Apndice I

Declaracin de Asilomar
En una reunin celebrada en California del 24
al 27 de febrero de 1975, un grupo internacional
de cientficos decidi que debera establecerse un
control estricto sobre el uso de la tcnica experimental que permita el trasplante de genes de un
organismo a otro. Esta declaracin redactada por
el Comit Organizador de la conferencia es el resumen de un informe sometido a la Asamblea de
las Ciencias de la Vida de la Academia Nacional
de Ciencias y aprobado por su comit ejecutivo el
20 de mayo de 1975.
Esta reunin fue organizada para revisar el
progreso cientfico en la investigacin sobre las
molculas de ADN recombinantes y para discutir
las formas adecuadas de tratar los riesgos potenciales de ndole biolgica de este trabajo. Los impresionantes avances cientficos que se han hecho
ya en este campo y en estas tcnicas son de una
gran importancia en el avance hacia una comprensin de los procesos bioqumicos fundamentales en clulas procariotas y eucariotas. El uso
de la metodologa de la recombinacin de ADN
promete revolucionar la prctica de la biologa
molecular. Aunque hasta ahora no se ha producido ninguna aplicacin de las nuevas tcnicas,
existen todas las razones para creer que sern de
gran utilidad prctica en el futuro.
La atencin de los participantes a la reunin se
dirigi de manera especial a la cuestin de si la
suspensin provisional de ciertos aspectos de la
investigacin en este rea, impuesta por el comit para la recombinacin de molculas de ADN
de la Academia Nacional de Ciencias de USA, en
la carta publicada en julio de 1974, debera levantarse; y en ese caso cmo podra emprenderse

el trabajo cientfico con unos riesgos mnimos para el personal de laboratorio dedicado a este tipo
de trabajo, para el pblico en general, y para los
animales y plantas que comparten nuestro ecosistema.
Las nuevas tcnicas que permiten la combinacin de informacin gentica entre organismos
muy diferentes entre s nos colocan en un rea de
la biologa con muchas interrogantes. Incluso en
la actualidad, el hecho de haber limitado la investigacin en este campo, hace que la valoracin de
los posibles riesgos sea extremadamente difcil.
Esta ignorancia es lo que nos ha impulsado a decidir que sera prudente tomar precauciones considerables en la realizacin de esta investigacin.
Sin embargo, los participantes a la conferencia
acordaron que la mayor parte del trabajo sobre
la construccin de molculas de ADN recombinantes debera continuar siempre que se empleen
medidas apropiadas de seguridad, principalmente en lo que se refiere a las barreras biolgicas y
fsicas adecuadas para contener los nuevos organismos creados. Los criterios de proteccin deberan ser ms exigentes an en el comienzo y modificados a medida que la metodologa mejore y se
posea una valoracin ms precisa de los riesgos.
Tambin se acord que hay ciertos experimentos
en los cuales los riesgos potenciales son tan elevados que no deben realizarse dados los medios
limitados actuales. En un plazo ms largo pueden
surgir problemas en la aplicacin, a gran escala,
de esta metodologa en la industria, la medicina
y la agricultura. Pero tambin se reconoci que
una investigacin futura y la experiencia pueden
demostrar que muchos de los riesgos potenciales

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APNDICE I. DECLARACIN DE ASILOMAR

