INDICE

1. Introduccin.........................................................................................................1
1.1.

Antecedentes................................................................................................2

1.2.

Planteamiento del problema.........................................................................3

1.2.1.

Caracterizacin del problema................................................................3

1.2.2.

Pregunta del problema..........................................................................3

1.3.

Justificacin..................................................................................................4

1.4.

Objetivos.......................................................................................................4

1.4.1.

Objetivo general.....................................................................................4

1.4.2.

Objetivos especficos.............................................................................4

2. Marco terico.......................................................................................................5
2.1.

Definicin......................................................................................................5

2.2.

Cromatografa...............................................................................................6

2.2.1.
2.3.

Tipos de cromatografa de gases..........................................................7

Principales compuestos voltiles encontrados en las fermentaciones........8

2.3.1.

Metanol..................................................................................................8

2.3.2.

Alcoholes superiores.............................................................................9

2.4.

Gas portador.................................................................................................9

2.4.1.
2.5.

Sistema de inyeccin de muestra........................................................10

Columnas y sistemas de control de temperatura.......................................11

2.5.1.

Detectores............................................................................................11

2.5.2.

Detector de ionizacin de llama..........................................................12

2.5.3.

La fase estacionaria.............................................................................13

3. Materiales y Mtodos........................................................................................15
3.1.

Materiales...................................................................................................15

3.1.1.
3.2.

Cromatografa de gases......................................................................15

Mtodos......................................................................................................16

3.2.1. Procedimiento para obtener la curva de calibracin de alcoholes por

cromatografa de gases....................................................................................16
3.2.2.

Preparacin de la muestra para medir alcoholes por GC...................24

3.2.3.

Para producir que contiene menos del 60% de alcohol en volumen.. 24

3.3.

Anlisis realizado en el cromatgrafo........................................................27

3.3.1.

Determinacin de algunos imponentes para cromatografa.............27

3.3.2.

Mix Standar 0.2%.................................................................................28

3.3.3.

Mix Standar 1.4%.................................................................................28

3.3.4.

Mix Standar 1%....................................................................................29

3.3.5.

Grficos de los experimentos..............................................................29

3.4.

Resultados..................................................................................................30

4. Conclusin.........................................................................................................31
5. Bibliografa........................................................................................................33

1. Introduccin
La cromatografa de gases se puede aplicar a gases y cualquier compuesto que
pueda ser volatilizado o convertido en un derivado voltil; la cromatografa de
gases tiene amplia aplicacin, en las industrias se enfoca principalmente a evaluar
la pureza de los recetantes y productos de reaccin o bien a moni torear la
secuencia de la reaccin, para los fabricantes de reactivos qumicos su aplicacin
para la determinacin de la pureza es lo ms importante.
En la investigacin es un auxiliar indispensable para diversas tcnicas de
evaluacin, entre las principales estn los estudios cinticos, anlisis de adsorcin
a temperatura programada, determinacin de reas especficas por adsorcin de
gas y determinacin de isotermas de adsorcin.
En el campo tambin pueden ser aplicadas, principalmente en estudios de
contaminantes del agua: insecticidas en agua, pesticidas en aguas de lagos,
lagunas, ros: desechos industriales descargados en ros o lagunas.
La industria del petrleo juega una funcin primordial, por medio de la
cromatografa se pueden analizar las constituyentes de las gasolinas, las mezclas
de gases de refinera, gases de combustin, etc. (M. Valcrcel Cases, A. Gmez
Hens, 1988)
La GC tiene dos importantes campos de aplicacin. Por una parte su capacidad
para separar mezclas orgnicas complejas, compuestos organometlicos y
sistemas bioqumicos. Su otra aplicacin es como mtodo para determinar
cuantitativa y cualitativamente los componentes de la muestra. Para el anlisis
cualitativo se suele emplear el tiempo de retencin, que es nico para cada
compuesto dadas unas determinadas condiciones (mismo gas portador, rampa de
temperatura y flujo), o el volumen de retencin. En aplicaciones cuantitativas,
integrando las reas de cada compuesto o midiendo su altura, con los calibrados
adecuados, se obtiene la concentracin o cantidad presente de cada analito.

1.1.

