1. Antecedentes histricos.

1.1.Anton Van Leeuwenhoek

. 1.2.Luis Pasteur.
1.3.Robert Koch.
1.4.Joseph Lister.
1.5.Alexander Fleming.
2. Origen de los microorganismos.
2.1.Teoras evolutivas.
2.1.1. Generacin espontnea.
2.1.2.Endosimbitica.
2.1.3.Del origen de las especies.
2.2.Origen evolutivo de las clulas eucarioticas y procariticas.
2.2.1.Diferencias entre clulas eucarioticasy procariticas.
3. Campo de estudio.
3.1.Eucariontes.
3.1.1 Algas.
3.1.2 Hongos.
3.1.3 Protozoarios.
3.2. Procariontes.
3.2.1. Bacterias.
3.3. Sin estructura celular.
3.3.1.Virus.
3.3.2. Priones.
4. Mtodos para el estudio de los microorganismos.
4.1.Mtodos fenotpicos.
4.1.1.Microscopa.
4.1.2.Cultivo de microorganismos.
4.1.3.Tincin de Gram.
4.1.4.Tolerancia al oxgeno.
4.1.5.Morfologa de colonia.
4.1.6.Motilidad.
4.1.7.Tipificacin bioqumica.
4.1.8.Perfiles de protenas.

4.1.9. Reaccin antgeno anticuerpo (ELISA, inmunodifusin).

4.2.Mtodos genticos.
4.2.1.PCR (reaccin en cadena de polimerasa).
4.2.2.Hibridaciones.
4.2.3.Secuenciacin de la fraccin 16s del rRNA.
5. Vinculacin de la microbiologa con otras reas.
5.1.Medicina.
5.2.Odontologa.
5.3.Industria.

Antonie van Leeuwenhoek.

Investigador holands. Construy microscopios simples de elevado

poder de resolucin, que le permitieron perfeccionar el estudio y
conocimiento de los tejidos orgnicos. Descubri las levaduras y los
glbulo de la sangre. Resumi sus conocimientos en Opera omnia sive
Arcana naturae ope exactissimorum microscopiorum detecta (17151722). Fue conocido por las mejoras que introdujo a la fabricacin de
microscopios y por sus descubrimientos de los glbulos rojos, el
sistema capilar y los ciclos vitales de los insectos, el primero en
observar las bacterias y los protozoos. Sus investigaciones en los
animales inferiores refut la doctrina de la generacin espontnea y
sus observaciones sentaron las bases de la bacteriologa y la
protozoologa. Fue reconocido como el Padre de la Microbiologa.
Desarroll tanto fijaciones para pequeas lentes biconvexas
montadas sobre platinas de latn, que se sostenan muy cerca del ojo,
al modo de los anteojos actuales, como estructuras
tipo microscopio en la que se podan fijar tanto la lente como el objeto
a observar. Descubrimiento de los espermatozoides

Luis Pasteur.

Las aportaciones de Louis Pasteur a la Microbiologa fueron:

- Descubri que la fermentacin es un proceso que realizan los
microorganismos para obtener energa en ausencia de O2, algunos de
forma exclusiva (anaerobios estrictos) y otros de forma alternativa,
cuando no hay O2 (anaerobios facultativos)
- Demostr que la produccin de alcohol en la obtencin del vino y de
la cerveza es consecuencia de un proceso de fermentacin realizado
por
levaduras.
- Asimismo demostr que la aparicin de sustancias que, como el
cido actico, agrian el vino se debe a una fermentacin producida
por
bacterias.
-Pasteurizacin.
- Contribuy al desarrollo de las vacunas. Empez estudiando el
carbunco o ntrax, una enfermedad mortal del ganado ovino y
vacuno, que
tambin afecta a las personas. Koch, fu quin demostr que est
causada por un bacilo, pero fu Pasteur quin sugiri un sistema de
prevencin de la infeccin: inducir una forma leve de la enfermedad
en los animales inoculndolos con el bacilo debilitado lo que
proporcionara resistencia a la infeccin.
Como sabemos, este sistema de prevencin de las infecciones se
conoce como vacuna.
Con el fin de demostrar su teora, Pasteur empez inoculando 25
ovejas; pocos das ms tarde inocul a stas y a otras 25 un cultivo
del bacilo especialmente poderoso. Predijo que las 25 ovejas que no
haban sido inoculadas previamente, pereceran y concluy el
experimento de forma espectacular: mostrando a una multitud
escptica los cadveres de las mismas dispuestas una junto a la otra.
Pasteur tambin ide con xito una vacuna contra el virus causante
de la rabia.
La 1 vacuna descubierta se debe al mdico ingls Jenner en 1796
quin observ la resistencia frente a la viruela de los muchachos que

trabajaban en establos con vacas que sufran la viruela de la vaca.

sta es una enfermedad eruptiva y pustulosa de la vaca que solo
produce en el hombre un ligero padecimiento y lesiones cutneas. Al
inocular en personas sanas pstulas de la viruela vacuna, Jenner
consegua que estas personas no padecieran la viruela humana, de
efectos ms graves que la viruela vacuna. El trmino vacuna fu
propuesto posteriormente por Pasteur en 1881 para designar este
sistema de prevencin de las enfermedades contagiosas.
Robert Koch.

Koch descubri por si mismo algunas de las bacterias que se

encuentran en las heridas infectadas y el espirilo del clera, pero
conmovi al mundo al anunciar el descubrimiento del germen de la
tuberculosis, el bacilo tuberculoso (Mycobacterium tuberculosis).
Demostr que los animales se enfermaban de TBC al ser inoculados
por cultivos puros de este organismo y recogi bacilos idnticos de los
tejidos enfermos de los
animales.
Koch hizo tambin un aporte muy importante al descubrir la
tuberculina, sustancia procedente de cultivos de bacilo tuberculoso
que causa una reaccin especifica cuando se inyecta en un individuo
tuberculoso.
Koch ideo un mtodo para reproducir bacterias en un medio de cultivo
slido hecho con gelatina, e introdujo el mtodo de la placa para
asegurar cultivos puros. El uso de un medio slido fue una idea
nueva, lo que facilito la obtencin de cultivos puros de bacterias para
su estudio individual.

Postulados de Koch
1.

Estar presente en todos los organismos que desarrollan la

enfermedad y ausente en aquellos que estn sanos.

2.

Poder cultivarlo de forma pura y por cierto periodo de tiempo en el

laboratorio.

3.

Transcurrido cierto tiempo, poder infectar a otros organismos sanos.

4.

Poder extraerlo de un organismo recin infectado y volver a

cultivarlo en laboratorio

Joseph Lister.

