Ral Jimnez Guerrero (SmarVet)

ANESTESIA, EUTANASIA Y DISECCIN

DEL PEZ DE LABORATORIO

RAL JIMNEZ GUERRERO

raulsmarvet@gmail.com

Resumen: Este documento intenta realizar una descripcin del procedimiento

anestsico, eutansico y de diseccin reglada tanto en peces de talla grande como pequea
empleados en la experimentacin animal.

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NDICE

1. INTRODUCIN ............................................................................................... 3

2. ANESTESIA ..................................................................................................... 3

3. EUTANASIA..................................................................................................... 6

4. NECROPSIA ..................................................................................................... 9

5. BIBLIOGRAFA .............................................................................................. 11

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1. INTRODUCIN

Donde el ratn supone la panacea por sus caractersticas biolgicas, ahora comienzan a emplearse
peces como modelos experimentales, este es el caso del Medaka (Oryzias latipes) y el pez cebra (Danio
rerio), experimentando este ltimo un crecimiento y uso exponencial dadas sus caractersticas. Estos
peces no son los nicos que se usan en la actualidad ya que depender del propsito y del tipo de
experimento a realizar.
Dado que se tratan de organismos acuticos y que existen ciertas diferencias anatomo-fisiolgicas,
existen diferencias en muchas de las prcticas que normalmente se realizan en los animales de
experimentacin. Este caso, nos entraremos en el pez cebra como talla pequea y en la tilapia del Nilo
(Oreochromis niloticus) como ejemplo de talla grande.

2. ANESTESIA
Es un procedimiento fundamental para la exploracin fsica del animal. Adems nos permitir y
nos facilitar su manipulacin para tcnicas de extraccin de sangre, administracin de frmacos,
procedimientos quirrgicos, entre otros.
La anestesia/sedacin en peces puede realizarse utilizando los siguientes compuestos:
o

o
o
o
o

Tricana metano sulfonato (MS-222). Es un frmaco del tipo benzocana y es el

mtodo ms eficaz para sacrificar a la mayora de los peces. Es soluble tanto en agua
dulce como salada. Sin embargo, es caro y eso puede limitar su empleo, especialmente
si hay que sacrificar un gran nmero de peces. Hay que aadir bicarbonato, imidazol,
fosfato cido de sodio o hidrxido sdico para neutralizar el agua (a pH 7.5) para
reducir la irritacin y el dao tisular.
Eugenol (aceite de clavo).
2-phenoxyethanol.
Medetomidina+Ketamina: intramuscular en peces asegura un adecuado aturdimiento
con una potente sedacin.
Halotano/Isofluorano. Puede ser burbujeado en el tanque y produce anestesia.

Tericamente podemos valorar el estado o profundidad anestsica del animal en funcin de ciertos
comportamientos o signos que expresa, de manera que:

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Tilapia:
Se procede a anestesiarlas con una inyeccin de una solucin de medetomidina + ketamina va
intramuscular en las porciones pertenecientes al cuadrante caudo-dorsal del pez:

Tras ser administrado el anestsico, dejamos en al agua del recipiente con aireacin forzada con la
intencin de esperar a que el frmaco ejerza su efecto anestsico.

Tras alcanzar la fase 4 de profundidad anestsica, nuestro pez est listo para la siguiente etapa,
que sera la exploracin fsica de mucus, piel, branquias, ojos, as como la extraccin de sangre
intracardiaca:

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La puncin se realiz a nivel del lmite opercular perpendicular con la lnea ventral del animal.
Mientras tanto, debemos mantener las branquias lo ms hmedas posibles con la ayuda de unas gasas
humedecidas o una jeringa para aplicar agua cada cierto tiempo. Una vez finalizada la extraccin,
procedemos a la eutanasia del animal a travs de una sobre-dosis de barbitricos intracardiaca.

Zebrafish:
Para la anestesia de este tipo de peces, utilizaremos una solucin de tricaina diluida en agua
tamponada con bicarbonato, en la que meteremos los peces para general la anestesia por inmersin. En la
prctica realizamos una serie de ensayos con cuatro tipos de disoluciones a diferentes concentraciones
para valorar el estado de profundidad anestsica segn la concentracin del frmaco (ver tabla de signos
de profundidad, pg. 13). Tras introducir a los animales en la diferentes concentraciones, pudimos
observar cmo mientras el grado de profundidad era superficial en la concentracin ms baja, a medida
que esta incrementaba, tambin lo hacia el grado de profundidad, acabando en la eutanasia por sobredosis
en el recipiente con la mayor concentracin. Tambin practicamos la reversin de la anestesia
introduciendo de nuevo al pez en otro recipiente con agua de su acuario sin el frmaco, donde pudimos
observar como en pocos minutos recuperaba su estado de actividad normal.