Antecedentes

La cromatografa de gases fue inventado por AJP Martin, quien, con RLM Synge,
propusieron que la fase lquida mvil utilizada en la cromatografa lquida podra
ser reemplazado por un gas adecuado. La base de esta recomendacin fue que,
debido a difusividad de los gases es mucho ms alta de solutos en los gases en
comparacin con los lquidos, el equilibrio en un proceso cromatogrfico sera
mucho ms rpido y por lo tanto, las columnas mucho ms eficiente con tiempos
de separacin mucho ms cortos. As, el concepto de cromatografa de gases fue
concebido hace ms de cincuenta aos.
La primera separacin publicado por cromatografa de gases fue la de una serie
de cidos grasos, un procedimiento de valoracin se utiliza, junto con una micro
bureta, como detector, tiempo despus la bureta se automatiz para proporcionar
una respuesta integra ms eficaz. El cromatgrafo de gases fue tambin uno de
los primeros instrumentos de anlisis que se asocian con un ordenador que
controlaba el anlisis, procesar los datos e inform de los resultados.
Una forma ms sofisticada de la cromatografa de gases fue construida por James
y Martin y descrita por James en 1955. El instrumento era un dispositivo algo
voluminoso con una columna recta llena con una camisa de vapor. Inicialmente, el
detector se encuentra en la base de la columna y consista en el dispositivo de
valoracin automtica, la separacin se presenta como un cromatograma en forma
de una serie de pasos, la altura de cada paso de ser proporcional a la masa de
soluto diluida. El aparato fue utilizado con xito para separar algunos cidos
grasos, pero la capacidad limitada del dispositivo para detectar slo material inico
motivado Martin para desarrollar un detector ms verstil, el balance densidad del
gas.

1.2.

Planteamiento del problema

1.2.1. Caracterizacin del problema

La cromatografa de gases tiene amplia aplicacin, en las industrias se enfoca
principalmente a evaluar la pureza de los reactantes y productos de reaccin o
bien a monitorear la secuencia de la reaccin, para los fabricantes de reactivos
qumicos su aplicacin para la determinacin de la pureza es lo ms importante.
En la investigacin es un auxiliar indispensable para diversas tcnicas de
evaluacin, entre las principales estn los estudios cinticos, anlisis de adsorcin
a temperatura programada, determinacin de reas especficas por adsorcin de
gas y determinacin de isotermas de adsorcin.
En el campo tambin pueden ser aplicados, principalmente en estudios de
contaminantes del agua: insecticidas en agua, pesticidas en aguas de lagos,
lagunas, ros: desechos industriales descargados en ros o lagunas.
En la industria del petrleo juega una funcin primordial, por medio de la
cromatografa se pueden analizar los constituyentes de las gasolinas, las mezclas
de gases de refinera, gases de combustin, etc.
Las aplicaciones de la cromatografa son mltiples y la convierten en la tcnica de
anlisis ms poderosa que existe, su utilizacin requiere principalmente de
constancia y entusiasmo.

1.2.2. Pregunta del problema

Cules seran las curvas de calibracin de los estndares de alcoholes de
acuerdo a la medicin en el cromatgrafo de gases?

1.3.

Justificacin

La cromatografa es un mtodo fsico de separacin para la caracterizacin de

mezclas complejas, la cual tiene aplicacin en todas las ramas de la ciencia y la
fsica. Es un conjunto de tcnicas basadas en el principio de retencin selectiva,
cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo
identificar y determinar las cantidades de dichos componentes.
Las tcnicas cromatogrfica son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase
mvil que consiste en un fluido (gas, lquido o fluido supercrtico) que arrastra a la
muestra a travs de una fase estacionaria que se trata de un slido o un lquido
fijado en un slido, siendo importante el conocimiento de cmo se maneja o se
utiliza este producto para conocer la calibracin que se conoce en las bebidas
alcoholizadas.

1.4.

Objetivos

1.4.1. Objetivo general

Determinar cul sera las bases cientficas de la cromatografa de gases, para
realizar las curvas de calibracin de los estndares de alcoholes que se analizaran
en las muestras de bebidas alcohlicas en el cromatgrafo de gases.

1.4.2. Objetivos especficos

Investigar cuales son las bases cientficas del cromatografa de gases.
Diagnosticar cuales son las curvas de calibracin de los estndares de
alcoholes
Realizar un anlisis de muestras de bebidas alcohlicas en el cromatgrafo
de gases.

