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Microbiologa de alimentos

Practica 4
Mtodo de cuenta total de mohos y levaduras
Objetivo
Conocer las tcnicas ms comunes para la cuenta de mohos y levaduras en
alimentos, se observaran adems las caractersticas morfolgicas y
fisiolgicas de los mohos que comnmente contaminan a los alimentos.

Material y equipo

Auto clave
Balanza granataria
Utensilios estriles (cuchillos, pinzas, esptulas.)
Pipetas bacteriolgicas estriles de 10 y 1ml.
Frasco de vidrio de boca angosta con tapn de rosca con 90 ml.
Tubos de 10 x 150 mm con tapn de rosca con 9 ml de solucin
diluyente contador de colonias.
Licuadora
Incubadora con termostato.
Varilla doblada en L
Cajas Petri

Medios de cultivo y reactivos

Solucin diluyente (NaCL 0.9%).


Extracto de malta
Extracto de levadura rafinosa
Peptona agar papa dextrosa (PDA)
Etanol
Azul de metileno
Acido tartrico
Dextrosa

Procedimiento
1.

Cuenta de mohos y levaduras


Preparan las soluciones decimales .Sembrar 0.1 ml de cada
disolucin, extendiendo sobre la superficie, con una varilla doblada en
placas de agar papa destroxa (3) incubar las placas a 25 durante 2-5
das.
Sacar las cajas de incubacin y contar las colonias caractersticas de
mohos y levaduras. El desarrollo de Mohos es caracterstico por su
aspecto aterciopelado, que algunas veces invade todo la caja. Las
colonias de levaduras se diferencian de las colonias bacterianas por
su forma oval, elptica o alargada.

Contar el nmero de colonias de mohos y levaduras y multiplicarlo


por el inverso de la dilucin. Reportar el nmero de mohos y
levaduras por gramos de muestras.

2.- Observaciones de las caractersticas de mohos.

Utilizando un bistur se acordar el al agar alrededor de cada una de


las colonias caractersticas de mohos y se separara el agar con la
colonia, procurando no daarla.
Se colocan los fragmentos de agar separados en pota-objetos
limpios.se observara la morfologa del micelio areo con un
microscopio en diseccin.
Transferir parte del microscopio a otro portaobjeto y observar las
estructuras con un microscopio ptico. Dibujar las estructuras
observadas y compararlas con las reportadas en la bibliografa para
identificar mohos.

3. Observacin de las caractersticas de levaduras.


Preparar frotis de las colonias de levaduras, teidas con azul de
metileno al 0.5%(un minuto con la solucin y lavar con agua
destilada). Observar al microscopio su morfologa.
De colonias cuya morfologa sea levaduras grandes, ovalo aislados,
o apiculares aisladas se sembraran en los siguientes medios:
a) En tubos de 16x150 mm con medio wickerham adicionando con
dextrosa, con tapn de rosca y campana Durham.
b) En tubos de 16x150mm con medio Wickerham adicionando con
rafinosa, tapn de rosca y campana Durham.
De las colonias cuya morfologa sea de levaduras ovales, pequeas,
agrupadas en micelio ramificado de levaduras apiculares, aisladas de
siembra de tubo de 25x250 mm con 10 ml de caldo de extracto de malta
estril.
Los tubos inoculados se incuban a 25-30 C durante 2 a 8 das.
En los tubos de 16x150 mm se observara al final del periodo posible
aparicin de turbidez en el medio y de gas en la campana de Durham,
como indicio de una fermentacin alcohlica.
En tubos de 25x250 mm se observara una posible formacin de pelcula
superficial en medio, como indicio de desarrollo de levaduras aerobias.
Formadoras de micelio.

determinacion de grados brix


3.1
3.05
3
2.95
2.9
2.85
2.8
2.75
2.7
2.65
2.6

madura

Grfica n 1. Promedio

pinton

verde

del pH e la Taperiba

Serie 1

16
14
12
10
8
6
4
2
0

madura

pinton
Serie 1

Grfica n 1. Promedio

del grados Brix de la Taperiba

verde