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Se obtienen por puncin quirrgica, en condicin de asepsia, con tcnicas que varan
segn la ubicacin del lquido. Conviene recoger una porcin en 3 tubos o recipientes estriles que
contengan uno de ellos citrato de sodio para evitar una probable coagulacin (til para el examen
fsico e inmunolgico), el segundo tubo con medio enriquecido de cultivo para transporte
(bacteriolgico) y el tercero con solucin salina (qumico y microscpico).
Las tcnicas de obtencin de la muestra varan de acuerdo ala zona o cavidad en que se
requiera el estudio.
EXUDADO
TRASUDADO
ASPECTO
TRANSPARENTE
TRANSPARENTE
CONSISTENCIA
SERO-FIBRINOSA
LIQUIDA
COLOR
VARIABLE
INCOLORO
OLOR
INODORO
INODORO
COAGULACIN
POSITIVA
NEGATIVA
pH
6.5
7.5
DENSIDAD
1.020 - 1.030
1.006 - 1.015
GLUCOSA
NEGATIVO
PROTENAS
>3g%
<3g%
PRUEBA DE RIVALTA
POSITIVA
NEGATIVA
LPIDOS
1 4.5 g %
NEGATIVO
CALCIO
LDH
PRCTICA No. 6
ANALISIS DE EXUDADOS.
5, 11, 12
EXAMEN FISICO
A)
B)
C)
D)
E)
F)
Aspecto y color
Olor
Consistencia
Coagulacin
pH
Densidad
MATERIAL, EQUIPO E INSTRUMENTACIN
portaobjetos
INSTRU
MENTACIN
Refractmetro o densitmetro
A) ASPECTO Y COLOR
El aspecto de los exudados depende de su origen y del agente etiolgico, pueden ser
serosos cuando contienen pocas clulas; serofibrinosos suelen coagular parcialmente por la
presencia de fibringeno procedente de la inflamacin. El aspecto se presenta sero-purulento
cuando contiene abundantes clulas y es francamente purulento cuando contiene pus pura, o
hemorrgicos con sangre.
El color vara de amarillo plido al pajizo cuando no contienen sangre. A veces presenta
coloracin amarillo verdosa debido a la presencia de Pseudomonas.
B) OLOR
Generalmente son inodoros o expiden un olor dulzn, excepto cuando son retenidos por
mucho tiempo y muestran alteraciones putrefactas. Los exudados ocasionados por grmenes
intestinales poseen en muchos casos un olor fecal debido a la necrosis de los tejidos.
C) CONSISTENCIA
Son fibrinosos o mucoide de fcil coagulacin por su riqueza en fibringeno.
D) COAGULACIN
Para su comprobacin se coloca una pequea cantidad de lquido una vez extrado, en un
tubo que no contenga anticoagulante y se observa si la coagulacin ocurre espontneamente.
Generalmente los exudados coagulan por la gran cantidad de protenas, si no produce
coagulacin se observan usualmente grandes flculos. No se presenta en las cavidades, si no
E) pH
El pH es alcalino o levemente cido y se determina con el potencimetro o papel pH.
F) DENSIDAD
Se mide usando los densitmetros comunes para orina, pero si la cantidad es pequea
con el uso del refractmetro. El peso especfico de los exudados es mayor que el de los
trasudados, varia entre 1.018 a 1.025 debido a la mayor cantidad de protenas existentes.
B)
Determinacin de glucosa
A)
Determinacin de cloruros
B)
Determinaciones de lpidos
C)
Determinacin de calcio
A)
1.
2.
pipetas lineales de 10 ml
TECNICA
1. Coloque en un tubo 5 ml de agua destilada agregar 0.01 ml de cido actico glacial y
completar con agua destilada a los 10 ml. Mezclar por inversin. Sobre esta solucin se dejan
caer unas gotas (5 a 10) del lquido y se observa cuidadosamente, la formacin de una
nubcula parecida al humo de un cigarrillo. La intensidad de turbidez se expresa en cruces.
VALOR DE REFERENCIA
En los exudados se forma una nubcula por lo que el resultado es positivo. Y en general en
los trasudados la prueba es negativa.
B)
DETERMINACIN DE GLUCOSA
La cuantificacin de glucosa en exudados se hace igual que en las tcnicas descritas para
suero y/o sangre completa. La glucosa en los exudados existe en cantidades muy bajas
comparado con la concentracin de glucosa sangunea, esta disminucin obedece a que la
gluclisis es continua por la accin de las bacterias y clulas; dependiendo hasta cierto punto de la
gravedad del proceso inflamatorio.
TCNICA
Revisar la tcnica disponible
.
