CORRELACIN IN VIVO IN VITRO

La velocidad a la cul el frmaco contenido en una forma farmacutica, se disuelve en el tracto

gastrointestinal o en el sitio de administracin parenteral, frecuentemente controla parcial o
totalmente la velocidad con la que el principio activo aparece en la sangre. Esto es cierto para
los medicamentos en los que la velocidad de disolucin del principio activo es ms lenta que la
velocidad de absorcin.
Por otro lado, existe suficiente evidencia de que en la mayora de los casos, los datos de velocidad
de disolucin in vitro pueden correlacionarse de alguna manera con resultados in vivo.
La necesidad de las tantas veces mencionada correlacin, surge en cualquier situacin en la que se
encuentren variaciones en la respuesta clnica, a la administracin de medicamentos
conteniendo cantidades iguales del mismo principio activo, siendo del mismo o diferente
fabricante.
Las primeras correlaciones datan de 1930, ao en el cual Wruble, describe el uso de tabletas de
sulfuro de calcio y azul de metileno para probar la eficacia de la cubierta entrica. Resulta difcil
en nuestros das imaginar a todo un grupo de investigadores que frente al paciente esperaban
ansiosos la aparicin del color azul en la orina o el eructo de sulfuro de hidrgeno.
Afortunadamente, la tecnologa actual permite que las correlaciones se lleven a cabo de
manera ms cientfica y menos molesta.
En 1959, Nelson demostr por primera vez la correlacin entre la velocidad de excrecin in vivo y la
velocidad de disolucin in vitro utilizando cuatro diferentes formulaciones de tetraciclina.

MG. EXCRETADOS
1 HR 2 HR 3 HR

VELOCIDAD DE DISOLUCIN
(mg /cm2 / hr)
Jugo
Jugo Intestinal
Gstrico
pH 7
pH >8

TETRACICLINA

0.2

1.5

3.3

2.6

TETRACICLINA FENOLSULFONFTALEINA

0.5

3.5

7.7

TETRACICLINA SDICA -HEXAMETAFOSFATO 1.1

5.3
12.0

TETRACICLINA CLORHIDRATO

3.0

> 0.001

> 0.001

0.12

0.09

3.0

10.4

6.1

1.7

26.0

20.4

4.1

7.8

38.0

(Nelson 1959)

Figura No. 1. Correlacin entre datos de excrecin urinaria y velocidad de disolucin a

diferentes pHs, de diferentes formulaciones de tetraciclina.
En 1961, Levy fue el primero que describi el desarrollo de un mtodo que permite la correlacin
cuantitativa entre cantidad de salicilato excretada en orina y velocidad de disolucin de tabletas de
cido acetil saliclico.
1

MG. DE SALICILATO EXCRETADOS

MEDICAMENTO

EN ORINA EN 1 HR
Intervalo
Promedio

ASPIRINA EN SOLUCIN
( 10 min, HCl 0.1 N)

TABLETA NORMAL A

4.23 - 17.1

12.5

257

TABLETA NORMAL B

3.98 - 28.3

14.6

313

TABLETA CON BUFFER

6.11 - 28.4

17.2

411

SOLUCIN

8.61 - 41.8

22.3

--(Levy, 1961)

Figura No. 2. Correlacin entre salicilato excretado en orina y cido acetil saliclico en
solucin.
En 1966, Levy clasific las correlaciones in vivo- in vitro en:
A) Farmacolgicas. Basadas en observaciones clnicas
B) Semi-Cuantitativas. Basadas en concentraciones de frmaco en sangre o datos de excrecin
en orina
C) Cuantitativas. Basadas en la cintica de absorcin.
Aunque la mayora de las publicaciones presentan correlaciones de naturaleza semi-cuantitativa, las
ms valiosas son las que se basan en la cintica de absorcin.
DISOLUCIN

CONCENTRACIN EN PLASMA
(MG / ML)

ABC

EXCRECIN EN
ORINA
( MG EN 8 HR)

0.5

1.0

2.0

3.0

6.0

(MG / ML X HR)

( t50% )
5

0.43

1.09

1.80

1.61

1.10

7.70

54.1

41

0.27

0.78

1.28

1.19

0.83

5.63

38.5

107

0.19

O,57

1.14

1.09

0.86

5.13

35.9

244

0.08

0.29

0.76

0.69

0.53

3.19

22.2

T50% Tiempo para disolver el 50% de tetraciclina HCl en agua a pH de 1

(Mcdonald, 1969)

