UNIVERSIDAD NACIONAL DEL

CENTRO DEL PERU

Produccin de celulasas a
partir de Aspergillus niger
por fermentacin sumergida
o micelo libre
Integrantes:
CATILLO OSCANOA, Yasmina
CHAMORRO REQUENA, Helen
GALARZA VERASTEGUI, Luis
LOPEZ URBANO, Laedy Ruth
ROSAS MOLINA, Mara

Biotecnologia

INTRODUCCION
El presente informe respecto a la produccin de celulasas a partir del
Aspergillus niger por el mtodo de fermentacin sumergida desarrollado en
el laboratorio de Biotecnologa, este mtodo consiste en el crecimiento y
desarrollo del hongo mencionado en forma libre por medio de un cultivo
lquido.
La ventaja del mtodo de fermentacin sumergida es que los parmetros
del proceso de cultivo son controlados son mayor dificultad ya que se
cuenta con un equipo especial para la realizacin de esta fermentacin. Y
as establecer modelos matemticos que predigan y optimen el proceso
fermentativo.
La produccin de celulasas tienen gran importancia en la industria textilera,
la del papel, en formulacin de detergentes y en la industria de los
alimentos, aunque esta tecnologa todava no es factible econmicamente a
la escala que se trabaja, si esta es poca, pero se tiene expectativas del uso
masivo en el futuro para producir enzimas mediante este mtodo. Por lo
cual es presente trabajo tiene por objetivos lo siguiente:

Utilizar el sistema de fermentacin sumergida para la produccin de

celulasas por Aspergillus niger.

Extraer la enzima celultica del sistema de fermentacin y utilizara
para la hidrolisis de celulosa.

19

Los Alumnos.

MSc. Norma Gamarra

Mendoza

19

Biotecnologia

MSc. Norma Gamarra

Mendoza

Biotecnologia

II. Revisin bibliogrfica

2.1. Microorganismos productores de celulasas
Las enzimas celulasas son producidas por una variedad de bacterias y
hongos aerbicos o anaerbicos, mesfilos o termfilos. Sin embargo,
slo algunos de ellos producen enzima celulasa extracelular capaz de
hidrolizar la celulosa. A partir de los hongos aerbicos, tales como:
Trichoderma

viride,

Trichoderma

reesei,

Penicillium

pinophilum,

Aspergillus niger, Fusarium solani, Talaromyces emersonii y Trichoderma

koningii, se han obtenido los complejos celulolticos utilizados en la
mayora de los estudios (Eriksson & Wood 1985), debido a que
presentan un sistema enzimtico completo de celulasas capaces de
degradar parcial o totalmente la celulosa en celobiosa y glucosa (Ryu &
Mandels 1980).
2.2. Aspergillus niger
Entre los organismos eucariotas que han sido objeto de numerosas e
importantes investigaciones, se encuentra el hongo Aspergilus nger.
Este hongo pertenece al gnero Aspergillus, que fue descrito por
primera vez por Micheli en 1729 en su obra Nova Plantarum genera,
siendo validado por Haller, en sus tratados de 1742 y 1768 y ms tarde,
por Link en el ao de 1809. Estos hongos, causan el deterioro de
muchos productos alimenticios (ajo, alimentos para aves, arvejas,
avena, berenjena, bananas, cebolla, harina de trigo, entre otros). Los
productos metablicos de la invasin fngica suelen ser muy txicos,
tanto para el hombre como para otros animales (Accensi, 2000).
Al comienzo de su crecimiento Aspergillus niger forma colonias
miceliales lanosas blancas o amarillentas; a medida que ste se
desarrolla la superficie micelar se va cubriendo de puntos negros: son
las cabezas aspergiares que pueden llegar a medir hasta 1 mm de
dimetro, stas se encuentran cargadas de esporas negras (Figura 1 y
2). Este hongo es un importante agente productor de cidos orgnicos,
principalmente glucnico, ctrico y oxlico; tambin es utilizado para la

19

obtencin de enzimas como la glucoamilasa y del 1--galactosidasa, por

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lo que es ampliamente cultivado para la produccin industrial de estos
compuestos qumicos

Figura 1.Aspergillus niger

Figura 2.Aspergillus niger

2.3. Tipos de celulasas

La accin enzimtica para llevar a cabo la hidrlisis de la celulosa
implica la operacin secuencial y la accin sinergsta de un grupo de
celulasas, que presentan diferentes sitios de enlace, debido a la
naturaleza compleja de la molcula de celulosa (Lee 1997). El sistema
de celulasa tpico incluye tres tipos de enzimas: la endo--1,4-glucanasa
(Cx)

