RESUMEN

Modificaciones epigenticas juegan un papel crucial en las enfermedades

humanas. A diferencia de las mutaciones genticas, sin embargo. no cambian
las secuencias de ADN subyacentes. Fenmenos epigenticos han ganado una
mayor atencin en el campo de la investigacin del cncer, con muchos
estudios que indican que estn involucrados de manera significativa en el
establecimiento y progresin tumoral. Methyltronsferases histonas (HMTs) de
mineral o Iorge grupo de enzimas que la lisina de protenas y residuos de
arginina especficamente metilato, especialmente en las histonas, utilizando Sadenosil-t-metionina (SAM) como donante de metilo. Sin embargo, en general,
no han HMTs ampliamente aceptado de alto rendimiento de cribado (HTS)
formato de ensayo, y los inhibidores de referencia no estn disponibles para
muchas de las enzimas. En este estudio, se describe la aplicacin de un,
sistema de reaccin a base de radioistopo miniaturizado: la plataforma
HotSpofM para methyltransferases. Desde esta plataforma emplea tritiada SAM
como un cofactor, se puede aplicar para el ensayo de cualquier HMT. La
principal ventaja de este formato es que cualquier sustrato se puede utilizar,
incluyendo pptidos, protenas, o incluso nucleosomas, sin la necesidad de
etiquetado o cualquier otra modificacin. El uso de esta plataforma, hemos
determinado especificidades de sustrato, cintica de enzimas caracterizadas,
realiz perfilado compuesto lejanos ambos metiltransferasas lisina y arginina, y
llev a cabo HTS para un LOPAC pequea biblioteca contra DOTIL Despus de
la confirmacin de xito y perfiles, encontramos que suramina inhibe DOTIL,
NSD2 y PRMT4 con / C50 valores en un rango bajo pM.
Introduccin

Epigentica implica el estudio de los cambios en la regulacin de la actividad

de los genes y de expresin, independiente de secuencias de genes. Las
modificaciones post-traduccionales de las histonas, incluyendo la metilacin,
acetilacin, fosforilacin, ubiquitinacin y, arco todos los factores epigenticos
importantes. Ncs Histo arc protenas alrededor del cual se enrolla el ADN para
la compactacin y regulacin gnica. Dos copias de cada uno de las histonas
H2A, I-128, H3, y H4 se renen para formar un ncleo de nucleosoma, que se
envuelve por -146 pares de bases de ADN. Histona HI une la nuclcosome en los
lugares de entrada y salida del ADN y bloquea en su lugar. 1 La estructura del
nucleosoma apretado ayuda a empaquetar el genoma re enti en el ncleo de la
clula y puede restringir el acceso de los factores nucleares al ADN. Este
entorno intrnsecamente restrictiva debe ser estrechamente regulada para
asegurar que los procesos celulares permisivas como la transcripcin de genes,

icacin repl, la recombinacin y reparacin slo se producen en las

circunstancias apropiadas. Debido a que la disfuncin de estos sistemas es
inherente en muchos estados de enfermedad, la epigentica se ha convertido
en una frontera emergente para el descubrimiento de frmacos.
El genoma humano codifica ms de 70 enzimas que catalizan la metilacin de
la lisina (Lys, K) o arginina residuos en las histonas HI, H2A, H2B, H3, y 1-14
(Arg, R). Ellos se conocen colectivamente como metiltransferasas de histonas
(HMTs). HMTs histonas principalmente metilato utilizando S-adenosil-Lmetionina (AdoMet o SAM) como un grupo metilo donor.2.J mayora
methyltransferascs lisina de las histonas (HKMTs) contienen un conjunto
-domain [Su (var) 3-9, Enhancer ofZeste, y trithorax]. Los HKMTs slo se conoce
que carecen del dominio SET son los miembros de la DOT! familia.
Expresin irregular de HKMTs est asociado con cnceres humanos. 5 6
Enhancer homlogo de zeste 2 (EZH2) se expresa de forma ubicua durante la
embriognesis temprana, y se restringe a los sistemas nerviosos central y
perifrico y los sitios de hematopoyesis fetal durante ms tarde dcvelopment.7
EZH2 es responsable de la metilacin de Lys 27 de la histona H38, as como la
de Lys 26 en la histona H 1,9 Ovcrexpression de EZH2 se encuentra en muchos
tipos de cncer: prstata (metastsico), mama, hgado, vejiga, colon, piel y
pulmn, entre otros. Sin embargo, sorprendentes hallazgos de Ernst y sus
colegas 10 han sugerido que EZI-12 es un supresor tumoral en neoplasias
mieloides. G9a y G9a-como la protena (GLP), los dos HKMTs altamente
homlogas, metilato de Lys 9 de la histona H3 y tambin han sido
recientemente reportado para inactivar p53 a travs de la metilacin de Lys
373,11 G9a y arco GLP ovcrexpresscd en diversos cnceres, lo que sugiere que
11 arco oncogenes putativos y los posibles objetivos inhibitorias para el
tratamiento del cncer. Gaughan y colegas encontraron que 12 SET7 / 9
metilacin del receptor de andrgenos en Lys 632 mejora la activacin
transcripcional de los genes diana, que SET7 / 9 de expresin se uprcgulated
en tejido de cncer de prstata, y que SET7 (9 es proproliferative y
antiapopttica en clulas de cncer de prstata. La no-SET HKMT, pitido! L,
mcthylatcs Lys 79 en la regin globular de H34 histonas y se inform que se
asocia con la leucemia.