2. Marco terico
2.1.

Definicin

La cromatografa de gases es una tcnica cromatogrfica en la que la muestra se

volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatogrfica. La elucin se
produce por el flujo de una fase mvil de gas inerte. A diferencia de los otros tipos
de cromatografa, la fase mvil no interacta con las molculas del analito; su
nica funcin es la de transportar el analito a travs de la columna.
Existen dos tipos de cromatografa de gases (GC): la cromatografa gas-slido
(GSC) y la cromatografa gas-lquido (GLC), siendo esta ltima la que se utiliza
ms ampliamente, y que se puede llamar simplemente cromatografa de gases
(GC). En la GSC la fase estacionaria es slida y la retencin de los analitos en ella
se produce mediante el proceso de adsorcin. Precisamente este proceso de
adsorcin, que no es lineal, es el que ha provocado que este tipo de cromatografa
tenga aplicacin limitada, ya que la retencin del analito sobre la superficie es
semipermanente y se obtienen picos de elucin con colas. Su nica aplicacin es
la separacin de especies gaseosas de bajo peso molecular. La GLC utiliza como
fase estacionaria molculas de lquido inmovilizadas sobre la superficie de un
slido inerte. (Daniel C. Harris, 2006)
La GC se lleva a cabo en un cromatgrafo de gases. ste consta de diversos
componentes como el gas portador, el sistema de inyeccin de muestra, la
columna (generalmente dentro de un horno), y el detector.
La cromatografa de un gas para la separacin de los componentes en una
mezcla. La base del proceso descansa dentro de la columna de separacin, la
cual normalmente es una tubera de dimetro pequeo, empacada con una cama
estacionaria de gran rea de superficie. Una fase mvil se filtra en la cama
estacionaria .La fase que se mueve es un gas de ah el nombre.

Los procesos bsicos responsables de las separaciones cromatogrfico gas slido

y gas lquido son respectivamente: Absorcin y separacin o particin .Aunque las
separaciones pueden llevarse a cabo por medio de anlisis por elucin, frontal y
desplazamiento, en la practica la elusin es la ms comn.
En el mtodo de elusin de cromatografa de gas .una corriente de gas
transportador fluye a travs de la columna .Una muestra se inyecta dentro del gas
transportador como un tapn de vapor que es arrastrado dentro de la cabeza de la
columna cromatogrfico empacada. (Douglas A. Skoog, Donald M. West, F. James
Holler, 1997)
La separacin de los componentes que comprende la muestra resulta de una
diferencia de las mltiples fuerzas por las cuales los materiales e la columna
tienden a retener cada uno de los componentes Ya sea que la naturaleza de la
retencin sea absorcin, solubilidad etc. La columna retiene a unos componentes
ms tiempo que a otros, son selectivamente retenidos en la fase estacionaria

2.2.

Cromatografa.

La cromatografa de gases es una tcnica cromatografa en la que la muestra se

volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatografa. La evaluacin
se produce por el flujo de una tase mvil de gas inerte. A diferencia de los otros
tipos de cromatografa, la fase mvil no interacta con las molculas del analito: su
nica funcin es la de transportar el analito a travs de la columna. (M. Valcrcel
Cases, A. Gmez Hens, 1988)

2.2.1. Tipos de cromatografa de gases.

Existen dos tipas de cromatografa de gases:

2.2.1.1.

Cromatografa gas-slido (GSC)

En la GSC la fase estacionaria es slida y la retencin de los analitos en ella se

produce mediante el proceso de adsorcin. Precisamente este proceso de
adsorcin, que no es lineal, es el que ha provocado que este tipo de cromatografa
tenga aplicacin limitada, ya que la retencin del analito sobre la superficie es
semipermanente y se obtienen picos de elucin con colas. Su nica aplicacin es
la separacin de especies gaseosas de bajo peso molecular.

2.2.1.2.

Cromatografa gas-lquido (GLC)

La GLC utiliza como fase estacionaria molculas de lquido inmovilizadas sobre la

superficie de un slido inerte. La cromatografa de gases tiene amplia aplicacin,
en las industrias se enfoca principalmente a evaluar la pureza de los reactantes y
productos de reaccin o bien a monitorear la secuencia de la reaccin, para los
fabricantes de reactivos qumicos su aplicacin para la determinacin de la pureza
es lo ms importante. (Douglas A. Skoog, Donald M. West, F. James Holler, 1997)
En la investigacin es un auxiliar indispensable para diversas tcnicas de
evaluacin, entre las principales estn los estudios cinticos, anlisis de adsorcin
a temperatura programada, determinacin de reas especficas por adsorcin de
gas y determinacin de isotermas de adsorcin.
En el campo tambin pueden ser aplicados, principalmente en estudios de
contaminantes del agua: insecticidas en agua, pesticidas en aguas de lagos,
lagunas, ros: desechos industriales descargados en ros o lagunas.