(1,4--D-glucan

glucanohidrolasa

E.C.3.2.1.4),

la

exo--1,4-

glucanasa (C1) (1,4--D-glucan celobiohidrolasa E.C.3.2.1.91) y la -1,4glucosidasa (celobiasa) (Cb) (-D-glucsido glucohidrolasa E.C.3.2.1.21).
2.4. Preparados celulolticos comerciales
En la actualidad existen disponible numerosos preparados enzimticos
comerciales grado alimenticio que contienen principalmente actividad
celuloltica
E.C.3.2.1.91,

(endo--1,4-glucanasa
-1,4-glucosidasa

E.C.3.2.1.4,
E.C.3.2.1.21).

exo--1,4-glucanasa
Estos

preparados

enzimticos son obtenidos de microorganismos de origen fngico y

bacteriano, que principalmente provienen de los microorganismos
Trichoderma sp., Aspergillus nger y Bacillus subtillis (Bhat 2000).
Algunos de estos preparados enzimticos son: Crystalzyme PML-MX de
Valley Research Inc., Biocellulase A de Quest Intl., Celluclast 1.5 L de
Novo Nordisk, Econase Ce-S de Enzyme Development Co., Cellulase

19

AP30K de Amano Enzyme, Stonenzyme Plus, Zymafilt L-300 y Macerex

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de Enmex S.A. de C.V., Novozym 342 de Novo Industries, Cellubrix L de
Novo Nordisk y Cellulase de Bio-Cat Inc. Todos son solubles en agua y su
presentacin es en estado lquido, excepto el preparado Cellulase que es
en polvo. As tambin, Crystalzyme PML-MX, Macerex y Cellulase son
preparados

enzimticos

con

actividad

mixta

porque

adems

de

actividad celulasa contienen actividad pectinasa y hemicelulasa. Estos

solamente son algunos de los preparados enzimticos comercialmente
disponibles en el mercado, ya que existen muchos de ellos, dado a la
amplia gama de aplicaciones que tienen las celulasas en las diferentes
industrias tales como de alimentos para consumo humano, alimentos
para animales, en textiles y combustibles (Mandels 1985).
2.5. Aplicacin de enzimas sobre la obtencin de componentes
alimenticios
El inters sobre el estudio de la aplicacin de enzimas en la industria de
la extraccin de productos vegetales se ha incrementado de manera
importante en las ltimas dos dcadas, debido a que ha mostrado ser
una herramienta factible facilitando la liberacin de los componentes de
las clulas del tejido adems de liberar el compuesto extra que se
encuentra encerrado dentro de las clulas incrementando la produccin.
2.6. La influencia de la actividad del agua en el medio
El agua juega diversos papeles en los sistemas biolgicos, ya que
participa directamente en los procesos de solvatacin y difusin de
nutrientes, y en algunos mecanismos de interaccin molecular, adems
de ser un importante componente biolgico estructural. El agua
presenta dos funciones fundamentales Gervais P. y Molin P. (2003):
A nivel celular es un solvente que provee de nutrientes, facilita la
excrecin de desechos y metabolitos secundarios, adems de constituir
un alto porcentaje de la estructura celular.
A nivel molecular el agua se encuentra unida a otras molculas, como
los polioles, azcares o enzimas, contribuye a mantener el volumen
celular, y estabiliza las estructuras de los biopolmeros, como las

19

protenas, los nucletidos, y los carbohidratos.

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Gutirrez

colaboradores

(1995)

estudiaron

el

efecto

de

la

concentracin de glucosa sobre el crecimiento en A. niger para la

produccin

de

diversos

metabolitos

secundarios,

analizando

la

produccin de cido ctrico y polioles a altas concentraciones de glucosa

(mayores de 300 g/L) en una fermentacin en estado slido.
Otro metabolito secretado por A. niger es la enzima tanasa, Cerda y
colaboradores (2005) proponen la hiptesis de que para modificar la
produccin de dicha enzima es necesario alterar la disponibilidad de los
nutrientes; por lo que llevaron a cabo un estudio del efecto de la
reduccin y aumento de glucosa en el medio, teniendo como resultado
que bajas concentraciones de glucosa incrementan la produccin de la
enzima intra y extracelular; a altas concentraciones de glucosa no se ve
afectada la produccin de tanasa intracelular, en cambio la produccin
extracelular decrece notoriamente y bajo estas condiciones concluyen
que la difusin del sustrato en el medio slido puede ser uno de los
factores responsables de la disminucin de la produccin enzimtica.
En

