Universidad de San Carlos de Guatemala

Facultad de Ingeniera
Escuela de Ingeniera Qumica
Microbiologa
Ing. Carlos Wong

Lectura Dirigida No. 2: Enzimas

Luis Emilio Garcia Laj

2012 13048
Guatemala, 17 de agosto del 2015

Objetivos

General
Llevar a cabo el estudio de las enzimas, as como entender su importancia en
las clulas vivas.
Especficos
1. Clasificar a las enzimas segn el sitio en el que actan.
2. Determinar las propiedades fsicas y qumicas de las enzimas.
3. Definir las condiciones que interfieren en la actividad enzimtica.
4. Entender la importancia de la regulacin de la actividad enzimtica.
5. Dar a conocer los distintos mtodos para la deteccin y medicin de la
actividad enzimtica.
6. Identificar a los agentes implicados en una reaccin enzimtica.
7. Establecer las principales fuentes de enzimas para la preparacin de estas.

Introduccin

Son diversas las actividades que debe llevar a cabo una clula viva para poder
desarrollarse y sobrevivir, como modificar los nutrientes del medio antes que
ingresen a ella y realizar los cambios necesarios una vez estos nutrientes estn
dentro. Algunos de estos materiales luego de ser asimilados, pasan a formar parte
de la clula, mientras que otros son desintegrados para aprovechar la energa que
se desprende de ellos, y de esta forma utilizar dicha energa en la sntesis. Todos
estos cambios resultan complejos si se considera tanto la cantidad de nutrientes
que puede ingresar a la clula as como la variedad de sustancias sintetizadas
como componentes celulares. Es aqu entonces donde surge la intrigante de cmo
la clula es capaz de realizar todo esto. La respuesta se encuentra en la actividad
de las enzimas, que son aquellas sustancias que se encuentran dentro de la clula
y que en cantidades muy pequeas son capaces de realizar grandes cambios en
ella.
De cierto modo, es posible considerar a las enzimas las responsables del
proceso de la vida. Cualquier obstculo en la actividad enzimtica se ve reflejado
en algn cambio en la clula, hasta tal punto que pueda producirse su muerte. Por
lo tanto, para poder entender todo proceso asociado a la vida, es indispensable
conocer las reacciones que llevan a cabo las enzimas. A continuacin se muestran
las principales caractersticas de las enzimas, as como las condiciones que
pueden afectar su actividad. De igual forma, se presenta la regulacin en la
actividad enzimtica, un aspecto muy importante para el control del metabolismo
de una clula.

Cuerpo de la investigacin

Qu es una enzima?
Bsicamente puede definirse a una enzima como un catalizador o agente
cataltico orgnico producido por las clulas vivas. Esto significa que son
sustancias que son capaces de acelerar las reacciones qumicas sin intervenir en
ellas, y en este caso se habla especficamente de reacciones que ocurren en los
organismos vivos. Sin embargo, aunque la mayora de las enzimas son producidas
dentro de las clulas, algunas son expulsadas mediante la pared celular y
funcionan en el medio celular. Esto es lo que permite entonces clasificar a las
enzimas de acuerdo con el sitio donde actan:

Enzimas intracelulares o endoenzimas, cuya funcin principal es la de

sintetizar el material celular y llevar a cabo reacciones catablicas para
desprender energa que posteriormente ser aprovechada por la clula.

Enzimas extracelulares o exoenzimas, cuya funcin principal es llevar a

cabo todos los cambios pertinentes en los nutrientes del medio para
asegurar que ingresen a la clula en forma de alimento.

Propiedades fsicas y qumicas

Dado que las enzimas son protenas o protenas combinadas con otros grupos
qumicos, se les atribuyen las mismas propiedades caractersticas de las
protenas, que son:

Desnaturalizacin con el calor

Precipitacin con el etanol o concentraciones elevadas de sales inorgnicas
No se dializan mediante membranas semipermeables