Figura No. 3. Correlacin entre datos de excrecin urinaria y concentracin en suero, con
datos de velocidad de disolucin de clorhidrato de tetraciclina.
El desafo ms importante para una prueba de disolucin, es su capacidad para reflejar diferencias
entre formulaciones, y de ser posible, predecir su comportamiento de su absorcin in vivo.
Wagner describe otra clasificacin de las correlaciones entre datos in vitro e in vivo, considerando
que existen dos tipos:
Correlacin ordenada o gradual
Correlacin cuantitativa
2

El primer tipo de correlacin es en el cual las variables dependiente e independiente, parmetros in

vivo (Y) e in vitro (X) respectivamente, se encuentran ordenadas. Existen cuatro posibilidades:
a) Y aumenta cuando X aumenta
b) Y aumenta cuando X disminuye
c) Y disminuye cuando X disminuye
d) Y disminuye cuando X aumenta
Este tipo de correlaciones son nicamente semicuantitativas sin que exista una ecuacin matemtica
que las relacione como es el caso de los ejemplos vistos anteriormente.
Las correlaciones cuantitativas son aquellas en las que un parmetro in vivo, generalmente la
variable Y, se correlaciona con un parmetro in vitro, la variable X, empleando una forma de
ecuacin linear:
y = bx + a
y = bx
Log y = Log y - bx
Este tipo de correlacin es desde luego, la que ms informacin proporciona, es ms difcil de
obtener y debe estar basada en el mtodo de regresin lineal de mnimos cuadrados.
Para conocer que tan significativa es la correlacin, se hace uso del coeficiente de Pearson, o
coeficiente de correlacin ( r ) el cual se obtiene por la aplicacin de la siguiente frmula:

XY

r
X 2

( X ) 2
N

X Y
N
Y 2

( Y ) 2
N

donde:
X = promedio de valores in-vitro
Y = promedio de valores in-vivo
N = nmero de pares de valores XY
En la prctica r se calcula de una serie de datos experimentales y el resultado se compara de tablas
a un determinado nivel de significancia.
En ocasiones, se pueden obtener buenas correlaciones a altos niveles de significancia y an as no
ser tiles para predecir datos in vivo a partir de datos in vitro y en estos casos Wagner sugiere
utilizar el parmetro 100 r2 definido como l por ciento de la varianza de los valores Y que pueden
3

ser explicados por las diferencias en los valores X para una regresin lineal. r 2 es definido como el
coeficiente de determinacin.
A menos que el valor 100 r2 sea 90, la relacin establecida no ser til para predecir datos in
vivo. Si este valor es bajo, los lmites de confianza para predecir un valor de Y en base a un valor de
X sern muy grandes y por lo tanto no habra confiabilidad en la prediccin. Es entonces cuando se
deben hacer ajustes y modificaciones ya sea a las variables o al mtodo de disolucin in vitro hasta
encontrar una correlacin confiable.
12

X
5

10

Y VS X

Y VS X

O
3

X
O

Y VS X

300

500

1000

2000

4000

X = CONCENTRACIN (U/ML) EN SOLUCIN A 10 MIN pH 2

X = CONCENTRACIN (U/ML) EN SOLUCIN A 10 MIN pH 8

Figura No. 4. Correlacin entre concentracin en plasma y

disolucin para penicilina V,

penicilina V potsica y penicilina V clcica.

En las ltimas tres dcadas, se han llevado a cabo un gran nmero de estudios tomando en cuenta
diferentes variables para tener una correlacin in vivo in vitro. En general, las variables
provienen de cuatro diferentes fuentes como se puede observar en la figura No. 5.
Una vez que se tienen los resultados de un estudio farmacolgico o de biodisponibilidad, existe una
serie de parmetros que se pueden obtener de las curvas de concentracin de frmaco contra
tiempo o de excrecin urinaria como pueden ser las reas bajo las curvas, las velocidades de
absorcin, las cantidades excretadas en orina, etc., o simplemente observaciones clnicas subjetivas
no cuantitativas, las cuales pueden correlacionarse con parmetros obtenidos en pruebas efectuadas
in vitro.
De todos los factores o variables, cules deben ser correlacionados? Varios investigadores han
argumentado acerca de la importancia relativa de diferentes parmetros de disolucin, sin embargo,
parece ser que el tiempo para que se disuelva el 50% del frmaco (t 50) es probablemente la variable
in vitro mas adecuada para ser correlacionada. Existen dos razones para esta observacin:
4

PROPIEDADES DEL
FRMACO

VARIACIONES EN EL
METODO DE DISOLUCIN

PROPIEDADES DEL
MEDICAMENTO
FfFARMACUTICA

VARIACIONES EN LA
ABSORCIN IN VIVO

Propiedades del frmaco.- Solubilidad, tamao de partcula, estabilidad, pK, estado qumico,
polimorfismo, etc.
Propiedades

del

medicamento.-

Forma

farmacutica,

formulacin,

excipientes,

aditivos,

desintegracin, sustancias reactivas, etc.