En la industria del petrleo juega una funcin primordial, por medio de la

cromatografa se pueden analizar los constituyentes de las gasolinas, las mezclas
de gases de refinera, gases de combustin, etc. Las aplicaciones de la
cromatografa son mltiples y la convierten en la tcnica de anlisis ms poderosa
que existe, su utilizacin requiere principalmente de constancia y entusiasmo.
(Herbert A. Laitinen, Walter E. Harris, 1982)

2.3.

Principales compuestos voltiles encontrados en las fermentaciones

Los compuestos voltiles presentes en las bebidas alcohlicas son compuestos

secundarios formados de la fermentacin alcohlica del mosto durante alguna
etapa del proceso de fabricacin. Estos compuestos pertenecen a clases
funcionales de cidos, esteres, aldehdos y alcoholes, en proporciones menores
forman tambin cetonas, compuestos fenoles, aminas. Las bebidas alcohlicas
son formadas bsicamente por una solucin de etanol agua. Estos son dos
compuestos mayoritarios que a diferencia de productos secundarios, sienten los
alcoholes superiores, principalmente Isoumilico, isobulilico, propanol, esteres,
principalmente el acetato de etilo contribuyen ms significativamente para el
aroma y sabor (Xavier Garca Barber, 2014).

2.3.1. Metanol
El metanol es considerado como un contenido en las
bebidas alcohlicas, se tolera un lmite mximo de
20mg/l00ml de alcohol anhidro en la cachaza para la
legislacin brasilea. Esto es proveniente de la
actividad del metabolismo de saccharomyces cerviciae
por la actividad de enzimas ppticas. (Peter Boyle ,
Paolo Boffetta , Albert B. Lowenfels , Harry Quemaduras , Otis Brawley , Witold
Zatonski , Jrgen Rehm, 2013)

2.3.2. Alcoholes superiores.

Durante la fermentacin alcohlica, las levaduras producen etanol. u otros
alcoholes con ms de dos carbonos en su cadena, llamados alcoholes superiores.
Estos alcoholes de inters en la cachaza, vino, cerveza deben ser cuantificadas
como alcoholes: Isoamilico (alcoholes 2 meti 1-1-butano o 3-metiI-l-butano).
isobutilico (2-meti 1-1-propanol), n-propilico (1- propanol). El lmite mximo de
concentracin de estos alcoholes es de 360mg/100ml de alcohol anhidro.
La produccin de estos alcoholes durante la fermentacin alcohlica se ve
influenciado principalmente por las condiciones del medio, entre ellas la
concentracin de azucares, el contenido de fuente de nitrgeno disponible,
temperatura de fermentacin, aeracin y tipo de levadura. (M. Valcrcel Cases, A.
Gmez Hens, 1988)
La GC se lleva a cabo en lu cromatgrafo de gases. ste consta de diversos
componentes como el gas portador, el sistema de inyeccin de muestra, la
columna (generalmente dentro de un horno), y el detector.

2.4.

Gas portador

El gas portador debe ser un gas inerte, para prevenir su reaccin con el analito o
la columna. Generalmente se emplean gases como el helio, argn, nitrgeno,
hidrgeno o dixido de carbono, y la eleccin de este gas en ocasiones depende
del tipo de detector empleado. El almacenaje del gas puede ser en balas
mrmales o empleando un generador, especialmente en el caso del nitrgeno y
del hidrgeno. Luego tenemos un sistema de manmetros y reguladores de flujo
para garantizar un flujo estable y un sistema de deshidratacin del gas como
puede ser un tamiz molecular.
Generalmente la regulacin de la presin se hace a dos niveles: un primer
manmetro se sita a la salida de la bala o generador del gas y el otro a la entrada
del cromatgrafo donde se regula el flujo. Las presiones de entrada varan entre

10 y 25 PSI lo que da lugar a caudales de 25 a 150 ml/min en columnas de relleno

y de 1 a 25 ml/min en columnas capilares. Para comprobar el caudal se puede
utilizar un rotmetro un simple medidor de pompas de jabn, el cual da una
medida muy exacta del caudal volumtrico que entra a la columna. (Daniel C.
Harris, 2006)

