agua a 35 C, por 10 minutos. La absorbancia se ley a
550 nm, contra un blanco de reactivo.
Para la curva estndar se prepararon 4 muestras de colesterol, a concentraciones de 2, 4, 6 y de 8
mM. Alcuotas de 0.050 mL de cada una de las disoluciones estndar se mezclaron con 0.450 mL de
cloroformo y 5 mL del reactivo de Liebermann-Buchard, en condiciones idnticas a las del
problema.
Mediante la extrapolacin de la absorbancia del problema en la curva estndar construida, fue
posible calcular la cantidad de esteroides en el extracto etreo de las plantas analizadas.

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3. RESULTADOS Y DISCUSION
En la tabla 1 se muestran los porcentajes de cada uno de los grupos de metabolitos secundarios
que se cuantificaron en la flor de S. mexicana y en hojas de T. zebrina y T. spathacea.
Tabla 1. Porcentaje para cada uno de los metabolitos secundarios cuantificados en la flor de
Sambucus mexicana y en hojas de T. zebrina y T. spathacea.

Los resultados obtenidos, muestran que estos tres grupos de metabolitos secundarios se
encuentran distribuidos de manera diferente en cada una de las especies estudiadas, lo cual se
atribuye a la variabilidad biolgica de cada especie. Cabe mencionar, que para el caso de T.
spathacea, ninguno de estos metabolitos puede ser utilizado como sensor de estabilidad
fisicoqumica en virtud de que se encuentran en concentraciones sumamente bajas.
Sin embargo, tanto para S. mexicana, como para T. zebrina, el grupo de esteroides puede ser un
buen sistema de monitoreo de estabilidad fisicoqumica, en virtud de encontrarse en buena
proporcin.

4. CONCLUSION
Se implementaron tres tcnicas espectrofotomtricas para la cuantificacin de tres grupos de
metabolitos secundarios (flavonoides, taninos y estereoides), en material vegetal derivado de
Sambucus mexicana, Tradescantia zebrina y Tradescantia spathacea sw, las cuales son plantas de
amplio uso en la medicina tradicional en Tabasco. Los resultados obtenidos mostraron que, para el
caso de las dos primeras plantas, estos tipos de metabolitos se encuentran en proporciones
apreciables, aunque el grupo esteroides se puede apreciar en mayor cantidad con respecto a los
otros dos grupos de metabolitos secundarios (taninos y flavonoides). La implementacin de esta
metodologa es til para el desarrollo futuro de procesos de control y estandarizacin de derivados
herbolarios generados a partir de S. mexicana y de T. zebrina, sin embargo, para el caso de T.
spathacea, los resultados muestran la necesidad de implementar otras tcnicas de cuantificacin
de metabolitos secundarios (e.g. quinonas o saponinas) que permitan llegar a obtener un
parmetro qumico susceptible de ser medido en pruebas de estabilidad.
5. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Kaack K. Fruit Variety J. 1996. 51: 28-31.
Maldonado Mares F. (2005) Flora Medicinal del Estado de Tabasco: Uso, Manejo y Conservacin.
Domnguez Ortiz Miguel ngel. (2003)- Elucidacin y Actividad Antimicrobiana de los Metabolitos
Presentes en Maguey morado (Roheo discolor L. Hr Hance). Universidad de Colima. Tecomn
Colima.
Secretaria de Salud. Farmacopea Herbolaria de los Estados Unidos Mexicanos. 2001. 17-18.