PRUEBAS BIOQUMICAS

PRUEBA DE CATALASA
El perxido de hidrgeno es el producto final del metabolismo oxidativo de carbohidratos,
a esta va metablica recibe el nombre de metabolismo aerobio-oxidativo.
La acumulacin del perxido es muy toxico por lo que la mayora de las bacterias aerobias
y anaerobias facultativas exceptuando a Streptococcus sp. producen una enzima llamada
catalasa que degrada el perxido de hidrgeno obteniendo agua y oxigeno gas.
Tcnica e interpretacin de la prueba.
El reactivo utilizado en la prueba es el perxido de hidrogeno al 30%, Hay diferentes
tcnicas para realizar la prueba la mas comn es poner una gota de perxido en el
portaobjetos y posteriormente con un palillo plano tomar un poco de bacteria a partir de una
colonia aislada, si se observa el burbujeo generalmente intenso significa que hay
produccin de oxgeno por lo tanto se entiende que hay presencia de la enzima catalasa.,
hay bacterias que dan una reaccin positiva debil aunque son las menos.
Reaccin de la catalsa.
Control positivo: Stahylococcus aureus
Control negativo: Streptococcus pyogenes

PRUEBA DE OXIDASA:
La oxidasa, es una prueba que se usa para poner de manifiesto el sistema citocromoxidasa,
que se encuentra en organismos aerobios, anaerobios facultativos y ocasionalmente en
microaerfilos, careciendo los anaerobios estrictos de esta. El mtodo ms frecuento es el
indirecto, se realiza en un trocito de papel de filtro, de forma que colocamos una gota del
reactivo de Kovacs en el papel y posteriormente tomamos parte de nuestra colonia con el
asa de siembra, que frotaremos sobre el papel. El resultado ser positivo se se produce una
reaccin de color a los pocos segundos.

PRUEBA VOGUES PROSKEUR

Esta prueba se realiza para determinar la capacidad de un microorganismo de fermentar la glucosa
con produccin de cido por la va cido mixta o con produccin de un producto final neutro
(acetona) por la va butanodilica.
La prueba rojo de metilo y Vogues-Proskauer son dos pruebas en una. Las bacterias que siguen
principalmente la va de fermentacin cidos mixtos a menudo producen suficiente cido para
mantener un ph menor de 4.4.

MEDIO OF
Es una prueba que indica del tipo de metabolismo energtico: Respiratorio (O) o
Fermentador (F). Se suele utilizar glucosa como sustrato. Se detecta la acumulacin de
cidos con un indicador cido-base (azul de bromotimol). La bacteria se inocula con el hilo
recto (por picadura ) y se incuba en condiciones de aerobiosis (sin parafina) y de
anaerobiosis (con parafina, tubo cerrado), simultneamente.
Las bacterias que respiran aerobiamente crecen en la superficie del medio del tubo abierto.
Transforman la glucosa en CO2, la superficie del medio se ver ligeramente amarilla (por la
formacin de cido carbnico originado al reaccionar el CO2 con el agua del medio). En el
tubo cerrado el cultivo se mantiene azul-verdoso. Las bacterias fermentadoras producen
cidos a partir de la glucosa. Viran el cultivo del tubo cerrado a amarillo; en el tubo abierto
se inicia el viraje en el fondo, pero transcurridas 24 horas los cidos pueden difundir por
todo el medio virndolo a amarillo.
Produccin de cido en la parte alta del tubo de cultivoque contiene azcar; el agar blando
se utiliza paradisminuir la mezcla durantela incubacin.

Esta prueba se basa en determinar el metabolismo osicativo o fermentativo de un hidrato de

carbono.

CITRATO
Se utiliza para determinar la capacidad de un microorganismo para usar citrato como nica
fuente de carbono. Esta reaccin es llevada a cabo por la encima citrasa.
Se siembra con asa recta en un tubo con Agar Citrato de Simmons, realizando una estra
sobre la superficie inclinada y se incuban los tubos durante 24 horas. Transcurrido este
tiempo se hace la lectura del test. Este agar contiene citrato sdico como nica fuente de
carbono e in amonio como nica fuente de nitrgeno. Adems contiene azul de
bromotimol como indicador de pH. El agar citrato de Simmons es inicialmente de color
verde, si el microorganismo es capaz de crecer en este medio y utilizar el citrato se
producirn productos alcalinos. El azul de bromotimol por encima de pH 7,6 produce un
viraje del medio a azul.