son menos serios y menos probables que lo que

El aislamiento de agentes potencialmente perahora sospechamos.
judiciales puede conseguirse de varias formas. La
contribucin ms importante para limitar la proPrincipios que guan las recomendaciones pagacin de los ADN recombinantes es el uso
de barreras biolgicas. Estas barreras son de dos
y conclusiones
tipos: 1) Huspedes bacterianos perjudiciales inAunque nuestras afirmaciones acerca de los capaces de sobrevivir en un ambiente natural; 2)
riesgos que pueden implicar cada uno de los dife- Vectores no transmisibles e igualmente perjudirentes caminos de investigacin, sobre la recom- ciales (plsmidos, bacterifagos u otros virus) cabinacin de las molculas de ADN pueden diferir, paces de desarrollarse solamente en huspedes espocas personas, si es que existe alguna, creen que pecficos. El aislamiento fsico, ejemplificado por
esta metodologa est totalmente exenta de riesgo. el uso de campanas o, donde sea posible, accesos
Los principios de prudencia para tratar con estos limitados a laboratorios con una presin negativa,
riesgos potenciales son:
proporcionan un factor de seguridad adicional. Es
Que la utilizacin de barreras adecuadas se de especial importancia someterse a una estricta
considere como algo esencial en el proyecto expe- y exigente prctica microbiolgica, la cual puerimental, y que esta proteccin y aislamiento sean de limitar, en gran medida, el escape de organisproporcionados al posible riesgo. Consiguiente- mos del medio experimental, y, por tanto, aumenmente, junto a una escala de riesgos, debera exis- tar la seguridad de la operacin. Por consiguientir la correspondiente escala de proteccin y aisla- te, la educacin y formacin de todo el personal
miento. La estimacin de los riesgos ser difcil e implicado en los experimentos es esencial para la
intuitiva al principio, pero mejorar a medida que eficacia de todas las medidas de aislamiento.
se vayan adquiriendo nuevos conocimientos; en
En la prctica, estos diferentes medios de aiscada etapa habr que comprobar que la proteccin lamiento se complementarn mutuamente y los
y aislamiento son adecuados al riesgo posible. Pa- adelantos sustanciales que se vayan consiguienrece lgico pensar que los experimentos que re- do para el desarrollo de huspedes bacterianos y
quieren operaciones a una escala mayor entraen vectores podran permitir modificaciones en los
riesgos mucho ms serios que los que se corren en requisitos complementarios de aislamiento fsico.
los que se realizan en pequea escala y, por tanEl aislamiento fsico estricto y los procedito, requieren unos procedimientos de proteccin mientos de laboratorio rigurosos pueden reducir,
y aislamiento ms rigurosos. El uso de vehculos pero no eliminar, la posibilidad de agentes potenclnicos o vectores (plsmidos, fagos) y huspe- cialmente peligrosos. Por lo tanto, los investigades bacterianos, con una capacidad restringida pa- dores que basen su trabajo en huspedes y vecra multiplicarse fuera del laboratorio, reduciran tores inactivados como una seguridad adicional
los riesgos de un experimento determinado. Por deben comprobar rigurosamente la efectividad de
tanto, las formas de adecuar los niveles de aisla- estos agentes antes de aceptar su validez como bamiento a los riesgos potenciales podrn variar con rreras biolgicas.
el tiempo, especialmente cuando las tcnicas de
proteccin y aislamiento mejoren. Los medios pa- Recomendaciones para adecuar los tipos
ra valorar y equilibrar los riesgos con los niveles
de aislamiento a los tipos de experimentos
apropiados de aislamiento y proteccin habrn de
revisarse peridicamente. Es de esperar que a traNinguna clasificacin de experimentos en
vs de los canales de informacin, tanto formales cuanto a riesgos, y ningn conjunto de procedicomo informales, nacionales e internacionales, la mientos de aislamiento puede prever todas las siforma por la cual se hace frente a riesgos biol- tuaciones posibles. Ante nuestras dudas actuales
gicos potenciales y de proteccin sea razonable- sobre los riesgos, los parmetros propuestos aqu
mente consecuente.
se han concebido ampliamente y con intento de

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ofrecer una pauta provisional para los investigadores y centros relacionados con la investigacin
del ADN recombinante. Sin embargo, cada investigador tiene la responsabilidad de decidir si,
en un caso concreto, las circunstancias especiales
justifican un nivel ms alto de aislamiento que el
que aqu se sugiere.
Tipo de contencin
1. Riesgo mnimo: Este tipo de aislamiento es
adecuado para aquellos experimentos en los que
los riesgos biolgicos pueden valorarse con exactitud y todo haga esperar que sean mnimos. Tal
aislamiento puede lograrse siguiendo los procedimientos recomendados para los laboratorios de
microbiologa clnica. Estas medidas se centran
fundamentalmente en no beber, comer, o fumar
en el laboratorio, utilizar batas en el rea de trabajo, el uso de pipetas taponadas con algodn o
preferiblemente pipetas mecnicas y una rpida
desinfeccin de los materiales contaminados.
2. Riesgo bajo: Este nivel de aislamiento es
apropiado para experimentos que generan biotipos nuevos, excepto cuando la informacin asequible indique que el ADN recombinante no pueda alterar de manera apreciable el comportamiento ecolgico de las especies receptoras, aumente
de manera significativa su patogenicidad, o impida un tratamiento efectivo de la posible infeccin
resultante. Las caractersticas esenciales de este
aislamiento (adems de los procedimientos mnimos, mencionado arriba) son la prohibicin del
uso de pipetas de boca, un acceso limitado al personal de laboratorio, cabinas de seguridad biolgica para los procedimientos que pueden producir aerosoles (por ejemplo, mezcla y sonicacin).
Aunque los vectores existentes pueden usarse en
este nivel de aislamiento para trabajos de riesgo bajo, deberan adoptarse vectores y huspedes
ms seguros, cuando se dispongan de ellos.
3. Riesgo moderado: Tales medidas de aislamiento son apropiadas para experimentos en los
que haya probabilidad de generar un agente con
un potencial significativo, en lo que se refiere a su
patogenicidad o destruccin ecolgica. Las caractersticas principales de este nivel de seguridad,
adems de las dos clases precedentes, son que
las operaciones de transferencia deben realizar-