La mayora de las enzimas son una protena combinada a una molcula

orgnica que posee bajo peso molecular, denominada coenzima. La protena en
este caso es conocida como apoenzima. Cuando se da la unin entre ambas, se
completa una enzima que recibe el nombre de haloenzima. La parte principal de
algunas coenzimas es una vitamina. A veces, la parte no proteica de una enzima
puede ser un metal, el cual puede estar bien ligado a la protena o unido
flojamente de forma que se pueda disociar con facilidad, esto en funcin de la
naturaleza misma de la enzima. De la misma manera, muchas enzimas necesitan
de la adicin de iones metlicos (Mg +2, Mn+2, Fe+3, entre otros) para activar su
funcin enzimtica. La razn de esta adicin es para que dichos iones acten
paralelamente con la protena de la enzima, y se les conoce como coenzimas
inorgnicas o cofactores.
Varias enzimas han sido extradas de las clulas directamente mediante la
combinacin de tcnicas fsicas y qumicas, lo que ha permitido obtenerlas en
estado puro. Las molculas en enzimas resultan bastante eficaces para acelerar la
conversin de sustratos en productos finales. Dicha propiedad junto con el hecho
de que las enzimas no interfieren durante la reaccin, permiten inferir por qu es
necesario que la cantidad de las enzimas sea muy pequea al llevar a cabo los
procesos celulares. Tambin cabe mencionar que las enzimas son inestables en el
sentido a que son susceptibles a modificar su actividad dependiendo de las
condiciones fsicas y qumicas en las que se encuentren. Esto repercute en la
prdida de funciones celulares en las que intervienen. Las dos caractersticas ms
importantes de las enzimas son las siguientes:

Su alto poder cataltico

Su alto grado de especificidad por los sustratos

Una enzima puede reaccionar con un solo sustrato o con un grupo particular de
sustratos vinculados qumicamente. Cuando se da esto, se dice entonces que el
grupo que acompaa a dicha transformacin es un sistema enzimtico. Estas

reaccionan en cadena, es decir que cada enzima por su cuenta produce un

cambio especfico en el producto formado por la reaccin enzimtica anterior. La
ltima reaccin en el sistema es la que da los productos finales.
Nomenclatura de las enzimas
Dado a que los nombres aplicados a las enzimas han generado una gran
controversia en los ltimos aos debido a que en muchos casos se le dan distintos
nombres a una enzima o se le da el mismo nombre a enzimas diferentes, surgi la
Comisin internacional en enzimas, establecida por la Unin Internacional de
Bioqumica. Esta comisin bsicamente dio algunas recomendaciones para
nombrar a las enzimas basndose en el tipo de reaccin cataltica y en sus
propiedades especficas, con el fin de obtener un sistema ms racional y
sistemtico en lo que respecta a su nomenclatura. Sin embargo, se ha encontrado
que muchas enzimas poseen formas estructurales distintas pero propiedades
catalticas idnticas (o similares). Estas enzimas reciben entonces el nombre de
isoenzimas o isozimas, quedando fuera del sistema actual de nomenclatura.
La naturaleza de las reacciones enzimticas
La mayor parte de las reacciones llevadas a cabo por las enzimas involucran a
una enzima (E) y a un sustrato (S), los cuales se combinan para dar lugar al
complejo enzima-sustrato (ES), que despus se rompe para dar el producto P. la
enzima como tal no interviene en la reaccin, nicamente queda libre para
reacciones futuras con otra molcula similar de sustrato. Este proceso se repite
varias veces. Cuando no se observan ms cambios, es porque la reaccin ha
llegado al equilibrio. Dado que todas las enzimas no actan de la misma manera,
cada una posee su propia forma de reaccionar, a esto se le conoce como
mecanismo de accin de las enzimas. Surge entonces el concepto de activacin
del sustrato seguida de la formacin del complejo enzima-sustrato. La activacin
de la molcula de sustrato se da debido a la gran afinidad qumica del sustrato en

ciertas reas en la superficie de la enzima, lo que se conoce como sitios activos.

No obstante, existen condiciones que afectan la actividad de las enzimas durante
una reaccin, que son:

Concentracin de la enzima
Concentracin del sustrato
pH
Temperatura

En trminos generales, puede establecerse que la variacin en alguna de estas

condiciones puede generar cambios en las enzimas, incluso destruirlas. Para
visualizar esto existen curvas de comportamiento especficas para cada enzima,
dado que no todas responden de igual forma bajo estas condiciones.
Inhibicin de la actividad enzimtica
A veces resulta de inters inhibir la actividad de una enzima, y esto es posible
gracias a los agentes qumicos. En particular, se hace nfasis en aquellas
sustancias qumicas que inhiben de forma ms sutil que la desnaturalizacin de la
porcin protenica de la enzima. La inhibicin de las enzimas puede clasificarse en
dos tipos:

No reversible: cuando esta se da, es porque se ha modificado o destruido

uno o ms de los grupos funcionales presentes en la enzima.