PRUEBA DE INDOL
Se usa para identificar bacterias capaces de producir indol a partir del triptfano (son
bacterias que producen la enzima triptofanasa) El aminocido triptfano puede ser
convertido por las bacterias que contienen la enzima triptofanasa, a indol, amonio y cido
pirvico.
Para ello, la bacteria se inocula en el medio lquido caldo de tristona que contiene triptfano
y se incuba durante 24 horas. Transcurrido el tiempo de incubacin, la presencia de indol se
detecta aadiendo unas gotas del reactivo de Kovacs que queda sobre la superficie del
caldo, ya que es menos denso, formando una especie de anillo. Se considera que la reaccin
es positiva si el anillo que forma es rojo-morado y negativa si es amarillo, quedando del
mismo color que el reactivo.

PRUEBA AGAR HIERRO LISINA (LIA)

Este medio pone de manifiesto:
- Si la bacteria posee la enzima descarboxilasa (LDC). el medio contiene como indicador
Purpura de Bromocresol, cuando la lisina se descarboxila, el medio se acidifica y el
indicador vira amarillo en el fondo.

MEDIO MIO ( MOVILIDAD, INDOL, ORNITINA)

Esta prueba bioqumica permite identificar bacterias de acuerdo a su motilidad a la reaccin
de Indol a la descarboxilacin de la ornitina.
Son tres pruebas, en esta prueba se evalu la produccin de indol, la descarboxilacin de la
lisina por la enzima ornitina descarboxilasa y la movilidad del microorganismo.
La presencia de indol, degradacin del tripotofano para la enzima triptofanasa libera indol,
acido pirvico, amoniaco y energa.
Procedimiento:
Inocular en picada las cepas de microorganismos en el medio de cultivo e incubar por 24
horas a 37C.

PRUEBA DE SULFURO INDOL MOVILIDAD (SIM)

Determinar si un organismo es mvil o inmvil, si es capaz deliberar cido sulfhdrico por
accin enzimtica de losaminocidos que contienen azufre produciendo una reaccinvisible
de color negro y por ltimo la capacidad dedesdoblar el indol de la molcula triptfano,
adems que laconsistencia del medio permite la observacin de lamovilidad de algunas
bacterias: Produccin de cido sulfhdrico, Produccin de indol, Movilidad.

PRUEBA DE
COAGULASA

La coagulasa es un enzima capaz de desnaturalizar la fibrina del plasma. El objetivo es

buscar en factor de aglutinacin de los microorganismos cuando estos se mezclan con el
plasma. Esta prueba se utiliza para diferenciar microorganismos del genero Staphylococcus.
Procedimiento:
Preparamos una mezcla de 0,1 ml. de CCC (caldo cerebro corazn) y 0,3 ml. de plasma de
conejo en un tubo de ensayo previamente esterilizado. La muestra ya contiene cepas de St.
Aureus. Tapamos el tubo de ensayo con algodn hidroflico y lo llevamos a bao Mara a
37 C durante una hora, observando la muestra cada 15 minutos. Al completa la hora,
sacamos las muestras y observamos sus resultados.
Resultados:
Estratificaremos los resultados en 4 distintos niveles:
1: pequeos cogulos no organizados
2: pequeos cogulos organizados
3: gran cogulo organizado
4: todo el contenido aparece coagulado y se mantiene cuando invierte el tubo.
Se consideran positivos los niveles 3 y 4.
(+) Staphylococcus aureus
( - ) Staphylococcus epidermis.

PRUEBA DE UREASA

Determina la capacidad de un organismo de desdoblar laurea formando dos molculas de

amoniaco por la accin de la enzima ureasa produciendo un cambio de color rojo en el
medio. La hidrlisis de la urea es catalizada por la ureasa, para dardos molculas de
amoniaco. La ureasa es una importante enzima microbiana vinculada con la
descomposicin de los compuestos orgnicos.

PRUEBA TAXO A (SENSIBILIDAD A LA BACITRACINA)

Prueba utilizada para la diferenciacin de estreptococos beta hemolticos del grupo A de
otros estreptococos beta hemolticos..

