113402-Bioqumica para Enfermagem

ROTEIROS DAS AULAS PRTICAS

REAES DE CARACTERIZAO DOS GLICDIOS
Os glicdios podem ser definidos como poliidroxialdedos ou poliidroxicetonas, seus
polmeros, seus produtos de reduo, oxidao ou seus produtos de substituio. Eles so as
molculas biolgicas mais abundantes na natureza.
Para um completo entendimento de muitas reaes que se processam com os glicdios
nos seres vivos, indispensvel o conhecimento de suas estruturas, suas reaes e de que maneira
eles so identificados no laboratrio. Apresentaremos a seguir uma srie de reaes clssicas,
geralmente reaes coloridas que apesar do advento da tcnica de cromatografia ainda so
utilizadas para identificao dos diversos tipos de glicdios.
I - IDENTIFICAO DE GLICDIOS
1-Reao com reagente de Molish (soluo alcolica de - naftol a 5% )
Sob a ao desidratante do cido sulfrico concentrado, os glicdios do origem ao
furfural ou aos seus derivados. Estas substncias condensam-se com o - naftol produzindo um
composto de cor violeta na interfase. Se um oligossacardeo ou polissacardeo estiver presente,
eles so primeiro hidrolisados aos seus monossacardeos constituintes os quais ento so
desidratados. As pentoses do o furfural e as hexoses o hidroximetilfurfural.
O teste de Molisch considerado uma reao geral para glicdios, quer livres, quer
combinados, embora no sendo especfica pois se processa com outras substncias.
Preparar a seguinte srie de tubos, contendo:
Tubo A 1 mL de gua destilada
Tubo B 1 mL de soluo de glicose 1%
Tubo C 1 mL de soluo de sacarose 1%
Tubo D 1 mL de soluo de amido 1%
Colocar em cada tubo duas gotas do reagente de Molish. Agitar bem
Adicionar cuidadosamente sem agitao, em cada tubo, 1 mL de cido sulfrico concentrado,
inclinando o tubo e deixando o cido escorrer lentamente pelas paredes do mesmo. Deixar o tubo
em repouso na estante por 5 min. e observar a formao de um anel de cor violeta na interfase dos
lquidos. Interprete os resultados.

2. Reao com iodo

O iodo presente no reagente de lugol forma, com o amido, um complexo de cor azul e
com o glicognio , um complexo de cor vermelha. Celulose, mono e dissacardeos no produzem
colorao com o iodo.
Preparar a seguinte srie de tubos, contendo:
Tubo A 1 mL de gua destilada
Tubo B 1 mL de soluo de glicose 1%
Tubo C 1 mL de soluo de sacarose 1%
Tubo D 1 mL de soluo de amido 1%
Acrescentar, a cada tubo, duas gotas de reagente de lugol, misturar e observar. Aquecer
ligeiramente no banho-maria o tubo D at mudana da colorao. Resfriar em gua corrente e
observar novamente. Explicar o ocorrido.
II - IDENTIFICAO DE GLICDIOS REDUTORES
Os glicdios que possuem grupamento glicosdico livre (hidroxila anomrica livre), so
capazes de reduzir ons de Cu++, Ag+ e Bi++.

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A reduo do Cu++ conseguida em meio alcalino, a quente:

Cu++

Cu+

Cu2O + H2O
Vermelho ou
amarelo
Mas o Cu++ tambm reage com o meio alcalino:
quente