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3. EUTANASIA
Existen ms de 20.000 especies de peces con formas de vida enormemente variables, lo que hace
muy difcil generalizar sobre mtodos de eutanasia. Aunque los peces no tengan las mismas vas
espinotalmicas que los mamferos para la percepcin del dolor, existen pruebas de que efectivamente
sienten el dolor y por este motivo deben ser sacrificados con el mismo cuidado y consideracin.
En la experimentacin animal, la eutanasia se practica con diversos fines o por diferentes motivos:

Final del experimento.

Obtencin de grandes cantidades de sangre u otros tejidos vitales.
Cuando el dolor, la angustia y sufrimiento son superiores a lo previsto.
Cuando el campo de estudio sea la salud o el bienestar de los animales.
Cuando ya no sean aptos para la cra.
Animales no utilizados o aquellos con caractersticas no adecuadas, por ejemplo el sexo
del animal no es necesario para una determinada experiencia.

Todos los peces son sensibles a los cambios en los parmetros fsicos y qumicos del agua en la
que se mantienen pero unas especies son mucho ms tolerantes que otras a los cambios en alguno de estos
parmetros. Por esta razn es recomendable realizar la eutanasia en el agua que sea habitual para la
especie. Si hay que utilizar sustancias, se reducir el nivel de agua para asegurar una sedacin rpida,
pero no demasiado para no producir angustia antes de aadir el agente. Puede ser necesario que los peces
ayunen entre 24-48 h antes de la eutanasia qumica, ya que esto permitir una absorcin ms rpida por el
intestino y minimizar el riesgo de regurgitacin que podra reducir el efecto de las sustancias qumicas
sobre el animal.
En general el enfriamiento del agua reduce los procesos metablicos y locomotores, facilitando as
su manipulacin, pero resulta esencial tener en cuenta la temperatura habitual del pez y su grado de
tolerancia. Es importante sealar tambin que en los peces de agua salada se forman cristales de hielo
dentro de las clulas antes de que se congele el agua marina, lo que producira un dolor muy intenso en el
pez. En los peces de agua dulce, se producir antes la congelacin del agua que la formacin de cristales
internos. Sin embargo, hay que tener presente que el enfriamiento no reduce la capacidad de sentir
dolor.
La eutanasia en peces puede realizarse a travs de mtodos qumicos (agentes eutansicos) o
fsicos como disparos, dislocacin o puncin craneal. En este tipo de peces debido a que se usan tanto
experimentalmente como especie productora de alimentos, existen diferencias significativas en el mtodo
de eleccin.
Analizando el Real Decreto 53/2013, de 1 de febrero, por el que se establecen las normas
bsicas aplicables para la proteccin de los animales utilizados en experimentacin y otros fines
cientficos, incluyendo la docencia, sabemos que experimentalmente hablando, por regla general para
realizar la eutanasia de este tipo de animales, el mtodo y el procedimiento depender de la especie y el
tamaos de la misma. Las especies y peces de pequeo tamao pueden ser eutanasiadas sin ser
previamente aturdidas, mientras que las de mayor tamao necesitan este procedimiento. El aturdimiento
al igual que la anestesia puede ser tanto qumico como fsico, y su eleccin depender de mltiples
factores intrnsecos y extrnsecos al animal.

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Especies de tamao reducido (Zebrafish, Medaka, alevines de otras especies como la trucha)
eutanasia directa sin previo aturdimiento:

Eutansicos qumicos (sobredosis de los siguientes compuestos diluidos en agua):

o

o
o

Tricana metano sulfonato (MS-222). Es un frmaco del tipo benzocana y es el

mtodo ms eficaz para sacrificar a la mayora de los peces. Es soluble tanto en agua
dulce como salada. Sin embargo, es caro y eso puede limitar su empleo, especialmente
si hay que sacrificar un gran nmero de peces. Hay que aadir bicarbonato, imidazol,
fosfato cido de sodio o hidrxido sdico para neutralizar el agua (a pH 7.5) para
reducir la irritacin y el dao tisular.
Eugenol (aceite de clavo).
Halotano Puede ser burbujeado en el tanque y produce anestesia.

Eutansicos fsicos:
o Conmocin cerebral o golpe.
o Aturdimiento elctrico.
o Decapitacin. Es posible en peces pequeos, pero resulta problemtica en peces de
mayor tamao. Slo debe llevarse a cabo la decapitacin de los peces previamente
anestesiados o aturdidos, ya que existen algunas dudas acerca de la inmediata prdida
de consciencia.

Especies o peces de tamao moredaro-grande (Salmn, dorada, trucha) eutanasia con previo
aturdimiento:

Aturdimiento-sedantes: (aquellos mencionados en la anestesia)

Eutansicos qumicos:
o Agentes inyectables (barbitricos intracardiacos o intraperitoneales).
o Sobredosis de anestsicos como la tricana metano sulfonato.