Fundamento
La bacitracina es un antibitico que inhibe la sntesis de pared celular bacteriana, y a la
concentracin que se encuentra en los discos (0.04 U) inhibe el crecimiento de los
estreptococos beta hemolticos del grupo A de Lancefield pero no inhibe el desarrollo de
otros estreptococos beta hemolticos.
Los micrococcus y los estomatococcus tambin son inhibidos, mientras que los
estafilococos coagulasa negativo son resistentes.

Un resultado sensible, es presuntivo de la presencia de estreptococo grupo A, y se puede

incrementar adems el valor diagnstico mediante la realizacin de la prueba del PYR
(PYR-A-Enterococos, cdigo B12-406-24)
Siembra
1-Realizar una suspensin densa del microorganismo en estudio (de turbidez igual a la del
estandard 0.5 de la escala de Mac Farland).
2-Utilizando un hisopo estril, hisopar una placa de agar sangre.
3-Aplicar un disco de Bacitracina de 0.04 U sobre la superficie de la placa.

Incubacin
Incubar durante 24 horas, a 35-37 C, en atmsfera5-10% de CO2.
Resultados
Examinar la placa para observar cualquier zona de inhibicin del desarrollo alrededor del
disco de bacitracina.

Sensible: presencia de halo de inhibicin del desarrollo alrededor del disco.

Informar: estreptococos beta hemolticos presuntivamente del grupo A por la prueba de
bacitracina.

Resistente: ausencia de halo de inhibicin del desarrollo alrededor del disco.

Informar: estreptococos beta hemolticos que presuntivamente no pertenecen al grupo A por
la prueba de bacitracina.

TAXO P (OPTOQUINA)
PRUEBA DEL DISCO DE OPTOQUINA

Bioqumica: la optoquina es una sustancia qumica, clorhidrato de etilhidrocuprena. La

etilhidrocuprena, la base del disco de optoquina, es insoluble en agua. Sin embargo, el
clorhidrato de etilhidrocuprna es completamente hidrosoluble. La optoquina es un derivado
del alcaloide hidroquinina, que se prepara por hidrogenacin, demitilacin, demetilacin y
etilacin de la quinina. Cada disco de papel de filtro est impregnado con alrededor de 0.02
mL de una dilucin acuosa 1:4000 de la sustancia qumica secada a 37 C. La optoquina
tiene alrededor de 95% de sensibilidad especfica para S pneumoniae y es bacteriosttica a
una concentracin 1:500,00 a 1:100,000.
Determinar la sensibilidad de un microorganismo a la sustancia qumica optoquina. La
sensibilidad a la optoquina prueba la fragilidad de la membrana celular bacteriana. El disco
de optoquina se utiliza de manera especfica para diferenciar entre Streptococcus
pneumoniae (sensible, S. sens) y otras especies de Streptococcs a_ hemolticos (viridans)
(resistente, R); un mtodo fenotpico.
Procedimiento:
A. Inoculacin del microorganismo a ser probado
1. Colonia pura
2. Medio: placa de agar con sangre al 5%
Alternativa: sangre humana antigua (banco de sangre). Deben utilizarse placas de
agar con sangre para la comprobacin de la optoquina, ya que todas las especies de
Streptococcus son microorganismos exigentes y requieren el agregado de elementos
de enriquecimiento para el desarrollo.
3. Mtodo de inoculacin para obtener el mximo crecimiento; dos opciones
Subcultivo en caldo con tripticasa y soja; una nica colonia
B. Inoculacin directa
Colonia nica
Estriar toda la placa de agar con sangre con una ansa de inoculacin
Siembra en estras en las cuatro direcciones.
No intentar usar ms de cuatro discos por placa
C. Incubacin
Placa invertida
Jarra con vela
35 C
18-24 h.