Lister empleo sustancias qumicas bactericidas, como el fenol,

y bicloruro de mercurio para el lavado de las heridas, manos y
material quirrgico e incluso para la pulverizacin del aire, con dichas
sustancias logro un gran descenso de las cifras de la mortalidad postoperatoria y sent las bases de la desinfeccin y antisepsia. Comenz
utilizando el cido fnico, que era una sustancia germicida muy
conocido como profilctico, al que aplicaba en las heridas de fracturas
abiertas, en la que los huesos rotos atravesaban la piel. Este tipo de
heridas sola infectarse muy seriamente produciendo muchas veces la
muerte de quien la padeca.
Tuvo un gran xito con dicha aplicacin ya que las heridas sanaron
muy rpidamente sin formar esa cantidad de pus que era habitual,
mas adelante Lister aplico este mtodo al tratamiento de abscesos y

otros tipos de heridas. Finalmente propuso un mtodo sistemtico

para el uso de cido fnico en las operaciones, conocido
como mtodo antisptico de Lister.

Alexander Fleming.

Durante sus investigaciones sobre la Gripe, y de manera accidental,

Fleming not que una colonia de un hongo, que haba crecido como
contaminante en un cultivo de Staphilococcus aureus, afectaba a las
colonias de S. aureus contiguas al hongo.
Estas colonias eran macroscopicamente transparentes debido a un proceso
de lisis (destruccin) bacteriana. Este hongo, que mas tarde fue identificado
como Penicillium notatum, produca una sustancia bactericida llamada

Penicilina.
Fleming descubri ademas en el ao 1922, una molcula proteica con
actividad antisptica: la lisozima. Esta molcula esta presente en las
lagrimas, saliva y otras secreciones corporales.

Teoras Evolutivas.
Generacin espontanea
La hiptesis de la generacin espontnea aborda la idea de que la
materia no viviente puede originar vida por s misma. Aristteles
pensaba que algunas porciones de materia contienen un "principio
activo" y que gracias a l y a ciertas condiciones adecuadas podan
producir un ser vivo. Este principio activo se compara con el concepto
de energa, la cual se considera como una capacidad para la accin.
Segn Aristteles, el huevo posea ese principio activo, el cual dirigir
una serie de eventos que poda originar la vida, por lo que el huevo
de la gallina tena un principio activo que lo converta en pollo, el
huevo de pez lo converta en pez, y as sucesivamente. Tambin se
crey que la basura o elementos en descomposicin podan producir
organismos vivos, cuando actualmente se sabe que los gusanos que
se desarrollan en la basura son larvas de insectos. La hiptesis de la
generacin espontnea fue aceptada durante muchos aos y se
hicieron investigaciones alrededor de esta teora con el fin de
comprobarla. Uno de los cientficos que realiz experimentos para
comprobar esta hiptesis fue Jean Baptiste Van Helmont, quien vivi
en el siglo XVII. Este mdico belga realiz un experimento con el cual
se podan, supuestamente, obtener ratones y consista en colocar una
camisa sucia y granos de trigo por veintin das, lo que daba como
resultado algunos roedores. El error de este experimento fue que Van
Helmont slo consider su resultado y no tomo en cuenta los agentes
externos que pudieron afectar el procedimiento de dicha

investigacin. Si este cientfico hubiese realizado un experimento

controlado en donde hubiese colocado la camisa y el trigo en una caja
completamente sellada, el resultado podra haber sido diferente y se
hubiese comprobado que lo ratones no se originaron
espontneamente sino que provenan del exterior

Teoria endosimbiotica.

La teora endosimbitica postula que algunos orgnulos propios de las

clulas eucariotas, especialmente plastos y mitocondrias, habran
tenido su origen en organismos procariotas que despus de ser
englobados por otro microorganismo habran establecido una relacin
endosimbitica con ste. Se especula con que las mitocondrias
provendran de proteobacterias alfa (por ejemplo, rickettsias) y los
plastos de cianobacterias.
La teora endosimbitica fue popularizada por Lynn Margulis en 1967,
con el nombre de endosimbiosis en serie, quien describi el origen
simbiogentico de las clulas eucariotas. Tambin se conoce por el
acrnimo ingls SET (Serial Endosymbiosis Theory). En la actualidad,
se acepta que las mitocondrias y los cloroplastos de los eucariontes
procedan de la endosimbiosis.

Pruebas a favor de la teora

La evidencia de que las mitocondrias y los plastos surgieron a travs
del proceso de endosimbiosis son las siguientes:
* El tamao de las mitocondrias es similar al tamao de algunas
bacterias.
* Las mitocondria y los cloroplastos contienen ADN bicatenario
circular cerrado covalentemente - al igual que los procariotasmientras que el ncleo eucariota posee varios cromosomas
bicatenarios lineales.
* Estn rodeados por una doble membrana, lo que concuerda con la
idea de la fagocitosis: la membrana interna sera la membrana
plasmtica originaria de la bacteria, mientras que la membrana
externa correspondera a aquella porcin que la habra englobado en
una vescula.
Pruebas en contra de la teora
* Las mitocondrias y los plastos contienen intrones, una caracterstica
exclusiva del ADN eucaritico. Por tanto debe de haber ocurrido algn
tipo de transferencia entre el ADN nuclear y el ADN
mitocondrial/cloroplstico.
* Ni las mitocondrias ni los plastos pueden sobrevivir fuera de la
clula. Sin embargo, este hecho se puede justificar por el gran
nmero de aos que han transcurrido: los genes y los sistemas que
ya no eran necesarios fueron suprimidos; parte del ADN de los
orgnulos fue transferido al genoma del anfitrin, permitiendo
adems que la clula hospedadora regule la actividad mitocondrial.

* La clula tampoco puede sobrevivir sin sus orgnulos: esto se debe

a que a lo largo de la evolucin gracias a la mayor energa y carbono
orgnico disponible, las clulas han desarrollado metabolismos que no
podran sustentarse solamente con las formas anteriores de sntesis y
asimilacin.

Teoria del origen de las especies.

Darwin afirmaba que los seres vivos que habitan nuestro planeta, son
producto de un proceso de descendencia en el que se introducen
sucesivas modificaciones, con origen en un antepasado comn. Por
tanto, todos partieron de un antecesor comn y a partir de l
evolucionaron gradualmente. El mecanismo por el cual se llevan a
cabo estos cambios evolutivos es la seleccin natural. Muchos
sucesos de la naturaleza slo tienen explicacin mediante la teora de
la evolucin; Darwin aport numerosos hechos que encajan en su
teora, y que posteriormente se vieron reforzados con nuevas
evidencias, constituyendo todos ellos lo que se llam pruebas de la

evolucin. Entre otras destacan las de tipo paleontolgico, anatmica

comparada, bioqumica comparada, embriolgica,
adaptacin/mimetismo, distribucin geogrfica y domesticacin.

La teora de Lamarck
se bas en dos principios bsicos: el concepto de que es una
caracterstica intrnseca de los seres vivos evolucionar a un nivel de
complejidad y perfeccin cada vez mayores motivo por el cual
Lamarck crea que los seres haba evolucionado de microorganismos
simples originados de materia no viva (teora de la generacin

espontnea) para organismos ms complejos; el segundo principio

fue el del uso y el desuso, que fue el punto crucial del lamarckismo y
deca bsicamente que lo que no es usado se atrofia y lo que es
usado se desarrolla siendo pasado a generaciones posteriores. Es
decir, rganos, miembros y otras caractersticas de los seres vivos
que fuesen usados acabaran desarrollndose y pasando de
generacin en generacin sucediendo la transmisin hereditaria de
las caractersticas adquiridas.
Teoria creacionista.