consecuencia,

el

comportamiento

de

un

microorganismo

en

crecimiento es el resultado de la interaccin que se produce entre ste y

el medio ambiente en el reactor, y que en rigor es el resultado de los
llamados efectores intra y extra celulares del proceso fermentativo. Los
efectores internos estn representados por la dotacin gentica
intrnseca del organismo considerado y por sus mecanismos de
regulacin metablica. Por otra parte, los efectores extra celulares estn
representados por las condiciones presentes en el medio ambiente, es
decir, valores de pH, temperatura, la agitacin, la aireacin, etc. Por lo
tanto, stos efectores externos estn constituidos por las variables de
manipulacin fsica que se fijan o se programan en el curso del proceso
de produccin. Estos ltimos pueden ser modificados por alteraciones
del medio ambiente, mientras que la existencia de un gen, depende de
la especie del microorganismo considerado. Un gen est o no est, slo
su expresin puede modificarse (OEA, 2006).

19

2.7 Fermentacin.-

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El proceso de fermentacin se conoce desde hace tiempo; sin embargo,
cada da se estudian nuevas tcnicas para mejorarlo; ya sea mediante el
mejoramiento del microorganismo (Por ingeniera gentica, fusin de
protoplastos, mutagenesis y otras tcnicas de microbiologa aplicada) o
la seleccin de los medios ptimos, as como el control de los diversos
parmetros

que

determinan

el

crecimiento

produccin

del

microorganismo. Se conocen varios tipos de fermentacin como son:

Fermentacin

sumergida

tanto

en

suspensin

como

con

clulas

inmovilizadas y fermentacin en sustrato slido (Lpez et.al (2002)).

La primera involucra aquellos procesos que se realizan con los agentes
biolgicos inmersos en la fase acuosa y la fermentacin sumergida con
clulas inmovilizadas es semejante a la anterior, excepto que los
agentes biolgicos estn unidos a soporte insolubles en agua. Con
respecto a la fermentacin en sustrato solido (FSS), esta se efecta con
la utilizacin de materiales insolubles en agua y con poca agua en el
sistema. (Lpez et.al (2002)).
La mayora de los productos obtenidos por va biotecnolgica son
producidos por fermentacin; por ejemplo, los antibiticos, el cido

19

ctrico, los aminocidos, entre otros. (Lpez et.al (2002)).

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2.8 Celulasas
En la actualidad, es ampliamente conocido que el papel es uno de los
productos de mayor uso en la vida del hombre. Se fabrica a partir de
una

materia

prima

renovable:

principalmente de los rboles,

las

fibras

de

pero tambin

celulosa
de

extradas

otras especies

vegetales, como paja, bagazo de la caa de azcar, bamb, algodn,

lino, entre otros.
Sin embargo, es menos conocido que la celulosa se encuentra
comercialmente disponible en una gran variedad de presentaciones y se
utiliza en las industrias de los detergentes, textil y alimenticia, entre
otras. Esto se debe a la posibilidad de romper la molcula de fibra
celulsica (un polmero) en unidades ms pequeas, gracias a la accin
de algunas enzimas llamadas celulasas
Al estudiar las enzimas celulasas que utilizan naturalmente los hongos y
bacterias para degradar la celulosa, se encontr que la hidrlisis
(degradacin) de este polmero es muy compleja. Por eso, es necesario

19

investigar las estructuras y funciones de estas enzimas para conocer

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con mayor detalle los mecanismos enzimticos involucrados en la
degradacin de la celulosa.
En este sentido, se espera que las herramientas moleculares y
biotecnolgicas permitan mejorar los procesos ya existentes, o bien
encontrar nuevas aplicaciones.
2.8.1 La celulosa: el polisacrido natural ms abundante en la
naturaleza
La celulosa es el principal componente de la pared celular de la
mayor parte de las plantas. Una clula vegetal joven contiene
aproximadamente un 40% de celulosa y la madera un 50 %. El
ejemplo ms representativo lo constituye el algodn que
contiene ms de 90% de celulosa.
Teniendo en cuenta su estructura qumica, se define como un
polisacrido lineal formado por residuos de glucosa unidos por
enlaces beta 1-4 (-1,4). La configuracin , le permite a la
celulosa formar cadenas largas y lineales, las cuales se
presentan unidas entre s por medio de enlaces de puentes de
hidrgeno dando lugar a la formacin de microfibrillas. Estas
regiones, conocidas como regiones cristalinas, son altamente
ordenadas y le dan las caractersticas de insolubilidad, rigidez y

19

resistencia al ataque enzimtico.