FERMENTACIN DE ALGUNOS
CARBOHIDRATOS
La mayor parte de las pruebas usadas para evaluar la actividad bioqumica o metablica de
bacterias (por medio de la cual puede hacerse una identificacin final de especie), se lleva a
acabo mediante el sub cultivo del aislamiento primario en una serie de medios
diferenciales, cuyos resultados pueden interpretarse despus de uno odos das de
incubacin.
La fermentacin es un proceso metablico de oxido-reduccin que ocurre en un medio
ambiente anaerobio y, en lugar de oxgeno, un sustrato orgnico sirve como el aceptor final
de hidrgeno (electrones). En los sistemas de prueba bacteriolgicos, este proceso se
detecta observando cambios de color en indicadores de pH a medida que se forman
productos cidos. Las bacterias que fermentan un hidrato de carbono son por lo general
anaerobios facultativos. Por medio del proceso de fermentacin un hidrato de carbono es
degradado y descompuesto en dos molculas de carbono (triosas) que son nuevamente
degradadas en un nmero de compuestos de 1,2, 3 y 4 carbonos. Los productos finales
varan con cada especie bacteriana y depende del sistema enzimtico existente en la especie
y las condiciones del medio ambiente .El ms importante ciclo fermentativo de la
degradacin dela glucosa es el ciclo de Embden - Meyerhof aun cuando ste tambin puede
producirse por la derivacin de pentosa o el ciclo de Entner - Duodoroff. Pueden utilizarse
diversos hidratos de carbono. La bacteria usada depende de las dificultades que se
presenten para identificar un organismo determinado.
Utilizando un indicador de pH con un determinado hidrato de carbono puede determinarse
si una bacteria ha degradado el mismo en varios productos terminales, observando un
cambio de color visible.

MEDIOS DE CULTIVOS

MEDIOS ENRIQUECIDOS
Son aquellos que, adems de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de
factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este
enriquecimiento se hace por adicin de sangre u otros productos biolgicos (sangre, suero,
leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichos factores. En ocasiones es posible aadir
suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo (p. ej.
Polivitex, Isovitalex, etc) El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cistena para su
crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de
cultivo (agar chocolate).

CHOCOLATE AGAR SUPLEMENTADO

Uso
Este medio permite el crecimiento de microorganismos exigentes en sus requerimientos
nutricionales, por ejemplo especies de
Streptococcus, Haemophilus y Neisserias patgenas.
Fundamento
El medio de cultivo es ampliamente nutritivo por la presencia de peptona, triptena, extracto
de levadura, extracto de corazn y almidn.
El agregado de sangre y suplemento Britalex con solvente aporta nutrientes, vitaminas y
minerales adicionales.
El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico y el agar es el agente solidificante.
instrucciones
Placas listas para usar.
Caractersticas del producto
Medio de cultivo color marrn.
Almacenamiento
A 2-8 C.
Procedimiento
Siembra
En superficie, estriar directamente el material en estudio.
Incubacin
El tiempo, la temperatura, y la atmsfera de incubacin, dependern
del microorganismo que se quiera recuperar.
En general se recomienda:
Bacterias de fcil crecimiento: en aerobiosis, a 35-37 C durante

18 a 24 horas.
Bacterias exigentes en sus requerimientos nutricionales: en atmsfera
con 5 % de CO2, a 35-37 C durante 18-48 horas.
Interpretacin de los resultados
Observar las caractersticas de las colonias.