2.4.1. Sistema de inyeccin de muestra

La inyeccin de muestra es un apartado crtico, ya que se debe inyectar una
cantidad adecuada, y debe introducirse de tal forma (como un "tapn de vapor")
que sea rpida para evitar el ensanchamiento de las bandas de salida: este efecto
se da con cantidades elevadas de analito. El mtodo ms utilizado emplea una
microjeringa (de capacidades de varios microlitros) para introducir el analito en
una cmara de vaporizacin instantnea. Esta cmara est a 50C por encima del
punto de ebullicin del componente menos voltil, y est sellada por una junta de
goma de silicona repta o septum. (Fundacin Confemetal, 2007)
En GC se emplean dos tipos de columnas: las empaquetadas o de relleix y las
tubulares abiertas o capilares. Estas ltimas son ms comunes en la actualidad
(2005) debido a su mayor rapidez, y eficiencia. La longitud de estas columnas es
variable, de 2 a 50 metros, y estn construidas en acero inoxidable, vidrio, slice
fundida o tefln. Debido a su longitud y a la necesidad de ser introducidas en un
horno, las columnas suelen enrollarse en una forma helicoidal con dimetros de 10
a 30cm. dependiendo del tamao del horno.
La temperatura es una variable importante, ya que de ella va a depender el grado
de separacin de los diferentes analitos. Para ello, debe ajustarse con una
precisin de dcimas de grado. Dicha temperatura depende del punto de ebullicin
del analito o analitos, y por lo general se ajusta a un valor igual o ligeramente
superior a l. Para estos valores, el tiempo de elucin va a oscilar entre 2 y 30-40
minutos. Si tenemos varios componentes con diferentes puntos de ebullicin, se
ajusta la llamada rampa de temperatura con lo cual sta va aumentando ya sea de

10

forma continua o por etapas. En muchas ocasiones, el ajustar correctamente la

rampa puede significar separar bien o no los diferentes analitos. Es recomendable
utilizar temperaturas bajas para la elucin, pero conforme la temperatura es mayor
la elucin es ms rpida, pero corriendo el riesgo de descomponer el analito.

2.5.

Columnas y sistemas de control de temperatura

2.5.1. Detectores
El detector es la parte del cromatgrafo que se encarga de determinar cundo ha
salido el analito por el final de la columna. Las caractersticas de un detector ideal
son:
Sensibilidad: Es necesario que pueda determinar con precisin cundo
sale analito y cuando sale slo el gas portador. Tienen sensibilidades entre
101 y 1015 g/s de analito.

11

 Respuesta lineal al analito con un rango de varios rdenes de magnitud.

Tiempo de respuesta corto, independiente del caudal de salida.
Intervalo de temperatura de trabajo amplio, por ejemplo desde
temperatura ambiente hasta unos 350-400C. temperaturas tpicas trabajo.
No debe destruir la muestra.
Estabilidad y reproducibilidad. es decir, a cantidades iguales de analito
debe dar salidas de seal iguales.
Alta Habilidad y manejo sencillo, o a prueba de operadores inexpertos.
Respuesta semejante para todos los analitos. o
Respuesta selectiva y altamente predecible para un reducido nmero de
analitos

2.5.2. Detector de ionizacin de llama

El detector de ionizacin de llama es un detector utilizado en cromatografa de
gases. Es uno de los detectores ms usados y verstiles. Bsicamente es un
quemador de hidrgeno/oxgeno, donde se mezcla el efluente de la columna (gas
portador y analito) con hidrgeno. Inmediatamente, este gas mezclado se
enciende mediante una chispa elctrica, producindose una llama de alta
temperatura. La mayora de compuestos orgnicos al someterse a altas
temperaturas pi rol izan y se producen iones y electrones, que son conductores
elctricos. Este hecho se aprovecha estableciendo una diferencia de potencial de
unos centenares de voltios entre la parte inferior del quemador y un electrodo
colector situado por encima de la llama. La corriente generada es baja (del orden
de los 10 A), por lo tanto debe ser amplificada mediante un amplificador de alta
impedancia. (Jos Carlos Herrera de Pablo, 2004)
El proceso de ionizacin que se da en la llama es complejo, pero se puede
aproximar el nmero de iones producidos al nmero de tomos de carbono
transformados en la llama. Esto produce que sea un detector de sensible a la
masa (al nmero de tomos de carbono que salen de la columna) ms que a la

12

concentracin, por lo tanto no le afectan demasiado los cambios en el flujo de

salida.
Existen algunos grupos funcionales que no dan respuesta en este detector, como
el carbonilo, alcohol, halgeno o amina, y tampoco responden gases no
inflamables como el CO2SO2 agua y xidos de nitrgeno. Este hecho, ms que
limitar el mbito de aplicacin de este detector, permite el anlisis de muestras
contaminadas con alguno de los compuestos mencionados. (Herbert A. Laitinen,
Walter E. Harris, 1982)

2.5.2.1.