Es una teora, inspirada en dogmas religiosos, que afirma que el mundo y

los seres vivos han sido creados de la nada por la libre voluntad de un ser
inteligente por un propsito divino. Por extensin el termino se aplica
tambin a las opiniones o doctrinas religiosas o filosficas que defienden
que el origen del mundo hay que encontrarlo en la creacin de un Dios
personal, como ocurre en la religin judaica (elBereshit) o islmica (sura 41);
y que han dado lugar a los movimientos pseudo-cientficos que se oponen al
hecho evolutivo.

Teora Sinttica de la Evolucin o Neodarwinista.

sta se basa en los cambios evolutivos que se llevan a cabo en las
poblaciones, y no en los individuos (hay que recordar que Darwin
nicamente observ las variaciones en los organismos).
Un organismo nace, crece y con el tiempo muere, a travs de su vida
los individuos pueden sufrir cambios, pero su constitucin gentica
permanece constante. Por otro lado, la constitucin gentica de una
poblacin puede variar de una generacin a otra mediante procesos
internos (mutaciones y recombinacin gnica) y procesos externos
(seleccin natural y aislamiento reproductivo).
Sus afirmaciones bsicas son:
Tal y como sostuvo Darwin, la evolucin ocurre por seleccin natural.
La variabilidad gentica en una poblacin se debe a la existencia de
mutaciones.
La seleccin natural acta sobre las poblaciones y no sobre
individuos aislados.
La evolucin ocurre a lo largo de miles y millones de aos. Los
cambios que se producen en las especies son pequeos y graduales.

Los procariotas alcanzaron pleno xito en su desarrollo y multiplicacin.

Gracias a su notable capacidad de evolucin y adaptacin, dieron origen a
una amplia diversidad de especies .
La biosfera estara llena de procariotas si no se hubiera dado un avance
extraordinario del que surgi una clula perteneciente a un tipo muy
distinto: eucariota, que posee un ncleo genuino. (el prefijo eu, de origen
griego, significa "bueno") .

Las consecuencias de este acontecimiento marcaron el inicio de una nueva

poca. En nuestros das todos los organismos pluricelulares estn
constituidos por clulas eucariotas, que tienen una complejidad mucho
mayor que las procariotas. Si no hubieran aparecido las clulas eucariotas,
no existira ahora la extraordinaria variedad, tan rica en gamas, de la vida
animal y vegetal en nuestro planeta.

Las clulas eucariotas surgieron de antepasados procariotas. Pero, de que

manera? Es un asunto difcil de analizar. No han sobrevivido representantes
de las etapas intermedias, ni nos han dejado fsiles que proporcionen
alguna pista directa. Solo podemos estudiar la celula eucariota actual, que
es diferente de cualquier clula procariota. Sin embargo, el problema ha
dejado de ser insoluble. Con las herramientas de la moderna biologa, los
investigadores han descubierto parentescos reveladores entre bastantes
rasgos eucariotas y procariotas, que arrojan luz sobre el proceso a travs
del cual los eucariotas pudieron originarse a partir de clulas procariotas.

Campo de estudio.
Eucariontes

Las clulas eucariotas tienen su informacin gentica encerrada

dentro de la envoltura nuclear. Su citoplasma presenta orgnulos

interconectados cuyos lmites se encuentran fijados por membranas

biolgicas. El compartimiento ms notorio del protoplasma es
el ncleo.
Las eucariotas suelen contener mitocondrias, que son orgnulos
membranosos que producen energa. Algunas eucariotas protistas,
sin embargo, ya no exhiben mitocondrias tras el curso de la
evolucin. La presencia de plastos en el citoplasma, por otra parte,
permite que ciertas eucariotas puedan realizar la fotosntesis.
Pese a la variedad de eucariotas, estas clulas comparten una
misma composicin bioqumica y un metabolismo homogneo, hecho
que representa una importante diferencia respecto a las procariotas,
las clulas cuyo material gentico se encuentra repartido en diversos
organelos.
Cabe destacar que los organismos eucariontes constituyen el
dominio Eukarya, que incluye seres de los cuatro reinos: animales,
plantas, hongos y protistas. La mayora de los especmenes ya
extintos, estudiados por los paleontlogos, pertenecieron a este
dominio.
Con respecto a su reproduccin, los eucarionte son capaces de
dividirse de manera asexual (fenmeno conocido como mitosis),
aunque en general atraviesan procesos reproductivos de tipo sexual
que se basan en la meiosis y que no se ve en las clulas procariotas

Algas.
Se llama algas a todos los protistas fottrofos (las cianobacterias son
fottrofas pero no son protistas, son bacterias, aunque algunos
autores las incluyen en el trmino). Tambin
llamadas plantas inferiores (en contraposicin a las plantas superiores

o plantas terrestres), su definicin significa que son eucariotas, no

plantas terrestres (ni animales ni hongos), con capacidad de realizar
fotosntesis y obtener el carbono orgnico con la energa de la luz del
sol. Pueden ser unicelulares o multicelulares, y casi siempre viven en
un medio acutico (alguna excepcin coloniz la superficie terrestre,
pero no de la forma espectacular en que lo hicieron las embriofitas o
plantas terrestres o plantas superiores). En la definicin moderna del
trmino, se incluye a todos los eucariontes sin
verdaderos tejidos ni rganos que son fottrofos por la adquisicin de
energa de la luz del Sol mediante la fotosntesis.
Todas las algas se consideran protistas segn algunos autores
(como Lynn Margulis), no obstante algunas especies son reconocidas
adems como plantas en una de sus circunscripciones ms modernas
Los caracteres esenciales que distinguen a stas del resto de los
vegetales fotosintticos (plantas terrestres) son: la falta de un
verdadero embrin (no son por tanto embriofitas) y la falta de una
envuelta multicelular alrededor de los gametangios y esporangios (a
excepcin de las carceas). Se distinguen de los hongos por carecer
stos de capacidad fotosinttica. Se trata de un grupo polifiltico (no
es un grupo de parentesco), y no tiene por lo tanto ya uso en
la clasificacin cientfica taxonmica moderna, aunque sigue teniendo
utilidad en la descripcin de los ecosistemas acuticos.
Auttrofos procariotas
Cianobacterias: Pertenecen al
dominio Bacteria (Prokaryota o Monera). Tradicionalmente se
denomin a las Cianobacterias, "algas verdeazules". Actualmente se
considera que las algas son eucariotas por lo que no es correcto
denominar a este grupo como algas verdeazules. Algunos otros
grupos de procariontes realizan formas de fotosntesis no oxignicas u
oxognica, pero tampoco son tratados como algas.
Algas eucariotas
Son muchos grupos de eucariotas, estn considerados habitualmente
como protistas o como plantas segn los sistemas de clasificacin.
Evolutivamente se pueden clasificar en dos grupos principales: los
descendientes de Primoplantae por adquisicicin primaria de
los cloroplastos y las algas cromofitas que descienden de protistas
que adquirieron los cloroplastos secundariamente por endosimbiosis
con una microalga roja. Adicionalmente hay grupos de protozoos que
adquieron sus cloroplastos en eventos posteriores como
los euglenales