Agar sangre
Es un medio enriquecido que se utiliza adems para la investigacin de los diversos tipos
de hemlisis(, gamma ). Se utiliza para el crecimiento de estreptococos. Para la
preparacin del agar sangre se puede utilizar el agar nutritivo enriquecido con cloruro
sdico o un preparado enriquecido con otras sustancias como Columbia o el tripticase de
soja. La adicin de sangre a un medio de cultivo no proporciona las sustancias que estn en
el interior de los hemates, pero s puede aadir factores inhibidores del crecimiento
bacteriano presentes en el suero. Este es un inconveniente que puede solucionarse
calentando la sangre para romper los eritrocitos y para que se destruyan las sustancias
inhibidoras, que son termolbiles.La sangre utilizada como aditivo a estos medios suele ser
sangre de carnero diluida al 5%, pero en algunas ocasiones es necesario utilizar sangre de
otras especies (caballo, conejo, humana), pues facilitan las reacciones hemolticas o
contienen determinados factores de enriquecimiento o no poseen sustancias inhibidoras del
crecimiento de determinados grmenes. Agar chocolate: El agar chocolate se obtiene
calentando la sangre antes de adicionarla al medio base. Por esta razn el agar chocolate
contiene hemoglobina, que aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: el
factor X o hemina termoestable. El agar chocolate es un medio destinado principalmente al
aislamiento de Neisserias (gonococos ymeningococos) y Haemophilus, pero en l pueden
crecer muchos otros microorganismos exigentes. El agar chocolate puede convertirse
quizs en uno de los medios ms enriquecidos si aadimos una mezcla de factores de
crecimiento no contenidas en la sangre. Estas mezclas, denominadas de forma diferente
segn las casas comerciales (Polivitex, Isovitalex, etc.) contienen ms de una docena de
compuestos que confieren a este medio unas cualidades nutritivas extraordinarias. Por
adicin de uno o varios antibiticos pueden lograrse medios inhibidores o selectivos para el
crecimiento de determinados microorganismos. Un ejemplo clsico es el Thayer-Martin,
utilizado para el aislamiento del gonococo y que no es otra cosa que un agar chocolate
enriquecido al cual se ha aadido unamezcla de tres antibiticos especficos que impedirn
el crecimiento del resto de la flora acompaante. Agar MacConkey: Es un medio utilizado

para el aislamiento e identificacin de enterobacterias. Es un medio inhibidor de los

grmenes Gram positivos por su contenido en cristal violeta y selectivo para enterobacterias
por su contenido en sales biliares. En su composicin lleva un azcar (lactosa) y un
indicador (rojo de metilo) que lo convierten en un medio diferencial. Los grmenes que
fermenten la lactosa producen una acidificacin del medio que hacen aparecer de color rojo
fuerte a las colonias resultantes. Las colonias lactosa negativas sern incoloras, apareciendo
del mismo color que el medio subyacente (naranja).

Agar Tripticase de soja

Es un medio utilizado para el crecimiento de grmenes exigentes, como Brucella, Neisseria
o Streptococcus. Es un medio muy enriquecido, pero no es diferencial. Caldo tioglicolato
con resazurina: Es un medio recomendado para controles de esterilidad. Permite el cultivo
de aerobios, anaerobiosy microaerfilos. Tiene un bajo potencial redox que, al aumentar, se
manifiesta por un color rosa del medio.

MEDIOS SELECTIVOS
Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una
poblacin polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar
nutricionalmente el crecimiento de una poblacin microbiana especfica. Un ejemplo de
medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de
salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.

MAC CONKEY AGAR

Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil desarrollo,
aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa
en muestras clnicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia
Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones Peptona 17.0 Pluripeptona 3.0 Lactosa 10.0
Suspender 50 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y Mezcla de sales
biliares 1.5 mezclar hasta uniformar. Calentar Cloruro de sodio 5.0 suavemente y hervir 1 a
2 minutos hasta disolver. Esterilizar en autoclave Agar 13.5 a 121 C durante 15 minutos.
Rojo neutro 0.03 Cristal violeta 0.001 pH final: 7.1 0.2
Fundamento En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales
biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte
de la flora Gram positiva. Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la
colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorcin en
las colonias, y la precipitacin de las sales biliares. Los microorganismos no fermentadores

de lactosa producen colonias incoloras. Resultados Microorganismos Colonias Escherichia