Ventajas

Alta sensibilidad, del orden de 103 g/s.

Amplio intervalo lineal de respuesta. 10'
unidades.
Bajo mido de fondo (elevada relacin
seal/ruido).
Bajo mantenimiento, fcil de fabricar.

2.5.2.2.

Desventajas

Destruye la muestra (la piroliza).

2.5.3. La fase estacionaria

Las propiedades necesarias para una fase estacionara lquida inmovilizada son:
1) Caractersticas de reparto (factor de capacidad K' y factor de selectividad a)
adecuados al analito.
2) Baja volatilidad, el punto de ebullicin de la fase estacionaria debe ser al
menos 100C mayor que la mxima temperatura alcanzada en el horno.
3) Baja reactividad.
4) Estabilidad trmica, para evitar su descomposicin durante la elucin.

13

Existen como mucho una docena de disolventes con estas caractersticas. Para
elegir uno debe tenerse en cuenta la polaridad del analito yaqu a mayor polaridad
del analito mayor polaridad deber tener la fase estacionaria. Algunas fases
estacionarias utilizadas actualmente (2005) son:
Polidimetilsiloxano. fase no polar de uso general para hidrocarburos,
aromticos, polinucleares, drogas, esteroides y PCBs.
Poli (fenilmetidifenil) siloxano (10% fenilo). para steres metlicos de
cidos grasos, alcaloides, drogas y compuestos halogenados.
Poli (fenilmetil) siloxano (50% fenilo). para drogas, esteroides. pesticidas
y glicoles.
Poli (trifluoropropildimetil)

siloxano.

para

aromticos

clorados,

nitroaromticos, be ncenos alquiLsusti luidos.

Polietilenglicol, para compuestos como glicoles. alcoholes,teres, aceites
esenciales.
Poli (dicianoalildimetil) siloxano. para cidos grasos poliinsaturados.
cidos libres y alcoholes.

14

3. Materiales y Mtodos
3.1.

Materiales

3.1.1. Cromatografa de gases

Shmadzu, modelo 2010, puerto de inyeccin: Split, Detector de ionizacin de
llama, Columna capilar restec-07248, stabilmax dimetro interno 0.25x0.5 um,
longitud 100m, gases (Helio, hidrogeno, aire), Headspace. (Maria del Carmen
Silva Garcia, 2004)

Principales partes de un cromatgrafo de gases

Balanza analtica.
Purificador de agua.
Lavador ultrasonido.
Filtros de membrana de 0.20umfl).45um.
Viales para la inyeccin automtica.
Papel toalla.
Jeringa descartable.
Probetas.
Envases embaces.
Filas.

15

Micropipetas.
Agua ultra pura.
Etanol grado cromatografa.
Propanol grado cromatografa.
Metanol grado cromatografico.
Muestras: pisco, cerveza vino, alcohol industrial.

3.2.

Mtodos

3.2.1. Procedimiento para obtener la curva de calibracin de alcoholes por

cromatografa de gases.
Abrir las llaves de los gases a utilizaren este mtodo como se indica en la
tabla 01.
Encender el equipo.
Ingresamos al programa GC SOLUTION haciendo doble click.
Se abrir la ventana de G REAL TIME ANALYSIS en donde programaremos
un nuevo mtodo con los parmetros ya establecidos en la tabla 01.

Tabla 01: condiciones de operacin de equipos para la determinacin y

cuantificar alcoholes.

Gases

Aire, Helio, Hidrogeno

16

Columna

Restec-07248. stabilwax - DA 30 meter. 0.25 mm ID.

0.5 umdf

Horno

T inicial 55C Tiempo T inicial 3 min.

T final 120C Tiempo T final 2 min.
Velocidad de calentamiento 10C/min

Detector (FID)

Temperatura 200C
Presin de hidrogeno 40ml/min
Presin del aire 399.9ml/min
Presin de helio 30ml/min

Inyector (Split)

Temperatura 200C
Split radio 300
Velocidad lineal 32.9 cnm/scc

Duracin del
mtodo

11.5 min

Volumen de
inyeccin

1.0 ul

Patrones

Etanol, metanol y propanol de grasa cromatografa.