Hongos.
El trmino fungi (latn, literalmente "hongos") designa a un grupo de
organismos eucariotas entre los que se encuentran los mohos,
las levaduras y las setas. Se clasifican en un reino distinto al de
las plantas, animales y protistas. Esta diferenciacin se debe, entre
otras cosas, a que tienen paredes celulares compuestas por quitina, a
diferencia de las plantas, que contienen celulosa. Se ha descubierto
que organismos que parecan hongos en realidad no lo eran, y que
organismos que no lo parecan en realidad s lo eran, si llamamos
"hongo" a todos los organismos derivados del que ancestralmente
adquiri la capacidad de formar una pared celular de quitina. Debido
a ello, si bien este taxn est bien delimitado desde el punto de vista
evolutivo, an se estn estudiando las relaciones filogenticas de los
grupos menos conocidos, y su lista de subtaxones cambi mucho con
el tiempo en lo que respecta a grupos muy derivados o muy basales.

Clasificacin actual de los hongos

Quitridiomicetes (divisin Chytridiomycota).
Zigomicetos (divisin Zygomycota).
Glomeromicetes (divisin Glomeromycota).
Basidiomicetes (divisin Basidiomycota).
Ascomicetes (divisin Ascomycota).

Protozoarios.

Los protozoos, tambin llamados protozoarios, son organismos

microscpicos, unicelulares eucariotas; hetertrofos, fagtrofos,
depredadores o detritvoros, a veces mixtrofos (parcialmente
auttrofos); que viven en ambientes hmedos o directamente en
medios acuticos, ya sean aguas saladas o aguas dulces.
La reproduccin puede ser asexual por biparticin y tambin sexual
por isogametos o por conjugacin intercambiando material gentico.
En este grupo encajan taxones muy diversos con una relacin de
parentesco remota, que se encuadran en muchos filos distintos del
reino Protista, definiendo un grupo parafiltico, sin valor en la
clasificacin de acuerdo con los criterios actuales.
Pertenecen al Reino Protista. Son eucariticos, unicelulares y
heterotrficos. Muchos son mtiles. Hay aproximadamente 45,000
especies descritas de protozoarios. Podemos encontrarlos en agua,
donde juegan un papel importante en la cadena alimentaria o en
simbiosis con animales superiores o con otros microorganismos
Poseen organelos que estn envueltos en el movimiento, la obtencin
de nutrientes, la excresin, la osmoregulacin, la reproduccin y la
proteccin.

Procariontes.

Es el imperio o dominio que incluye los microorganismos constituidos

por clulas procariotas, es decir, clulas que presentan un ADN libre
en el citoplasma, ya que no hay ncleo celular. Los procariontesu
organismos procariotas han recibido diversas denominaciones tales
como Bacteria, Monera y Schizophyta, dependiendo de los autores y
los sistemas de clasificacin. Otros trminos usados
fueron Mychota, Protophyta y Procaryotae. Est constituido a su vez
por dos dominios bien diferenciados: Archaea y Bacteria.
Los procariontes son unicelulares, salvo algunos casos como
las mixobacterias, algunas de las cuales tienen etapas multicelulares
en su ciclo de vida.3 En otros casos crean grandes colonias, como en
las cianobacterias. Los procariontes se caracterizan por tener
componentes intracelulares hidrosolubles (protenas, ADN y
metabolitos solubles en agua), por lo que no presentan ncleo
celular,mitocondrias ni otros orgnulos, pues todo el organismo est
delimitado por la membrana celular en lugar de separarse en
diferentes compartimientos celulares. Son microorganismos que
poseen un solo cromosoma llamado nucleoide, su reproduccin es
asexual porfisin binaria, tienen gran variedad de metabolismos y hay
especies adaptadas a todo tipo de ambiente, incluso los ms
extremos, calculndose que hay aproximadamente
51030 procariontes en el mundo.

Bacterias.

Las bacterias son organismos unicelulares microscpicos, sin ncleo

ni clorofila, que pueden presentarse desnudas o con una cpsula
gelatinosa, aisladas o en grupos y que pueden tener cilios o flagelos.
La bacteria es el ms simple y abundante de los organismos y puede
vivir en tierra, agua, materia orgnica o en plantas y animales.
Tienen una gran importancia en la naturaleza, pues estn presentes
en los ciclos naturales del nitrgeno, del carbono, del fsforo, etc. y
pueden transformar sustancias orgnicas en inorgnicas y viceversa.
Son tambin muy importantes en las fermentaciones aprovechadas
por la industria y en la produccin de antibiticos.
Desempean un factor importante en la destruccin de plantas y
animales muertos.
En efecto, la vida en nuestro planeta no existira sin bacterias, las
cuales permiten muchas de las funciones esenciales de los
ecosistemas. Una bacteria de tamao tpico es tan pequea que es
completamente invisible a la vista.
Las bacterias son muy importantes para el ser humano, tanto para
bien como para mal, debido a sus efectos qumicos y al rol que juegan
en diseminar enfermedades.

Las bacterias pertenecen a la clase procariota debido a que su ncleo

no est rodeado por una membrana y consiste de una sola molcula
de ADN cuya divisin es no-mittica.
En su efecto beneficioso, algunas bacterias producen antibiticos
tales como estreptomicina capaces de curar enfermedades.
Anlogamente, las bacterias son muy importantes ya que convierten
nitrgeno en una forma til por ciertas races de plantas o proveen el
gusto intenso en yogurt.
Las bacterias se usan en la produccin de cido actico y vinagre,
varios aminocidos y enzimas, y especialmente en la fermentacin de
lactosa a cido lctico, la cual coagula las protenas de la leche, y se
usan en la fabricacin de casi todos los quesos, yogurt y productos
similares.

Virus.

"Virus" significa "jugo venenoso". Los virus, a diferencia de las bacterias, no

son clulas, estn formados de la misma sustancia que el ncleo celular, el
ADN.
Los virus estn formados por una regin central de cido nucleico, DNA o
RNA, rodeado por una cubierta de protena o cpside y, en algunos casos,
por una envoltura lipoproteica.

Se reproducen solamente dentro de las clulas vivas, apoderndose de las

enzimas y de la maquinaria biosinttica de sus hospedadores. Sin esta
maquinaria, seran tan inertes como cualquier otra macromolcula, o sea,
sin vida segn la mayora de los criterios.

Son muy diminutos, de 20 a 500 milimicras, y muchos de ellos no se han

podido ver ni en el microscopio electrnico pero vemos sus efectos:
poliomielitis, Sida, rabia, sarampin, varicela, viruela, encefalitis, tracoma,
herpes, gripe, fiebre amarilla

Cmo daan al hombre

Esencialmente, de cuatro formas:
1.- Produciendo cogulos con su gran nmero, obstruyendo vas vitales para
el organismo, y destruyendo los rganos, produciendo en el proceso
abscesos, hemorragias...
2.- Produciendo sustancias venenosas una vez que se han introducido en
algn organismo celular (incluyendo las bacterias).
3.- Produciendo reacciones alrgicas.
4.- Debilitando el sistema inmunitario del organismo.

