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TITULO
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE MICROORGANISMOS
DE LA MATRIZ AMBIENTAL: _____Agua____
ASESORA
Dr. ROSA RICO MATA
DATOS DE IDENTIFICACIN DE LOS ANALISTAS
Fecha de inicio del anlisis: 1 de julio de 2015
Fecha de trmino: 13 de julio de 2015
Nombre
Cargo
Gonzlez Snchez Carla Valeria
Responsable
Mireles Villasana Alejandra
Administrador
Cruz Romo Diana Laura
Laboratorista 1
Prez Gmez Cynthia Sarai
Laboratorista 2
Gaona Aboytes Mara Alejandra
Laboratorista 3
GENERACIN: 2014-2016
aguas termales las usan para lavar ropa utilizando detergentes y blanqueadores que
alteran la composicin natural de dichas aguas. En la zona de estudio deambulan perros,
ganado vacuno y algunos caballos. Se encuentra un balneario por donde hay escorrenta
de aguas termales naturales. Tambin se encuentra aledao a la zona, el hotel Misin
Comanjilla.
Nombre
Ubicacin
/coordenadas GPS
Aguas termales
de comanjilla
Municipio delegacin
Len Gto.
Lat. 21.081300
Ing. 101.473073
SITIO
DE
MUESTR
EO
2.Parmetros Fisicoqumicos
Color: Sin color(Transparente)
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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
1. Justificacin del proceso para la identificacin bacteriana
El proceso de la identificacin de bacterias comienza con las pruebas bioqumicas, las
cuales son un conjunto de reacciones que determinan la actividad metablica de las
bacterias, a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la
bacteria al crecer transforma o no, as como tambin la presencia o ausencia de la
fermentacin y realizando este proceso se realiza la identificacin de bacterias pero
para ello, hay que partir de un cultivo puro obtenido en el aislamiento, resembrado de
una colonia bien aislada.
2. Dos medios de siembra (Nombre y Composicin)
(1) Violeta rojo y bilis agar
Receta:
Extracto de levadura3.0
(2) Agar para mtodos estndar
Peptona...7.0
Sales biliares..1.5
Receta:
Dextrosa..1.0
Peptona de
Lactosa..10.0
casena..............5.0
Cloruro de sodio...5.0
Extracto de
Rojo neutro..0.03
levadura...............2.5
Cristal violeta....0.002
Agar Bacteriolgico..
Agar.15.0
15.0
Morfologa Colonial (Medio 1)
Descripcin
En este medio se observan como colonias de
color rojo prpura, azul intenso de 1 a 2 mm
de dimetro, rodeadas, generalmente, de
una zona rojiza de bilis precipitada. Con un
borde redondo y regulares y pequeas y
grandes colonias puntiformes en donde
crecen juntas y separadas como tambin
crecimiento plano de las bacterias.
Imagen
Imagen
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composicin:
Extracto de levadura..3.0
Peptona7.0
Sales biliares.1.5
Lactosa.10.0
Cloruro de sodio..5.0
Rojo neutro..0.03
Cristal violeta...0.002
Agar.15.0
Peptona gelatina17.0g
Peptona casena...1.5g
Peptona de tejido animal...1.5g
Lactosa ...10.0g
Sales biliares.1.5g
Cloruro de sodio...5.0g
Rojo neutro...0.03g
Cristal violeta.0.001g
Agar..........13.5g
Imagen
Imagen
4. Procedimiento de Aislamiento
(describir detalladamente la cantidad de materiales y los pasos a seguir)
Materiales/Reactivos/Medios de cultivo/ Equipo a utilizar
Material
Medio de cultivo
2 cajas Petri.
1 matraz Erlenmeyer de 250 ml. Agar de bilis y rojo
violeta
1 charola de pesado.
1 esptula.
1 pizeta.
1 mechero de bunsen.
Equipo de rotulacin.
Agua de ionizada.
1 probeta de 100ml.
1Membrana s-pak 0.45 m 47 mm blanca cuadriculada.
Pinzas de acero.
Soporte magntico para Filtros.
Equipo para esterilizar (algodn, papel destreza gasas y papel
Equipo
Autoclave.
Incubadora.
Balanza analtica.
Campana de flujo
laminar.
Bomba de vaco.
Colector de Aluminio
para embudos de
filtrado.
aluminio).
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6. Romper el vaco y extraer el embudo. Con las pinzas se extrae la membrana del
soporte.