B) DETERMINACIN DE CLORUROS
La determinacin de cloruros se hace igual que en el plasma o suero. La concentracin de
cloruros es menor en los exudados que en los trasudados pero muy parecida a la del plasma
sanguneo. El grado de disminucin depende del aumento de protenas, de acuerdo con las leyes
que regulan la concentracin de las sustancias fcilmente difusibles a travs de una membrana
semipermeable.
TCNICA
C)
TCNICA
Revisar las tcnicas disponibles
EXAMEN MICROSCPICO
1)
2)
INSTRUMENTACIN
Microscopio binocular con iluminacin Koheler
TCNICA.
A)
B)
INSTRUMENTACIN
Microscopio binocular con iluminacin Koheler
TINCION DE GRAM
1. Se prepara el extendido bacteriolgico y se deja secar al aire, se fija por calor suave sobre a la
flama de un mechero Bunsen y luego pasadas a travs de ella (debe tenerse cuidado para
evitar calor excesivo, que altere morfologa bacteriana).
2. La preparacin se coloca en un puente de tincin y se cubre con cristal violeta tiendo por un
minuto, se escurre.
3. Se cubre con lugol por un minuto, se escurre y se decolora con alcohol acetona en 2 tiempos de
15 segundos cada uno enjuagando entre ellos con agua de la llave (para no exceder la
decoloracin), se contratie con zafranina de 30 a 60 segundos. Se escurre se enjuaga con
agua, se deja secar y se observa al microscopio con objetivo de inmersin.
TINCION DE ZIEHL NEELSEN
1. Se efecta un extendido delgado del material a teir, sobre un portaobjetos NUEVO,
se deja
suavemente hasta emisin de vapores dejando actuar por 5 minutos calentando varias veces,
reponiendo el colorante que se pierda por evaporacin.
3. Se lava con agua, se decolora con alcohol acido hasta que el extendido tome un color rosa
plido, se neutraliza con agua de la llave.
4. Se cubre con azul de metileno por 1 minuto, se escurre, se lava con agua, se deja secar y se
observa con objetivo de inmersin.
TCNICA
1. Seguir los procedimientos habituales de cada tincin y observar las preparaciones con aceite
de inmersin en el microscopio.
2. Al trmino de la observacin asegrese de dejar limpios los objetivos y la platina. As como
colocar en posicin de transporte segura el microscopio.
PRCTICA No. 7
ANLISIS DE TRASUDADOS.
5, 9, 11, 12
EXAMEN FSICO
A)
B)
C)
D)
E)
F)
Aspecto y color
Olor
Consistencia
Coagulacin
pH
Densidad
portaobjetos
gradilla,
aplicadores de madera
papel Parafilm
INSTRU
MENTACIN
Refractmetro o densitmetro
A) COLOR Y ASPECTO.
El aspecto normal va de transparente a opaco y el color suele ser de verde a amarillo, a
menos que contenga sangre ser de tono rosado-rojizo.
Los trasudados en las ictericias se observan de color amarillo oscuro debido a la presencia
de bilirrubina. Los lquidos pleurales son quilosos (lechosos), al igual que los peritoneales.
Generalmente los trasudados recin extrados son transparentes, al enfriarse se tornan lechosos.
C) COAGULACIN
La coagulacin en los trasudados suele ser negativa o ligeramente positiva, y es mas lenta
que en los exudados. Excepto en caso de trasudados hemticos y quiloides, especialmente
cuando se debe a la presencia de tumores malignos.
De 1 2 ml de lquido recin extrado se colocan en un tubo de ensaye de 13 x 100 mm y se
observa con que rapidez coagula.
D) DENSIDAD
Por lo general la densidad de los trasudados es inferior a la de los exudados, varia de
1.006 1.015, esta prueba ayuda a su diferenciacin; sin embargo, los resultados estn sujetos a
considerables alteraciones, de acuerdo a la cantidad de protena presente, lo cual depende de la
permeabilidad de los capilares del cuerpo. As, los trasudados pleurales y peritoneales contienen
mayor cantidad de protenas y por consiguiente son de mayor densidad. En los trasudados
tumorales la densidad se eleva hasta 1.025. La tcnica empleada es la misma utilizada para
muestras de orina.
10
E) pH.
El pH de los trasudados es alcalino cerca de 7.4. y se determina con el potencimetro o
papel pH.
2.
Determinacin de glucosa
3.
Determinacin de cloruros
4.
Otras determinaciones
A) DETERMINACIN DE PROTEINAS
Esta determinacin es de gran valor para diferenciar los trasudados de los exudados. Se
realiza con los mismos mtodos que se usan para sangre y orina, efectundose diluciones
multiplicndose la cifra obtenida por el factor de dilucin y los resultados se expresan en g/ l.