Priones.

Prin es un trmino que define el agente infeccioso responsable de varias

enfermedades neurodegenerativas, el cual deriva la palabra "proteinaceus
infectious particle" (Stanley, 1982). Este agente infeccioso est constituido
por partculas proteicas carentes de ADN (PrP) y puede replicarse sin genes.
Es ms pequeo que la mayora de los virus, muy resistente al calor
producido por las radiaciones ionizantes y se le identifica con la abreviatura
PrPsc. Este agente no causa reacciones inflamatorias e inmunitarias
detectables, ni se ha observado al microscopio ptico y electrnico. No se
dispone de pruebas de deteccin en seres vivos, salvo el estudio patolgico.
Las enfermedades transmitidas por los priones ms reportadas en la
literatura, son en animales: Encefalopata Espongiforme Bovina (Vacas
Locas), Srapie (ovejas), Encefalopata transmisible (visones), Enfermedades
crnicas de desgaste (mulas, ciervos y alces); y en los humanos varias
enfermedades han sido vinculadas a priones, tales como: Enfemedad de
Creutzfeldt-Jakob, Sndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, Kuru,
Insomnio Fatal Familiar, Sndrome de Alpers.

Mtodos para el estudio de los microorganismos.

Metodos Fenotipicos.
La identificacin bacteriana se realiza por medio de mtodos
convencionales basados en las caractersticas fenotpicas, puesto que
su realizacin y coste los hace ms asequibles.
Los esquemas tradicionales de identificacin fenotpica bacteriana se
basan en las caractersticas observables de las bacterias, como su
morfologa, desarrollo, y propiedades bioqumicas y metablicas. El
cultivo, cuando es factible, contina siendo el mtodo diagnstico de
eleccin; permite el aislamiento del microorganismo implicado, su
identificacin, el estudio de sensibilidad a los antimicrobianos y
facilita la aplicacin de marcadores epidemiolgicos. En el cultivo es

esencial la correcta eleccin del medio de crecimiento y las

condiciones de incubacin.
Los laboratorios deben elaborar y realizar un proceso de identificacin
normalizado en su actividad diaria, que utilice de forma secuencial o
simultnea un conjunto de pruebas cuyo propsito final sea la
identificacin del microorganismo a nivel de gnero y especie, y que
incluya la mayora de las bacterias desde el punto de vista infeccioso.
Caractersticas microscpicas
Caractersticas macroscpicas: morfologa y hemlisis; Cultivo:
Medios de cultivo y requisitos de crecimiento en relacin a atmsfera,
temperatura y nutricin.
Pruebas bioqumicas, diferenciando 1,2
Pruebas que se utilizan en la identificacin preliminar y con lectura
inmediata como la catalasa y oxidasa; 2) otras pruebas rpidas, con
lectura en menos de 6h tal y como la hidrlisis del hipurato, la galactosidasa (ONPG), las aminopeptidasas, la uresa y el
indol; 3) pruebas lentas, con lectura de 18 a 48h que incluiran la
xido-fermentacin, reduccin de nitratos, rojo de metilo, VogesProskauer, Agar hierro de Kligler, fermentacin de azcares, hidrlisis
de la esculina, coagulasa, fenilalanina-desaminasa, DNasa, hidrlisis
de la gelatina, decarboxilasas, lipasa, lecitinasa, utilizacin de
citratos, utilizacin de malonato, y prueba de CAMP entre las ms
frecuentes, y 4) pruebas basadas en caracteres de resistencia a
ciertas sustancias tal y como optoquina, bacitracina, solubilidad en
bilis, y crecimiento en caldo hipersalino.
Sistemas comerciales manuales o galeras multipruebas
Se trata de celdillas aisladas con sustrato liofilizado que se inoculan
individualmente y que permiten realizar simultneamente entre 10 y
50 pruebas bioqumicas. Los resultados de las pruebas se expresan de
forma numrica (los resultados de las pruebas se agrupan de tres en
tres, de manera que el resultado de cada tro de pruebas queda
reducido a un dgito). Cada especie est definida por un cdigo
numrico, resultado de la codificacin de las reacciones a las pruebas
que se hubieran utilizado. Para codificar el dgito de un tro de
pruebas se establece el siguiente sistema:
Si una prueba cualquiera es negativa, se le asigna un valor de 0
(cero) a la prueba.
Si la primera prueba es positiva, se asigna un valor de 1.
Si la segunda prueba es positiva, se asigna un valor de 2.
Si la tercera prueba es positiva, se asigna un valor de 4.

Microscopia.
Detectan R a INH y RMP en cultivo liquido mediante microspio de luz
invertida formando cuerdas
No comercial requiere entrenamiendo importante y buen equipo
Cultivo de microrganismos.
un cultivo es un mtodo para la multiplicacin de microorganismos,
tales comobacterias, hongos y parsitos, en el que se prepara
un medio ptimo para favorecer el proceso deseado. Un cultivo es
empleado como un mtodo fundamental para el estudio de
las bacterias y otros microorganismos que causan enfermedades
en medicina humana yveterinaria. Los medios de cultivo, para poder
ser utilizados y garantizar que los resultados obtenidos a partir de
ellos sean confiables, deben cumplir con los siguientes requisitos:
-Disponibilidad de nutrientes.
-Consistencia adecuada del medio.
-Presencia o ausencia de oxgeno y otros gases.
-Condiciones adecuadas de humedad (mantener en frigorfico).
-Luz ambiental.
-pH adecuado.
-Temperatura.
-Esterilidad.

Tincion de Gram.

Tambin conocida como coloracin de Gram, es una tcnica de

laboratorio que se utiliza rutinariamente en los estudios
microbiolgicos de las bacterias. Fue diseada por Christian Gram, un
cientfico dans, en el ao 1884. El objetivo de Gram era conseguir
una prueba con la que fuera posible diferenciar diferentes grupos de
bacterias para as poder estudiarlas y clasificarlas. La prueba result

todo un xito y pronto se convirti en una tcnica muy til no solo

para el estudio de las bacterias, sino tambin para poder
identificarlas rpidamente en una infeccin yseleccionar
el antibitico ms adecuado para tratarla.
La tcnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra
de cualquier origen (esputo, orina, pus, etctera) que supuestamente
contenga bacterias no identificadas. Los colorantes tien la pared de
las bacterias de color morado y, tras unos minutos, se realiza un
lavado del colorante. Despus de eso puede que el colorante
permanezca en la pared bacteriana o que se haya ido. En el primer
caso permanecera el color morado, y se tratara de bacterias Gram
positivas y, en el segundo, la pared tendra un color rosado, y
seran Gram negativas.
La tincin de Gram tambin tiene ciertas limitaciones. Algunas
bacterias no tienen pared, como por ejemplo lasChlamidias, y no se
podrn identificar, al igual que los virus. En esos casos la tincin no
colorear ningn germen. Otro aspecto negativo de la prueba es que
no puede identificar el tipo exacto de bacteria responsable de la
infeccin. Para ello es necesario realizar un cultivo microbiolgico que
se acompaa siempre de un antibiograma para estudiar de forma
exacta el antibitico ms efectivo.

