AOAC 960.

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Ensayos de vitaminas
Por Mtodos Microbiolgicos
(A lo largo de todas las etapas, excepto donde se indique lo contrario, proteger
todas las soluciones a la exposicin excesiva de la luz.)
A Soluciones stock para medio base. (Almacenar todas las soluciones en la
obscuridad a 10 C; excepto aquellas que contengan alcohol o tolueno. Pueden
ser preparadas las cantidades proporcionales)
(a) Solucin de Casena Acid hydrolyzed. Mezclar 400 g de casena libre de
vitamina con 2L en constante ebullicin a reflujo en una solucin de HCL
al 5M de 8 12 horas o meter a autoclave a 121-123 C. Remover el HCl
de la muestra por destilacin en un rota vapor hasta que se forme una
pasta. Re disolver esta pasta en agua, ajustando la solucin a un pH de
3.5 +/- 0.1 con NaOH y diluir la mezcla hasta los 4L. Adicionar 8 g de
carbn activado, agitar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbn activado. Filtrar la solucin si se forma un precipitado
durante el almacenamiento. (Algunas presentaciones comerciales de
casena acida-hidrolizada han sido satisfactorias)
(b) Solucin de adenina-guanina-uracilo. Disolver cada uno de los reactivos:
sulfato-adenina, guanina-HCL y uracilo en 50 mL warm HCL (1+1), fro,
y diluir con agua hasta completar 1 L.
(c) Solucin de Aspar agina. Disolver 10 g de L- aspar agina monohidratada
en agua hasta completar 1 L.
(d) Solucin de cistina. Suspender 2 g de L-cistina en 750 mL de agua y
calentar hasta 70-80 C. Agregar HCL (1+1) gota a gota y en agitacin
hasta disolver los slidos presentes. Enfriar y disolver con agua hasta
completar 1L.
(e) Solucin de cistina-triptfano. Suspender 8 g de L cistina y 2 g de Ltriptfano (o puede usarse 4 g de D,L- triptfano) en 1.5 L de agua.
Calentar hasta alcanzar los 70-80 C, y agregar HCL (1+1) gota a gota y
con agitacin hasta disolver todos los slidos. Enfriar y diluir hasta los 2
L.
(f) Solucin de sulfato de manganeso. Disolver 2 g de MnSO4
monohidratado en agua y disolver. Disolver hasta los 200 mL.
(g) Solucin de peptona fotolizada. Disolver 100 g de peptona en 625 mL de
agua destilada y mezclar con una solucin de NaOH elaborada a partir
de 50 g de NaOH en 625mL de agua destilada. Utilice un matraz lo
suficientemente grande para dicha mezcla. Coloque el matraz en una
parrilla con agitacin baja, a 30-50cm de un foco de 100-500 Watts
equipado con reflector durante un tiempo aproximado de 4 a 10 horas.
La luz del foco debe destruir completamente la riboflavina. Mantenga la

solucin a menos de 25 C durante este tratamiento. Despus de este

tratamiento ajuste el pH a 6.0-6.5 con CH3COOH, agregue 18 g de
NaCH3COO anhidro, agite hasta disolver los solidos y diluya con agua
destilada hasta completar 2 L y filtre la solucin si esta se ve turbia.
(h)