se en cabinas de seguridad biolgica (por ejemplo, campanas de flujo laminar), deben utilizarse
guantes durante el manejo de los materiales infecciosos, las lneas de vaco deben estar protegidas
por filtros y en los laboratorios de acceso limitado
debe mantenerse una presin negativa, Sin embargo los experimentos que ofrecen un riesgo moderado deben realizarse slo con vectores y huspedes que tengan una capacidad muy reducida para
multiplicarse fuera del laboratorio.
4. Alto riesgo: Este nivel de seguridad est
ideado para experimentos en los que el potencial
de destruccin ecolgica o patogenicidad del organismo modificado puede ser grave y, por tanto,
presenta un peligro muy serio para el personal del
laboratorio o para el pblico. Las caractersticas
principales de este tipo de medida son las mismas que se utilizan en el manejo de agentes microbiolgicos extraordinariamente infecciosos, y
consisten en medidas de aislamiento del rea de
trabajo de otras reas, mediante cierres de aire,
un ambiente de presin negativa, la exigencia de
cambios de indumentaria, ducha para el personal
y laboratorios equipados con sistema para la inactivacin o eliminacin de agentes biolgicos que
pueden estar contenidos en el aire viciado y en
los residuos lquidos o slidos. Todas las personas que ocupen estas reas deberan llevar batas
de proteccin y ducharse en cada salida del mbito de aislamiento especial. El manejo de los agentes biolgicos debe hacerse exclusivamente en cabinas de seguridad biolgica, en las que el aire
viciado se incinere o pase a travs de filtros especiales. El aislamiento para el trabajo de alto riesgo
incluye, adems de las caractersticas fsicas y de
procedimiento descritas arriba, el uso de vectores
y huspedes rigurosamente probados y cuyo desarrollo pueda ser confinado al laboratorio.

Tipos de experimentos
Clculos precisos de los riesgos relacionados
con diferentes tipos de experimentos son difciles de obtener, debido a nuestra ignorancia sobre
la probabilidad de que los riesgos que se anticipan se manifiesten. Sin embargo, los experimentos que implican la construccin y propagacin de

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las molculas de ADN recombinantes procedentes de: 1) procariotas, bacterifagos y otros plsmidos; 2) eucariotas, han sido clasificados como
de riesgo mnimo, bajo, moderado y alto para
orientar a los investigadores en su eleccin de la
proteccin apropiada. Estas designaciones deberan ser consideradas como valoraciones provisionales, que necesitarn una revisin a la luz de la
experiencia futura.
Las mismas molculas de ADN recombinante,
como distintas de las clulas portadoras, pueden
ser infecciosas para bacterias o para organismos
superiores. Las preparaciones de ADN en estos
experimentos, especialmente en grandes cantidades, deberan ser inactivadas qumicamente antes
de su eliminacin.
1. Procariotas, bacterifagos y plsmidos bacterianos: Donde la construccin de las molculas
de ADN recombinante y su propagacin implica
agentes procariticos que se sabe que intercambian informacin gentica de forma natural, los
experimentos pueden realizarse con medidas de
seguridad de riesgo mnimo. Siempre que los experimentos hagan sospechar un riesgo potencial,
debe asegurarse una proteccin ms rigurosa.
Los experimentos que implican la creacin y
propagacin de las molculas de ADN recombinante a partir de ADN de especies que ordinariamente no intercambian informacin gentica,
genera biotipos nuevos. Dado que tales experimentos pueden ofrecer riesgos mayores que los
relacionados con los organismos originales, deberan hacerse, por lo menos, con las medidas de seguridad recomendadas para experimentos de bajo
riesgo. Si los experimentos implican organismos
patgenos, o determinantes genticos que puedan
aumentar la patogenicidad de las especies portadoras, o si el ADN transferido puede conferir a los
organismos portadores nuevas actividades metablicas no nativas para estas especies, y, por tanto, modificar su relacin con el medio ambiente,
entonces debe utilizarse el aislamiento para riesgo
moderado o alto.
Los experimentos que provoquen en los agentes patognicos para el hombre un aumento de la
resistencia a antibiticos o a desinfectantes, podran ser realizados slo bajo condiciones de se-