Cu++

alcalino

Cu (OH)2
alcalino

CuO
preto

Para evitar que esta reao mascare o teste de presena de glicdio redutor, o on Cu++
mantido em soluo alcalina sob a forma de complexo. H vrios reagentes base de Cu++,
(como Fehling , Benedict) que diferem em relao ao solubilizador, ao alcalinizante ou ao
reagente para o Cu++ formado.
Reativo de Benedict. (Contm citrato de sdio, carbonato de sdio anidro e sulfato de cobre).
Reao de Benedict
Preparar a seguinte srie de tubos, contendo:
Tubo A 1 mL de gua destilada
Tubo B 1 mL de soluo de glicose 1%
Tubo C 1 mL de soluo de frutose 1%
Tubo D 1 mL de soluo de amido 1%
Acrescente a cada um deles 1 mL do reagente de Benedict. Aquecer 3 minutos, em banho-maria
fervente. Observar. Explicar.
DIFERENCIAO ENTRE ALDOSES E CETOSES
Reao de Seliwanoff - O reagente de Seliwanoff contm resorcinol diludo em cido clordrico.
Este teste permite diferenciar aldoses e cetoses, que sob a ao desidratante do cido clordrico
so transformadas em derivados de furfural, que se condensam com o resorcinol formando um
composto. A reao com cetose rpida e mais intensa pela facilidade de formao do derivado
furfural. A sacarose d reao positiva: Explicar este fato.
Preparar os seguintes tubos de ensaio:
Tubo A 3 mLde Seliwanoff + 5 gotas de gua destilada
Tubo B 3 mL de Seliwanoff + 5 gotas de soluo de frutose 1%
Tubo C 3 mL de Seliwanoff + 5 gotas de soluo de glicose 1%
Tubo D 3 mL de Seliwanoff + 5 gotas de soluo de sacarose 1%
Colocar em banho-maria 100C. Observar de trs em trs minutos, durante aproximadamente 10
minutos. Explicar.
IV - HIDRLISE DE DI E POLISSACARDEOS
A sacarose um dissacardeo encontrado nas plantas (acar comum) e formada por uma
unidade de D - glicose e uma de D - frutose com uma ligao do tipo - 1,2 O-glicosdica.
O amido o material de reserva celular dos vegetais. Contm dois tipos de polmeros da glicose,
a amilose e a amilopectina. O primeiro consiste de cadeias longas, no ramificadas de unidades
de D-glicose conectadas por ligaes -1,4. A amilopectina altamente ramificada. As
ligaes glicosdicas unindo os resduos de glicose nas cadeias da amilopectina so -1,4, mas
os pontos de ramificao, so ligaes -1,6.
Hidrlise da sacarose
Preparar os seguintes tubos de ensaio:

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Tubo A 2 mL de soluo de sacarose 1% + 3 gotas de cido sulfrico concentrado

Tubo B 2 mL de soluo de sacarose 1% + 3 gotas de gua destilada
Colocar em banho-maria 100C durante trs minutos. Adicionar a cada tubo 3 mL do reativo
de Benedict . Agitar. Recolocar no banho-maria durante trs minutos. Retirar. Explicar.

REAES DE CARACTERIZAO DOS LIPDIOS

Os lipdios biolgicos constituem um grupo de compostos que, apesar de quimicamente
diferentes entre si, exibem a sua insolubilidade em gua como caracterstica definidora e comum
a todos.
Os leos e gorduras, utilizados como formas de armazenamento de energia nos
organismos vivos, so compostos do ponto de vista qumico, altamente reduzidos e derivados dos
cidos graxos. Os lipdios mais simples constitudos de cidos graxos so os triacilgliceris. A
maioria das gorduras naturais, como aquelas dos leos vegetais, dos laticnios e a gordura animal,
so misturas complexas de triacilgliceris simples e mistos. Elas contm uma grande variedade de
cidos graxos que diferem no comprimento da cadeia carbnica e no grau de saturao da mesma.
Os leos vegetais, como o leo de oliva, de canola ou de milho so compostos principalmente de
triacilgliceris constitudos por cidos graxos insaturados, por isso, so lquidos temperatura
ambiente. Eles so convertidos industrialmente em gorduras slidas por hidrogenao cataltica, a
qual reduz, para ligaes simples, algumas de suas ligaes duplas. Os triacilgliceris contendo
apenas cidos graxos saturados, como a triestearina, o maior componente da gordura bovina, so
slidos brancos e gordurosos temperatura ambiente.
O objetivo desta aula prtica analisar as propriedades fsicas e qumicas dos cidos
graxos e triacilgliceris.
A - Hidrlise alcalina dos triacilgliceris
Colocar em um tubo de ensaio de grosso calibre (Tubo A), 10g de manteiga, 10mL de
soluo alcolica de hidrxido de potssio 5%. Aquecer em banho-maria 100C durante 30
minutos. (Cuidado com a chama do Bico de Bunsen). Esquematizar e nomear a reao qumica
ocorrida. No descartar a soluo, ela servir para o experimento seguinte.
B- Separao dos cidos graxos
Adicionar ao tubo da reao A, 1 mL de cido clordrico concentrado, gota a gota, sob
agitao. Colocar novamente em banho-maria e deixar at separao de uma camada oleosa na
superfcie do lquido. Esfriar os tubos em gua corrente e a seguir em banho de gelo. Observar.
Isolar os produtos obtidos, descartando na pia o lquido do tubo. Reservar os produtos obtidos
paras as experincias seguintes.

C- Solubilidade nos solventes

Retirar com basto uma alquota dos cidos graxos obtidos na experincia B e distribuir
em trs tubos de ensaio:
Observao: trabalhe longe da chama do Bico de Bunsen
Tubo A cidos graxos + 1mL de ter
Tubo B cidos graxos + 1mL de gua destilada
Tubo C cidos graxos + 1mL de lcool etlico
Agitar. Observar e explicar.