Reversible: se subdivide a su vez en competitiva y no competitiva, cuya

diferencia es que en la primera es posible revertirla a travs del aumento en
la concentracin del sustrato, mientras que en la no competitiva, no.

Cabe mencionar tambin que algunos agentes qumicos poseen gran afinidad
por los iones metlicos, formando complejos con el metal. Esto reitera lo que se
mencion anteriormente respecto a la necesidad de algunas enzimas para ejercer
su actividad. Este tipo de inhibicin enzimtica es no competitiva ya que el

inhibidor no compite con el sustrato por ocupar un sitio activo en la superficie de la

enzima. Del mismo modo, al responsable de inducir la formacin de una enzima
es conocido como inductor.
Mtodos para la deteccin y medicin de la actividad enzimtica
Esto se logra mediante varias tcnicas, algunas de ellas requieren instrumentos
muy sofisticados, mientras que otras necesitan nicamente tubos de ensayo y
algunos reactivos. Es necesario conocer algunos aspectos, previo a realizar dicho
anlisis, que incluyen:

La naturaleza de la reaccin catalizada

Cofactor y coenzima necesarios
Concentraciones necesarias para el sustrato y para el cofactor o coenzima
El pH ptimo
La temperatura ptima
Un mtodo analtico simple para determinar la desaparicin del sustrato o la
aparicin de los productos en la reaccin
Dentro de los mtodos ms comnmente empleados figuran la

espectrofotometra, los mtodos por radioistopos y la cromatografa.

Preparacin de las enzimas
La fuente de enzimas en cualquier experimento microbiolgico debe ser una de
las siguientes:

Clulas de un cultivo en desarrollo

Clulas tomadas de un cultivo en desarrollo y re suspendidas en una

solucin no nutritiva
Enzimas extradas de clulas

Estas fuentes pueden obtenerse en distintos grados de pureza. De igual forma,

las tcnicas utilizadas para realizar esto son:

Del cultivo en desarrollo

De las clulas inactivas
De las enzimas libres de clulas

Regulacin de la actividad enzimtica

Por ltimo, es necesario conocer el control del metabolismo de las clulas para
la regulacin de su actividad enzimtica. En general, las enzimas son controladas
o reguladas de dos formas: control gentico y control directo de catlisis. Esto es
de suma importancia para que todas las actividades qumicas dentro de la clula
se integren unas a otras, para permitir la sntesis del material necesario para
desarrollar su metabolismo y as mismo su crecimiento personal. El control del
metabolismo celular requiere de la regulacin de la actividad enzimtica.

Conclusiones

1. Las enzimas pueden clasificarse segn el sitio en el que actan en

intracelulares y extracelulares.
2. La semejanza entre enzimas y protenas permite establecer una similitud
entre sus propiedades fsicas y qumicas.
3. Las condiciones que pueden afectar a la actividad enzimtica son la
concentracin de la enzima y del sustrato, el pH y la temperatura.
4. La importancia de la regulacin de la actividad enzimtica radica
principalmente en que permite controlar el metabolismo de las enzimas, lo
que repercute en una buena ejecucin de sus funciones.
5. Los mtodos actuales para la deteccin y medicin de la actividad
enzimtica son la cromatografa, los mtodos por radioistopos y
espectrofotometra.
6. En una reaccin enzimtica intervienen una enzima y un sustrato, que se
unen para formar un complejo, el cual posteriormente se desintegra para
dar lugar al producto.
7. Las principales fuentes de enzimas son clulas de un cultivo en desarrollo,
clulas tomadas de un cultivo en desarrollo y re suspendidas en una
solucin no nutritiva y enzimas extradas de clulas.

Bibliografa

1. Pelczar, Michael J. Microbiologa. Segunda edicin en espaol.

McGraw-Hill: Mxico: 1982. ISBN: 968-6064-65-8.

Anexos

Figura 1.

Reaccin enzimtica

Figura 2.

Inhibicin competitiva.