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los alimentos.
RESUMEN
Esta investigacin se divide en dos partes; la primera consisti en el
aislamiento de coliformes fecales encontradas en los alimentos, y la segunda
tuvo como objetivo probar la resistencia de los coliformes a algunos antibiticos
para gram negativos.
Para llevar a cabo la primera etapa se realizaron tres muestreos de cuatro
alimentos en los que se elaboraron pruebas de aislamiento, primero de
coliformes totales, despus de coliformes fecales y posteriormente, de stos se
obtuvieron 10 cepas de la bacteria E. coli y 4 cepas de Klebsiella.
En la segunda etapa, de las cepas E. coli y Klebsiella obtenidas, se realizaron
pruebas de resistencia a antibiticos con un multidisco de 12 gram negativos.
El 100% de las cepas presentaron resistencia a la ampicilina y a la cefalotina y
en menor cantidad a otros antibiticos. A las cepas resistentes se les aplic la
prueba de resistencia con diferentes concentraciones (50, 10, 150, 250 y 500
g) de ampicilina, obteniendo nuevamente resistencia total por parte de E. coli;
sin embargo slo una cepa de Klibsiella present resistencia a dos
concentraciones (250 y 500 g).
Esta resistencia se debe a distintos factores como son: 1) el uso indiscriminado
de antibiticos, 2) las aguas contaminadas por los desechos de animales
engordados con antibiticos, dichas aguas son utilizadas para regar las
hortalizas de las cuales provienen los alimentos vendidos a las afueras de
Colegio de Ciencias y Humanidades Plantel Naucalpan.
4. INTRODUCCIN
4.1. Marco terico.
4.1.1. Bacterias Gram Negativas
Los tipos bacterianos se dividen en Gram positivas (cocos) y Gram negativas
(bacilos). Las bacterias Gram negativas son aquellas que no se tien de azul
oscuro o violeta por la tincin de Gram, pero s lo hacen de un color rosado
tenue, por lo que, se denominan Gram negativas. Esto es debido a que, en
medio de la membrana se localiza un espacio llamado periplsmico, relleno de
una sustancia denominada periplasma, la cual contiene enzimas importantes
para la nutricin, que es donde esretenida la safranina, que le da el
caracterstico
color
rosado,(http://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_Gram_negativa, 2014).
4.1.2. Coliformes Totales
La denominacin genrica coliformes designa a un grupo de especies
bacterianas que tienen ciertas caractersticas bioqumicas en comn. Las
bacterias de este gnero se encuentran principalmente en el intestino de los
humanos y de los animales de sangre caliente, es decir, homeotermos, pero
tambin estn ampliamente distribuidas en la naturaleza, existiendo muchos
coliformes de vida libre, especialmente en suelos, semillas y vegetales (Merino
y Lssch,2014; http://es.wikipedia.org/wiki/Coliforme, 2013).
Como mencionamos anteriormente, debido a que una gran cantidad de
coliformes que se encuentran en el ambiente son de origen fecal; producto de
la contaminacin por heces fecales de humanos y de animales, por tanto son
indicadoras del grado de contaminacin del agua y los alimentos. (Merino y
Lssch,2014; http://es.wikipedia.org/wiki/Coliforme, 2013).
Bacteria
Phyllum: Proteobacteria
Clase:
Gamma Proteobacteria
Orden:
Enterobacteriales
Familia:
Enterobacteriaceae
es.wikipedia.org/wiki/Coliforme
Escherichia
(2013);
Klebsiella
Enterobacter
Citrobacter
Gal,
2010;Merino
Lssch, 2014.
4.1.3. Enterobacterias
Las enterobacterias forman parte de la familia
Enterobacteriaceae, bacterias Gram negativas que
contiene ms de 30 gneros (tabla 1) y ms de
100 especies. Los miembros de esta familia
presentan forma baciliar, recta o curva, con una
anchura
que
anchocolonizan
mucosas,
no
excede
los
habitualmente
especialmente
las
m de
0,5
las
diferentes
del
tracto
tambin
se
encuentren
organismos
patgenos.
(http://microbiologia2a.blogspot.mx/2013/04/klebsiella-
fecal
(Goez,
Vzquez
Pea,
1999;http://es.wikipedia.org/?title=Escherichia_coli, 2014)
La E. coli se transmite a los seres humanos por medio del
consumo de
que
se
fundamental
tienen
en
la
un
papel
resistencia
la
trasmisin
otras
4.3. Problema
En la actualidad algunos antibiticos son utilizados de manera indiscriminada
por dos causas principales: la automedicacin para combatir una infeccin de
tipo gastrointestinal, y el suministro de estos medicamentos para la engorda de
animales en las granjas. Los antibiticos no son retenidos por mucho tiempo en
el cuerpo de personas y animales, sino que son desechados en las heces
fecales, y estas a su vez, vertidas a las aguas residuales las cuales sirven para
riego en los cultivos de frutas y hortalizas.
Debemos tomar en cuenta que la mitad del contenido de los excrementos
contiene coliformes fecales, bacterias del coln que al estar en contacto con los
antibiticos presentes en el ambiente, desarrollarn resistencia a estos.