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D - Formao de sabes por redissoluo dos cidos graxos

Adicionar ao tubo da experincia B, 10 mL de gua deslada e 6 mL de soluo de KOH
0,5 N. Colocar no banho-maria 100C durante 5 minutos. Agitar e observar. Guardar os
sabes para a experincia seguinte.
E - Separao dos sabo por salificao
Colocar numa proveta 3 mL da soluo de sabes da experincia D. Acrescentar gua
destilada at 20 mL e adicionar cloreto de sdio em espcie agitando com o basto at saturao.
Observar e explicar.
F - Formao de sabes insolveis
Preparar dois tubos de ensaio, contendo:
Tubo A 2 mL da soluo de sabo obtido na experincia D + 3 gotas da soluo de
cloreto de clcio 5%
Tubo B 2 mL da soluo de sabo obtido na experincia D + 3 gotas de soluo de
acetato de chumbo 5%. Observar e equacionar as reaes.

DETERMINAO QUALITATIVA DOS AMINOCIDOS

Os aminocidos so as unidades estruturais bsicas das protenas. Um - aminocido
constitudo de um grupamento amina, uma carboxila, um tomo de hidrognio e um
grupamento R diferenciado, todos eles ligados a um tomo de carbono . Sendo portanto,
compostos orgnicos de funo mista. O grupamento R referido como uma cadeia lateral. Vinte
tipos de cadeias laterais, variando em tamanho, forma, carga, capacidade de formao de pontes
de hidrognio e reatividade qumica, so comumente encontrados em protenas.Todas as
protenas em todas as espcies, de bactrias a seres humanos, so construdas a partir do mesmo
conjunto de 20 aminocidos. A notvel gama de funes exercidas por elas resulta da diversidade
e da versatilidade desses 20 tipos de precursores.
O objetivo desta aula prtica a determinao qualitativa de aminocidos bem como a
pesquisa da ligao peptdica.
PESQUISA DA LIGAO PEPTDICA
Reao do Biureto
A reao do Biureto ocorre com substncias que contm no mnimo duas ligaes
peptdicas ( tripeptdeo). Portanto, essa reao positiva para todas as protenas, graas s suas
ligaes peptdicas.
Reagente do Biureto (Contm sulfato cprico, tartarato de sdio e potssio e hidrxido de sdio)
Preparar os seguintes tubos de ensaio, contendo:
Tubo A 1 mL de soluo de ovo albumina 2% + 1mL do reagente de Biureto
Tubo B 1 mL de soluo de gelatina 1% + 1 mL do reagente de Biureto
Tubo C 1 mL de gua destilada + 1 mL do reagente de Biureto
Agitar e observar. Qual a aplicao importante dessa reao?
REAES DE PRECIPITAO DE PROTENAS
1-Efeito de cidos fortes
Colocar em um tubo de ensaio, 1 mL de cido ntrico concentrado e adicionar cuidadosamente,
pelas paredes do tubo, 2 mL de soluo de ovo albumina 2%. Observar e explicar o aparecimento
de um precipitado branco.

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2- Precipitao com sais de metais

Preparar os seguintes tubos de ensaio, contendo:
Tubo A 2 mL de soluo de ovo albumina 2% + 3 gotas de soluo de cloreto de
mercrio 5%
Tubo B 2 mL de soluo de ovo albumina 2% + 3 gotas de soluo de acetato de
chumbo 10%
Observar e explicar.
REAES DE AMINOCIDOS
Reao da ninidrina (hidrato de tricetoidrindeno)
Esta reao ocorre devido a presena do amino grupo livre e possibilita inclusive a determinao
quantitativa do aminocido.
Preparar a seguinte srie de tubos, contendo:
Tubo A 1 mL de gua destilada + 0,5 mL de soluo de ninidrina 0,1%
Tubo B 1 mL de soluo de ovo albumina 2% + 0,5 mL de soluo de ninidrina 0,1%
Aquecer em banho maria 100C durante 3 minutos. Observar e explicar os resultados.
Reao Xantoproteca
Esta reao ocorre devido ao grupo fenil, portanto identifica os aminocidos tirosina e triptofano
e fenilalanina.
Colocar num tubo de ensaio, 1 mL de soluo de ovo albumina 2% + 10 gotas de cido ntrico
concentrado. Ferver. Acrescentar 4 mL de soluo de hidrxido de sdio 2N. Observar e
equacionar a reao.
Reao de Millon
Esta reao ocorre devido ao grupo hidroxifenil da tirosina.
Colocar num tubo de ensaio, 1 mL de ovo albumina 2% + 5 gotas do reativo de Millon
(mercrio + cido ntrico concentrado). Aquecer. Observar e explicar a reao.
Reao do grupo sulfidrila
Esta reao determina a presena dos aminocidos cistina e cistena.
Colocar num tubo de ensaio uma pequena quantidade de cabelo + 5 gotas de soluo de acetato
de chumbo 10% + 2 mL de soluo de hidrxido de sdio 50%. Aquecer 5 minutos , em
banho - maria 100C. Observar e explicar o resultado obtido.