Estabilizar la lnea base antes de realizar los anlisis de la curva de

calibracin.
Preparar las concentraciones de la curva de calibracin del patrn etanol
0.2%. 0.6%. 1.0% y 1.4% de concentracin y enrasar con agua ultra pura.
Nota. Los patrones debern estar refrigerados a fin de evitar que se
volatilicen.
Preparacin de concentraciones a partir de:

17

Realizados los clculos para las concentraciones de 0.2%. 1% y 4% procedemos

a la preparacin.

0.2 %

0.2 99,9 %
X=0.2002 ml

X 100 %

ETANOL
METANOL

PROPANOL
18

0.2 99,5 %
X=0.201 ml

X 100 %
Se extrajo aproximadamente 0.1 ml de cada uno de las sustancias ya que se
aforara en una fiola de 50 ml.

Se extrajo 0.1 ml de
cada una de las
sustancias
Se us una
micropipeta
para mayor
precisin

19

Colocamos en
una misma
fiota lo extrado

Nota: mantener los reactivos a utilizar

refrigerados y utilizar el agua ultra pura
refrigerada para evitar la volatilizacin de
los reactivos durante el proceso.

1%

1 99,9 %
X=1,0001 ml

X 100 %

ETANOL
METANOL

PROPANOL

0.2 99,5 %
X=1,005 ml

X 100 %
Se extrajo aproximadamente 0.500 ml de cada uno de las sustancias ya que se
aforara en una fiola de 50 ml.

20

1,4 %

1,4 99,9 %
X=1,407 ml

X 100 %

X=1,401 ml

21

METANOL

PROPANOL

1,4 99,5 %
X 100 %

ETANOL

Se extrajo aproximadamente 0.700 ml de cada uno de las sustancias ya que se

aforara en una fiola de 50 ml.

22

Aadirlos viales del equipo aproximadamente 1 ml de las concentraciones

preparadas.

Programare inyectar.

Obtencin de cromatogramas

23

3.2.2. Preparacin de la muestra para medir alcoholes por GC.

Segn N'TP 211.035 2003 bellidas alcohlicas mtodo de ensayo determinacin
de metanol y congneres de bebidas alcohlicas y en alcohol etlico empleando en
su elaboracin, mediante cromatografa de gases.

3.2.3. Para producir que contiene menos del 60% de alcohol en volumen.
Colocamos 200ml de la muestra a analizar en el sistema de destilacin.
Destilar hasta aproximadamente hasta las 2/3 partes del volumen inicial.

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Nota: Asegurarse de colocar bien el

tubo digestor en el destilador de tal
manera que no haya prdida de
alcoholes durante el proceso por
tanto no altere los resultados

Enrasar el destilador a 200ml con agua ultra pura filtrada.

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La dilucin -se har de acuerdo a la curva patrn que .se elabor inicialmente.
C1 V 1=C 2 V 2

VINO

ALCOHOL

( 12 )( V 1 )=( 1 )(50 ml)

( 90 )( V 1 ) =( 1 )(50 ml)

V 1=4,17 ml

V 1=0,56 ml

Filtrar en los filtros de disco de porosidad 0.20um/0.45um.

Para el anlisis cromatografa, adicionar a los viales

del

GC

aproximadamente 1 mililitro de la muestra a analizar, propagar e inyectar de

I ul en los viales.

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3.3.

Anlisis realizado en el cromatgrafo

El anlisis cromatogrfico de gases se utiliz estndares para preparar el Mix con

3 diferentes % (Metanol. Etanol y Propanol) 100L/50ml donde llegamos a
identificar los componentes principales en el vino y el alcohol.

3.3.1. Determinacin de algunos imponentes para cromatografa.

La determinacin de la composicin cualitativa y cuantitativa del alcohol se efectu
por cromatografa de gases, empleando para el efecto un cromatgrafo de gases
equipado. Para la identificacin de los compuestos, se procedi en primer lugar, a
buscar las condiciones para una ptima separacin y luego se inyectaron una
serie de estndares en idnticas condiciones, comparndose despus los tiempos
de retencin con los de la muestra problema. En el anlisis de cromatografa que
se observa en las grficas.
Calculamos la cantidad de volumen que se echara para realizar los clculos
en la cromatografa de gases.

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3.3.2. Mix Standar 0.2%

Se utiliz Estndares para preparar el Mix 0.2 % (Metanol. Etanol y Propanol)
100ul/50ml

3.3.3. Mix Standar 1.4%

Se utiliz Estndares para preparar el Mix 1.4 % (Metanol, Etanol y Propanol)
100ul/50ml.