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iii. materiales y mtodos

3.1. MATERIALES:
Cultivo esporulado de
Aspergillius niger

Matraz Kitasato y Embudo

Buchner

Solucin de Tween 80 al 0.01

%

Tubos de prueba

Solucin nutritiva en g/L

Gradillas

Cmara de Neubauer

Succionador

Microscopio compuesto

Espectrofotmetro

19

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Erlenmeyer de 250 mL

Vortex

Placas Petry

Bomba de vaco

Papel filtro

DNS

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3.2.- MTODO
a) Preparacin de agar papa dextrosa (PDA) para cultivo de
esporas de Aspergillus niger
Trozar la papa y cocinarla a fuego lento con 800 mL de agua
destilada. Retirar del fuego y filtrar dos veces (con gasa y/o algodn)
la solucin obtenida. Disolver la glucosa y enrasar con agua destilada
hasta los 1000 mL. Agregar y disolver el agar. Esterilizar a 121 C por
15 min. Opcionalmente, despus de esterilizar agregar oxitetraciclina
a una concentracin final de 100 ug/mL cuando el medio se ha
enfriado.

Esterilizamos los materiales para hacer la respectiva siembra

19

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Vertemos el agar de papa dextrosa en los de 250 mL y procedemos a

sembrar el Aspergillus niger.

Lo dejamos incubar por 5 das a 30 C.

19

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Realizamos la dilucin, mezclamos en el vortex para tomar una

alcuota y cuantificamos en el microscopio.

19

C) FERMENTACIN SUMERGIDA

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METODOS

Se

prepar

lquido

el medio de cultivo

para

la

fermentacin

sumergida.

Se aadi 60mL del medio de

cultivo en frascos de 250 mL e
inocular

cada

frasco

de

fermentacin 3% volumen (v/v)

de inoculo con 1X106 esporas/mL.

Se agito el sustrato lquido para

mezclar

adecuadamente

incubar a 30C por 4 a 5 das en

un shaker a 175 rpm

D) EXTRACCIN DE LA ENZIMA CELULTICA DE LA FMS

METODOS
Se filtr con Buchner y papel
filtro prepesado. Se procur
retirar la mayor cantidad de
lquido posible, ya que este

19

contiene la celulasa.
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Se determin el peso de la
biomasa despus de secarlo a
80C por 24h

Se conserv el filtrado de la
forma ms asptica posible
Se determin la actividad de la
celulasa presente en el filtrado
Como complejo enzimtico, la
celulasa contiene actividades de
varias enzimas y se puede medir
la actividad global del complejo
mediante la tcnica denominada
Actividad

sobre

papel

de

filtro(APF).
Puesto

que

se

utiliza

como

sustrato 50mg de papel whaman

1(1x6cm). La prueba de APF que
se

realiz

siguiendo

el

procedimiento.

d.1 ) Actividad de papel

METODOS
Una vez preparado los tubos
que

contienen

acetato,

reactivo

tampn
DNS,

colocar los tubos en bao de

19

agua durante 5 minutos e

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inmediatamente se enfri en
bao de agua corriente.

Se agito bien los tubos en

bao y luego se llev a leer
en

el

540

espectrofotmetro

nm

contra

blanco

a
de

reactivo (BR).
Se calcul la concentracin
de glucosa en los tubos BPF,
BM

utilizando

la

curva

estndar.

d.2) Curva estndar de glucosa

METODOS
Se prepararon los tubos con
los reactivos y se coloc en
bao

de

durante

agua
5

hirviendo

minutos

inmediatamente se enfri con

agua corriente.

Se mezcl bien todos los tubos y

se ley en el espectrofotmetro a
540 nm contra el blanco de
reactivo(BR)
Los valores de absorbancia se
grafican contra la concentracin
de

la

glucosa

19

conveniente

donde

realizar

es
una
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regresin lineal.
Los clculos de concentracin de
azcar en la determinacin de
actividad enzimtica se realizan
con la ecuacin de la regresin

19

obtenida.