7. Se coloca la membrana dentro de una caja Petri sobre el medio de cultivo Agar de
bilis y rojo violeta, con la cuadricula hacia arriba, procurando que no se formen
burbujas entre la membrana y el medio de cultivo.
intenso
hacer una
4. Trabajar
en
sentido
5. Flamear el asa bacteriolgica y del ltimo punto del estriado, estriar el siguiente
cuadrante con movimientos rpidos de la mano
Gramm -
Gramm +
Catalasa +
Movilidad -
Movilidad
+
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Produccin de ndol+
produccion de indol -
Prueba de metabolitos
neutros-
Prueba de citrato+
Prueba de citrato
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FOTO 2
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Medio de
cultivo
utilizado
Resultado
obtenido
(positivo/neg
ativo)
1.-Tincion de
gram
N/A
Negativo
Evidencia fotogrfica
Fundamento de la prueba
Se utiliza para poder diferenciarse la morfologa celular bacteriana que radica en la
diferente estructura de la pared celular de ambos grupos: las bacterias Gram+ tienen una
gruesa capa de peptidoglicano en su pared, mientras que las bacterias Gram- tienen una
capa de peptidoglicano ms fina y una capa lipopolisacardica externa.
Tras la tincin con el primer colorante (Cristal violeta) se efecta un lavado conetanol que
arrastrar al colorante slo en las Gram (-), mientras que en las Gram (+) el colorante
queda retenido. Las clulas Gram (-) se teirn despus con un colorante de contraste
(safranina) para que puedan observarse.
Considerndose gram positiva a las que se visualizan de color moradas y gram negativas a
las que se visualizan de color rosa o rojo.
2.-Movilidad
Agar SIM
Negativo
Fundamento de la prueba
La movilidad se demuestra por un enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde
ms all de la lnea de inoculacin. Se realiza una siembra en picadura, y tras incubar 24 h.
observamos si se ha producido crecimiento en torno a la zona inoculada.
Las bacterias tienen movilidad por medio de sus flagelos, que se encuentran
principalmente entre los bacilos; sin embargo algunas formas de cocos son inmviles. Las
bacterias mviles pueden contener un solo flagelo o muchos; adems su localizacin vara
con su especie bacteriana y las condiciones de cultivo. A veces, las bacterias con movilidad
producen variantes no mviles que parecen ser estables y raramente se revierten en
formas mviles. Los organismos no mviles carecen de flagelos, en el caso del medio SIM
(medio semislido) los microorganismos mviles pueden apreciarse por la turbidez que
producen alrededor de la puncin de siembra.
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3.-Citrato
Caldo citrato
de coser
Negativo
Fundamento de la prueba
Citrato de sodio es una sal del cido ctrico, un compuesto orgnico simple que constituye
uno de los metabolitos del ciclo de los cidos tricarboxilicos. Generalmente los
microorganismos que emplean el citrato como nica fuente de carbono, utilizan sales de
amonio como nica fuente de nitrgeno. El metabolismo del citrato realizado, por algunas
bacterias se realiza por el ciclo de krebs y requiere el desdoblamiento del citrato por la
enzima citritasa (citrato-oxalacetato-liasa o citrato desmolasa) en presencia de magnesio
o manganeso y de transportadores como citrato permeasa.
La citritasa acta sobre el citrato produciendo cido oxalacetico y acetato; productos que
son convertidos enzimaticamente a piruvato y dixido de carbono. Durante esta reaccin el
medio comienza a alcalinizarse por el CO 2 que se genera, el cual se combina con el agua y
el sodio para formar Carbonato un producto alcalino.
Citrato de sodio
Productos metablicos alcalinos (carbonatos y bicarbonatos)- TpH
Azul de bromotimol
(verde)
pH 6.9
4.-Catalasa
No aplica
Azul de bromotimol
(Azul)
pH 7.6
Positivo
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Fundamento de la prueba
La catalasa es una enzima que poseen la mayora de las bacterias aerobias. Descompone
el perxido de hidrgeno en agua y oxgeno. El desprendimiento de burbujas procedentes
del oxgeno indica que la prueba es positiva. El perxido de hidrogeno es un compuesto
producido en pequeas cantidades durante la respiracin aerbica. Su produccin esta
medida por flavo protenas.
H202 + e- + H+
5.-
Fermentacin
de Lactosa
Agar trile
azcar de
hierro
H2O + OH-
No crecimiento
Fundamento de la prueba
Es una prueba usada para la fermentacin de lactosa por parte de la bacteria sumndole
produccin de gas.