Tolerancia al oxigeno.
Los microorganismos varan en sus necesidades, o tolerancia de oxgeno. De
hecho, los microorganismos pueden ser divididos en
diversos grupos dependiendo del efecto de ste.

Los aerobios son capaces de crecer con tensin de oxgeno total (en el aire
el oxgeno es del 21%) y muchos pueden soportar incluso concentraciones
ms altas.
Los microaerfilos, por el contrario, son aerobios que pueden utilizar
este gas slo cuando su tensin es ms baja que la del aire, usualmente por
su limitada capacidad de respirar, o por que contienen alguna molcula o
enzima sensible al oxgeno.
Los organismos que carecen de sistemas respiratorios no pueden utilizar el
oxgeno como aceptor terminal de electrones. Tales organismos se llaman
anaerobios, pero existen dos clases de anaerobios: los anaerobios
aerotolerantes, que pueden tolerar el oxgeno y crecer en su presencia, an
cuando no pueden utilizarlo, y los anaerobios estrictos (u obligados) que
mueren en presencia del oxgeno. La razn por la que los anaerobios
estrictos son destruidos por el oxgeno, es probablemente por que son
incapaces de eliminar algn producto txico derivado del metabolismo del
oxgeno. Cuando se reduce el oxgeno, se producen algunos elementos
txicos tales como el perxido de hidrgeno (H2O2), superxido (O2-) y
radicales hidroxilo (OH-). Muchos anaerobios estrictos son ricos
en enzimas flavnicas, que reaccionan espontneamente con el oxgeno
para dar estos productos txicos. Por el contrario, los aerobios poseen
enzimas que descomponen los productos txicos; tales enzimas no estn
presentes en los anaerobios.
Como ocurre con los aerobios, algunos de ellos pudieron tolerar la presencia
de O2 y de substancias oxidantes, pero en la mayora de los casos, el O2 se
comporta como un gas txico que provocaba la oxidacin de ciertos
radicales libres altamente agresivos imposibles de
neutralizar. Fusobacterium, Prevotella y Porphyromonas no sobreviven ms
de 10 a 30 minutos de exposicin al aire. Actinomyces,
Propionibacterium,Bacteroides y algunos Clostridium, son relativamente
aerotolerantes.
El metabolismo anaerobio, pese a restringir la proporcin de energa
obtenida a partir de un nutriente y estar limitado en el nmero de
substratos que pueden ser utilizados como fuente de energa, tiene una
importante ventaja: la capacidad de suministrar energa de forma continua
y muy rpidamente en tanto est presente un substrato capaz de ser
fermentado, o bien dos compuestos entre los cuales puedan transferirse los
electrones al oxidarse un compuesto y reducirse el otro.
Las bacterias anaerbicas difieren de las dems bacterias en varios
aspectos. Se desarrollan adecuadamente en reas del organismo que tienen
bajos valores de oxgeno (como el intestino) y en los tejidos que sufren
un proceso de degeneracin, particularmente las heridas profundas y
sucias, donde otras bacterias no pueden vivir y adonde las defensas del
organismo no llegan fcilmente.

Morfologia colonial.
Cuando tienes un cultivo en agar (caja petri) siempre es relevante
anotar la morfologa colonial (colonias aisladas) de la cepa bacteriana
para facilitar la identificacin, los siguientes datos te sern de
utilidad:
Generalmente se reporta la morfologa colonial tal como uno la
percibe, por ejemplo si se ves que las colonias bacterianas son como
puntitos, pues reportan que son puntiformes, si son lisas pues
reportan que son lisas.
Si observas que estn como moco, pues reportan que estn mucosas,
si su color es amarillento pues reportan que son de color amarillento,
y as sucesivamente., tambin puedes agregar caractersticas que
consideres importante para identificarlas, por ejemplo el olor.
De superficie.

De forma.

Borde.

Motilidad.
La motilidad es la habilidad de moverse independientemente y
espontneamente, esta eficiente caracterstica ha permitido a los
organismos la adquisicin de nutrientes, desplazarse a sitios
ptimospara el desarrollo, evitar depredaciones y otros tantos
beneficios.
Un orgnulo encargado de la motilidad en bacterias es el flagelo,
aunque no lo parezca el flagelo es un sistema complejo
La bacteria Myxococcus xanthus presenta dos tipos de sistemas de
motilidad: la motilidad S, que implica la extensin y retraccin de
los pili de tipo IV, y la motilidad A, que envuelve la adhesin
transitoria de complejos que permanecen en posiciones fijas relativas
al sustrato mientras la clula se mueve hacia delante. Los complejos
se ensamblan en extremo anterior de la clula y se dispersan en el
extremo posterior. Cuando la clula invierte el sentido de movimiento,
los dos extremos intercambian su operacin.
Las mixobacterias se deslizan sobre superficies dejando un rastro
mucoso a su paso. Se saba que este moco actuaba lubricante, pero
hasta hace poco no se poda explicar cmo se generaba la fuerza
para el movimiento. Recientemente, se ha descubierto que las
bacterias se propulsan expulsando el moco a presin a travs de unas
boquillas, a modo de cohetes. Las mixobacterias presentan unas 250
boquillas situadas en cada extremo y expulsando moco por un
conjunto de ellas pueden deslizarse hacia adelante o hacia atrs a
una velocidad mxima de 10 m por minuto.

Tipificacin bioqumica.
Perfiles de protenas
El examen de protena total mide la cantidad total de dos clases de
protenas encontradas en la porcin lquida de la sangre: albmina y
globulina.
Las protenas son partes importantes de todas las clulas y tejidos.
La albmina ayuda a impedir que se escape lquido fuera de los vasos
sanguneos.
Las globulinas son una parte importante del sistema inmunitario.
Forma en que se realiza el examen
Se necesita una muestra de sangre. La mayora de las veces, la
sangre se extrae de una vena localizada en la parte interior del codo
o el dorso de la mano.
Preparacin para el examen
Muchos medicamentos pueden interferir con los resultados del
examen de sangre.
El mdico le dir si necesita dejar de tomar algunos medicamentos
antes de que le hagan el examen.
No suspenda ni cambie sus medicamentos sin consultar primero con
el mdico.
Razones por las que se realiza el examen
Este examen a menudo se hace para diagnosticar problemas
nutricionales, enfermedad renal o enfermedad heptica.
Si la protena total es anormal, ser necesario realizar ms exmenes
para buscar la causa exacta del problema.