La problemtica radica en que las frutas y hortalizas regadas con estas aguas
residuales y que contengan coliformes resistentes lleguen a los mercados
locales, en nuestro caso, frutas y hortalizas compradas en el mercado o en el
supermercado, con las cuales se preparan los alimentos que se venden en los
puestos a las afueras de CCH-Naucalpan, y que estos contengan coliformes
resistentes. Que si se ingieren en ciertas cantidades por los alumnos pueden
provocar una infeccin, que al ser tratada con antibiticos, prdra ser ineficaz o
muy lento, debido a la resistencia que presentan frente a ciertos antibiticos,
por lo que, cantidad que antes se utilizaba de este medicamento, no surtira
ningn efecto contra estas bacterias resistentes, y se requerirn de mayores
concentraciones para eliminarlas y el tiempo para matarlas sera mayor.
Por lo que es de nuestro inters aislar coliformes fecales antibiticos en
alimentos que se consumen a las afueras de Colegio de Ciencias y
Humanidades Plantel Naucalpan y determinar su resistencia frente a ciertos
antibiticos.
5. DESARROLLO
El material que se utiliz para el proyecto de investigacin fue el siguiente:
Cristalera.
Equipo
-Agitadores
-Autoclave
-Cajas Petri
-Basculas
-Campanas Durham
-Incubadora
-Matraces
-Parrilla
-Morteros
-Estufa
-Pipeta
-Probeta
-Tubos de ensaye
Material
-Asas
bacteriolgicas
-Bolsas
-Cubre bocas
-Cuchillo
-Esptulas
-Encendedor
Medios de cultivo.
-Agua Peptonada
-Caldo Lauril
-Caldo Bilis Verde Brillante
-Agar EMB
-Agar Mac Conkey
-Agar Muller Hilton
-Agar Nutritivo
-Hisopos
-Guantes
-Gradillas
-Mecheros
-Pinzas
-Tapones
11
se procedi a su
Klebsiellasp
Klebsiellasp
12
Antibitico
Concentracin
Antibitico
Concentracin
Amikacina (AK)
30
Gentamicina (GE)
10
Ampicilina (AM)
10
Netilmicina (NET)
30
Carbenicilina (CB)
100
Nitrofurantona (NF)
300
Cefalotina (CF)
30
Pefloxacina (PEF)
Cefotaxima (CTX)
30
Trimetoprim- (SXT)
25
Sulfametoxazol
Ceftriaxona (CROM)
30
Cloranfenicol (CL)
30
13
6. RESULTADOS
Los resultados obtenidos fueron los siguientes.
pasar
48
horas
una
temperatura 37 C se observ un
crecimiento
bacteriano
que
nos
formacin
de
una
14
Tubos negativos.
Caldo Lauril
26
23
Brillante
15
16
Tabla 5.Rresultados que muestran los promedios de las medidas en centmetros (cm)
de los halos de inhibicin a 12 antibiticos para Gram-negativas
AK
AM
CB
CF CTX CRO CL
GE
NET NF
PEF SXT
1.91 R
0.58 R
2.17
2.51
Klebsiellasp 2.24 R
1.44 R
2.16
2.42
E. coli
17
18
Tabla 6. Resultados que muestran los promedios de las medidas (cm) de los halos de
inhibicin en las concentraciones de ampicilina.
No. de Muestra y
Concentracin de ampicilina en
g (microgramos)
cm (centmetros)
35.Klebsiella
250
1.2
35 Klebsiella
500
2.4
Gnero
se
menciono
en
el
marco
terico,
son
unidades
de
ADN
21
8. CONCLUSIONES
Podemos concluir que los alimentos adquiridos por los alumnos en los puestos
ubicados a las afueras del CCH-Naucalpan, presentan un alto grado de
contaminacin por coliformes fecales, siendo las principales coliformes fecales,
E.coli y Klebsiella sp.
Estas cepas presentaron resistencia a dos antibiticos; Ampicilina y Cefalotina.
Esta resistencia pudo ser desarrollada por el uso indiscriminado de estos,
producto de la
9. FUENTES DE INFORMACIN
Armora, E. y Gmes, I. (2012). Qu es Escherichia coli?: Todas los detalles
sobre la bacteria de los pepinoshttp://www.abc.es/20110531/sociedad/abciescherichia-coli-pepinos-201105301450 Consultada 06/03/14; 18:34 hrs.
Bioxon. (1986). Manual Bioxon., medios de cultivos reactivo de diagnstico.
87pp.
Cabrera, C., Bonilla, N.,Tornero, M. y Castro, A. (2007). Monitoreo de
coliformes fecales y huevos de helmintos en agua y sedimentos (lodos) de la
presa Manuel vila Camacho. Benemrita Universidad Autnoma de
Pueblawww.uaemex.mx/Red_Ambientales/docs/congresos/...
Escherichia
coli
ycoliformes
totales
usando
un
mismo
sustrato
Gram
negativa
Enterobacteriaceae
Escherichia
coli.
(2014).
23
Nordeste,
Facultad
de
Medicina-Microbiologa
Inmunologa.
http://ecaths1.s3.amazonaws.com/catmicromed/APUNTE%20Enterobacterias.p
df Consultada 14/mar/2014; 15:30 hrs.
Norma
Oficial
Mexicana.
NOM-110-SSA1-1994.
Bienes
servicios.
Oficial
Mexicana.
NOM-112-SSA1-1994.
Bienes
servicios.
(2007).http://www.aemps.gob-esp.pdfConsulta
el
24