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1. Definio
Os mtodos imunolgicos desenvolvidos para quantificar a concentrao de
antgenos e anticorpos, por apresentarem grande sensibilidade e
especificidade, tornaram-se tcnicas padronizadas para pesquisa e
aplicaes clnicas. Entre esses mtodos, um dos mais usados o ELISA,
do ingls Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (Ensaio de Imunoabsoro
Ligado a Enzima).
O Elisa se baseia na identificao de anticorpos e ou antgenos, por
anticorpos marcados com uma enzima, de maneira que esta enzima age
sobre um substrato e a reao faz com que o cromgeno (microrganismo
que produz colorao no meio onde se encontra) mude de cor. O produto
da reao, alm de colorido, insolvel para no difundir do local da
formao. Foi inicialmente desenvolvido por Engvall & Perlman e por van
Weeman & Schuurs e, posteriormente, muito utilizado como teste
diagnstico em varias doenas.
2. O teste
Quando o sistema imunolgico do corpo encontra um antgeno
especfico (por exemplo, uma protena caracterstica na superfcie de um
vrus ou bactria), os anticorpos que so especficos para o antgeno
interceptam-no com uma ligao fsica a ele em uma "chave e
fechadura", neutralizando assim o antgeno. O ELISA uma tcnica
fundamental para avaliaes imunolgicas e bioqumicas, utilizada para
detectar o antgeno ou anticorpo em uma amostra, com base em
interaes anticorpo-antgeno. Se um antgeno (ou da mesma forma, um
anticorpo) detectada, um sinal produzido na forma de uma mudana
mensurvel.
Para avaliar a presena de um antgeno especfico, em uma amostra,
um "teste de ELISA" pode ser realizado da seguinte maneira: Uma
soluo de anticorpo, que especfico (isto , tem reconhecimento
exclusivo) ao antgeno putativo, imobilizado em uma superfcie slida
em um poo de uma placa de microtitulao. aplicado em seguida
amostra a ser analisada condies que permitam o antgeno ligar-se aos
anticorpos imobilizados especficos. O material no ligado lavado, e o
antgeno ligado reconhecida mais uma vez em condies de ligao
com a adio de uma soluo de um segundo anticorpo especfico para
o mesmo antgeno, que desta vez acoplado ou ligados a uma enzima
que catalisa a converso de seu substrato a uma forma detectveis e
possivelmente quantificvel.
Esses anticorpos ligados a uma enzima que esto vinculados ao
complexo antgeno-anticorpo imobilizado so resistentes a ciclos de
lavagem e, finalmente, o substrato adicionado e incubado de modo
que a enzima pode catalisar a converso do substrato para o sinal de
deteco do antgeno especfico . ELISAs costumam empregar qualquer
um substrato cromognico ou um fluorognico, que produz uma cor ou
Indireto
Direto ou sanduche
O mtodo de sanduche, ou captura, indicado para identificao de
antgenos, e este antgeno fica entre dois anticorpos. Assim, um anticorpo
primrio especfico ao antgeno adsorvido no poo da microplaca. Em
seguida o antgeno na soluo problema adicionado. Depois o segundo
anticorpo especfico ao antgeno marcado com uma enzima adicionado.
Esta enzima que reage com o substrato fazendo com que o cromgeno mude
de cor. A presena de cor nos poos indica a presena do antgeno, e os poos
que no mudarem de cor indica a ausncia do antgeno em questo.
Dentre os diversos tipos de ELISA, destaca-se o ELISA SANDUCHE. Nesse
mtodo, o anticorpo de um antgeno particular , inicialmente, adsorvido no
well. Depois, o antgeno (soro, urina ou outra soluo contendo o antgeno)
adicionado e se liga ao anticorpo. Finalmente, um segundo e diferente
anticorpo ligado enzima adicionado. Nesse caso, a intensidade da reao
proporcional quantidade de antgeno presente. Logo, permite mensurar at
pequenas quantidades de antgeno.
Competitivo
O mtodo competitivo mais usado para identificao de antgenos, mas pode
tambm ser empregado para a deteco de anticorpos. Neste mtodo primeiro
se adsorve o anticorpo no poo da micro placa. Aps a adsoro do anticorpo,
uma soluo que possivelmente contm o antgeno adicionada sobre os
anticorpos adsorvidos. O prximo passo adicionar o antgeno marcado com
uma enzima. Os poos que no possuem o antgeno primrio (da soluo
problema) aderido ao anticorpo ficam coloridos, enquanto que os poos que
possuem antgenos aderidos aos anticorpos no mudam de cor.
7. Curva Padro
Em geral, faz-se uma CURVA PADRO, preenchendo 8 poos de uma fileira
com concentraes crescentes e conhecidas de antgeno. A curva serve como
padro de comparao para deduzir as quantidades de antgenos nas
solues-testes. O grfico fornecido por um programa prprio para a leitura
de ELISA.
Fogo Selvagem
FS uma doena autoimune de causa desconhecida, provocada por autoanticorpos patognicos antiepiteliais e responsveis pelo fenmeno da acantlise.
Os auto-anticorpos so do tipo imunoglobulina G (IgG), predominando o subtipo
IgG4. Os auto-antgenos contra o qual os anticorpos antiepiteliais reagem e a
desmogleina 1 (Dsg1), molcula, da famlia das caderinas, que compe os
desmossomos, glicoproteina transmembranica com uma parte intracelular
(endodominio) e vrios domnios extracelulares (ectodominio EC). Demonstrouse que os auto-anticorpos do FS em pacientes com doena em atividade reagem
contra os ectodominios EC1 e EC2, que so os dominios extracelulares da Dsg1
mais afastados da membrana celular.
Dermatite herpetiforme
Dermatite herpetiforme (DH) doena clinicamente caracterizada por leses
urticariformes e bolhas associada enteropatia sensvel ao glten (doena celaca).
Nessa doena, h presena de IgA de forma granular, grumosa, pontilhada ou fibrilar
ao longo da zona da membrana basal (ZMB).