Mtodo de disolucin. - a) aparato, arreglo geomtrico, etc.
b) medio de disolucin, volumen, pH, fuerza inica, tensoactivos, etc.
Absorcin in vivo.- sitio de absorcin, pH, enzimas, bilis, ayuno, salud del individuo, descanso, etc.
Figura No. 5. Variables que afectan la correlacin in vivo in vitro.
1. Empleando este factor no se est limitando la observacin a ninguna interpretacin cintica de los
datos
2. El valor t50 indica la tendencia central del comportamiento de la formulacin durante el proceso de
disolucin.
Por otro lado, algunos autores han propuesto que en lugar de utilizar un solo dato o valor, es mejor
utilizar un parmetro que sea ms significativo del comportamiento de la forma dosificada in vivo,
como puede ser el perfil de disolucin o un parmetro derivado de este. De acuerdo a esto,
parmetros como el rea bajo la curva (ABC) o el tiempo medio de residencia (TMR), probablemente
proporcionen una mejor indicacin de la biodisponibilidad

VARIABLES OBTENIDAS IN VIVO

1. Concentraciones en plasma o suero a un tiempo
dado
2. Mxima concentracin del frmaco en sangre*

VARIABLES OBTENIDAS IN VITRO

1. Tiempo de desintegracin

2. Tiempo para la disolucin de un

porcentaje de frmaco (t50% t20%)
3. rea bajo la curva de concentraciones en
3. Cantidad del frmaco en solucin a
sangre* a intervalos de t1 a t2 (horas)
un tiempo (mg) o concentracin en %.
4. rea bajo la curva de concentraciones en 4. Velocidad de disolucin
sangre* de tO a t1 (horas)
5. rea bajo la curva de concentracin en sangre*
5. Porcentaje
disuelto a uno o varios
tiempos
en un perodo de t0 a t
6. Constante de velocidad de absorcin obtenidos a
6. Velocidad de disolucin intrnseca
partir del modelo farmacocintico.
(principio activo)
7. Cantidad de frmaco excretada en la orina en un 7. Area bajo la curva
tiempo dado, t
8. Cantidad total excretada en la orina.
8. Eficiencia de la disolucin
9. Velocidad de excrecin, obtenida del modelo
farmacocintico.
10. Respuestas farmacolgicas
*Sangre total, plasma o suero
Figura No. 6. Variables in vivo e in vitro que pueden ser correlacionadas.
Con objeto de que quede mas claro la manera en que los cambios en las variables pueden afectar la
correlacin y la importancia de sta, a continuacin se presenta un ejemplo de literatura de un trabajo
efectuado por el Dr. Pernarowski.
Hace algunos aos, en un hospital para enfermos mentales de Vancouver, se estaban empleando
tabletas de clorhidrato de clorpromacina 25 mg en el tratamiento de pacientes con deficiencias
mentales. Los mdicos haban notado que una de las marcas daba mucho mejor resultado que la
otra, por lo cual comunicaron al Dr. Pernarowski la falla y se le pidi que investigara la causa.

Tableta No.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

CONTENIDO DE CLORPROMACINA (%)

Lote A
Lote B
90.0
104.5
105.0
101.0
104.0
102.0
99.0
101.0
98.0
99.0

99.2
100.0
102.0
98.9
99.6
97.8
100.5
102.0
99.5
99.6

Figura No. 7. Uniformidad de contenido de dos marcas de tabletas de clorhidrato de

clorpromacina.

En ese momento se estaba llevando a cabo un estudio comparativo clnico entre clorpromacina y
mesoridacina y por peticin del Dr. Pernarowski, en el estudio se incluy la marca en la que se
haban notado las deficiencias.
En los resultados obtenidos, se observ que realmente exista una diferencia en las respuestas de
los pacientes a cada uno de los medicamentos administrados. Se decidi iniciar la investigacin
buscando diferencias en los controles de calidad de cada producto, comenzando por hacer variacin
de contenido de cada lote; en la figura No. 7 se presentan los resultados.
Se llev a cabo la prueba de desintegracin tanto en agua como en jugo gstrico simulado y como se
observa en la siguiente figura, no existen diferencias significativas entre los datos de los dos
productos.

Mtodo

TIEMPO DE DESINTEGRACIN (min)1

Lote A
Lote B

USP / H2O
Modificado* / H 2O
USP / JGS
Modificado / JGS **
1

14

15

10

Promedio de 6 tabletas. * Sin discos. **Jugo gstrico simulado

Figura No. 8. Desintegracin de dos marcas de tabletas de clorhidrato de clorpromacina.