coli Rojas con halo turbio Klebsiella pneumoniae Rosadas mucosas Salmonella
typhimurium Incoloras, transparentes Shigella flexneri Incoloras, transparentes Proteus
mirabilis Incoloras, transparentes Enterococcus faecalis Diminutas, incoloras, opacas.
USO PREVISTO
BD CLED Agar (Agar cistina-lactosa deficiente en electrolitos) es un medio de cultivo
diferencial para aislar y contar las bacterias presentes en la orina. Favorece el crecimiento
de los patgenos y contaminantes urinarios aunque, debido a la ausencia de electrolitos,
impide la indebida proliferacin de especies de Proteus.
PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO
Mtodo microbiolgico.
En 1960, Sandys public el desarrollo de un nuevo mtodo para prevenir la proliferacin de
Proteus en medios slidos mediante la restriccin de electrolitos en un medio de cultivo que
posteriormente se modific en varias ocasiones para utilizarlo en los cultivos de orina1-3.
Se design como medio Cystine-Lactose-Electrolyte-Deficient (CLED) y se proclam que
resultaba ideal para las tcnicas de sumersin del inculo y para la bacteriologa urinaria en
general.
La gelatina, las peptonas de casena y el extracto de carne bovina constituyen los nutrientes
del
BD CLED Agar. Se incluye lactosa en el medio con el objeto de proporcionar una fuente de
energa para los microorganismos capaces de utilizarla a travs de un mecanismo de
fermentacin. Como indicador del pH se utiliza azul de bromotimol, para diferenciar los
microorganismos fermentantes de lactosa y los no fermentantes. Los primeros reducen el
pH y modifican el color del medio, pasando ste de verde a amarillo. La cistina permite el
crecimiento de "colonias enanas" de coliformes. Se reducen las fuentes de electrolitos con
objeto de minimizar la proliferacin de las especies de Proteus. De este modo, el medio
permite la determinacin cuantitativa de los patgenos urinarios, incluido el Proteus, si se
emplean asas calibradas para la inoculacin.

AGAR CHROMOCULT
Medio selectivo para Enterobacterias. Permite diferenciar entre coliformes totales y E. coli

MEDIO DE CULTIVO DIFERENCIAL

Se utilizan para poner en evidencia caractersticas bioqumicas que ayuden a diferenciar
gneros o especies. La adicin de un azcar fermentable o un sustrato metabolizable se
utilizan para este fin. El medio MacConkey es un medio diferencial porque permite
distinguir los grmenes que fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen. Tambin lo
son el C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -), el agar sangre (tipo de hemlisis), el SS (que es
doblemente diferencial), etc.

Agar C.L.E.D.
El medio C.L.E.D. (Cistina Lactosa Electrlito Deficiente) est recomendado para el
recuento e identificacin presuntiva de los microorganismos de las vas urinarias. Su bajo
contenido en electrolitos evita la invasin de los cultivos por Proteus.La presencia de
lactosa en su composicin le confiere el carcter de medio diferencial, aunque la
interpretacin sea diferente al anterior medio por la incorporacin de otro indicador: el azul
de bromotimol. Las colonias lactosa positivas aparecern de color amarillo y las lactosa
negativas lo harn con un color verdoso, blanco o azulado.
Agar S.S.
El agar SS es un medio selectivo empleado para el aislamiento de Salmonella y Shigella a
partir demuestras fecales. El medio contiene sales biliares y verde brillante para impedir el
crecimiento de coliformes y grmenes Gram positivos. La presencia de lactosa y rojo de
metilo nos permiten diferenciar las colonias que fermentan la lactosa (rosas o rojas) de las
que no lo hacen (incoloras).Las especies de Salmonella y Shigella no fermentan nunca la
lactosa por lo que este medio es excelente para descartar todas las colonias que no cumplan
este requisito. El agar SS es doblemente diferencial, porque adems de indicarnos el
comportamiento de los grmenes con relacin a la lactosa, nos muestra los grmenes que
son capaces de producir cido sulfhdrico, que se manifiesta como un precipitado de color
negro en el centro de la colonia. As, una colonia incolora y con un punto negro central es
sospechosa de Salmonella, y ser exclusivamente a estas colonias a quienes se hagan las
pruebas bioqumicas confirmatorias de esta especie. El agar SS es un medio muy inhibidor
que a veces impide incluso el crecimiento de ciertas especies de Salmonella y sobre todo de
Shigella. Por esta razn debe utilizarse siempre junto con otro medio menos inhibidor como
el Hektoen.

Manitol Salado Agar.

Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciacin de
estafilococos.
Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patognicos a partir de muestras
clnicas, alimentos, productos cosmticos y otros materiales de importancia sanitaria.
Tambin, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halfilas de Vibrio, si no se
dispone de medios apropiados (TCBS Medio, Medio Marino, etc.), aunque algunas
especies pueden no desarrollar.
Fundamento
Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracin salina. Los
estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias
aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa negativos,
presentan colonias rodeadas de una zona roja o prpura. Las colonias sospechosas, se
repicarn en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la
prueba de la coagulasa.
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de
carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable,
el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentracin) es el agente selectivo que
inhibe el desarrollo de la flora acompaante, y el rojo fenol es el indicador de pH.
Las bacterias que crecen en un medio con alta concentracin de sal y fermentan el manitol,
producen cidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color
rojo al amarillo.
Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el
manitol.
Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias
amarillas rodeadas de una zona del mismo color.
Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas, rodeadas
de una zona del mismo color o prpura.