APNDICE I. DECLARACIN DE ASILOMAR

guridad de riesgo moderado o alto, dependiendo
de la virulencia del organismo implicado.
2. Virus animales: Los experimentos que implican unin de genomas virales o segmentos de genes a vectores procariotas y su propagacin en clulas procariotas deberan ser realizados con sistemas de husped-vector, con una capacidad de desarrollo nula fuera del laboratorio y con medidas
de seguridad adecuadas para un riesgo moderado. Los segmentos rigurosamente caracterizados
y purificados de genomas virales no oncognicos
demostrablemente no transformantes de ADN de
virus oncognicos pueden unirse a vectores actualmente existentes y propagados dentro del recinto exigible para un riesgo moderado; cuando se
disponga de sistemas de husped-vector ms seguros, tales experimentos pueden llevarse a cabo
con medidas de bajo riesgo.
Los experimentos encaminados a introducir o
propagar ADN no viral u otros agentes de bajo
riesgo en clulas animales deberan utilizar como
vectores slo ADN animal de bajo riesgo (por
ejemplo, viral, mitocondrial) y las manipulaciones deberan realizarse donde existan las medidas
de aislamiento para riesgo moderado.
3. Eucariotas: Los riesgos asociados con la
unin fortuita de fragmentos de ADN de eucariotas a vectores de ADN de procariotas y la propagacin de estos ADN recombinantes en huspedes procariotas son los ms difciles de valorar.
A priori, el ADN de vertebrados de sangre caliente es ms probable que contenga genomas virales, potencialmente patgenos para el hombre,
que los ADN de otros eucariotas. Por consiguiente, los intentos de clonar segmentos de ADN de
tales animales y particularmente los genomas de
primates deberan realizarse slo con sistemas de
husped-vector que tengan una capacidad demostrada de crecimiento restringido fuera del laboratorio y con medidas de aislamiento adecuadas para riesgo moderado. Hasta que los segmentos clonados de ADN de vertebrados de sangre caliente estn completamente caracterizados, deberan
mantenerse en el sistema husped-vector de mxima restriccin en laboratorios de contencin de
riesgo moderado; cuando tales segmentos clonados estn caracterizados, pueden ser propagados,

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como se ha sugerido para los segmentos purificados de genomas virales.
A menos que los organismos sinteticen un producto conocido como peligroso (tales como toxinas, virus), los ADN recombinantes de vertebrados de sangre fra y todos los dems eucariotas
inferiores pueden ser construidos y propagados
con el sistema husped-vector ms seguro entre
los disponibles, con medidas de aislamiento para
bajo riesgo.
El ADN purificado de cualquier fuente, que
realice funciones conocidas y puedan ser juzgadas como no txicas puede clonarse con vectores ordinariamente disponibles y con medidas de
seguridad para bajo riesgo. (El trmino txico se
aplica aqu para las toxinas, productos potencialmente oncognicos o sustancias que podran perturbar el metabolismo normal, si se produjesen en
un animal o planta por la presencia de un microorganismo).
4. Experimentos que deben ser aplazados: Hay
experimentos factibles que presentan tan graves
peligros que su realizacin no debera emprenderse de momento con los sistemas husped-vector
ahora disponibles y con las medidas de proteccin
actuales. Estos incluyen el clonaje de los ADN recombinantes derivados de organismos, considerados como muy patognicos (es decir, agentes etiolgicos de las clases III, IV y V segn la clasificacin del Departamento de la Salud, Educacin y
Bienestar Social de USA), el ADN que contenga
genes txicos y experimentos a gran escala (ms
de 10 litros de cultivo) usando ADN recombinantes capaces de sintetizar productos potencialmente dainos para el hombre, animales o plantas.

que podran ser puestas en marcha de manera inmediata y directa por la comunidad cientfica.

Desarrollo de vectores y huspedes ms seguros

Una importante y esperanzadora consecucin
de la reunin fue la verificacin de que bacterias y vectores especiales con capacidad restringida para multiplicarse fuera del laboratorio pueden construirse genticamente, y que el uso de estos organismos aumentar la seguridad de los experimentos con ADN recombinantes en muchos
rdenes de magnitud.
Los experimentos en este sentido estn en fase de progreso, y en un futuro prximo se podr
disponer de variantes del bacterifago, plsmidos
no transmisibles y cepas especiales de Escherichia coli. Todos estos vectores podran reducir
extraordinariamente el riesgo potencial al mismo
tiempo que ayudarn a mejorar la metodologa.
Otros sistemas de husped-vector, especialmente
las cepas modificadas de B. subtilis, bacterifagos y plsmidos, pueden tambin ser tiles para
fines concretos. Muy posiblemente se encontrarn
vectores adecuados y totalmente inocuos para los
huspedes eucariotas, tales como levaduras, clulas animales y vegetales fcilmente cultivables. Es
probable que haya un continuo desarrollo en este
rea y los participantes de la reunin acordaron
que sistemas husped-vector en que se introducen
mejoras que reduzcan los riesgos de la investigacin de ADN recombinante estarn a disposicin
de todos los investigadores interesados.