Ya que el clorhidrato de clorpromacina es muy soluble en agua, el siguiente paso lgico fue el
estudiar las caractersticas de disolucin de los dos productos utilizando el mtodo de la Farmacopea
americana.

PRODUCTO

TIEMPO DE DISOLUCIN (min)1

t
t
t
t
20
40
60
80

10

20

39

>120

11

44

>120

Mtodo USP, 50 rpm, 900 ml de agua

Figura No. 9. Datos de disolucin para dos marcas de tabletas de clorhidrato de

clorpromacina.
Como se observa en la tabla, una vez ms no se pudieron apreciar diferencias significativas entre los
dos lotes, Sin embargo, de acuerdo a los perfiles de disolucin de la figura No. 10, ninguno de los
dos productos liberan el frmaco adecuadamente si se compara con la disolucin de la sustancia
pura y en base a estos datos, los productos tendran que proporcionar resultados semejantes en la
clnica.
7

100

Frmaco puro

% Disuelto

80
Lote A
Lote B

60

40

20

40

80

Tiempo (min)

Figura No. 10.- Perfiles de disolucin de dos lotes de tabletas de clorhidrato de clorpromacina.
Los datos indican que probablemente el agua no es el medio de disolucin adecuado para el estudio
y se prob el jugo gstrico simulado sin enzimas igual que en el caso anterior empleando el aparato
de la USP. En la siguiente figura se presenta el resultado.
Como se observa de los datos, el lote B que dio los mejores resultados clnicos tambin presenta una
velocidad de disolucin mayor, lo cual puede deducirse al observar que el 60% se haba disuelto en
menos de 5 min., mientras que el lote A, no lo hace sino hasta 40 min.

PRODUCTO

TIEMPO DE DISOLUCIN ( min )1

t
t
t
t
20

40

60

80

21

40

73

**

**

**

11

Mtodo USP, 50 rpm, 900 ml JGS sin enzimas. ** < de 5 min

Figura No. 11. Datos de disolucin para dos marcas de tabletas de clorhidrato de
clorpromacina.
En base a estos datos se decidi que el jugo gstrico simulado es un medio satisfactorio para el
estudio de este producto ya que es posible diferenciar la disolucin entre dos lotes que presentan
una diferencia en la clnica.
Es interesante hacer notar que el jugo gstrico simulado no cambia el patrn de disolucin inicial del
producto A ya que los tiempos para que se disuelva el 20, 40 y 60% del frmaco son prcticamente
los mismos que cuando se utiliza agua, sin embargo para el producto B, el cambio es significativo.

Los productos son clnicamente diferentes y utilizando jugo gstrico como medio de disolucin se
pueden observar diferencias importantes y hay que tomar en cuenta que las tabletas estarn sujetas
a un medio cido cuando se administren al paciente.
No contento con esto, el Dr. Pernarowski, hizo variaciones de pH, de geometra del vaso, tamao de
la malla, velocidad de agitacin, encontrando los siguientes resultados:
LOTE

A
A
A
A
B
B
B
B

RPM

TIEMPOS DE DISOLUCIN (min)

25
50
75
100
25
50
75
100

t20

t40

t60

t80

5
8

19
21

*
*
*
*
*
*

17

37
40
32
26

61
59
53
38
17
11

15

6
*
*
*

10
*
*
*
*
*
1 Canastilla malla 40,50 rpm,900 ml JGS sin enzimas. * Matraz redondo. *< 5 minutos
Figura No. 12. Datos de disolucin a diferentes velocidades de agitacin para dos marcas de
tabletas de clorhidrato de clorpromacina.
LOTE

DISTANCIA
AGITADOR (cm)

A
A
A
A
B
B
B
B
1

1
2
3
4
1
2
3
4

TIEMPOS DE DISOLUCIN (min)1

t20

t40

t60

t80

10

25

47

8
7
8

21
18
23

40
42
49

73
57
60

*
*
*

*
*
*

5
6
7

11
8
9

Contenedor USP, 50 rpm, 900 ml JGS sin enzimas, malla 40. * < 5 minutos

Figura No. 13. Datos de disolucin a diferente altura del agitador-contenedor para dos marcas
de clorhidrato de clorpromacina.

LOTE

TIEMPOS DE DISOLUCIN (min)1

MALLA

t20

t40

A
40
8
21
A
10
*
*
B
40
*
*
B
10
*
*
1 Recipiente USP,50 rpm,900 ml, JGS sin enzimas. ** < 5 minutos

t60

t80

40
18

73
35
11
7

*
6

Figura No. 14. Datos de disolucin utilizando diferentes mallas para dos marcas de clorhidrato
de clorpromacina.
9