PROPRIEDADES DA UREASE
A urease uma enzima altamente especfica para a uria. Nesta prtica utilizaremos a
urease para estudar as propriedades das enzimas como por exemplo: atividade, especificidade,
inibio, desnaturao e natureza da estrutura enzimtica.
Como j foi discutido, com exceo das enzimas de RNA ou ribozimas, todas as enzimas
so protenas. Por isso, a primeira reao a ser realizada nesta prtica ser para verificar a
estrutura protica da urease.
A - Reao da urease com o Biureto
Preparar a seguinte srie de tubos, contendo:
Tubo A 1 mL do reativo de Biureto + 3 gotas de soluo de urease
Tubo B 1 mL do reativo de Biureto + 3 gotas de gua destilada
Observar e explicar o resultado.

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B - Teste da atividade
Preparar a seguinte srie de tubos, contendo:
Tubo A 1 mL do substrato (soluo de uria 0,4 M pH 7,0 contendo o indicador vermelho de
fenol) + 3 gotas da soluo de urease
Tubo B 1 mL do substrato + 3 gotas de gua destilada
Misturar levemente. Aguardar 2 min. Observar e equacionar a reao.
C - Teste da especificidade
As enzimas so especficas pelos seus substratos. Especificidade a habilidade da enzima de
discriminar entre dois substratos competidores. Para demonstrar a especificidade da urease ser
utilizadas uma substncia com estrutura similar a uria: a tiouria.
Colocar em um tubo de ensaio, 1 mL da soluo de tiouria 0,4 M pH 7,0 (contendo vermelho de
fenol como indicador) + 3 gotas da soluo de urease.
Misturar levemente. Aguardar 2 min. Observar e comparar com a reao B ( teste da
atividade). Explicar.
Desnaturao pelo calor
A maneira de demonstrar a importncia da estrutura especfica das protenas para a funo
biolgica que exercem, alterar esta estrutura e determinar o efeito que isto causa nesta funo.
Uma alterao extrema a desnaturao. Desnaturao a perda total da estrutura tridimensional
da protena.
Colocar num tubo de ensaio 1 mL de gua destilada + 3 gotas da soluo de urease. Ferver
usando a chama do bico de Bunsen, durante 2 minutos.
Adicionar em outro tubo de ensaio 1 mL da soluo do substrato (soluo de uria 0,4 M pH 7,0
contendo o indicador vermelho de fenol) e acrescentar 0,5 mL da soluo de urease fervida.
Misturar levemente. Aguardar 2 min. Observar e comparar com a reao B. Explicar
Inibio por sais de mercrio
Os grupos sulfidrilas (-SH) so essenciais para a atividade enzimtica da urease. Eles podem
manter ou talvez constituir parte do centro ativo da enzima.
Para verificar a inibio da atividade da urease pelo cloreto de mercrio, preparar a seguinte
srie de tubos, contendo:
Tubo A 3 gotas de soluo de urease + 1 mL de gua destilada
Tubo B 3 gotas de soluo de urease + 1 mL de gua destilada + 5 gotas da soluo de
cloreto de mercrio 5 %
Misturar levemente e adicionar 1 mL do substrato (sol. de uria 0,4 M pH 7,0 contendo o
indicador vermelho de fenol) a cada um dos tubos. Observar e propor uma equao para a
inibio.

NORMAS PARA ELABORAO DO RELATRIO

O relatrio deve conter os seguintes tpicos:
TTULO- o mesmo indicado no roteiro da prtica
RESUMO- um breve relato de tudo que foi desenvolvido no experimento,
inclusive os resultados obtidos. No deve conter mais que 08
(oito) linhas.
INTRODUO- neste tpico deve constar o fundamento terico necessrio

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para o bom entendimento da experincia realizada, bem

como dos resultados e discusso. Pode ser compilado de
livros ou manuais existentes na literatura. Seja objetivo.
MATERIAL E MTODOS - descrio da parte experimental, destacando
os materiais e equipamentos usados.
RESULTADOS- os resultados devem ser apresentados de maneira sucinta e
clara. Tabelas, figuras e reaes podem ser usadas para
melhor compreenso dos dados.
DISCUSSO - O propsito da discusso interpretar os resultados e
relat-los com base no conhecimento terico existente.
Informaes dadas em outra parte do texto podem ser
citadas mas no repetidas em detalhes na discusso.
CONCLUSES- Esta parte do relatrio deve sumarizar as principais concluses obtidas no
decurso do trabalho realizado.
REFERNCIAS - livros, artigos, websites consultados, manuais utilizados na elaborao do
relatrio devem ser relacionados (utilizar NBR 6023 - ago 2002, da ABNT).