Reaccin antgeno anticuerpo

La tcnica ELISA (acrnimo del ingls Enzyme-Linked ImmunoSorbent

Assay: ensayo por inmunoabsorcin ligado a enzimas) es una tcnica
de inmunoensayo en la cual un antgeno inmovilizado se detecta
mediante un anticuerpoenlazado a una enzima capaz de generar un
producto detectable, como cambio de color o algn otro tipo; en
ocasiones, con el fin de reducir los costos del ensayo, nos
encontramos con que existe un anticuerpo primario que reconoce al
antgeno y que a su vez es reconocido por un anticuerpo secundario
que lleva enlazado la enzima anteriormente mencionada. La aparicin
de colorantes permite medir indirectamente
mediante espectrofotometra el antgeno en la muestra.
Se usa en muchos laboratorios para determinar si un anticuerpo
particular est presente en la muestra de sangre de un paciente.
Aunque el procedimiento es rutinario y sencillo, involucra a un gran
nmero de variables, tales como seleccin de reactivo, temperatura,
medicin de volumen y tiempo, que si no se ajustan correctamente,
puede afectar los pasos sucesivos y el resultado de la prueba.

Inmunodifusion
Los antgenos presentes en los tejidos y lquidos biolgicos se pueden
detectar y cuantificar mediante muchas tcnicas inmunolgicas basadas en
la extraordinaria especificidad de las reacciones antgeno-anticuerpo.

Existen diversos mtodos basados en procedimientos distintos para

visualizar la unin Ag-Ac . As tenemos:
1. Tcnicas de aglutinacin. Cuando el antgenos e encuentra unido o
formando parte de clulas, bacterias o partculas, la reaccin Ag-Ac se
puede detectar y cuantificar por el aglutinado celular o bacteriano formado.
2. Tcnicas de fluorescencia y citometra de flujo. Para la realizacin de
estas tcnicas el anticuerpo se marca con un fluorocromo detectndose la
formacin del complejo Ag-Ac por la fluorescencia emitida.

3. Tcnicas de radioinmunoensayo. En estas tcnicas al anticuerpo se une

un istopo radiactivo siendo posible la cuantificacin del complejo Ag-Ac a
travs de la radiactividad emitida.
4. Cromatografa de afinidad. La especificidad de la unin Ag-Ac puede
utilizarse para obtener Acs y Ags puros.
5. Inmunoprecipitacin e inmunoblotting. Permite detectar la presencia y
cantidad de antgenos y anticuerpos especficos.

La reaccin en cadena de la polimerasa.

conocida como PCR por sus siglas en ingls

(polymerase chain reaction), es una tcnica debiologa
molecular desarrollada en 1986 por Kary Mullis,1 .Su objetivo es
obtener un gran nmero de copias de un fragmento de ADNparticular,
partiendo de un mnimo; en teora basta partir de una nica copia de
ese fragmento original, o molde.
Esta tcnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es
que tras la amplificacin resulta mucho ms fcil identificar con una
muy alta probabilidad, virus o bacterias causantes de
una enfermedad, identificar personas (cadveres) o hacer
investigacin cientfica sobre el ADN amplificado. Estos usos
derivados de la amplificacin han hecho que se convierta en una
tcnica muy extendida, con el consiguiente abaratamiento del equipo
necesario para llevarla a cabo.
Para realizar la tcnica se necesitan:

Los 4 desoxirribonucletidos-trifosfato (dNTP), sustratos

para polimerizar nuevo ADN.
Dos cebadores o iniciadores (en ingls, primers), oligonucletidos que
son, cada uno, complementarios a una de las dos hebras del ADN.

Son secuencias cortas, de entre seis y cuarenta nucletidos,

normalmente de dieciocho a veintids, que permiten que la
polimerasa inicie la reaccin. Deben estar enfrentados y a no mucha
distancia. Delimitan la zona de ADN a amplificar, es decir,
corresponden a los nucletidos que definen los extremos de la
secuencia que se desea replicar.
Iones divalentes. Se suele usar magnesio (Mg2+), agregado
comnmente como cloruro de magnesio (MgCl2), o algn
otro catindivalente. Tambin se puede emplear manganeso (Mn2+),
para mutagnesis de ADN mediante PCR, ya que altas
concentraciones de Mn2+ incrementan la tasa de error durante la
sntesis de ADN. Actan como cofactores de la polimerasa.
Iones monovalentes, como el potasio.
Una solucin tampn o buffer que mantiene el pH adecuado para el
funcionamiento de la ADN polimerasa.
ADN polimerasa o mezcla de distintas polimerasas con temperatura
ptima alrededor de 70 C (la ms comn es la polimerasa Taq).
ADN molde, que contiene la regin de ADN que se va a amplificar.
Termociclador, el aparato que mantiene la temperatura necesaria en
cada una de las etapas que conforman un ciclo.

Hibridacion.

La hibridacin de cidos nucleicos (ADN o ARN) es un proceso por el

cual se combinan dos cadenas de cidos nucleicos antiparalelas y con
secuencias de bases complementarias en una nica molcula de
doble cadena, que toma la estructura de doble hlice, donde las
bases nitrogenadas quedan ocultas en el interior. Esto hace que si
irradiamos la muestra con la longitud de onda a la que absorben
estas bases (260 nm), la absorcin de energa ser mucho menor si la
cadena es doble que si se trata de la cadena sencilla, ya que en esta
ltima los dobles enlaces de las bases nitrogenadas, que son las que
captan la energa, estn totalmente expuestos a la fuente emisora de
energa.
Los nucletidos se unirn con sus complementarios bajo condiciones
normales: A=T; A=U; CG; GC; T=A o U=A
As que dos cadenas perfectamente complementarias se unirn la una
a la otra rpidamente. Por el contrario, debido a las diferentes

geometras de los nucletidos, una simple variacin de las parejas

anteriores lleva a inconsistencias entre las cadenas y dificultar la
unin.
El proceso de hibridacin se puede revertir simplemente calentando
la disolucin que contiene la molcula. El porcentaje de GC dentro de
la cadena condiciona la temperatura de alineamiento y de
desnaturalizacin ya que G se une a C mediante tres puentes de
hidrgeno y A se une a U o T mediante dos puentes de hidrgeno; por
tanto, y dado que se requiere ms energa para romper tres enlaces
que para romper dos, dicha energa se traduce en una mayor
temperatura. El %GC no es igual para todas las especies, es ms,
el %GC es distinto incluso entre el ADN nuclear y el ADN mitocondrial,
lo que nos da bastante juego en los protocolos de extraccin de ADN,
segn qu tipo vamos a estudiar y esto es importante, entre otros
motivos porque existen enfermedades genticas debidas a
mutaciones en el ADN mitocondrial.
En biologa molecular experimentalmente se llevan a cabo dos tipos
diferentes de hibridacin: Tipo Southern, para uniones ADN-ADN y
tipo Northern blot, para uniones ADN-ARN
Southern
El mtodo tipo Southern o Southern blot fue desarrollado para la
deteccin de genes especficos en el ADN celular.
Northern
El segundo mtodo, tipo Northern blot o Northern, se utiliza para
identificar las cadenas de ARN de secuencia semejante al ADN que se
usa como sonda; a diferencia del tipo Southern que se utiliza para
identificar ADN, el mtodo Northern sirve para identificar ARN.
Hibridacin in situ
Un desarrollo de las tcnicas de preparacin y fijacin de materiales
biolgicos para su observacin al microscopio, junto con el desarrollo
de tcnicas de hibridacin tipo Northern ha llevado a poder realizar la
hibridacin de las sondas directamente sobre tejidos de material
orgnico. Utilizando tcnicas inmunohistoqumicas se puede conocer
la localizacin precisa de los tejidos y clulas que estn expresando
los genes de secuencia complementaria a las sondas utilizadas.