Superficie acida/profundidad acida (pico amarillo/ fondo amarillo) fermenta la lactosa, si la
superficie es alcalina/ profundidad alcalina (pico rojo/fondo rojo) no fermenta lactosa. La
presencia de burbujas o ruptura del medio de cultivo produce gas.
Importanteenla identificacinde bacteriasentricas.Fermentadorasde lactosa:Escherichia,
Klebsiella,Enterobacter. Nofermentadoras: Salmonella,Proteusy Shigella
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6.-
Fermentacion
de Glucosa
Agar trile
azcar de
hierro
Negativo
Fundamento de la prueba
La oxidacin de la glucosa produce cido pirvico por una va de derivacin (Shunt), ocurre
en condiciones aerobias y no requiere de fosforilacin inicial.
Superficie la superficie es alcalina/ profundidad alcalina (pico rojo/fondo rojo) no fermenta
glucosa. La presencia de burbujas o ruptura del medio de cultivo produce gas.
7.-
Fermentacin
de Sacarosa
Agar trile
azcar de
hierro
Negativo
Fundamento de la prueba
Es una prueba usada para la fermentacin de sacarosa y la produccin de H 2S por parte de
la bacteria sumndole produccin de gas.
Superficie acida/profundidad acida (pico amarillo/ fondo amarillo) fermenta sacarosa, si la
superficie es alcalina/ profundidad alcalina (pico rojo/fondo rojo) no fermenta sacarosa. La
presencia de burbujas o ruptura del medio de cultivo produce gas.
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Agar SIM
No crecimiento
Picadur
a
Fundamento de la prueba
Permite detectar la produccin de indol, producto de la degradacin metablica del
aminocido triptofano. Las bacterias que poseen la enzima triptofanasa son capaces de
hidrolizar y desaminar el triptofano con produccin de indol, cido pirvico y amonaco. El
indol desdoblado de la molcula de triptofano puede ser detectado cuando reacciona con
el grupo aldehdo del para-dimetilamino benzaldehdo del reactivo revelador (reactivo de
Kovacs), formndose un complejo de color rojo.
Triptofanasa
Trp
9.Rojo de
Caldo RM-VP
Negativo
Metilo,
Fermentacin
Acido-mixta
Fundamento de la prueba
Este ensayo pone en evidencia la capacidad del microorganismo de realizar fermentacin
Acido-mixta. Parte del piruvato se metaboliza produciendo cantidades menores de cido
lctico, frmico y actico, la mayor parte del piruvato se condensa formando
acetilmetilcarbinol, que es reducido a 2,3-butilenglicol, productos que son neutros.
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(Prueba positiva color rosado -violceo en la parte superior del tubo; Prueba negativa no
tiene coloracin).
Microorganismos por cada 4 molculas de piruvato formadas, reducen dos a cido lctico
y dos las metabolizan para formar cido actico y frmico; parte del acetato pasa a
etanol y parte del frmico a CO2y H2en cantidades iguales.
Reaccin ()Amarillo,
Reaccin (+) Rojo
10.-
Produccin de
metabolitos
neutros,
fermentacin
butilengliclic
a de glucosa
Caldo RM-VP
No crecimiento
Fundamento de la prueba
Este ensayo pone la capacidad del microorganismo de producir acetilmetilcarbinol
(Acetona) a partir de la fermentacin butilengliclica de la glucosa. La glucosa puede ser
metabolizada por los microorganismos, a travs de distintas vas metablicas. Segn la
va utilizada, se originarn productos finales cidos (cido lctico, cido actico, cido
frmico), o productos finales neutros.
En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo
bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable.
IDENTIFICACIN DEL MICROORGANISMO AMBIENTAL
EN LA MATRIZ DE ESTUDIO: _____Agua__________________________________
1.- Nombre cientfico del o los microorganismo identificado de acuerdo a los
resultados
del perfil bioqumico planteado ( gnero y especie)
Debido a que en algunas pruebas no se obtuvo crecimiento de la bacteria no logramos
llegar a un resultado definitivo, esto debido a que las condiciones para el crecimiento de
la bacteria no fueron las ptimas, como pudimos observar solo fue posible el
crecimiento de una colonia bacteriana, la cual considerando la temperatura con la que
se obtuvo fue de 35 C y comparando esta temperatura con la que se tiene en las aguas
termales de Comanjilla que es aproximadamente de 80 C, es probable que las bacterias
que se tienen presentes en las aguas termales necesiten una mayor temperatura de
incubacin para desarrollarse en un medio de cultivo y as lograr el crecimiento, por lo
tanto lograr la obtencin de resultados en una marcha de pruebas bioqumicas y as
poder identificar una bacteria.
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