Eutansicos fsicos:
o Conmocin cerebral o golpe.
o Aturdimiento elctrico con material especial.
o Decapitacin. Es posible en peces pequeos, pero resulta problemtica en peces de
mayor tamao. Slo debe llevarse a cabo la decapitacin de los peces previamente
anestesiados o aturdidos, ya que existen algunas dudas acerca de la inmediata prdida
de consciencia.
o Maceracin enceflica a travs de la insercin de una aguja (peces de tamao no
excesivo). Consiste en introducir una pa metlica en la parte superior de la cabeza
entre los ojos, movindola hacia delante y hacia atrs para destruir el cerebro y el
extremo proximal de la mdula espinal.

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Reconocimiento y confirmacin de la muerte.

Se puede reconocer la muerte por el cese de la respiracin (movimiento opercular) y el cese del
latido cardiaco (palpacin). Cuando sea posible, se deber confirmar la muerte por destruccin del
cerebro y se comprobar que el animal no responde al estmulo de la puncin.
Nosotros en la prctica eutanasiamos la tilapia con una sobredosis de barbitricos administrada va
intracardiaca. Sin embargo en el caso del pez cebra, realizamos el procedimiento por una sobredosis con
el mismo anestsico utilizado (tricaina).

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4. NECROPSIA
En los peces, al igual que en el resto de especies experimentales, se debe conocer el procedimiento
adecuado para una correcta necropsia.

Tilapia
Necesitamos:

Peces eutanasiados.
2 Pinzas, una de ellas dentada.
Tijeras de diseccin fina.
Tijeras de diseccin roma.
Jeringa 5ml.
Placa de petri.

Procedimiento:
1.
2.
3.

4.

5.

Cogemos al animal sin vida y lo colocamos decbito lateral derecho con el ano cara al personal
a realizar el procedimiento.
Realizamos una inspeccin superficial del mucus del pez, as como el estado de las aletas,
mucosa, ojos, piel y oprculos.
Con las tijeras de diseccin roma realizamos un corte con la ayuda de unas pinzas a lo largo del
oprculo del lado cara a nosotros, de forma que queden expuestos los arcos branquiales de ese
lado para su posterior inspeccin.
Con las tijeras de diseccin fina cortamos todo el plano cutneo y muscular hasta llegar a la
cavidad celmica, desde el ano hasta el borde caudal de las branquias.

Continuamos el corte hacia el borde dorsal de la cavidad desde el extremo craneal de la incisin
practicada ventralmente pasando cranealmente a la aleta pectoral.

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6.

Continuamos el corte direccin caudal hasta el borde anal dibujando un ngulo de 90 para
acabar dejando libre la porcin muscular que permita su extraccin.

7.

Retiramos la porcin muscular, y exponemos las vsceras al exterior para realizar la inspeccin.

8.

Procedemos a la identificacin e inspeccin de las vsceras del animal, extrayndolas poco a

poco para una vez en el exterior realizar un examen ms detenido. Identificamos:
Bazo.
Pncreas.
Vejiga natatoria.
Tejido renal. Pronefro.
Estmago.
Ciegos pilricos.
Intestino.
Gnadas.
Vejiga.

9.

Extendemos el corte ms cranealmente para poder visualizar el corazn del animal, el cual
debemos de extraer e inspeccionar tambin.
10. Realizamos unos cortes transversales a nivel caudal para poder examinar el msculo del pez.

10

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11. Cortamos la cabeza del animal.
12. Con la cabeza cortada, realizamos un corte sagital sobre toda la cabeza para observar el interior
del crneo y de la cavidad bucal del pez.
13. Realizamos la inspeccin del encfalo, hipotlamo, hipfisis
14. Echamos los restos del pez en el depsito adecuado.
Aqu se muestra un enlace de un breve video perteneciente al IRTA, en el que se muestra un
ejemplo de necropsia:
https://www.youtube.com/watch?v=Sf8AxvkAhYo

Zebrafish
Necesitamos:

Peces eutanasiados.
2 Pinzas, una de ellas dentada.
Tijeras de diseccin fina.
Tijeras de diseccin roma.
Placa de petri.
Placa de corcho.
Lupa con lmpara.

Procedimiento:
El mismo que la tilapia pero teniendo en cuenta que todo es mucho ms pequeo y trabajamos a
una menor escala, por esa razn haremos uso de la lupa con lmpara.

5. BIBLIOGRAFA

Cooke J.S., D.C. Suski, G.K. Ostranda, L.B. Tuftsb, H.D. Wahl. 2004. Behavioral and
physiological assessment of low concentrations of clove oil anaesthetic for handling and
transporting largemouth bass (Micropterus salmoides). Aquaculture 239, 509-529.

Real Decreto 53/2013, de 1 de febrero, por el que se establecen las normas bsicas aplicables
para la proteccin de los animales utilizados en experimentacin y otros fines cientficos,
incluyendo la docencia.

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