Secuenciacin de la fraccin 16s de rRNA.

El ARN ribosmico (ARNr) 16S es la macromolcula ms ampliamente

utilizada en estudios de filogenia y taxonoma bacterianas. Su
aplicacin como cronmetro molecular fue propuesta por Carl Woese
(Universidad de Illinois) a principios de la dcada de 19702. Los

estudios de Woese originaron la divisin de los procariotas en dos

grupos o reinos: Eubacteria y Archaeobacteria, cuya divergencia es
tan profunda como la encontrada entre ellos y los eucariotas.
Adems, permitieron establecer las divisiones mayoritarias y
subdivisiones dentro de ambos reinos3. Posteriormente, Woese
introdujo el trmino dominio para sustituir al reino como categora
taxonmica de rango superior, y distribuy a los organismos celulares
en tres dominios: Bacteria , Archaea y Eukarya , el ltimo de los
cuales engloba a todos los seres eucariotas4. Desde entonces, el
anlisis de los ARNr 16S se ha utilizando ampliamente para establecer
las relaciones filogenticas dentro del mundo procariota, causando un
profundo impacto en nuestra visin de la evolucin y, como
consecuencia, en la clasificacin e identificacin bacteriana. De
hecho, las ediciones vigentes de los dos tratados fundamentales de
bacteriologa, el Bergey's Manual of Systematic Bacteriology
(http://www.springer-ny.com/bergeysoutline/ main.htm) y The
Prokaryotes (http://www.prokaryotes.com), basan su estructuracin
del mundo procariota en las relaciones filogenticas establecidas con
esta macromolcula.
Los ARNr 16S pueden caracterizarse en trminos de secuencia
parcial, mediante el mtodo de catalogacin de oligonucletidos,
utilizado en los estudios pioneros de Woese. Siguiendo esta tcnica, el
ARNr 16S marcado in vivo , y purificado, se trata con la enzima
ribonucleasa T1. Los fragmentos generados se separan,
determinndose posteriormente la secuencia de todos aquellos que
incluyan al menos seis nucletidos (nt). A continuacin, las
secuencias de la coleccin de fragmentos correspondientes a
diferentes bacterias se alinean y comparan, utilizando programas
informticos, para calcular finalmente los coeficientes de asociacin.
Como se ver ms adelante, la secuenciacin del gen que codifica el
ARNr 16S ha sustituido en la actualidad a la secuenciacin de
catlogos de oligonucletidos.
En microbiologa clnica, la identificacin rpida y correcta de los
agentes patgenos es un requisito esencial para el diagnstico y la
aplicacin posterior de un tratamiento adecuado. En la actualidad, la
mayor parte de las bacterias de inters clnico pueden identificarse
fcilmente mediante tcnicas microbiolgicas convencionales, que
requieren el aislado previo del agente patgeno y se basan en
caractersticas fenotpicas. Sin embargo, existen situaciones en las
cuales la identificacin fenotpica necesita mucho tiempo, resulta
difcil o, incluso, imposible. En estas circunstancias, la identificacin
molecular basada en el anlisis del ARNr 16S (o del gen que lo
codifica) puede representar una ventaja tanto en tiempo como en
precisin, llegando incluso a competir de manera favorable con otras
tcnicas rpidas y eficaces, como las inmunolgicas. En este artculo,

revisaremos el fundamento y los aspectos tcnicos de la metodologa

implicada, analizaremos sus ventajas e inconvenientes con respecto a
mtodos tradicionales, y presentaremos ejemplos de distintas
aplicaciones en el campo de la microbiologa clnica.

Vinculacin de la microbiologa con otras reas.

Odontologia.

La Microbiologa Bucal es una disciplina relativamente nueva, el

diagnstico microbiolgico de las infecciones de la cavidad bucal, en
nuestro pas, no se realiza con la frecuencia que debera hacerse. No
obstante, conviene tener presente que este tipo de anlisis es una
herramienta importante para el Odontlogo, ya que permite conocer
la etiologa microbiana de una enfermedad, seleccionar el
antimicrobiano adecuado y tambin determinar la eficacia del
tratamiento realizado. Por lo anteriormente expuesto, esta resea
tiene como objetivo, ofrecer una visin general del diagnstico
microbiolgico, como herramienta de ayuda para los estudiantes de
Odontologa y los Odontlogos en general.
El diagnstico microbiolgico es un trabajo en equipo entre el clnico,
que establece su diagnstico presuntivo diferencial sobre la base del
cuadro clnico y radiogrfico, y el especialista en microbiologa, que
dependiendo del diagnstico presuntivo, debe indicar como tomar y
transportar la muestra clnica, as como tambin, orientar la
metodologa especfica en el diagnstico a seguir.
El estudio de la microbiota bucal y de las enfermedades infecciosas
de la cavidad bucal involucra una serie de etapas que van desde la
toma y transporte de la muestra hasta el aislamiento e identificacin
de los agentes etiolgicos, por procedimientos especiales de cultivo y
pruebas diferenciales de las especies aisladas.
Industria.
La microbiologa industrial est dedicada a la utilizacin comercial
de microorganismos e incluye procesos que tienen gran importancia
econmica, ambiental y social.
Tradicionalmente se ha utilizado la palabra fermentacin en
microbiologa industrial para describir los procesos de cultivo de
microorganismos con propsitos industriales. Sin embargo, no hay
que confundir esta utilizacin del trmico con el proceso bioqumico
de fermentacin consistente en la regeneracin del poder reductor
(NADH) por un procedimiento no oxidativo (estos procesos se
estudiarn ms adelante en el curso). La fermentacin que tiene lugar
en la produccin del vino, en este sentido, comprende ambos
significados: por un lado, se trata bioqumicamente de un proceso de
fermentacin (produccin de alcohol a partir de glucosa en
condiciones anaerobias) y es una fermentacin industrial en el
sentido de que se trata de un proceso industrial llevado a cabo por
microorganismos.
El desarrollo de una fermentacin industrial incluye dos tipos de
procesos denominados, por sus nombres en ingls,
procesos upstream y procesos downstream. Los procesos upstream

comprenden la seleccin y preparacin del microorganismo, la

preparacin del medio de cultivo y de las condiciones de
fermentacin (cultivo). Los procesos downstream incluyen la
purificacin del producto y el tratamiento de los residuos de la
fermentacin.
En el proceso de fermentacin del mosto de uva para producir
vino, podemos distinguir los procesos upstream de la seleccin y
preparacin de cepas de levadura, tratamiento del mosto y
acondicionamiento de loas condiciones de fermentacin. Los
procesos downstream comprenden, en este caso, el tratamiento del
vino para su clarificacin y el de los residuos del proceso.