MEDIOS DE TRANSPORTE
Se usan para el transporte de muestras clnicas que no pueden sembrarse inmediatamente.
Su utilizacin debe hacerse introduciendo la torunda con la que se obtuvo la muestra en el

interior de lmedio (generalmente en un tubo). Son ejemplos tpicos de este grupo los
medios de Stuart -Amies, Cary-Blair, etc.

Stuart Medio de Transporte

Medio destinado a la recoleccin, transporte y preservacin de muestras clnicas aptas para
exmenes bacteriolgicos. Es til para mantener la viabilidad de gonococos y de otros
microorganismos de difcil desarrollo.
Fundamento
Medio semislido, no nutritivo. Contiene tioglicolato de sodio, el cual provee un ambiente
reducido y es til para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte, y azul de
metileno, que es el indicador de oxido reduccin. De esta manera se favorece la viabilidad
de los microorganismos durante su envo al laboratorio. Cooper encontr que usando
hisopos impregnados con carbn bacteriolgico se recuperan en forma exitosa numerosos
patgenos entricos y respiratorios.
Medio de Transporte AMIES sin/con carbn activado
Este medio se obtuvo de una modificacin del medio Stuart al cual se le reemplaz el
glicerofosfato por un buffer inorgnico superior, la adicin de carbn permiti el
crecimiento de patgenos tratados con antibioterapia y mejorar el desarrollo de fastidiosos
en comparacin con el Stuart. Se le omiti el azul de metileno. Este medio as modificado
permiti recuperar un nmero mayor de patgenos que en el Medio de Stuart. Bsicamente,

cambia el glicerofosfato por un fosfato inorgnico y el azul de metileno por carbn vegetal
neutro farmacutico. Adems, aade iones Calcio y
Magnesio, que ayudan a conservar la permeabilidad de la clula bacteriana.
El Medio Amies es recomendado para secreciones de garganta, vagina, heridas y urogenital
causadas por flora fastidiosa
o difcil de mantener viable como son: Neisserias, Streptococcus, Haemophilus, Listerias ;
mantenindolos en ptimas condiciones para el cultivo hasta despus de 48 hrs , y Medio
Amies con carbn activado se utiliza para secreciones de heridas y urogenital , para el
cultivo y aislamiento de grmenes fastidiosos , tratados o en tratamiento con
antimicrobianos y/o expuestos a metabolitos txicos para su desarrollo, la presencia del
carbn tiene afinidad por compuestos orgnicos , descompone las formas reducidas de
oxigeno y secuestra los radicales libres .V.cholerae permanece viable y cultivable durante
sesenta das en el medio de transporte Amies con carbn.
Cary Blair Medio De Transporte.
Medio recomendado para la recoleccin, transporte y conservacin de muestras aptas para
estudios microbiolgicos.
Es especialmente til para la bsqueda de Vibrio spp. a partir de muestras fecales y rectales.
Fundamento
El primer medio utilizado para el transporte de muestras para estudios microbiolgicos fue
el medio de Stuart. En 1964 Cary y Blair describieron un nuevo medio para el transporte de
muestras fecales. Tena un bajo contenido de nutrientes, un bajo potencial de
oxidoreduccin y un alto pH. En los estudios de Cary y cols., Salmonella y Shigella fueron
recuperadas luego de 45 das de inoculacin. Otros autores han demostrado la eficacia de
ese medio de transporte para estudios microbiolgicos en gastroenteritis. El medio de
transporte Cary-Blair, es semislido debido a la baja concentracin de agar. Tiene un
mnimo aporte de nutrientes que permite la recuperacin de los microorganismos sin que
haya replicacin. El tioglicolato de sodio se incluye para proveer un bajo potencial redox; y
el pH relativamente alto minimiza la destruccin bacteriana por acidificacin.