Procedimientos de laboratorio

Realizacin
En muchos pases, organizaciones nacionales
empiezan a dar pasos encaminados a la elaboracin de cdigos o normas aplicables en la realizacin de experimentos con riesgos conocidos o
potenciales. Mientras stos no estn perfectamente establecidos, urgimos a los cientficos para que
usen como una gua lo que se propone en este documento. Adems, hay algunas recomendaciones

Es responsabilidad del investigador principal

informar al personal del laboratorio de los riesgos de tales experimentos antes de que sean iniciados. Es necesaria una discusin libre y abierta para que cada participante en el experimento
comprenda plenamente la naturaleza del mismo y
cualquier riesgo que pueda implicar. Todo el personal ha de ser adiestrado en lo que se refiere a las
medidas de seguridad encaminadas a controlar los
riesgos, incluidas las actuaciones de emergencia,

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en caso de que se presente un riesgo inesperado.
Se recomienda tambin que se realice peridicamente un control apropiado de la salud de todo el
personal, incluida una monitorizacin serolgica.

Intercambio de experiencia y cursos de

adiestramiento
La investigacin en este rea avanzar con rapidez y los mtodos utilizados encontrarn aplicacin en muchos problemas biolgicos diferentes.
Es imposible prever la gama completa de posibles
experimentos y establecer un juicio preciso sobre
cada uno de ellos. Por lo tanto, es esencial llevar a
cabo una valoracin continua de los problemas, a
la luz de los nuevos conocimientos cientficos. Esto podra lograrse por medio de una serie de reuniones de trabajo y conferencias anuales, algunas
de las cuales deberan tener lugar a nivel internacional. Deberan existir, tambin, cursos para el
adiestramiento de personal en los mtodos importantes, ya que es probable se interesen por este
tipo de trabajo laboratorios que pueden no haber
tenido una extensa experiencia en este rea. Debe
darse prioridad a la investigacin que puede mejorar y valorar la eficacia de las medidas de aislamiento de los sistemas husped-vector ya existentes y de los que puedan encontrarse en el futuro.

Conocimientos nuevos
Este documento presenta una primera valoracin de los riesgos potenciales a la luz de los
conocimientos actuales. Sin embargo, se sabe
muy poco acerca de la viabilidad de cepas de bacterias y bacterifagos de laboratorio en diferentes
nichos ecolgicos del mundo exterior. Y menos
an se sabe acerca de si las molculas de ADN
recombinantes mejorarn o empeorarn la supervivencia de sus vectores y huspedes en la naturaleza. Estas cuestiones son fundamentales en la valoracin de cualquier nuevo organismo que pueda
construirse en el futuro. Es necesario emprender
una investigacin en este rea y darle una gran
prioridad. Sin embargo, la mayora de los bilogos moleculares que pueden construir molculas

APNDICE I. DECLARACIN DE ASILOMAR

de ADN recombinante no estn realizando estos
experimentos y ser necesario facilitar una investigacin en colaboracin entre ellos y grupos experimentados en el estudio de la infeccin bacteriana o la microbiologa ecolgica.
Tambin debera realizarse un trabajo que haga
posible la monitorizacin del escape o diseminacin de vehculos clnicos y sus huspedes.
Nada se sabe acerca de la capacidad de infeccin potencial en organismos superiores de fagos
o bacterias que contengan segmentos de ADN eucariticos y muy poco sobre la capacidad de infeccin de las molculas de ADN por s mismas.
La transformacin gentica de las bacterias ocurre, sin duda, en animales, lo que sugiere que las
molculas de ADN recombinantes pueden retener
su potencia biolgica en este ambiente. Hay muchos interrogantes en este campo cuyas respuestas son esenciales para una valoracin correcta de
los riesgos de los experimentos con molculas de
ADN recombinantes. Ser necesario asegurar que
este trabajo se planifique y se lleve a cabo; y ser
especialmente importante tener esa informacin
antes de que se intente la aplicacin a gran escala
del uso de las molculas de ADN recombinantes.