En los trasudados pleurales y peritoneales, en caso de insuficiencia cardiaca congestiva,
cirrosis, nefrosis, pueden mostrar de 0.1 a 1 g/ 100 ml en la concentracin de protena. Si estos
trasudados permanecen varios das en la cavidad, el lquido se reabsorbe mas por lo que la
concentracin de protenas en estos casos esta elevada, llegndose a confundir algunas veces con
los exudados, (que a diferencia de los trasudados son de origen inflamatorio).
B) DETERMINACIN DE CLORUROS
La determinacin de cloruros se hace igual que en suero. El cloruro en los trasudados
suele ser mayor que el cloruro plasmtico, varia de 720 a 750 mg / 100 ml de NaCl. Esta diferencia
se debe al equilibrio Donan el cual depende de la mayor concentracin de protenas en el plasma
que en los trasudados.
C) OTRAS DETERMINACIONES
Se pueden hacer determinaciones de glucosa, creatinina, cido rico, urea, fsforo
inorgnico, y enzimas teniendo concentraciones iguales que en el suero, las tcnicas son las
mismas que se emplean para las determinaciones sricas. Se recomienda tambin electroforesis
de protenas. El contenido de Ca se encuentra mas elevado en los trasudados y exudados que en
el plasma debido a las protenas presentes los valores de Na, Mg, K se encuentran disminuidas
con respecto a los plasmticos.
La presencia de bilirrubinas se ve en los trasudados pleurales y peritoneales sin que exista
aumento en la sangre. Por lo general, no contienen lpidos pero el aspecto quiloso es debido a la
presencia de pequeas cantidades de lecitina y colesterol.
11
tumores
metastticos, pleurales o ascticos. Todas estas determinaciones son los mismos que se realizan
en sangre.
portaobjetos
cubreobjetos
gradilla, perilla
puente de tincin
aplicadores de madera
papel Parafilm
INSTRU
MENTACIN
Microscopio binocular con iluminacin Koheler
TCNICA.
OBSERVACION DIRECTA O EN FRESCO
12
aunque poseen
escasas clulas, una segunda opcin en concentrar por centrifugacin las muestras lquidas con
anticoagulante y del sedimento se hace una preparacin entre portaobjetos y cubreobjetos para la
observacin microscpica, primero se observa con objetivo seco dbil y luego con seco fuerte para
bsqueda de clulas mesoteliales, linfocitos, clulas tumorales, leucocitos, eritrocitos, etc.
OBSERVACION MICROSCPICA DE MUESTRAS TEIDAS
TINCIONES HEMATOLGICAS
La observacin de muestras teidas tiene dos propsitos fundamentales el primero: al
utilizar colorantes para extendidos sanguneos tratamos de distinguir procesos infecciosos agudos
(donde existe predominio de clulas polimorfonucleares) de los procesos infecciosos crnicos (el
predominio es de clulas mononucleares -tuberculosis, sfilis, tumores-), mientras que si se
distinguen eosinfilos predominantemente sugiere procesos alrgicos o parasitarios. Y el segundo
objetivo con las tinciones bacteriolgicas, es informar de manera rpida la poblacin bacteriana
persistente para instituir el protocolo de tratamiento lo ms pronto posible.
TCNICA
1. Depositar una pequea gota de material a estudiar sobre el portaobjeto limpio y seco.
2. Hacer un extendido delgado tipo hematolgico o bacteriolgico.
3. Dejar secar y teir con la tcnica de May Gruenwald Giemsa para efectuar la diferenciacin
celular.
4. Puede teirse con Wright, Papanicolaou, etc.
Es conveniente agregar citrato sdico a la muestra biolgica para evitar coagulacin.
TINCIONES BACTERIOLOGICAS
Se usan las tinciones Gram y Ziehl Neelsen para teir los frotis.
REACTIVOS
1. TINCION DE GRAM
CRISTAL VIOLETA
LUGOL
ALCOHOL ACETONA
SAFRANINA
13
portaobjetos
cubreobjetos
gradilla,
puente de tincin
INSTRU
aplicadores de madera
MENTA
papel Parafilm
CIN
Microsco
ALTERACIONES
HEMORRGICO, POR TUMORES MALIGNOS
TURBIO, POR CARGA BACTERIANA O
MICTICA
ASPECTO
TRANSPARENTE
VOLUMEN
< 3.5 ML
AMARILLO CLARO
VERDE 0 DERRAME BILIAR
O PLIDO
6.9 7.6
1.010 1.026
ELEVADO = > CARGA DE SOLUTOS
POSITIVA
=
ETIOLOGA
INFECCIOSA
NEGATIVA
BACILAR
DISMINUIDO = CARGA BACTERIANA Y/O
50 75 mg%
CLULAS NEOPLSICAS
< 3 g%
ELEVADO = PROCESO INFLAMATORIO
COLOR
pH
DENSIDAD
COAGULACION
GLUCOSA
PROTENAS
14
ALBUMINA 50 - 70%
GLOBULINAS 30 45
%
FIBRINGENO
0.3
-4.5%
CLORUROS
AMILASA
AMONIACO
FOSFATASA
ALCALINA
CLULAS
LQUIDO PERICRDICO.