MEDIOS ESPECIALES
Son aquellos medios de cultivo que por su riqueza nutritiva, sirven para el cultivo de
bacterias muy exigentes. Contienen en su formulacin sustancias inhibidoras para ciertas
bacterias, que permiten el aislamiento y diagnstico precoz de aquellas bacterias que nos

interesan por ser los agentes etiolgicos de las enfermedades infecciosas. Tambin
pertenecen a este grupo aquellos medios que por adiccin de sustancias qumicas
determinadas, facilitan el diagnstico por caractersticas bioqumicas de algunas especies
microbianas.

Los medios especiales se clasifican en:

Medios Mejorados: se obtienen aadiendo a los medios corrientes sustancias de mayor
valor nutritivo, que tienen el efecto de proporcionar condiciones favorables para el cultivo
de bacterias exigentes (Ej. Estreptococos, Corynebacterium).
Las sustancias aadidas pueden ser: sangre desfibrinada (conejo, cordero o caballo), suero
sanguneo (equino), suero fetal bovino, huevo, cerebro, corazn, trozos o extracto de
hgado, carne o levadura, etc.
La mayora de estas sustancias por ser proteicas coagulan con el calor, lo cual impide que
sean esterilizadas en autoclave. Deben por lo tanto ser esterilizadas por filtracin o ser
agregadas a los medios previamente esterilizados, en condiciones de rigurosa asepsia.
Ejemplo: Agar Sangre, Agar Cerebro Corazn, etc.
Medios Selectivos: generalmente el microorganismo patgeno causante del cuadro
infeccioso que se desea aislar a partir de la muestra, no se encuentra puro sino que convive

con otras especies sin inters diagnstico. As por ejemplo es frecuente que las fecas, orina,
exudados, alimentos, agua, etc. estn altamente contaminadas con bacterias saprfitas que
por su desarrollo exuberante en los medios de cultivo corrientes, inhiben el crecimiento o
enmascaran la presencia del agente patgeno buscado.
Los medios selectivos se caracterizan por estimular el desarrollo de ciertas especies
bacterianas y a la vez inhibir el desarrollo de otras especies, lo que permite es aislamiento y
diagnstico de las bacterias con facilidad y rapidez. Estas caractersticas se obtienen por la
adicin de sustancias tales como colorantes de anilinas, sales biliares, antibiticos, etc.
Ejemplo: Agar Brucella, Caldo Selenito Cistina, etc.

Caldo selenito-F: Se utiliza exclusivamente para enriquecimiento de Salmonellas.

TCBS Medio

Medio selectivo para el aislamiento y cultivo de Vibrio cholerae, Vibrio parahemolyticus y

otras especies de Vibrio a partir de heces, agua y alimentos contaminados.
Tambin es conocido como Agar Tiosulfato Citrato Bilis Sacarosa, o como Agar Selectivo
para Vibrios.

Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de levadura, la peptona de carne y la triptena aportan
nutrientes para el desarrollo bacteriano. Es este, el medio selectivo ms adecuado para el
aislamiento de las especies de Vibrio, e inhibidor para la mayora de las enterobacterias.
Esta inhibicin se basa en las altas concentraciones de tiosulfato y citrato, la presencia de
bilis y un pH fuertemente alcalino. La degradacin de la sacarosa es variable entre las
especies de Vibrio y las colonias son verdes para las cepas que no la utilizan y amarillas
para aquellas que producen cido a partir de este azcar. Esto es debido al viraje del color
de los indicadores de pH azul de timol y azul de bromotimol, del color azul al amarillo en
medio cido. Es importante tener en cuenta, que la proporcin de sacarosa en el medio est
equilibrada de forma tal que no inhiba el crecimiento bacteriano por exceso de cido.
El cloruro de sodio favorece el crecimiento de microorganismos. El tiosulfato de sodio
aporta azufre y junto con el citrato frrico permiten la deteccin de produccin de cido
sulfhdrico.

Aumentando la concentracin de cloruro de sodio y disminuyendo la temperatura de

incubacin, pueden aislarse especies marinas sin importancia sanitaria.

Lwenstein-Jensen
Este medio se utiliza para el cultivo de Mycobacterium tuberculosis. Contiene verde
malaquita para inhibir parcialmente el crecimiento de otras bacterias. El huevo se utiliza
como sustancia de enriquecimiento.