28

3.3.4. Mix Standar 1%

Se utiliz Estndares para preparar el Mix 1 % (Metanol. Etanol y Pro panol) 100ul/50ml.

3.3.5. Grficos de los experimentos.

Para realizar la curva de calibracin se us una solucin de etanol metanol y
propanol como patrn interno, se les midi el rea a diferentes concentraciones y
se hizo la relacin de rea entre los dos picos. Los datos para esta se muestran en
la grfica relacin de rea vs porcentaje de etanol (v/v).
CON.

AREA

0.2

25000

181000

1.4

250000

Y =aX+ b
a=5.277545e-006
b=6.852608e-002

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R 2=0.9987398

R=0.9990695

Mean RF :6.219860e-006

RF SD :9.339090e-007

RF %RSD:15.01495
De esta curva se obtiene la ecuacin lineal y = mx.
Y = 5.277545-6 * X + 6.852608-2
Entonces se adiciona una masa conocida del estndar interno a una masa
conocida de muestra y esta mezcla se inyecta al cromatgrafo del cromatograma
se obtienen las reas de analito y del estndar y luego con la ecuacin de
calibracin y conociendo la masa del estndar se puede obtener la masa del
analito en la muestra.
2

( v /v )= Relacion de aerea+6.852608
5.2775456 (v /v)1

3.4.

Resultados

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4. Conclusin
La cromatografa de gases es la mejor y ms confiable va para obtener la
composicin real de una mezcla estos datos pueden ser de gran utilidad debido a
que se pueden calcular diferentes propiedades de la mezcla partiendo de las
propiedades de cada componente.
El proceso de cromatografa de gases es sencillo, automatizado y general: lo que
lo hace una prueba ampliamente usado en diferentes industrias.
El cromatgrafo de gases, se caracteriza por ser una tcnica de separacin que
tiene incorporado un sistema de deteccin, generalmente continuo (tipo on-line),
ya que realiza tanto la separacin como la determinacin cualitativa y cuantitativa
de los solutos.
La cromatografa es una tcnica en la cual los componentes de una mezcla son
separados con base en las velocidades a los cuales son separados a travs de
una fase estacionario porua fase mvil gaseosa lquida.
La elucin es un proceso en la cual los solutos son lavados a travs de una fase
estacionaria por el movimiento de una fase mvil. Un fluyente es un disolvente que
se usa pura llevar los componentes de una mezcla a travs de una fase
estacionaria.
Un cromatograma es un grfico de alguna funcin de concentracin de soluto
contra el tiempo o volumen de elucin. El tiempo de retencin TR es el tiempo
entre la inyeccin de una muestra muy la aparicin de un pico de soluto en el
detector de una columna cromatogrfica.
Existen varios mtodos para la continuacin de curvas de concentracin para el
anlisis cuantitativo por cromatografa de gases y como ocurre muchas veces en
la ciencia la mayor exactitud en esta aparicin se paga con una mayor
laboriosidad en los mismos.
Las conclusiones que debe cumplir una sustancia para servir como patrn interno
son las siguientes:

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1. No encontrarse en el problema que se desea.

2. Tener similitud con los componentes del problema.
3. Proporcionar en s y con el problema, picos bien resueltos y de buena
forma.
4. Eluir en un tiempo cercano al de los componentes del problema.
Las siguientes recomendaciones se deben tomar en cuenta a fui de corregir en
buen anlisis.
1) Se deber tener en cuenta un control de la temperatura e intervalo de lo
2)
3)
4)
5)
6)

mismo.
Tipo y caractersticas del detector.
Variedad de columnas utilizables.
Control del caudal de gas.
Estabilidad de la lnea de base trabajando al mximo de sensibilidad
Tipo de sistema para la inyeccin de muestras.

Finalmente, cabe recordar que para el llenado de la jeringa microltica es deseable

eliminar inicialmente lodo el aire. Esto se puede llevar acabo absorbiendo y
eliminando repetidamente lquido dentro de ella, como un enjuague de tomarse en
cuenta que la cantidad de muestra tomada, debe ser la misma en todos los casos.

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5. Bibliografa
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Douglas A. Skoog, Donald M. West, F. James Holler. (1997). Fundamentos de
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Jos Carlos Herrera de Pablo. (2004). Aplicacin de las tcnicas de extraccin con
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