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IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES

4.1 datos obtenidos en la prctica
Cuadro 4.1 datos de consumo de sustrato, produccin de enzimas y para la
curva estndar de calibracin.

TIEMP
O

CONSUMO
DE
SUSTRATO
(S)

24

0,260

48

0,293

72

0,274

96

0,228

PRODUCCIN DE
ENZIMAS
BPF

BM

0,13
4
0,18
7
0,11
2
0,12
9

0,07
7
0,10
5
0,09
4
0,09
8

CURVA ESTNDAR DE
GLUCOSA

CONCENTRACI
N DE
GLUCOSA

ABSORBANC
IA

0,169

0,2

0,044

0,184

0,4

0,096

0,192

0,6

0,157

0,180

0,8

0,263

1,0

0,506

Fuente: elaboracin propia.

4.2 Curva estndar de glucosa

curva de calibracion, glucosa estandar

0.6
0.4

absorvancia

f(x) = 0.55x - 0.11

R = 0.89

0.2
0
0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

0.9

concentracion glucosa (mg/mL)

Figura 4.1 curva de calibracin

Fuente: elaboracin propia.

Se observa que al linealizar los datos ledos en el espectrofotmetro,

19

se tiene los valores de del cuadro 4.1 teniendo una pendiente

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positiva, la cual nos indica que a mayor concentracin de glucosa se
percibe una absorbancia mayor cada vez. La ecuacin que se obtuvo
tiene un R2 igual a 0.89, el cual seala que dicha ecuacin representa
significativamente los datos tomados en la prctica.
Cuadro 4.2 ecuacin de la curva estndar
ecuacin
linealizada y=ax+b
a
b
0.5455
-0.1141
Fuente: elaboracin propia.

4.3 Formacin de biomasa (X)

Cuadro 4.3 datos para clculo de biomasa
hora de
muestra

placa +
papel

24
48
72
96

73.113
62.955
62.623
69.377

placa +
papel +
muestra seca
73.124
62.969
62.644
69.458

biomasa seca

0.011
0.014
0.021
0.081

Fuente: elaboracin propia.

Segn el mtodo por diferencia de pesos, se obtuvo la biomasa seca

para 60 mL; como podemos observar segn pasa el tiempo (das)
esta biomasa representada por lo producido por el Aspergillus niger
(la celulasa), el cual aumenta segn el tiempo transcurre, esto se
puede observar en la figura 4.2 empero esta representacin no es la
ms adecuada debido a la contaminacin producida en la siembra del

19

hongo.

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formacion de biomasa
0.1

0.08

0.08
0.06

biomasa seca 0.04

0.02

0.01

0.02 0.01
0
20

30

40

50

60

70

80

90

100

tiempo (h)

Figura 4.2 representacin de la formacin de biomasa en el tiempo.

Fuente: elaboracin propia.

Tenemos una mayor concentracin de biomasa seca en la muestra de

96 horas de fermentacin sumergida. En los tiempos 48 y 72 horas es
casi similar, por lo que se puede decir que en la muestra de 72 horas
se tuvo mayor contaminacin por lo cual no se produjo el contenido
ptimo de celulasas.
4.4 Consumos de sustrato (S)
Cuadro 4.4 datos para clculo del consumo de sustrato
Fuente:

tiempo
(h)

absorba
ncia

24
48
72
96

0.26
0.293
0.274
0.228

factor
de
dilucin
10
10
10
10

concentracin
sustrato
(mg/mL)
6.85792851
7.46287809
7.11457379
6.27131072

elaboracin propia.

La concentracin de sustrato para cada uno de los tiempos segn este

avanza debe ser menor, ya que conforme se da la produccin de celulasas
el sustrato se vuelve ms pobre, disminuye. Tal comportamiento

19

podemos observar grficamente en la figura 4.3.

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lo

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consumo de sustrato (S)

8.00
7.50

7.46
7.11

6.86
7.00

concentracion de sustrato

6.27

6.50
6.00
5.50
20

40

60

80

100

tiempo (h)

Figura 4.3 consumo de sustrato en el tiempo

Fuente: elaboracin propia.

