TECNICA DE TINCION DE MICROORGANISMOS

Mara Fernanda Feijoo, Byron nuez, Daniela muriel, Julin muoz

Tecnologa en procesos agroindustriales
Microorganismos
universidad autnoma de occidente

Resumen
Con base a esta metodologa queremos conocer y estudiar la morfologa de las
bacterias, mohos y levaduras, tambin aplicar diferentes mtodos de tincin
para la identificacin de los moo, determinar las caractersticas morfolgicas
microscpicas como forma y agrupacin , aprender a diferenciar si son gran
positivos o negativos, adquirir destrezas en la manipulacin de medios de
cultivos y cepas microbianas.se realizo la tincin de microorganismos en la
universidad autnoma se observo un hongo de mango y de tomate en
diferentes tamaos en 40 y 100 dando a conocer que son bacterias gran
positivas mirando su colonias , aprendimos la manipulacin de cepas
microbianas.
Palabras claves: morfologa, tincin, manipulacin.
Introduccin
Se realiza esta tincin para dar a conocer a los estudiantes las variables de las
bacterias microbiolgicas que se presentan en nuestro medio con el fin de
aprender a diferenciarlas cuales son mohos, levaduras o bacterias tambin
saber cmo desarrollarse en un trabajo de grupo cual es su rol ante la tincin y
dar a conocer las tcnicas de manipulacin de cepas.
Materiales y Mtodos
Cepas de microorganismos
Azul de metileno
Azul de lactofenol
Colorantes de gran: cristal violeta, Lugo, alcohol acetona, fucsina
Soporte para tincin
Solucin salina fisiolgica estril
Laminas portaobjetos

Mechero de bunsen
Cinta pegante
Asas bacteriolgicas
Papel absorbente frasco de boca ancha
Microscopios (todos los disponibles)
Procedimiento
A. Tincin simple
Realice 2 extendidos con cepas bacterianas diferentes
Encienda el mechero y esterilice el asa, (curva para el cultivo liquido
y recta para el cultivo solido) como indico el tutor, djala enfriar cerca
del mechero.
Recoja con el asa estril cultivo de la bacteria, al lado del mechero.
En una lamina portaobjetos limpia, desengrasada y marcada,
coloque una pequea gota de solucin salina estril y realice una
suspensin homognea del cultivo, (si el cultivo es slido). Si el
cultivo bacteriano es lquido coloque una pequea gota de este en la
lmina portaobjetos y extindala.
Deje que el frotis se seque a temperatura ambiente luego pase la
lamina portaobjetos por el mechero 3 veces (con el frotis en la parte
de arriba) con el fin de fijar el extendido.
Coloque la lmina en el soporte de coloracin y cubra el frotis con el
azul de metileno durante 2 minutos.
Lave suavemente el frotis con el agua con el frasco de boca ancha y
deje escurrir sobre el papel absorbente hasta que se seque
Observe al microscopio con el objetivo 100x (de inmersin)
colocando una gota de inmersin sobre el frotis, recuerde colocar el
condensador arriba y el diafragma abierto.
b. coloracin de gram
Realice 2 extendidos con cepas bacterianas diferentes

Realice 2 frotis como se indico para la coloracin simple

Dejar secar al aire libre y luego fije el frotis
Marque la lamina con la cinta de enmascarar: numero de grupo y
coloracin
Coloque la lamina en el soporte de coloracin
Coloque sobre el frotis una pequea cantidad de cristal violeta
durante 1 minuto
Lave con el frasco de boca ancha y escurra el exceso de agua
Decolore aplicando alcohol acetona durante 30 segundos
Lave con el frasco de boca ancha y escurra el exceso de agua

Aplique el colorante de contraste fuscina durante 1 minuto

Por ltimo lave con agua y deje escurrir sobre el papel absorbente a
temperatura ambiente
Observe al microscopio con el objetivo 100x y (de inmersin)
colocando una gota de aceite de inmersin sobre el frotis.
Dibuje sus observaciones

Para hongos y levaduras

coloque cerca del mechero el alimento con hongos y con ayuda de

cinta pegante, recoja muestra de la superficie
marque la lamina con cinta de enmascarar: numero del grupo y
coloracin
coloque en el centro de la lamina portaobjetos una pequea gota de
azul de lactofenol, y luego pegue la cinta a la lamina presiones
ligeramente para eliminar burbujas de aire
observe en el microscopio en los objetivos 10x y 40x realice una
posible identificacin del hongo con los diagramas que encuentra en
el laboratorio
dibuje las observaciones
Resultados

HONGO DE MANGO AL 40

HONGO DE MANGO AL 100

HONGO DE TOMATE AL 40

HONGO DE TOMATE 100

Discusin
Aunque las bacterias no aparecen en diferentes medio que las rodea, difieren
mucho qumicamente esta diferencia qumica es los que permite distinguir las
bacterias por Tincin, pues generalmente, el colorante reacciona con
la clula bacteriana, pero no reacciona con su medio exterior.
Debido a eso la Tincin es importante para la microbiologa debido a que:
Proporciona contraste entre el microorganismo y el medio que lo rodea,
permitiendo diferenciar varios tipos morfolgicos
Permite el estudio de las estructuras internas de la clula bacteriana, tales
como paredes celulares vacuolas o cuerpos celulares
Bibliografa
Adaptado de:
Pia Lpez c, curso de microbiologa, protocolo acadmico.
UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD- Bogot 2005