CARACTERSTICA REFERENCIA
VOLUMEN
SIGNIFICADO CLNICO
10 15 ml
ASPECTO
TRANSPARENTE
LEUCOCITOS
TOTALES
DIFERENCIAL
PMN 25%
MN 45 65%
CLULAS
> % PMN = ENDOCARDITIS BACTERIANA
MESOTELIALES 20%
CLASIFICACIN DE GRUPOS
SIGNIFICADO PATOLGICO
15
NO INFLAMATORIOS
II
INFLAMATORIOS
TRASTORNOS DEGENERATIVOS
EVENTOS
INMUNOLGICOS:
ARTRITIS
REUMATOIDE,
LUPUS
ERITEMATOSO DISEMINADO
III. SPTICOS
INFECCIONES BACTERIANAS
IV
INDUCIDOS
INSOLUBLES
POR
HEMORRGICOS
SOLUTOS
CARACTERSTICA
REFERENCIA
VOLUMEN
< 3.5 ml
ASPECTO
Transparente
COLOR
Amarillo claro
GRUPO I
GRUPO II
No
inflamatorio
inflamatorio
GRUPO
Compue
insolubl
> 3.5 ml
> 3.5 ml
Turbio
Turbio
Amarillo
Amarillo
opalescente
Amarillo a verde
Alta
Alta
Baja
Baja
Positiva compacto
Positivo
compacto
Positivo -friable
Positivo- friable
Igual que
suero
> de 25 mg%
< que srica
> de 25 mg%
PROTENAS
1.36 g%
< 5.0
< 5.0
> 5.0
<
GLOBULINAS
0.05 g%
< 1.8
> 2.0
<
CIDO RICO
< 5.0
No
ponderado
No ponderado
No ponderado
Ele
VISCOSIDAD
COAGULACIN
GLUCOSA
CLULAS
TOTALES
< 200/mm3
> 3.5 ml
Transparent
e
GRUPO III
sptico
200 a 3000 /
mm3
300 a 10 000
/mm3
>3
Turbio
Am
Positivo
Dism
16
PMN
> 30%
> 50%
> 75%
>
ERITROCITOS
< 5 /mm3
Ausentes
Ausentes
Aus
CRISTALES
Ausentes
Ausentes
No
ponderado
No ponderado
No ponderado
Pre
LQUIDO SINOVIAL
REFERENCIA
VOLUMEN
< 3.5 ml
ASPECTO
TRANSPARENTE
COLOR
DENSIDAD
COAGULACION
SIGNIFICADO CLNICO
TURBIO = AUMENTO DE POBLACIN
(LEUCOCITOS)
QUILOSO = QUILOTORAX
HEMORRGICO O PURULENTO
CELULAR
AMARILLO CLARO
1.008 1.020
NEGATIVA
pH
7.4
GLUCOSA
IGUAL QUE
SUERO
AMILASA
IGUAL QUE
SUERO
7.3
EXUDADO?, EMPIEMA, AFECCIONES
MALIGNAS,
PLEURESIA REUMATOIDE, PLEURITIS POR LUPUS,
TUBERCULOSIS Y ROTURA ESOFGICA
> 60 mg% : AFECCIONES TUBERCULOSAS Y MALIGNAS;
EN DERRAMES POR LUPUS ERITEMATOSO
DISEMINADO
< 60 mg%. AFECCIONES BACTERIANAS O PLEURITIS
REUMATOIDE, AFECCIONES TUBERCULOSAS Y
MALIGNAS
>
<
TRIGLICRIDO
S
IGUAL QUE
SUERO
CLULAS
TOTALES
< 200/mm3
>
=
PROCESO INFLAMATORIO, DERRAME,
HEMORRAGIA
LEUCOCITOS
< 1000/mm3
DIFERENCIAL
PMN 25%
MN 45 65%
CLULAS
MESOTELIALES
20%
ERITROCITOS
< DE 5 /mm3
DERRAMES
PANCREATITIS,
17