En la figura 4.3 que representa en consumo de sustrato para los

tiempos durante cuatro das, se observa que en el cuarto da (96
horas) se tiene mayor consumo de sustrato (menor concentracin de
sustrato), el cual dice que tal muestra utilizo mayor sustrato para
producir las celulasas, esto se puede verificar con las fotos tomadas
de las muestras en las cuales para el tiempo 92 horas se produjo en
forma adecuada estas enzimas.
4.5 Produccin de celulasa (P)
Cuadro 4.5 resultado de la produccin de las enzimas

TIEMPO
24
48
72
96

PRODUCCIN DE
LA ENZIMA
(CELULASA)
(U/mL)
3,36
3,84
3,16
3,18

19

Fuente: elaboracin propia.

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produccion de celulasas
5
4
3

U/mL 2

produccion

1
0
20

30

40

50

60

70

80

90 100

tiempo (h)

Figura 4.4 formacin del producto (P)

Fuente: elaboracin propia.

En la prctica realizada la cintica de expresin de celulasas

demostr que a las 48 horas se producan 3,84 UI/mL de actividad
AFP. Por la razn anterior el tiempo de fermentacin seleccionado fue
48 horas, lo cual garantiza la operacin del biorreactor en un punto de
mayor productividad. Lo cual es corroborado por Villena (2003)
menciona que probablemente hay un mecanismo en Aspergillus que
explique este pico inicial de actividad. Aunque generalmente el
incremento en la actividad metablica se ha relacionado con la
densidad celular, los resultados obtenidos en la produccin de
celulasas sugieren que la adsorcin de microorganismos a superficies
genera una respuesta fisiolgica distinta reflejada en la mayor
produccin de celulasas de Aspergillus.
4.6 Resultados totales
Cuadro 4.6 resultado de la biomasa, consumo de sustrato y produccin de
las enzimas

24
48
72
96

0.011
0.014
0.021
0.081

19

TIEMPO

BIOMASA
SECA

CONSUMO
DE
SUSTRATO
6.86
7.46
7.11
6.27

PRODUCCIN
DE LA ENZIMA
(CELULASA)
3,36
3,84
3,16
3,18
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Biotecnologia
Fuente: elaboracin propia.

comportamiento de la produccion de celulasas

9
8
7
6
X

3
2
1
0
20

30

40

50

60

70

80

90

100

110

tiempo (h)

Figura 4. 5 Variacin de la formacin de biomasa (X), consumo de sustrato

(S) y formacin del producto (P)
Fuente: elaboracin propia.

19

En la figura 4.5 podemos ver que la formacin de biomasa (X) es

ascendente, ya que a mayor tiempo de fermentacin en las
condiciones adecuadas de sustrato y ambiente se producen mayor
cantidad de enzimas. Sobre el consumo de sustrato (S) podemos
observar que tiene una tendencia descendente, mas no es la ms
adecuada ya que se produjo una contaminacin de las muestras,
vemos que para el primer da es menor que para el segundo y
tercero, debiendo haber sido mayor para ambos casos. En el caso de
produccin de enzimas (P) podemos verificar que no se dio el
adecuado desarrollo de las mismas, puesto que solo se ve un mayor
crecimiento en el tiempo de 48 horas, en este comportamiento debi
ser en aumento segn los das pasaban, por lo cual se debe tener
mayor cuidado en la siembra del hongo cuidando de la
contaminacin.

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v. conclusiones
1. La cuantificacin de biomasa seca en la produccin de celulasas para
los tiempos de 24, 48, 72 y 96 horas fue de 0.011, 0.014, 0.021,
0.081 mg/ cada 60 mL de muestra.
2. El consumo de sustrato (S) obtenido de las muestras de produccin
de celulasas, son 6.86, 7.46, 7.11, 6.27 mg/mL para las 24, 48, 72 y
96 horas respectivamente.
3. Los resultados obtenidos de la formacin de las enzimas celulasas
fueron: para un tiempo de 24, 48, 72 y 96 horas le corresponde 3,36;
3,84; 3,16 y 3,18 de celulasa expresada en UI/mL. Como se puede
observar en la figura 4.4 la formacin de productos tiende a subir

19

hasta alcanzar su punto mximo que es 3,84 para luego descender.

MSc. Norma Gamarra

Mendoza

Biotecnologia

vi. BIBLIOGRAFA
1. Villena, G. (2003). Biopelculas de Aspergillus niger para la produccin
de celulasas: algunos aspectos estructurales y fisiolgicos. Disponible
en: http://www.scielo.org.pe/pdf/rpb/v10n1/v10n1a09.pdf
2. Agustn Lpez, Mariano Garca Garibay, Rodolfo Quintero Ramrez,
Agustn Lpez-Mungua Canales (2002) Biotecnologa alimentaria,
Editorial Limusa.
3. Villena Gretty K. y Gutirrez-Correa Marcel (2003), Biopelculas de
Aspergillus niger para la produccin de celulasas: algunos aspectos
estructurales y fisiolgicos, Facultad de Ciencias Biolgicas UNMSM,
Laboratorio de Micologa y Biotecnologa, Universidad Nacional
Agraria La Molina, Revista Peruana Biologa (10) Lima Per
4. Izarra, Myriam L.; Santayana, Mnica L.; Villena, Gretty K.; GutirrezCorrea, Marcel (2010), Influencia de la concentracin de inculo en la
produccin de celulasa y xilanasa por Aspergillus niger, Revista
Colombiana de Biotecnologa, vol. XII, nm. 2, diciembre, 2010, pp.

19

139-150, Universidad Nacional de Colombia, Bogot, Colombia.

5. Sanchez gutierrez iraiz (2001)

MSc. Norma Gamarra

Mendoza

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vii. ANEXOS
Hallando la concentracin de glucosa utilizando la ecuacin de regresin
BPF

A BPF =0,464 x0,0543

A BPF =0,464 x0,0543

0,134=0,464 x0,0543

0,187=0,464 x0,0543

24

x BPF =
24

0,134+ 0,0543
(30)
0,464

x BPF =12,17
24

48

x BPF =
48

0,187+ 0,0543
(30)
0,464

x BPF =15,60
48

A BPF =0,464 x0,0543

A BPF =0,464 x0,0543

0,112=0,464 x0,0543

0,129=0,464 x0,0543

72

x BPF =
72

0,112+0,0543
( 30)
0,464

96

x BPF =
96

0,129+0,0543
( 30)
0,464

BM

A BM =0,464 x0,0543

A BM =0,464 x0,0543

0,077=0,464 x0,0543

0,105=0,464 x0,0543

24

x BM =
24

0,077+0,0543
(30)
0,464

x BM =8,49
24

19

48

x BM =
48

0,105+0,0543
(30)
0,464

x BM =10,29
48

MSc. Norma Gamarra

Mendoza

Biotecnologia

A BM =0,464 x 0,0543

A BM =0,464 x0,0543

0,094=0,464 x0,0543

0,098=0,464 x0,0543

96

72

x BM =
72

0,094+0,0543
(30)
0,464

x BM =
96

0,098+0,0543
(30)
0,464

x BM =9,85
96

M:

A M =0,464 x0,0543

A M =0,464 x0,0543

0,169=0,464 x0,0543

0,184=0,464 x0,0543

24

xM =
24

0,169+0,0543
( 30)
0,464

xM =
48

0,184+0,0543
(30)
0,464

A M =0,464 x0,0543

A M =0,464 x0,0543

0,192=0,464 x 0,0543

0,180=0,464 x0,0543

72

xM =
72

0,192+0,0543
(30)
0,464

96

xM =
96

0,180+0,0543
(30)
0,464

Hallando la concentracin de glucosa

[ Glucosa ] 24=[ M ]24 [ BM ] 24+ [ BPF ] 24

[ Glucosa ] 48=[ M ] 48[ BM ] 48+ [ BPF ] 48

[ Glucosa ] 24=14,448,49+12,17

[ Glucosa ] 48=15,4110,29+15,60

[ Glucosa ] 72 =[ M ]72[ BM ] 72+ [ BPF ] 72

[ Glucosa ] 96=[ M ] 96[ BM ] 96+ [ BPF ] 96

[ Glucosa ] 72=15,929,59+10,75

[ Glucosa
96 =15,159,85+11,85
MSc. ]Norma
Gamarra

19

48

Mendoza

[ Glucosa ] 96=17,15

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Hallando la actividad enzimtica (APF)

[ celulasa ]U /mL =[ 18,12 ]24 0,1852

24

[ celulasa ]UI /mL =3,36

[ celulasa ]U /mL =[ 20,72 ] 48 0,1852

48

[ celulasa ]UI /mL =3,84

24

48

[ celulasa ]U /mL =[ 17,08 ]72 0,1852

72

[ celulasa ]UI /mL =3,16

72

19

[ celulasa ]U /mL =[ 17,15 ] 96 0,1852

96

[ celulasa ]U I / mL =3,18
96

MSc. Norma Gamarra

Mendoza